Summary
तेजी से और पूरी प्रतिगामी छिड़काव के माध्यम से एक अक्षुण्ण सुअर का दिल से सेलुलर घटकों को दूर करने के लिए एक विधि का वर्णन है. इस पद्धति का एक विशिष्ट साइट हृदय कोशिकी मैट्रिक्स पाड़ जो कई नैदानिक अनुप्रयोगों में उपयोग के लिए क्षमता है पैदावार.
Abstract
परफ्यूज़न आधारित पूरे अंग decellularization साइट विशेष कोशिकी मैट्रिक्स scaffolds बनाने के लिए, के लिए एक साधन के रूप में ऊतक इंजीनियरिंग के क्षेत्र में हाल ही में ब्याज फायदा हुआ है, जबकि बड़े पैमाने पर पाड़ की देशी वास्तुकला के संरक्षण. तिथि करने के लिए, इस दृष्टिकोण अंग प्रणालियों की एक किस्म में उपयोग किया गया है, हृदय, फेफड़े, और 1-5 जिगर सहित. एक आसानी से सुलभ संवहनी नेटवर्क के बिना ऊतकों के लिए पिछला decellularization तरीकों डिटर्जेंट, एसिड, या आसपास के बाह्य वातावरण 6-8 से सेलुलर और परमाणु उपकरणों को हटाने के लिए एक साधन के रूप में enzymatic उपचार के समाधान के लिए ऊतक के लंबे समय तक जोखिम पर भरोसा किया है. हालांकि, इन तरीकों hinged के समाधान की क्षमता पर प्रभाव के प्रसार के माध्यम से ऊतक तर करने के. इसके विपरीत, अंगों के प्राकृतिक नाड़ी तंत्र के माध्यम से प्रभावी ढंग से छिड़काव प्रसार दूरी और decellularizati की परिवहन सुविधा कमऊतक और ऊतक के बाहर सेलुलर घटकों में एजेंटों पर. के साथ साथ, हम पूरी तरह से कोरोनरी प्रतिगामी छिड़काव के माध्यम से एक बरकरार सुअर का दिल decellularize विधि का वर्णन करता है. प्रोटोकॉल बरकरार दिल की तीन आयामी संरचना के साथ एक पूरी तरह से decellularized हृदय कोशिकी मैट्रिक्स पाड़ (ग ईसीएम) मिले. हमारे विधि एंजाइमों, डिटर्जेंट, और hypertonic और hypotonic rinses के साथ मिलकर एसिड और कोशिकाओं के lysis हटाने में सहायता की एक श्रृंखला का इस्तेमाल किया. प्रोटोकॉल एक ट्रिप्सिन समाधान का इस्तेमाल करने के लिए मैट्रिक्स ट्राइटन X-100 और सोडियम deoxycholate समाधान द्वारा पीछा करने के लिए सेलुलर सामग्री को हटाने में सहायता से कोशिकाओं को अलग. वर्णित प्रोटोकॉल भी 2 से अधिक समय की विस्तारित अवधि के लिए एल / मिनट के छिड़काव की गति का उपयोग करता है. उच्च प्रवाह दर, समाधान ऊतकों को सेलुलर मलबे के प्रदूषण के बिना एजेंट के परिवहन और अनुमति परिवर्तन के साथ मिलकर प्रभावी ऊतक के rinsing सुनिश्चित की. वर्णित विधि विकासशील देशों से सभी परमाणु सामग्री को हटायासुअर का हृदय ऊतक ve, एक साइट विशिष्ट हृदय ईसीएम पाड़ कि आवेदनों की एक किस्म के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
1. ऊतक तैयारी और सेटअप प्रयोग
- हार्वेस्ट एक वधशाला या अनुसंधान सुविधा से इच्छामृत्यु के तुरंत बाद और अतिरिक्त रक्त कुल्ला सुअर का अंग. अतिरिक्त चर्बी और ऊतक के दिल छाँटो, अटरिया और महाधमनी बरकरार रखने. छाँटो दूर महाधमनी से फुफ्फुसीय धमनी अलग वसा. अगर वहाँ ऊतक में किसी भी कटौती कर रहे हैं, उचित त्यागें.
- फ्रीजर कागज में हर दिल व्यक्तिगत और लपेटें पूरा ठंड सुनिश्चित करने के लिए कम से कम 24 घंटे के लिए एक -80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में सभी ऊतकों को स्टोर करने के लिए.
- जब (आमतौर पर कम से कम 3 महीने) का उपयोग करें, पिघलना एक बरकरार टाइप 1 पानी में जमे हुए सुअर का दिल रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर एक 4 एल बीकर में जलमग्न के लिए तैयार
- दिल पूरी तरह thawed है, दिल सूखा पॅट, दिल तौलना, और वजन रिकॉर्ड. एक बाजार वजन सुअर का दिल 375-450 लगभग छ तौलना चाहिए.
- एक कांटेदार reducer के ¼ "को समाप्त करने के लिए आकार 18 Masterflex टयूबिंग कनेक्ट कांटेदार reducer डालें और.महाधमनी अंदर टयूबिंग. प्लेस 2 नली clamps या brachiocephalic ट्रंक नीचे महाधमनी के चारों ओर सुरक्षित ज़िप संबंधों,. reducer और टयूबिंग महाधमनी वाल्व ऊपर रहना चाहिए, इतना, कोरोनरी धमनियों (1 चित्रा) perfused किया जा सकता है.
- प्रकार पानी के साथ मैं टयूबिंग को भरने के लिए एक 30 या 60 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करने के लिए. अपने लगभग मध्य में एक Masterflex रोलर पंप के कारतूस के भीतर टयूबिंग डालें. डूब एक 4 एल पानी की 2.5 एल के साथ भरा बीकर के नीचे में टयूबिंग की आमद के अंत और टयूबिंग सुरक्षित.
- पानी के साथ भरा बीकर में दिल, और हवाई बुलबुले को दूर करने के लिए प्रधानमंत्री पंप रखें. यदि बुलबुले महाधमनी टयूबिंग जहां डाला जाता है से आने मनाया जाता है, महाधमनी पर repositioned या अतिरिक्त के साथ संबंधों को सुरक्षित करने की आवश्यकता हो सकती है. एक airtight मुहर लिए decellularization (2 चित्रा) की प्रक्रिया के दौरान पर्याप्त दबाव बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण है.
- 4 एल 0.2% Trypsin/0.05% EDTA/0.05% NaN 3 एल युक्त बीकर रखेंप्लेट हलचल है और यह 37 के लिए गर्म ° decellularization प्रक्रिया की तैयारी में सी 3 समाधान.
2. ऊतक rinses
- 400 मिलीग्राम / मिनट की एक प्रवाह की दर के लिए पंप सेट, यह सुनिश्चित करना है कि सही टयूबिंग आकार चुना है. 15-25 मिनट के लिए मैं पानी प्रकार के साथ दिल फ्लश. पंप के रूप में शुरू होता है, दिल प्रफुल्लित और ventricles से रक्त उड़ेलना चाहिए. ताजा समाधान हर 5-10 मिनट प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए, या के रूप में दिल से हटा रक्त की मात्रा के आधार पर की जरूरत है. यदि रक्त को हृदय से नहीं effused है, और आवश्यक के रूप में टयूबिंग clamps समायोजित करें.
- पंप बंद करो और एक अलग 2X फास्फेट के साथ भरा बीकर दिल हस्तांतरण खारा (पीबीएस) buffered. बाद टयूबिंग समाधान में डूबे हुए है, पंप शुरू और 700 मिलीग्राम / मिनट प्रवाह की दर में वृद्धि. दिल समाधान में 15 मिनट के लिए रहते हैं, इस समस्या का समाधान हर 5 मिनट बदलने चाहिए. प्रत्येक समाधान परिवर्तन पंप की आवश्यकता के लिए अस्थायी रूप से बंद कर दिया जा सकता है जबकि ऊतक और टयूबिंग ले जाया जाता हैनई बीकर.
- दिल का स्थानांतरण करने के लिए 10 मिनट के लिए मैं पानी लिखें और 750 मिलीग्राम / मिनट प्रवाह की दर में वृद्धि.
3. Decellularization और समाधान परफ्यूज़न
- 0.2 Trypsin/0.05%% EDTA/0.05% NaN 3 युक्त 37 पर बीकर दिल स्थानांतरण ° सी. 1200 मिलीग्राम / मिनट के लिए पंप की गति को बढ़ाने के लिए और पंप शुरू. हलचल बीकर में समाधान प्रसारित बीकर के नीचे रखा पट्टी का उपयोग करें. दिल 0.2% Trypsin/0.05% 37 डिग्री सेल्सियस में EDTA/0.05% NaN 3 समाधान में तीन घंटे के एक कुल के लिए रहना चाहिए. 1 घंटे के बाद, 1500 मिलीग्राम / मिनट के लिए पंप की गति बढ़ा सकते हैं. एक अतिरिक्त घंटे के बाद, 1800 मिलीग्राम / मिनट के लिए पंप की गति बढ़ा सकते हैं. ऊतक धीरे धीरे बढ़ ऊतक हालत के लिए छिड़काव गति के अधीन है और जहाजों का टूटना को रोकने के. दिल प्रफुल्लित और प्रोटोकॉल के इस चरण के दौरान लगभग दोगुनी आकार में. ऊतक अपने प्राकृतिक रंग खो वें भर atria से सुप्रीम प्रगतिई प्रोटोकॉल (3 चित्रा).
- प्रत्येक समाधान छिड़काव के बाद एक दो कदम कुल्ला सेलुलर मलबे, रासायनिक अवशेषों, और सहायता सेल निकालने के लिए किया जाता है. प्रत्येक कुल्ला एक 10 मिनट के होते हैं प्रकार मैं एक 10 मिनट बाद पानी 2X पीबीएस समाधान के साथ कमरे के तापमान पर कुल्ला में कुल्ला. प्रत्येक धोने समाधान के मूल बीकर से हटाने के होते हैं, कुल्ला समाधान जोड़ने, और जलमग्न दिल युक्त बीकर के के भीतर perfusate परिसंचारी. 0.2 Trypsin/0.05%% EDTA/0.05% NaN 3 समाधान के बाद, 1900 मिलीग्राम / मिनट पर छिड़कना पानी और फिर 1950 मिलीग्राम / मिनट 2X पीबीएस छिड़कना.
- 3% ट्राइटन X-100/0.05 EDTA/0.05% कमरे के तापमान पर% 3 NaN के समाधान के लिए दिल स्थानांतरण. 2000 मिलीग्राम / मिनट और एक घंटे के लिए छिड़कना समाधान के लिए पंप की गति बढ़ाएँ. बीकर से समाधान निकालें और ताजा समाधान के साथ प्रतिस्थापित करने के लिए, 2100 मिलीग्राम / मिनट पंप गति बढ़ाने के लिए, और एक अतिरिक्त घंटे और एक आधे के लिए नए समाधान छिड़कना, कुल समय लाने में3% ट्राइटन X-100/0.05% EDTA/0.05% 2.5 घंटा NaN 3.
- 2150 मिलीग्राम / मिनट और 2X पीबीएस में 10 मिनट प्रत्येक के लिए 2180 मिलीग्राम / मिनट पर मैं प्रकार पानी में ऊतक कुल्ला.
- कमरे के तापमान पर 4% सोडियम Deoxycholate समाधान दिल स्थानांतरण. २२०० एमएल / मिनट और 3 घंटे के लिए छिड़कना समाधान के लिए पंप की गति बढ़ाएँ.
- कुल्ला प्रकार मैं पानी में ऊतक और +२,२०० में 2X / मिलीलीटर मिनट पीबीएस 15 मिनट प्रत्येक, प्रत्येक समाधान के लिए 5-10 मिनट के बाद समाधान को बदलने के लिए. वर्णित छिड़काव कदम कदम कुल्ला करने के लिए दो बार प्रदर्शन करने और चार डिग्री सेल्सियस में संलग्न टयूबिंग के साथ दिल रातोंरात भंडारण के द्वारा कई दिनों में विभाजित किया जा सकता है और मैं प्रकार पानी में डूबे हुए है.
- अगले दिन प्रदर्शन, एक 5 मिनट 750 मिलीग्राम / मिनट पर मैं प्रकार पानी से कुल्ला, एक 5 मिनट में +१,५०० मिलीग्राम / मिनट 1X पीबीएस में कुल्ला द्वारा पीछा किया. प्रोटोकॉल तो उचित समाधान में वर्णित प्रवाह दर पर जारी किया जा सकता है.
4. कीटाणुशोधन और अंतिम प्रसंस्करण
- दिल को 0.1% perac स्थानांतरितetic एसिड / 4% इथेनॉल और 2200 मिलीग्राम / मिनट पर 1.5 घंटे के लिए छिड़कना समाधान समाधान.
- ऊतक के लिए अंतिम rinses सभी 2200 मिलीग्राम / मिनट पर प्रदर्शन कर रहे हैं. 1X पीबीएस के साथ 15 मिनट, दो प्रकार मैं पानी में 5 मिनट washes द्वारा पीछा के लिए ऊतक छिड़कना. Rinses की यह श्रृंखला एक बार दोहराया है क्रम में समाधान छिड़काव की प्रक्रिया को पूरा करने के लिए.
- पंप बंद करें और दिल नाली समाधान से दिल को हटा दें. महाधमनी से संबंधों में कटौती करने के लिए, सभी टयूबिंग निकालने के लिए, और 1 घंटे के लिए पलायन करने के लिए एक खाली बीकर में दिल की जगह है. अतिरिक्त तरल करने के लिए समय समय पर सूखा होने की आवश्यकता होगी. एक शोषक पैड पर दिल निर्धारित करने के लिए पूरी तरह से दिल (4 चित्रा) नाली.
- के बाद पानी की सबसे हटा दिया जाता है, हृदय बाह्य मैट्रिक्स (सी ईसीएम) के वजन रिकॉर्ड. दिल decellularization प्रक्रिया के दौरान अपने प्रारंभिक वजन के लगभग 20-25% खो उम्मीद की जा सकती है.
- सही और बाएँ ventricles, साथ ही डीएनए quantificati लिए वेंट्रिकुलर पट काटनापर और histological प्रसंस्करण ऊतक की पूरी decellularization (5 चित्रा) में आदेश की पुष्टि करने के लिए.
- -80 डिग्री सेल्सियस पर lyophilization से पहले कम से कम 2 घंटे के लिए रुक सी ईसीएम.
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Representative Results
पूरे सुअर का दिल पर decellularization का प्रभाव स्वाभाविक रूप से आकार में मतभेद, दबाव, और पोत व्यवस्था के कारण भिन्न होता है. इसलिए, व्युत्पन्न कोशिकी मैट्रिक्स scaffolds के सटीक संरचना दिल से दिल के लिए ही नहीं होगा. वर्णित प्रोटोकॉल का पूरा एक दिल है कि सफेद या पारदर्शी प्रकट होता है, सेलुलर सामग्री के नुकसान का संकेत निकलेगा. हालांकि, यह व्यापक रूप से स्वीकार किया जाता है कि एक ऊतक "decellularized" कुछ और मात्रात्मक 8 पैरामीटर के संयोजन पर आधारित माना जा सकता है. ऊतक के मिलीग्राम प्रति डबल असहाय डीएनए (6 चित्रा) के कम से कम 50 एनजी के साथ एक सफल decellularization प्रोटोकॉल एक मैट्रिक्स का उत्पादन होगा. आदेश में मैट्रिक्स के आरोपण पर एक मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से बचने के लिए, शेष डीएनए भी कम से कम 200 आधार जोड़े (7 चित्रा) को शामिल करना चाहिए. इन निष्कर्षों की पुष्टि, Hematoxylin और लाल भामसान रंग धुंधला हो जाना परमाणु के अभाव प्रकट करना चाहिएventricles और वेंट्रिकुलर पट (8 चित्रा) के प्रतिनिधि वर्गों में धुंधला हो जाना. Masson Trichrome आगे हृदय की मांसपेशी बंडलों और कोलेजन नेटवर्क (9 चित्रा) की अवधारण के नुकसान की पुष्टि करता है.
चित्रा 1. टयूबिंग की कांटेदार अंत में देशी दिल की महाधमनी में डाला जाता है. ट्यूबिंग नली clamps या महाधमनी वाल्व ऊपर ज़िप संबंधों के साथ सुरक्षित कोरोनरी धमनियों के माध्यम से छिड़काव सुनिश्चित किया जाना चाहिए.
2. दिल एक 4L बीकर और हवा के बुलबुले में पानी में डूबे हुए है चित्रा टयूबिंग से हटाया जाना चाहिए. यदि बुलबुले टयूबिंग निकट महाधमनी से उभर मनाया जाता है, अतिरिक्त संबंधों के लिए टी टयूबिंग सुरक्षित करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए वह क्रम में महाधमनी ऊतक में पर्याप्त दबाव बनाए रखने के लिए.
चित्रा 3 के रूप में समाधान कोरोनरी धमनियों के माध्यम से perfused हैं, दिल अपने मूल रंग, अटरिया से दिल और coronaries चारों ओर स्थानीयकृत के शीर्ष प्रगति करने के लिए खो देंगे.
चित्रा 4 कीटाणुशोधन और कुल्ला प्रोटोकॉल के इस कदम के पूरा होने के बाद, टयूबिंग हटा दिया है और दिल एक शोषक पैड पर रखा गया है के लिए अतिरिक्त पानी दिल के बाहर पलायन करने देते. यह एक सटीक माप सुनिश्चित करता है जब ऊतक वजन और भी ऊतक सेक्शनिंग से पहले आराम करने के लिए अनुमति देता है.
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5 चित्रा छोड़ दिया निलय (LV), सही वेंट्रिकल (आर वी), और वेंट्रिकुलर पट सभी histologic प्रसंस्करण, ठंड और lyophilization, और डीएनए की मात्रा का ठहराव के लिए decellularized दिल से हटा रहे हैं.
6 चित्रा डीएनए सामग्री के मात्रात्मक विश्लेषण एक पिको ग्रीन परख का उपयोग. cECM दिल से ventricles डीएनए सामग्री में एक महत्वपूर्ण कमी का पता चलता है जब देशी ventricles की तुलना में. डीएनए इस प्रोटोकॉल से मनाया मूल्यों पर या उसके नीचे 50 एनजी / मिलीग्राम मानक decellularized ऊतकों के लिए मनाया जाता है.
7 चित्रा डीएनए टुकड़ा आकार, रूप में ethidiu द्वारा निर्धारितमीटर ब्रोमाइड जेल, decellularized ventricles में थोड़ा अवशिष्ट डीएनए से पता चला है जब एक मूत्राशय मैट्रिक्स (UBM) मानक की तुलना में.
8 चित्रा. Hematoxylin और लाल भामसान रंग धुंधला हो जाना ventricles से decellularization प्रोटोकॉल के पूरा होने के बाद परमाणु सामग्री का पूरी तरह हटाने दिखाया.
9 चित्रा Masson एक की Trichrome धुंधला हो जाना) देशी और बी) decellularized निलय.
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Discussion
वर्तमान अध्ययन एक सुअर का दिल की लगातार और कुशल decellularization के लिए पद्धति में वर्णित है. प्रोटोकॉल पहले प्रकाशित रिपोर्ट 1 एक संशोधन किया गया है, और अब प्रवाह करने के लिए जोखिम और बढ़ा दबाव है, जो अधिक repeatable परिणाम प्रदान शामिल है. परिणामस्वरूप decellularized ऊतक 2 ऊतक के सफल decellularization लिए प्रकाशित मापदंड के सभी से मुलाकात की. लगातार समाधान परिवर्तन करने के लिए ऊतकों को सेलुलर सामग्री के reintroduction को सीमित करने के लिए प्रदर्शन किया गया है, और प्रत्येक decellularization एजेंट के लिए जोखिम की अवधि के लिए ECM पर प्रतिकूल प्रभाव को कम करने के लिए कम से कम किया गया था. प्रोटोकॉल की शुरुआत चरणों के दौरान, छिड़काव दर धीरे - धीरे ऊतक हालत के लिए बढ़ा दिया गया था और प्रोटोकॉल के बाद के चरणों के दौरान उच्च प्रवाह की दर के लिए अनुमति देते हैं. प्रारंभिक अवस्था में ऊतक कंडीशनिंग के बिना, दिल की vasculature टूटना, दिल के छिड़काव असंभव बना सकते हैं. आद्यकर्नल अपनी क्षमता के कारण इस्तेमाल किया गया था, और कोई दावा अन्य प्रोटोकॉल पर अपनी श्रेष्ठता के लिए बना रहे हैं. decellularization एजेंटों और छिड़काव की दरों की सटीक संरचना क़यास बेहतर यांत्रिक या जीवविज्ञान विशेषताओं के साथ एक प्रोटोकॉल उपज विविध किया जा सकता है, लेकिन एजेंटों के दिल को प्रसव के लिए सामान्य सिद्धांतों को लागू कर रहे हैं.
कई decellularization प्रोटोकॉल भर में प्रदर्शन प्रक्रियाओं को दिल की देशी तीन आयामी संरचना के संरक्षण के लिए जिम्मेदार ठहराया गया था. सबसे पहले, ऊतक छंटनी और आगमन पर जमे हुए है. बर्फ़ीली सेल को बढ़ावा और पूर्व कंडीशनिंग छिड़काव चक्र के लिए ऊतक के लिए महत्वपूर्ण था. ऊतक में कटौती और 2 बरकरार बरकरार महाधमनी सेमी महाधमनी वाल्व से बेहतर के लिए अच्छी तरह से निरीक्षण किया गया. यदि किसी भी pericardium या epicardium कट गया था, अंग क्योंकि perfusate दिल के बहाव के क्षेत्रों तक पहुँच नहीं था खारिज कर दिया गया था, और दिल पूरी तरह से नहीं decellularized था.अगला, ऊतक पूरी तरह से उपयोग करने से पहले किया गया था मैं प्रकार पानी में thawed. पानी के ऊतकों के रूप में यह thawed और भी दिल के भीतर सहायता प्राप्त अवशिष्ट रक्त के थक्के के हटाने के आराम करने के लिए अनुमति दी. अंत में, के रूप में टयूबिंग डाला गया था, देखभाल करने के लिए सुनिश्चित करें कि महाधमनी वाल्व बरकरार रह इतना है कि यह टयूबिंग चारों ओर पानी से तंग सील का गठन किया है, ताकि एक उचित दबाव बनाए रखा गया था और है कि समाधान कोरोनरी धमनियों में प्रवेश करने के लिए लिया गया था.
है के बाद प्रत्येक decellularization प्रोटोकॉल पूरा किया गया है, गुणवत्ता नियंत्रण उपायों की एक श्रृंखला के लिए सेलुलर सामग्री का पूरी तरह हटाने सुनिश्चित करने के लिए पूरा किया गया. वर्तमान सत्यापित है कि प्रोटोकॉल सेल नाभिक के लिए histologic धुंधला हो सफाया एक अध्ययन से पता चला है कि डीएनए के कम से कम 50 एनजी ऊतक की सूखी वजन के मिलीग्राम प्रति उपस्थित थे, और कि किसी भी डीएनए 6 आकार में कम से कम 200 बीपी. हृदय decellularization के लिए पहले प्रकाशित तरीकों डीएनए धुंधला हो जाना और मात्रा decellularization के समान स्तर से पता चला2,5,9,10. पूरा decellularization इन एंजाइमों और डिटर्जेंट के इसी तरह के उपचार का उपयोग कर पढ़ाई में पूरा किया गया. हालांकि, वर्तमान अध्ययन में, प्रत्येक रासायनिक करने के लिए जोखिम की लंबाई बढ़ा दिया गया था, वहाँ अधिक समाधान परिवर्तन थे, और प्रवाह की दर बढ़ रहे थे. वर्तमान प्रोटोकॉल भी रासायनिक rinses की लंबाई में वृद्धि हुई है, संभावित कोशिकी मैट्रिक्स से रासायनिक अवशेषों के कुशल हटाने के लिए अग्रणी.
हृदय विशिष्ट कक्षों के साथ decellularized चूहे दिल की Recellularization इन विट्रो 2,5 में आशाजनक परिणाम सामने आए है. पूरे अंग छिड़काव decellularization देशी vasculature, जो ऊतक के recellularization में महत्वपूर्ण है के रखरखाव के लिए अनुमति दी है. निहित वृद्धि कारकों, मैट्रिक्स प्रोटीन, और तीन आयामी फाइबर वास्तुकला भी उचित सेल लगाव, प्रवास, और reconstitute सिकुड़ा दौरे ऊतक संकेत को बढ़ावा दिया. सुअर हृदय extracelluमैट्रिक्स lar और अधिक मुश्किल हो पाड़ के आकार और उचित सेल संचार और पोषक तत्व परिवहन के लिए आवश्यक कोशिकाओं की संख्या की वजह से recellularize जाएगा. हालांकि, हृदय मैट्रिक्स से काट पैच vivo अनुप्रयोगों में के लिए उपयोगी हो सकता है. कई अध्ययनों पशु 11-13 मॉडल में क्षतिग्रस्त ऊतकों के पुनर्निर्माण के लिए एक साइट विशिष्ट मैट्रिक्स का उपयोग करने के संभावित लाभ दिखाया गया है. इस प्रकार, एक बाह्य मैट्रिक्स हृदय ऊतक से व्युत्पन्न पाड़ दौरे पुनर्निर्माण अनुप्रयोगों के लिए वांछनीय है. हृदय ऊतक के निहित वास्तुकला एक ECM अन्य अंग या एक कृत्रिम biomaterial से व्युत्पन्न पाड़ अधिक लाभ उपस्थित हो सकता है. एक साइट विशेष पाड़ मेजबान सेल घुसपैठ का समर्थन और एक रचनात्मक remodeling प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने, निशान ऊतक गठन के लिए विरोध के रूप में हो सकता है. तिथि करने के लिए, हृदय ईसीएम पैच vivo में जांच की गई है एक दौरे दीवार 14 में बनाया दोष का पुनर्निर्माण किया. भविष्य stuपाड़ हृदय वरीयता प्राप्त और मैट्रिक्स पर संवर्धित कोशिकाओं का समर्थन करने की क्षमता की जांच करने के लिए मर जाता है इन विट्रो में प्रदर्शन किया जाएगा. यहाँ बताया तरीकों में भी मानव मन की decellularization के लिए लागू हो सकता है.
अंत में, सुअर का दिल decellularization संभव है और तरीकों सीधे आगे हैं. इस सामग्री की निरंतर जांच नैदानिक इस्तेमाल के लिए अपनी क्षमता में अंतर्दृष्टि प्रदान करेगा.
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Disclosures
डा. गिल्बर्ट ACell इंक, वैज्ञानिक सलाहकार बोर्ड पर था, जबकि अध्ययन किया जा रहा था, और हाल ही में अनुसंधान और विकास के उपाध्यक्ष बने. ACell इंक, मूत्राशय मैट्रिक्स बेचता है और वर्तमान अध्ययन में कोई वाणिज्यिक हित है.
Acknowledgments
लेखकों के लिए Brogan अतिथि, मिशेल वीवर, और िईद्भस्टेन Lippert स्वीकार करना चाहते हैं. इस अध्ययन के लिए अनुदान NIH अनुदान R03EB009237, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से NIH बायोमेडिकल इमेजिंग और बायोइन्जिनियरिंग के राष्ट्रीय संस्थान और T32HL076124-05 से प्रशिक्षण T32EB001026-06 अनुदान द्वारा प्रदान किया गया.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Trypsin | Gibco | 15090 | |
| EDTA | Fisher | BP120-500 | |
| NaN3 | Sigma | S2002-500G | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-1L | |
| 10X PBS | Fisher | BP399-20 | |
| Sodium Deoxycholate | Sigma | D6750-500G | |
| Peracetic Acid | Pfaltz and Bauer | P05020 | 35% CAS# 79-21-0 |
| Ethanol | Pharmco | 111000200 | |
| Masterflex Pump Drive | Cole Parmer | SI-07524-50 | |
| Masterflex Tubing | Cole Parmer | 96400-18 | Size 18 |
| Barbed Reducer | Cole Parmer | EW-30612-20 | |
| 4L Beaker | Fisher Scientific | 02-540T |
References
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