我们提出一个方法,收集脑脊液(CSF),并建立系统,缺乏的胚胎斑马鱼大脑脑室系统内脑脊液。 CSF的组成及其胚胎大脑发育过程中的要求,这使得进一步的检查。
脑脊液(CSF)是一种富含蛋白质的脑室内所含的流体。这是目前早期脊椎动物的胚胎发育过程中,坚持在整个生命。成人CSF认为,以减轻大脑,排除废物,并进行分泌的分子1,2。在成人和年龄较大的胚胎中,大多数的CSF是由脉络丛,一系列的高度血管化的分泌位于脑室3-5相邻的区域。在斑马鱼,脉络丛完全形成受精后144小时(HPF)6。在此之前,在包括鼠标,一个显着量的胚胎CSF(eCSF)的斑马鱼和其他脊椎动物胚胎是本。这些数据和研究表明,在鸡的神经上皮分泌在开发的早期,可能是之前的主要来源eCSF发展脉络丛7。
eCSF包含了大约3倍以上的蛋白质吨韩成人CSF,这表明它可能具有重要作用,在发展8,9。研究表明,在小鸡和老鼠分泌因子eCSF,流体压力,或这些的组合,是非常重要的神经发生,基因表达,细胞增殖和细胞生存的神经上皮10-20中。人,大鼠,小鼠和小鸡eCSF的蛋白质组学分析,已经确定了许多蛋白质可能是必要的CSF功能。这些包括胞外基质成分,载脂蛋白,渗透压调节蛋白和蛋白参与细胞死亡和增殖21-24。然而,复杂的功能在很大程度上是未知的eCSF。
我们已经开发出一种方法,用于除去从斑马鱼脑室eCSF,从而允许识别eCSF组件,并在开发过程中进行分析的eCSF规定的。虽然可以采集更多eCSF,从其他脊椎动物系统W第i个较大的胚胎,eCSF可以收集到的斑马鱼发育的早期阶段,与遗传或环境条件下,导致脑室体积异常或形态。拆卸和回收的eCSF允许质谱分析,调查eCSF功能,并重新选择因素破入脑室分析它们的功能。因此,斑马鱼早期胚胎的可访问性可以在开发过程中的eCSF功能进行详细的分析。
使用这种技术的手动排水eCSF的从斑马鱼脑室用于确定eCSF在开发过程中的要求将是有益的。此外,这种技术将允许在胚胎发育过程中描述的eCSF蛋白更新。在此期间,不同的蛋白质的鉴定将能够进一步调查到CSF和大脑发育过程中的潜在作用的功能。在脊椎动物中,在eCSF(FGF2,IGF2,视黄酸和载脂蛋白)的一些因素有证明作用在神经上皮细胞存活,增殖和神经细胞13,17,20,23,27,28。然而,似乎有…
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由美国国家精神卫生研究所和美国国家科学基金会的支持。特别感谢仁Gutzman博士,博士阿曼达迪金森和其他许多有益的讨论和建设性的批评的的西伯实验室成员,并奥利维尔Paugois专家鱼的饲养。
Name of Reagent | Company | Catalogue number |
Eppendorf CellTram Oil | Eppendorf | 516 000.025 |
Mineral Oil | Sigma | M8410 |
Tricaine powder | Sigma | A5040 |
Capillary Tubes | FHC Inc. | 30-30-1 |