Summary
ووصف طريقة لإزالة بسرعة وبصورة كاملة المكونات الخلوية من قلب الخنزير سليمة من خلال نضح الوراء. هذه الطريقة تعطي القلب موقع خارج الخلية مصفوفة محددة سقالة الذي لديه القدرة لاستخدامها في التطبيقات السريرية المتعددة.
Abstract
وقد اكتسب نضح على أساس decellularization الجهاز كله مؤخرا الاهتمام في مجال هندسة الأنسجة كوسيلة لخلق مواقع محددة السقالات المصفوفة خارج الخلية، إلى حد كبير مع الحفاظ على بنية الأصلية هي السقالة. حتى الآن، وقد استخدمت هذه الطريقة في مجموعة متنوعة من أجهزة الجسم، بما في ذلك القلب والرئة والكبد و1-5. وقد اعتمدت أساليب decellularization السابقة لأنسجة الأوعية الدموية وشبكة دون الوصول إليها بسهولة عند التعرض لفترات طويلة من النسيج إلى حلول من المنظفات، والأحماض، أو العلاجات الأنزيمية كوسيلة لإزالة المكونات الخلوية والنووية من البيئة المحيطة خارج الخلية 6-8. ومع ذلك، فإن فعالية هذه الأساليب يتوقف على قدرة الحلول لتتخلل نسيج عبر نشرها. في المقابل، نضح من الأجهزة من خلال النظام الأوعية الدموية الطبيعية على نحو فعال خفض المسافة نشرها وتيسير النقل من decellularizatiعلى وكلاء في الأنسجة والمكونات الخلوية من الأنسجة. هنا، نحن تصف طريقة لdecellularize تماما قلب الخنزير سليمة من خلال نضح الوراء التاجية. أسفرت عن بروتوكول القلب خارج الخلية decellularized تماما مصفوفة (C-ECM) سقالة مع هيكل ثلاثي الأبعاد للقلب سليمة. استخدام أسلوب لدينا سلسلة من الإنزيمات، والمنظفات، والأحماض بالإضافة إلى يشطف مفرط التوتر وناقص التوتر للمساعدة في تحلل وإزالة الخلايا. استخدام بروتوكول حل لفصل الخلايا التربسين من المصفوفة تليها حلول تريتون X-100 deoxycholate والصوديوم للمساعدة في إزالة المواد الخلوية. بروتوكول يستخدم أيضا وصف سرعات نضح من أكبر من 2 لتر / دقيقة لفترات طويلة من الزمن. ضمان معدل تدفق عالية، إلى جانب التغييرات حل يسمح النقل من وكلاء للأنسجة دون التسبب في تلوث الحطام الخلوية وفعالة الشطف من الأنسجة. الطريقة الموضحة إزالة جميع المواد النووية من ناتيهاء الأنسجة القلبية الخنازير، وخلق مواقع محددة القلب ECM سقالة التي يمكن استخدامها لمجموعة متنوعة من التطبيقات.
Protocol
1. إعداد الأنسجة وتجربة الإعداد
- حصاد الخنازير الجهاز مباشرة بعد القتل الرحيم من منشأة مسلخ أو البحث وشطف الدم الزائد. تقليم قلب من الدهون الزائدة والأنسجة، والحفاظ على الشريان الأورطي والأذين سليمة. تقليم بعيدا الدهون لفصل الشريان الرئوي من الشريان الأورطي. إذا كان هناك أي تخفيضات في الأنسجة، وتجاهل بشكل مناسب.
- التفاف كل قلب على حدة في ورقة المجمد وتخزين جميع الأنسجة في الفريزر -80 ° C لمدة لا تقل عن 24 ساعة لضمان التجميد الكامل.
- عندما جاهزة للاستخدام (عادة أقل من 3 أشهر)، ذوبان الجليد سليمة 1 قلب الخنزير المجمدة في الماء 1 نوع المغمورة بين عشية وضحاها في كوب L 4 في C. ° 4
- بعد إذابة قلب تماما، بات قلب الجافة، تزن القلب، وتسجيل الوزن. وينبغي قلب السوق خنزير تزن حوالي 375-450 الوزن ز.
- الاتصال أنابيب حجم Masterflex 18 إلى النهاية "ل¼ المخفض الشائكة. أدخل المخفض الشائكة وأنابيب داخل الشريان الأورطي. المشابك خرطوم 2 أو مكان الرمز البريدي العلاقات آمنة حول الأبهر، أسفل الجذع العضدي الرأسي. والمخفض وأنابيب يجب أن تبقى فوق الصمام الأبهري، وبالتالي يمكن perfused الشرايين التاجية (الشكل 1).
- استخدام حقنة مل 30 أو 60 لملء الأنابيب بالماء I نوع. إدراج أنابيب داخل خرطوشة من مضخة الأسطوانة Masterflex في منتصفه تقريبية. يغرق نهاية تدفق للأنابيب في قاع كوب مملوء L 4 2.5 لتر من الماء وتأمين أنابيب.
- وضع القلب في كوب مملوء بالماء، ورئيس المضخة لإزالة فقاعات الهواء. إذا لاحظت فقاعات قادمة من الشريان الأورطي حيث يتم إدراج أنابيب، قد تحتاج إلى الشريان الأورطي أو أعادت العلاقات مع تأمين إضافية. ختم محكم المهم للحفاظ على الضغط الكافي أثناء عملية decellularization (الشكل 2).
- ضع الكأس التي تحتوي على L 4 3 L لنان 0.2٪ Trypsin/0.05٪ EDTA/0.05٪3 الحل على اثارة وحة والحارة إلى 37 درجة مئوية في إعداد عملية decellularization.
2. يشطف النسيج
- تعيين مضخة لمعدل التدفق من 400 مل / دقيقة، وضمان أن يتم تحديد حجم أنابيب الصحيح. مسح القلب مع النوع الأول 15-25 دقيقة للمياه. كما بدأت المضخة، يجب قلب تنتفخ ومنفرش الدم من البطينين. ينبغي الاستعاضة حل الطازج كل 5-10 دقيقة، أو حسب الحاجة على أساس كمية من الدم من القلب إزالة. إذا لم يتم effused الدم من القلب، وضبط أنابيب والمشابك حسب الضرورة.
- التخزين المؤقت وقف ضخ ونقل القلب إلى دورق منفصل مليئة المالحة الفوسفات 2X (PBS). بعد الأنبوب المغمور في الحل، وبدء ضخ زيادة معدل تدفق إلى 700 مل / دقيقة. يجب أن تبقى في قلب حل لمدة 15 دقيقة، وتغيير كل 5 دقائق الحل. كل تغيير يتطلب حل المضخة إلى أن يتوقف مؤقتا بينما يتم نقل الأنسجة وأنابيبإلى دورق جديدة.
- نقل القلب إلى النوع الأول الماء لمدة 10 دقيقة وزيادة معدل تدفق إلى 750 مل / دقيقة.
3. Decellularization والحل الإرواء
- نقل القلب إلى دورق يحتوي على 0.2٪ Trypsin/0.05٪ EDTA/0.05٪ نان 3 في 37 ° C. زيادة سرعة مضخة إلى 1،200 مل / دقيقة وتبدأ المضخة. استخدام قضيب تحريك وضعت في أسفل الكأس تعميم الحل في الدورق. يجب أن تبقى في القلب 0.2٪ حل EDTA/0.05٪ 3٪ Trypsin/0.05 نان في C ° 37 ليصبح المجموع ثلاث ساعات. بعد 1 ساعة، زيادة سرعة مضخة إلى 1،500 مل / دقيقة. بعد ساعة إضافية، زيادة سرعة مضخة إلى 1،800 مل / دقيقة. تتعرض الأنسجة ببطء لزيادة سرعات نضح إلى حالة الأنسجة ومنع تمزق الأوعية. سوف تنتفخ وقلب مزدوج تقريبا في حجم أثناء هذه الخطوة من البروتوكول. سوف النسيج يفقد لونه الطبيعي، تتقدم من الأذينين إلى قمة أنحاء اله بروتوكول (الشكل 3).
- بعد كل نضح الحل، يتم تنفيذ الخطوة الثانية شطف لإزالة الأنقاض الخلوية، والمخلفات الكيميائية، والمساعدات تحلل الخلايا. كل شطف يتكون من 10 دقيقة في شطف المياه من النوع الأول تليها 10 دقيقة شطف بمحلول PBS 2X في درجة حرارة الغرفة. كل غسل يتكون من إزالة الحل من الكأس الأصلية، مضيفا شطف الحلول، وتعميم سائل الإرواء في دورق يحتوي على القلب المغمورة. بعد حل 0.2٪ Trypsin/0.05٪ 3٪ EDTA/0.05 نان، يروي المياه في 1900 مل / دقيقة ثم يروي 2X PBS في 1950 مل / دقيقة.
- نقل القلب إلى حل من 3٪ تريتون X-100/0.05٪ EDTA/0.05٪ نان 3 في درجة حرارة الغرفة. زيادة سرعة مضخة إلى 2،000 مل / دقيقة وحل يروي لمدة ساعة. إزالة الحل من الدورق واستبدالها مع حل جديد، زيادة سرعة مضخة إلى 2100 مل / دقيقة، ويروي الحل الطازجة لمدة ساعة ونصف إضافية، ليصل إجمالي الوقت في3٪ تريتون X-100/0.05٪ EDTA/0.05٪ نان 3 حتي 2،5 ساعة.
- شطف الأنسجة في الماء I نوع في 2150 دقيقة / مل وPBS 2X في 2180 مل / دقيقة لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
- نقل القلب إلى حل الصوديوم Deoxycholate 4٪ في درجة حرارة الغرفة. زيادة سرعة مضخة إلى 2،200 مل / دقيقة وحل يروي لمدة 3 ساعة.
- شطف الأنسجة في الماء I نوع و2X في PBS في 2200 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة لكل منهما، بعد تغيير الحلول 5-10 دقيقة في كل حل. ويمكن تقسيم الخطوات الموضحة نضح خلال الأيام متعددة قبل تنفيذ الخطوة شطف مرتين وتخزين أنابيب المرفقة مع القلب بين عشية وضحاها في 4 و C ° المغمورة في المياه I نوع.
- في اليوم التالي، تنفيذ حد أدنى 5 شطف بالماء I نوع في 750 مل / دقيقة، تليها 5 دقائق شطف PBS 1X في 1500 في مل / دقيقة. ثم قد البروتوكول أن تستمر في معدل التدفق الوارد وصفها في الحل المناسب.
4. التطهير والمعالجة النهائية
- نقل قلب لperac 0.1٪ETIC حمض / 4٪ محلول الإيثانول وحل يروي ل 1.5 ساعة في 2200 مل / دقيقة.
- يتم تنفيذ جميع يشطف النهائية للنسيج في 2200 مل / دقيقة. يروي النسيج مع 1X PBS لمدة 15 دقيقة، ثم يغسل من قبل اثنين من 5 دقائق في الماء I نوع. ويتكرر هذا المسلسل من يشطف مرة أخرى من أجل استكمال إجراءات نضح الحل.
- تحويل قبالة مضخة وإزالة القلب من حل لتصريف القلب. قطع العلاقات من الشريان الأورطي، وإزالة جميع الأنابيب، ووضع القلب في كوب فارغ لاستنزاف لمدة 1 ساعة. سوف السائل الزائد يجب أن يتم بشكل دوري ينضب. وضع وسادة القلب على ماصة لاستنزاف تماما القلب (الشكل 4).
- بعد إزالة معظم الماء، سجل وزن المصفوفة خارج الخلية القلب (C-ECM). ويمكن توقع أن يخسر قلب حوالي 20-25٪ من وزنه الأولي خلال عملية decellularization.
- تشريح البطينين الأيمن والأيسر، وكذلك الحاجز البطيني للquantificati DNAعلى تجهيز والنسيجية من أجل تأكيد decellularization كاملة من النسيج (الشكل 5).
- تجميد C-C ° ECM في -80 على الأقل 2 ساعة قبل تجفيد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تأثير على قلوب الخنازير decellularization كله يختلف بطبيعة الحال بسبب الاختلافات في حجم والضغوط وترتيب السفينة. ولذلك، فإن تكوين الدقيق للالسقالات المصفوفة خارج الخلية المستمدة لن تكون هي نفسها من القلب الى القلب. والانتهاء من البروتوكول وصف تسفر عن القلب الذي يظهر بيضاء أو شفافة، مما يدل على فقدان المواد الخلوية. ومع ذلك، يتم قبول على نطاق واسع التي يمكن أن تعتبر نسيج "decellularized" على أساس مزيج من معلمات قليلة الكمية أكثر 8. وهناك بروتوكول decellularization ناجحة إنتاج مصفوفة مع أقل من 50 نانوغرام من الحمض النووي الذين تقطعت بهم السبل المزدوجة في ملغ من الأنسجة (الشكل 6). من أجل تجنب الاستجابة المناعية للمضيف على غرس المصفوفة، يجب أن تحتوي أيضا على الحمض النووي المتبقية أزواج قاعدة أقل من 200 (الشكل 7). لتأكيد هذه النتائج، ينبغي hematoxylin و eosin تلطيخ تكشف عن غياب النوويةتلطيخ في الفروع ممثل البطينين الحاجز البطيني و(الشكل 8). ثلاثي الألوان ماسون يؤكد كذلك فقدان حزم عضلة القلب والاحتفاظ شبكات الكولاجين (الشكل 9).
الشكل 1. يتم إدراج نهاية الشائكة للأنابيب في الشريان الأورطي للقلب الأم. يجب تأمين الأنبوب مع المشابك خرطوم أو العلاقات الرمز فوق الصمام الأبهري لضمان نضح عبر الشرايين التاجية.
يجب إزالة الشكل 2. هي غارقة في الماء قلب في كوب 4L وفقاعات الهواء من الأنبوب. إذا لاحظت فقاعات الخارجة من الشريان الأورطي بالقرب من أنابيب، يجب استخدام العلاقات إضافية لتأمين أنابيب لر انه الشريان الأورطي من أجل الحفاظ على ضغط كاف في الأنسجة.
الشكل 3. كما يتم perfused حلول من خلال الشرايين التاجية، فإن القلب يفقد لونه الأصلي، تتقدم من الأذينين إلى قمة القلب والمترجمة في جميع أنحاء التاجية.
الشكل 4. بعد الانتهاء من تطهير وشطف الخطوات من البروتوكول، تتم إزالة الأنبوب ويتم وضع القلب على وسادة ماصة للسماح لاستنزاف المياه الزائدة من القلب. هذا يضمن قياس دقيق وزنها عندما الأنسجة ويسمح أيضا للاسترخاء الأنسجة قبل تقطيع.
خريج "بديل =" الشكل 5 "/>
الشكل 5. تتم إزالة كافة البطين الأيسر (LV)، البطين الأيمن (RV)، والحاجز البطيني من القلب decellularized لتجميد نسيجية وتجهيزها وتجفيد، وتقدير DNA.
الشكل 6. التحليل الكمي للمحتوى DNA باستخدام مقايسة الأخضر بيكو. البطينين من قلوب cECM تظهر انخفاضا كبيرا في محتوى DNA بالمقارنة مع البطينين الأصلية. ويلاحظ القيم DNA لاحظ من هذا البروتوكول في أو دون المستوى نانوغرام / 50 ملغ لأنسجة decellularized.
الشكل 7. حجم جزء DNA، على النحو الذي يحدده ethidiuوأظهرت م بروميد هلام، DNA المتبقية قليلا في البطينين decellularized بالمقارنة مع مصفوفة المثانة البولية (UBM) القياسية.
وأظهرت الشكل 8. hematoxylin و تلطيخ يوزين الإزالة الكاملة للمواد النووية من البطينين بعد الانتهاء من البروتوكول decellularization.
الشكل 9. تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان في لA) B الأم و) البطين decellularized.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وحددت الدراسة الحالية منهجية متسقة وفعالة decellularization من قلب الخنزير. كان بروتوكول تعديل لتقرير نشر سابقا 1، وشملت يعد التعرض لتدفق وزيادة الضغط، التي وفرت المزيد من النتائج للتكرار. التقى الأنسجة الناتجة decellularized كافة المعايير المنشورة لdecellularization ناجحة من الأنسجة 2. وأجريت تغييرات متكررة الحل للحد من انبعاث المواد الخلوية للأنسجة، وتقليل مدة التعرض لكل عامل decellularization للحد من الآثار السلبية على ECM. خلال المراحل الأولى من البروتوكول، وزادت تدريجيا إلى معدل نضح حالة الأنسجة والسماح لتدفق معدلات أعلى خلال مراحل لاحقة من البروتوكول. دون تكييف النسيج في المراحل المبكرة، يمكن للالأوعية الدموية للقلب تمزق، مما نضح من قلب المستحيل. وبروتوتم استخدام عمود بسبب كفاءته، ويتم إجراء أية مطالبات لتفوقها على غيرها من البروتوكولات. قد تصور في التكوين الدقيق للعوامل decellularization ومعدلات التروية أن تختلف لانتاج بروتوكولا مع أفضل الخصائص الميكانيكية أو البيولوجية، ولكن المبادئ العامة للتسليم من وكلاء لقلب قابلة للتطبيق.
ويعزى الحفاظ على هيكل ثلاثي الأبعاد للقلب الأم إلى عدة إجراءات تنفيذ البروتوكول في جميع أنحاء decellularization. أولا، تم خفض الأنسجة وجمدت عند الوصول. تجميد ترقية تحلل الخلايا والأنسجة من المهم للما قبل تكييف للدورات التروية. تم تفتيشها بدقة النسيج لخفض و2 سم الشريان الأورطي سليمة سليمة متفوقة على الصمام الأبهري. إذا تم قطع أي التأمور أو النخاب، تم تجاهل الجهاز لأن سائل الإرواء لم تصل مناطق المصب من القلب، ولم decellularized قلب بالكامل.المقبل، وإذابة الأنسجة تماما في الماء قبل الاستخدام I نوع. يسمح للمياه الأنسجة للاسترخاء كما ساعد أيضا إذابة وإزالة جلطات الدم المتبقية في القلب. أخيرا، وكما تم إدراج الأنابيب، والحرص على التأكد من أن الصمام الأبهري ظلت سليمة بحيث شكلت ختم المياه مشددة حول الأنبوب، بحيث تم الحفاظ على الضغط المناسب وأن الحل دخلت الشرايين التاجية.
بعد الانتهاء من كل بروتوكول decellularization، أنجزت سلسلة من التدابير لمراقبة الجودة لضمان الإزالة الكاملة للمواد الخلوية. وأظهرت الدراسة الحالية التحقق من أن بروتوكول القضاء على تلطيخ نسيجية لنوى الخلايا، أن أقل من 50 نانوغرام من الحمض النووي كان حاضرا في ملغ من الوزن الجاف للنسيج، وأن أي DNA كان أقل من 200 BP في حجم 6. أظهرت أساليب المنشورة سابقا لdecellularization القلب مستويات مماثلة من decellularization في تلطيخ DNA وتقدير2،5،9،10. تم انجازه decellularization كاملة في هذه الدراسات باستخدام علاجات مماثلة من الإنزيمات والمنظفات. ومع ذلك، في هذه الدراسة، تم زيادة طول التعرض للكل مادة كيميائية، كانت هناك تغييرات أكثر الحل، وتمت زيادة معدلات التدفق. هذا البروتوكول كما زاد طول يشطف الكيميائية، مما قد يؤدي إلى إزالة أكثر كفاءة من المخلفات الكيميائية من المصفوفة خارج الخلية.
وقد أسفرت Recellularization من قلوب الفئران decellularized مع خلايا معينة القلب نتائج واعدة في المختبر 2،5. كله decellularization نضح الجهاز يسمح لصيانة الأوعية الدموية الأصلية، وهو أمر حاسم في recellularization من الأنسجة. عوامل النمو الكامنة، والبروتينات المصفوفة، والهندسة المعمارية ثلاثية الأبعاد الألياف عززت أيضا مرفق الخلية السليمة، والهجرة، ويشير إلى الأنسجة إعادة عضلة القلب مقلص. الخنازير القلب extracelluلار سوف يكون أكثر صعوبة مصفوفة لrecellularize نظرا لحجم السقالة وعدد الخلايا اللازمة لخلية الاتصال والنقل السليم المغذيات. ومع ذلك، قد خفض من بقع المصفوفة القلب تكون مفيدة للتطبيقات في الجسم الحي. وقد أظهرت دراسات متعددة ميزة إمكانية استخدام مصفوفة مواقع محددة لإعادة بناء الأنسجة التالفة في النماذج الحيوانية 11-13. وهكذا، فإن المصفوفة خارج الخلية المستمدة من الأنسجة سقالة القلب أمر مرغوب فيه لتطبيقات التعمير عضلة القلب. قد العمارة الأصيلة في النسيج القلبي تقديم مزايا أكثر من سقالة ECM المستمدة من جهاز آخر أو مادة بيولوجية اصطناعية. ويجوز للموقع المحدد سقالة دعم تسلل خلية المضيفة وتعزيز استجابة إعادة عرض بناءة، بدلا من تشكيل ندبا. حتى الآن، وقد تم التحقيق في القلب بقع ECM في الجسم الحي لإعادة خلق خلل في جدار عضلة القلب 14. المستقبل ستوسيتم تنفيذ يموت في المختبر لفحص قدرة سقالة لدعم الخلايا القلبية المصنف ومثقف على المصفوفة. قد الأساليب المذكورة هنا قد تكون أيضا قابلة للتطبيق لdecellularization من قلوب البشر.
في الختام، الخنزير decellularization القلب هو ممكن، والأساليب هي على التوالي إلى الأمام. والتحقيق المستمر لهذه المواد توفر نظرة ثاقبة قدرتها على الاستخدام السريري.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وكان الدكتور جيلبرت على المجلس الاستشاري العلمي في ACell، وشركة في حين يجري القيام به الدراسة، وأصبح مؤخرا نائب الرئيس للبحوث والتنمية. ACell، وشركة تبيع البولية مصفوفة المثانة وليس لديه مصلحة تجارية في هذه الدراسة.
Acknowledgments
فإن الكتاب أود أن أنوه بروغان ضيف، ويفر ميشيل، وكريستين ليبرت. تم توفير التمويل لهذه الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R03EB009237، فضلا عن منح التدريب NIH-06 T32EB001026 من المعهد الوطني للتصوير الطبية الحيوية والهندسة الحيوية وT32HL076124 05-.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Trypsin | Gibco | 15090 | |
| EDTA | Fisher | BP120-500 | |
| NaN3 | Sigma | S2002-500G | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-1L | |
| 10X PBS | Fisher | BP399-20 | |
| Sodium Deoxycholate | Sigma | D6750-500G | |
| Peracetic Acid | Pfaltz and Bauer | P05020 | 35% CAS# 79-21-0 |
| Ethanol | Pharmco | 111000200 | |
| Masterflex Pump Drive | Cole Parmer | SI-07524-50 | |
| Masterflex Tubing | Cole Parmer | 96400-18 | Size 18 |
| Barbed Reducer | Cole Parmer | EW-30612-20 | |
| 4L Beaker | Fisher Scientific | 02-540T |
References
- Ott, H. C., et al. Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung. Nat. Med. 16, 927-933 (2010).
- Ott, H. C., et al. Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart. Nat. Med. , (2008).
- Petersen, T. H., et al. Tissue-engineered lungs for in vivo implantation. Science. 329, 538-541 (2010).
- Uygun, B. E., et al. Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. Nat. Med. , (2010).
- Wainwright, J. M., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix from an intact porcine heart. Tissue Eng. Part C Methods. 16, 525-532 (2010).
- Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials. 32, 3233-3243 (2011).
- Gilbert, T. W. Strategies for tissue and organ decellularization. Journal of cellular biochemistry. , (2012).
- Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. Decellularization of tissues and organs. Biomaterials. 27, 3675-3683 (2006).
- Akhyari, P., et al. The quest for an optimized protocol for whole-heart decellularization: a comparison of three popular and a novel decellularization technique and their diverse effects on crucial extracellular matrix qualities. Tissue Eng. Part C Methods. 17, 915-926 (2011).
- Weymann, A., et al. Development and evaluation of a perfusion decellularization porcine heart model--generation of 3-dimensional myocardial neoscaffolds. Circulation journal : official journal of the Japanese Circulation Society. 75, 852-860 (2011).
- Cortiella, J., et al. Influence of acellular natural lung matrix on murine embryonic stem cell differentiation and tissue formation. Tissue Eng. Part A. 16, 2565-2580 (1089).
- Remlinger, N. T. Hydrated xenogeneic decellularized tracheal matrix as a scaffold for tracheal reconstruction. Biomaterials. 31, 3520-3526 (2010).
- Sellaro, T. L., Ravindra, A. K., Stolz, D. B., Badylak, S. F. Maintenance of hepatic sinusoidal endothelial cell phenotype in vitro using organ-specific extracellular matrix scaffolds. Tissue Eng. 13, 2301-2310 (2007).
- Wainwright, J. M. Right ventricular outflow tract repair with a cardiac biologic scaffold. Cells, tissues, organs. 195, 159-170 (2012).
