Summary
De eksperimentelle design foreslått her fokusere på å studere effekten av alkohol eksponering i apoptose og anvendelse av neurotrophic peptid under svangerskapet i fosterets hjerne. En detaljert beskrivelse fra avl til innsamling av fosterets hjerne er beskrevet. Teknikker for bestemmelse av apoptose er også beskrevet i detalj.
Abstract
Eksperimentelle design for å undersøke effekten av prenatal alkohol eksponering under tidlige embryonale stadier i hjernens vekst er utfordrende. Dette er hovedsakelig på grunn av vanskelighetene med mikrodisseksjon av fosterets hjerne og deres seksjoneringsventil for bestemmelse av apoptotiske celler forårsaket av prenatal eksponering for alkohol. Forsøkene som er beskrevet her gir visualiserte teknikker fra mus avl til identifisering av celledød i hjernens vev. Denne studien benyttet C57BL / 6 mus som dyremodell for å studere fetal alkohol eksponering og rollen trofiske peptid mot alkohol-indusert apoptose. Formeringsraten består av en 2-timers matting vinduet for å bestemme den nøyaktige fase av embryonisk alder. En etablert fetal alkohol eksponering modellen har blitt brukt i denne studien å undersøke virkningene av prenatal alkohol eksponering i fosterets hjerne. Dette innebærer fri tilgang til alkohol eller pair-matet flytende dietter som eneste kilde til næringsstoffer for gravide mus.
For å undersøke apoptose, er fosterets hjerne først innebygd i gelatin med en peel-away mold å lette seksjonering med en vibratome apparat. Fetal hjerne innebygde og fiksert i paraformaldehyd er lett seksjonert, og de frittflytende seksjonene kan monteres i SuperFrost pluss slides for bestemmelse av apoptose eller celledød.
TUNEL (TdT-mediert dUTP Nick End Merking; TdT: terminal deoxynucleotidyl transferase) analysen har blitt brukt til å identifisere celledød eller apoptotiske celler. Det er bemerkelsesverdig at apoptosis og cellemediert cytotoksisitet er kjennetegnet ved DNA-fragmentering. Således visualisert TUNEL-positive celler er tegn på celledød eller apoptotiske celler.
De eksperimentelle design her gi informasjon om bruk av en etablert flytende diett for å studere effekten av alkohol og rollen neurotrofiske peptider under svangerskapet i fosterets hjerne. Dette innebærer avl og fôring gravide mus, microdissecting fosterets hjerne, og bestemme apoptose. Sammen kan disse visuelle og tekstlige teknikker være en kilde for å undersøke prenatal eksponering av skadelige stoffer i fosterets hjerne.
Introduction
Målet med de eksperimentelle metodene beskrevet her er å vurdere de nervecellene effektene av trofiske peptider i en fetal alkohol eksponering modell ved hjelp av flere teknikker som involverer avl, fôring, microdissecting, og oppdager celledød. Arbeid fra vårt laboratorium har involvert en flytende diett blandet med alkohol som en modell for moderat alkohol drikking, noe som kan ligne på et menneske drikking paradigme på sikt av mengden alkohol konsumert 1-5. Vi og andre har identifisert tre peptidderivater som er nervecellene mot de skadelige effektene av fetal alkohol eksponering. Undersøker alkohol eksponering under embryonale stadier hjelp dyremodeller kan føre til identifisering av mulige mekanismer for neuroprotection og gi rom for utvikling av intervensjon prosedyrer. Dette kan gi god informasjon om de nervecellene effekter og demping av de skadelige virkningene av alkohol eksponering under graviditet.
Mulig forhindring av virkningene av prenatal alkohol eksponering kan innebære behandling av gravide mus med peptider som har vist seg å være involvert i in vitro neurobeskyttelse 6,7 og in vivo 1,2,4,8,9. Blant disse peptidene, er SALLRSIPA, kjent som ADNF-9 eller SAL, avledet fra aktivitets-avhengige neurotrophic factor (ADNF) 7,10. En annen peptid med sekvensen NAPVSIPQ peptid, kalt NAP, avledet fra aktivitets-avhengige nervecellene protein (ADNP) 6,11, viste en potent beskyttende effekt mot oksidativt stress forbundet med alkohol eksponering 12,13. I tillegg har vi nylig identifisert en ny syntetisert peptid, colivelin som ser ut til å spille en sentral nervecellene rolle i fetal alkohol eksponering modell to. Colivelin består av ADNF-9 og AGA-(C8R) HNG17 (PAGASRLLLLTGEIDLP). Betydningen av anvendelsen av disse peptider er at de har evnen til åkrysse blod-hjerne barrieren for å forhindre virkningene av alkohol-indusert apoptose og hjernens vekst underskudd.
De eksperimentelle metoder brukt C57BL / 6 mus for å teste de nervecellene effekter mot alkohol-indusert apoptose. Vi har vedtatt en to-timers vinduet i stedet for over natten avl for å nøyaktig anslå embryonale dag 0 (E0), så det kan bli avslørt ved påvisning av en sperm plug and vaginalutstryket 1-5. Vi har brukt en flytende diett med fôring rør, da dette anses fri tilgang i stedet for levering av alkohol gjennom sonde rute, som kan forårsake stress til gravide mus. På den annen side kan mikrodisseksjon være utfordrende på grunn mykhet av fosterets hjerne vev, noe som vil kunne oppstå når dissekere fosterets hjerne på tidlige embryonale stadier. Her viser vi visualiserte teknikker for å håndtere alle utfordringer som involverer mikrodisseksjon. Videre, ettersom fosterets hjerne seksjonering kan også være utfordrende, har vi innførten teknikk som innebærer innebygging fosterets hjerne i gelatin med peel-away innebygging muggsopp. Vi har lykkes i å kutte fosterets hjerne i frittflytende seksjoner på 50 mikrometer tykkelse. Dette gir oss muligheten til å undersøke eventuelle endringer av innhold protein i fosterets hjerne seksjoner, inkludert identifisering av celledød.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Dyr Avl og Trofisk Peptide Treatment
- Rase C57BL/mice ved å plassere hunnmus (~ 6 uker gamle, snittvekt 20 g) i mannlige hjem burene for 2 hr.
- Se etter en sperm plugg og / eller vaginalutstryket umiddelbart etterpå.
- Hvis prøven var positiv, angir dette tidspunkt som embryonisk dag 0 (E0).
- På E7, vekt-match gravide hunner til kontroll og behandlingsgrupper (3 grupper) er lagt som beskrevet nylig 4: 1) Alkohol (etanol) flytende diett gruppe (ALC), 2) par-matet kontrollgruppen (PF), 3) peptid behandling gruppen, som skal motta intraperitoneal (ip) injeksjon av ADNF-9 peptid sammen med alkohol eksponering flytende diett (ALC/ADNF-9). Detaljene i utarbeidelsen av ALC og PF dietter og prosedyren for ip injeksjoner kan bli funnet i vår nyere arbeider fire.
- Mål daglig alkohol flytende diett som kan tilbys som gratis tilgang som eneste kilde til næringsstoffer. PF flytende diett yoked individuelt to en ALC dam kan måles daglig også.
- Volumet av flytende diett konsumert under den forrige 24-timers kan tas opp fra 30-ml gradert skrukork rør og nylaget kosthold bør gis daglig fra E7 til E13.
2. Disseksjon av fostre og mikrodisseksjon av Fetal Brains
- Ofre gravide mus på E13 ved dypt euthanizing musene med et CO 2 prosedyre etterfulgt av en halshugging.
- Rengjør abdominal incisjonsstedet med 70% etanol.
- Gjør en abdominal snitt med steril saks og pinsett.
- Når magen er åpen, dissekere ut livmoren ved å holde den med en pinsett og bruke de andre pinsett til å rive mesometrium bort fra livmoren. Sørg for å gjøre denne prosedyren langsomt for å unngå punktering embryoene.
- Fjern embryoene fra livmoren og overføre dem til en cellekultur tallerken (60 mm x 15 mm) som inneholder Hanks 'balanserte saltløsning (HBSS) i iskaldt vann.
- Dissekere fosterets hjerne fra hele embryoer henhold stereomikroskop for mikrodisseksjon.
- Ved hjelp av ultra-fine tang for mikrodisseksjon, dra av skallet av embryoene på den øverste delen av hodet for å avsløre skallen.
- Når skallen er utsatt og tydelig visualisert under mikrodisseksjon stereomikroskop, så løsner skallen starter fra bakre del av hjernen på ryggmargen og hjernestammen områder.
- Pass på å skrelle av skallen bit for bit fra bakre til fremre deler av hodet.
- Når fosterets hjerne er visuelt eksponert, fortsette med å utvinne dem.
- Dissekere fosterets hjerne fra bunnen av primordium luktelappen til bunnen av metencephalon.
- Postfix alle dissekert fosterets hjerne i 4% paraformaldehyde i 2-3 dager. Du kan også fryse andre fosterets hjerne fra hver dam hvis du tester dem for Western blot eller enzymatiske analyser.
3. Innebygging Fetal Brains i Gelatin for seksjonering
- Forbered 10% av gelatin klasse A.
- Fyll en peel-away innebygging mugg halvveis og vent til gelatin stivner.
- Sted kontroll og prenatalt behandlet føtal hjerne side-ved-side på toppen av den størknede gelatin. Dette er å holde konsistente forhold av immunodetection av celledød mellom både kontrollen og eksperimentelle grupper.
- Legg flytende gelatin på toppen av fosterets hjerne til å lage en komplett mold (pass på at gelatin er ikke for varmt).
- Kjøle forberedt gelatin mold som holder fosterets hjerne i 15 min.
- Peel offinnebygging mold plast og deretter overføre de ferdiglagde gelatin som inneholder fosterets hjerne til 4% paraformaldehyde i to dager.
- Sted og § fikset fosterets hjerne i gelatin hjelp vibratome seksjonering maskin (Leica VT 1000S) på 50 mikrometer tykkelse for koronale snitting. Denne tykkelsen er testet i våre studier fordi det gir bedre anatomiske trekk. I tillegg, tykkelser på 25 pm og høyere kan også testes med denne teknikk som involverer innebygd av fetal hjerne i 10% gelatin. Merk at koronale seksjoner ble kuttet ved hjelp vibratome på basalgangliene eminense nivå på forhjernen
- Samle føtal hjerne seksjoner i fosfat-bufret saltvann (PBS) løsning.
- Monter fosterets hjerne seksjoner i SuperFrost Plus lysbilder i vann.
- Tørk de monterte seksjoner for 15 min.
- Plasser lysbildene (montert med fosterets hjerne seksjoner) i PBS for neste dag testing av TUNEL reaksjon.
4. TUNEL Reaction for Debeskyttelse av celledød eller apoptose
(TUNEL: TdT-mediert dUTP Nick End Merking; TdT: terminal deoxynucleotidyl transferase). Denne undersøkelse tok sikte på å bestemme celledød.
- Unn fetal hjerne seksjoner montert i Superfrost Plus objektglassene med proteinase K (20 pg / ml) i 5 min ved 37 ° C (300 pl proteinase K blandet i 20 ml PBS). Lysbilder er samlet i fem-Plend åpen maile).
- Skyll fosterets hjerne seksjoner (montert i lysbilder) med PBS tre ganger for 5 min etter Orbital shaker.
- Inkuber seksjoner med 3% H 2 O 2 i metanol i 10 min ved romtemperatur (3 ml 30% H 2 O 2 i 27 ml 100% metanol) (slides ikke bør være i en shaker).
- Skyll seksjoner med PBS tre ganger for 5 min i orbital shaker.
- Inkuber seksjoner i permeabilization oppløsning (0,1% TritonX-100 i 0,1% natrium-citrat) i 2 min på is (4 ° C) (100 pl TritonX + 0,1 g natriumcitrat + 99,9 ml distilled vann).
- Skyll seksjoner i PBS to ganger for 5 min i orbital shaker.
- Tørt område rundt seksjoner i lysbildene.
- Tegn barriere på SuperFrost Plus lysbilder ved hjelp av PAP Pen. Dette er rettet mot å forhindre enhver lekkasje av løsning som brukes til å behandle seksjonene for påvisning av TUNEL-positive celler.
- Inkuber seksjoner med TUNEL reaksjonsblandingen (50 pl fra en flaske og 450 pl fra flasken 2) i 1 time ved 37 ° C, blir kontrollen benyttes ved inkubasjon i oppløsning fra flasken 2.
- Skyll med PBS tre ganger 5 min etter Orbit shaker.
- Tørt område rundt vev.
- Inkuber seksjoner med omformer-POD i 30 min ved 37 ° C.
- Skyll seksjonene tre ganger i 5 min med tris-HCl (pH 7,5, 0,05 M).
- Inkuber seksjoner for 7 min i 0,05% 3'-3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) og 0.003% H 2 O 2 (25 ml Tris HCl, pH 7,5, 0,05 M + 25 ul 3% H 2 0 2 + 500 ul DAB) I henhold Oribtal shaker ved 4 ° C (i is) og i mørke (sørg for å gjøre denne prosedyren i nye 5-Plend åpne mailer).
- Skyll delene med PBS tre ganger 5 min etter Orbital shaker.
- Hold lysbilder seksjoner i PBS for ikke mer enn 24 timer i PBS, deretter behandle dem for Nissl flekker som beskrevet i neste avsnitt protokollen.
Merk: DAB er et kreftfremkallende stoff. Bruk hansker og rengjør alle retter brukes med blekemiddel gang ferdig med alle forsøkene.
5. Nissl farging for Utarbeidelse av fosterets hjerne seksjoner mikroskopobservasjon
- Nissl fargingsprosedyre bør gjøres i en biologisk sikkerhet hette.
- Skyll sleidene seksjoner med avionisert vann i 2 min.
- Inkuber seksjoner i 70% etanol i 2 min.
- Inkuber seksjoner i 95% etanol i 6 min.
- Inkuber seksjoner i 70% etanol i 2 min.
- Skyll delene i avionisert wateh for 2 min.
- Inkuber seksjoner i Cresyl Violet Stain i 3 min.
- Skyll delene i avionisert vann i 2 min.
- Inkuber seksjoner i 70% etanol i 2 min.
- Inkuber seksjoner i 95% etanol + 3 ml iseddik i 3 min.
- Inkuber seksjoner i 95% etanol i 2 min.
- Inkuber seksjonene i 100% etanol i 2 min tre ganger.
- Inkuber seksjoner i xylen i 10 min tre ganger.
- Lysbilder holder fosterets hjerne seksjoner kan monteres ved hjelp Permount og dekkglass glassplater.
- Forlate monterte lysbilder over natten før du mikroskopiske observasjon og analyser.
- Mikroskopiske observasjon og photomicrographs kan utføres under Leica oppreist mikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De eksperimentelle metodene som er beskrevet her viser at en 2-timers avl vindu er viktig å beregne nøyaktig svangerskapsdiabetes stadium. Vi har vist disseksjon av embryoene i en alder av E13. Vi har også demonstrert mikrodisseksjon av fosterets hjerne på E13. Prosedyren involverer flere trinn (AC), som beskrevet i figur 1.. Fetal hjernen dissekeres fra bunnen av primordium olfactory bulb til bunnen av metencephalon (figur 1). Fetal hjerner er så fiksert i 4% paraformaldehyde for immunkjemiske gjenkjenning. Etter fiksering blir føtal hjerne innleiret i 10% gelatin, og klargjort for vibratome snitting som beskrevet i figur 2.. Merk at step-by-step innebygging av fosterets hjerne ble utført ved lavere forstørrelse. Fetal hjerner innebygde kan visualiseres ved høyere forstørrelse i figur 1. Videre koronale fosterets hjerne seksjoner på nivå med ganglionic eminense på forhjernen kanoppnås ved hjelp av vibratome og montert i lysbilder for immunhistokjemisk deteksjon. Dette innebærer at antallet TUNEL-positive celler (figur 3). Vi viser her at prenatal alkohol eksponering indusert økning i TUNEL-positive celler i ganglionic eminense (figur 3b) sammenlignet med PF kontrollgruppen (figur 3a). ADNF-9 administrasjonen betydelig redusert alkohol-indusert økning i TUNEL-positive celler (Figur 3c og 3d) sammenlignet med ALC gruppen.
Figur 1. Mikrodisseksjon av fosterets hjerne på E13. Stages ac viser trinn-for-trinn prosedyre s fra embryo til dissekert fosterets hjerne. A) dissekert kontroll (PF) og alkohol (ALC) som utsettes prenatalt embryoer. B) c) dissekert fosterets hjerne til PF og ALC grupper.
Figur 2. Metode for innebygging fosterets hjerne for seksjonering. Stages (ae) viser trinn-for-trinn prosedyrer fra utarbeidelse av innebygging av fosterets hjerne til innstillingen av gelatin blokken i objektet for vibratome skjæring. A) Peel-away innebygging mugg fylt halvveis med gelatin, b) Fetal Hjernene fra PF-kontroll og ALC gruppene er plassert side-ved-side i formen, og dekket med gelatin, c) Peel-away innebygging mugg kuttet på fire sider, d) fetal hjerne innleiret i gelatin og klar å være fast i paraformaldehyde; e) gelatin mold inneholder fosterets hjerne er plassert i objektet for vibratome snitting.
Figur 3. Effekter av neurotrofisk peptid, ADNF-9, mot alkohol-indusert apoptose ved hjelp TUNEL assay i ganglier dominans ved E13 fase. Prenatal alkohol eksponering induserte økninger i celledød som angitt ved pilspisser i ALC-gruppen (b) sammenlignet med PF-gruppen (a). ADNF-9 administrasjon sammen med prenatal alkohol eksponering viste nedgang i TUNEL-positive celler (c). Statistiske analyser viste at ADNF-9 administrasjon forhindret alkohol-indusert økning i TUNEL-positive celler (d). Verdier er oppgitt som middel ± SEM. * P <0,05; ** p <0.01 (Newman-Keul sin post hoc test). N = 4 i hver gruppe. Scale bar = 100 mikrometer. Gjengitt fra publikasjonen (4), med tillatelse fra ElSevier (lisens # 2904310752995).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metodikken og teknologien som presenteres i denne undersøkelse demonstrerer effekten av prenatal eksponering for alkohol i føtal hjerne og rollen til trofiske peptidene ved forebyggelse av disse effektene. Disse kan gi informasjon om hvordan å studere andre narkotiske stoffer eller andre giftige kjemikalier i fosterets hjerne under forskjellige stadier av svangerskapet.
I forhold til avl paradigme, i noen tilfeller påvisning av sperm pluggen ikke kan observeres. På dette tidspunkt er det viktig å teste vaginalutstryket i et la seg under mikroskopisk observasjon, som kan gi mulig sperm positiv deteksjon.
Det fremgår i denne studie at mate innebærer fri tilgang av flytende diett inneholdende PF kontroll og alkohol. Minst 30% av fuktighet og en temperatur som ikke overskrider 22-24 ° C er nødvendig for å overvåke kvaliteten av dietten i løpet av 24-timers fri tilgang til dietten 1,2. Det er også nødvendig atdiett være forberedt fersk daglig. Fôring rør bør rengjøres etter hver bruk.
Det er vanskeligheter i mikrodisseksjon av fosterets hjerne. Disse avhenger av fosterstadiet testet. For eksempel kan fosterets hjerne dissekert i en alder av E13 være vanskelig å håndtere i forhold til fosterets hjerne dissekert på E18. Dette skyldes det faktum at på E18, blir fetal hjerne godt utviklet og hodeskallen blir lett å trekke av i forhold til E13, når skallen fremdeles er myk og vanskelig å trekke av. På dette punktet, når dissekere fosterets hjerne på E13, er det viktig å trekke av skallen bit-for-bit som demonstrert i videoen som følger med dette manuskriptet.
I forhold til innebygging fosterets hjerne i gelatin, fant vi at dette er den beste teknikken for å få deler som er klar til å bli brukt til immunhistokjemisk analyse. For å få bedre kutting av føtal hjerne, er det viktig at fiksering i 4% paraformaldehyd igelatin blokk inneholdende fetal hjerne er fullført. Således kan dette ta minst to dager, og gelatinen blokken kan være klar for å kutte av den tredje dagen. Tykkelsen av seksjonene er også en faktor, 50 um tykkelse er vanligvis testet for immunokjemisk påvisning eksempel TUNEL assay 1,2,4. Imidlertid tykkelser på 25 pm og høyere kan også bli testet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen opplysninger skal gjøres.
Acknowledgments
Dette forskningsprosjektet ble støttet av Award Number R21AA017735 (YS) fra National Institutes on Alcohol Abuse og alkoholisme. Innholdet er utelukkende ansvaret til forfatteren og representerer ikke nødvendigvis de offisielle visningene av National Institute on Alcohol Abuse og alkoholisme eller National Institutes of Health. Forfatteren vil også gjerne takke Charisse Montgomery for redigering dette manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Superfrost Plus Slides | VWR | 48311-703 | |
| PAP PEN | Research Products Int. Corp. | 195506 | |
| 5-Plend Open Mailer | Heathrow Scientific, LLC | HS 15983G | |
| Peel away embedding molds | Electron Microscopy Sciences | 70182 | |
| In situ cell death detection kit, POD | Roche Diagnostics, Inc | 11684817910 | |
| Hanks' Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-120 | |
| Gelatin Type A | FisherScientific | G8-500 | |
| Stereomicroscope | W. NUHSBAUM, Inc | Leica M60, KL 200 LED | |
| Micro-Vibratome | Leica, Inc | Leica VT 1000S | |
| Moria Ultra Fine Forceps | Fine Science Tools | 11370-40 | 2 pairs |
| Graduate 30 ml feeding tubes | Dyets, Inc | 900012 | |
| Vitamin Mix | Bio-Serv. Inc. | F8031 | |
| Mineral Mix | Bio-Serv. Inc. | F8598 | |
| Maltose Dextrin | Bio-Serv. Inc. | 3650 | |
| Ethyl alcohol 190 Proof, 5 gallons | 111000190-SS05 | Pharmco-AAPER | |
| Upright microscope | W. NUHSBAUM, Inc | LEICA DM 4000 |
References
- Sari, Y. Activity-dependent neuroprotective protein-derived peptide, NAP, preventing alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mouse. Neuroscience. 158 (4), 1426-1435 (2009).
- Sari, Y., Chiba, T., Yamada, M., Rebec, G. V., Aiso, S. A novel peptide, colivelin, prevents alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mice: signaling pathway investigations. Neuroscience. 164 (4), 1653-1664 (2009).
- Sari, Y., Hammad, L. A., Saleh, M. M., Rebec, G. V., Mechref, Y. Alteration of selective neurotransmitters in fetal brains of prenatally alcohol-treated C57BL/6 mice: quantitative analysis using liquid chromatography/tandem mass spectrometry. Int. J. Dev. Neurosci. 28 (3), 263-269 (2010).
- Sari, Y., Weedman, J. M., Ge, S. Activity-dependent neurotrophic factor-derived peptide prevents alcohol-induced apoptosis, in part, through Bcl2 and c-Jun N-terminal kinase signaling pathways in fetal brain of C57BL/6 mouse. Neuroscience. 202, 465-473 (2012).
- Sari, Y., Zhang, M., Mechref, Y. Differential expression of proteins in fetal brains of alcohol-treated prenatally C57BL/6 mice: a proteomic investigation. Electrophoresis. 31, 1-14 (2010).
- Bassan, M., Zamostiano, R., Davidson, A., Pinhasov, A., Giladi, E., Perl, O., Bassan, H., Blat, C., Gibney, G., Glazner, G., Brenneman, D. E., Gozes, I. Complete sequence of a novel protein containing a femtomolar-activity-dependent neuroprotective peptide. J. Neurochem. 72 (3), 1283-1293 (1999).
- Brenneman, D. E., Hauser, J., Neale, E., Rubinraut, S., Fridkin, M., Davidson, A., Gozes, I. Activity-dependent neurotrophic factor: structure-activity relationships of femtomolar-acting peptides. J. Pharmacol. Exp. Ther. 285 (2), 619-627 (1998).
- Spong, C. Y., Abebe, D. T., Gozes, I., Brenneman, D. E., Hill, J. M. Prevention of fetal demise and growth restriction in a mouse model of fetal alcohol syndrome. J. Pharmacol. Exp. Ther. 297 (2), 774-779 (2001).
- Sari, Y., Gozes, I. Brain deficits associated with fetal alcohol exposure may be protected, in part, by peptides derived from activity-dependent neurotrophic factor and activity-dependent neuroprotective protein. Brain Res. Brain Res. Rev. 52 (1), 107-118 (2006).
- Brenneman, D. E., Gozes, I. A femtomolar-acting neuroprotective peptide. J. Clin. Invest. 97 (10), 2299-2307 (1996).
- Zamostiano, R., Pinhasov, A., Gelber, E., Steingart, R. A., Seroussi, E., Giladi, E., Bassan, M., Wollman, Y., Eyre, H. J., Mulley, J. C., Brenneman, D. E., Gozes, I. Cloning and characterization of the human activity-dependent neuroprotective protein. J. Biol. Chem. 276 (1), 708-714 (2001).
- Offen, D., Sherki, Y., Melamed, E., Fridkin, M., Brenneman, D. E., Gozes, I. Vasoactive intestinal peptide (VIP) prevents neurotoxicity in neuronal cultures: relevance to neuroprotection in Parkinson's disease. Brain Res. 854 (1-2), 257-262 (2000).
- Steingart, R. A., Solomon, B., Brenneman, D. E., Fridkin, M., Gozes, I. VIP and peptides related to activity-dependent neurotrophic factor protect PC12 cells against oxidative stress. J. Mol. Neurosci. 15 (3), 137-145 (2000).
