Summary
Vi ville finne ut tålelig konsentrasjoner av tre fettsyrer (oljesyre, linolsyre og linolensyre) og kolera toksin som ikke betydelig negativ innvirkning celle overlevelse ved oppløsning av de fettsyrer og toksin og bruke dem i celle overlevelse analyser.
Abstract
Den positive rolle av fettsyrer i forebygging og lindring av humane og ikke-menneskelige sykdommer har vært og fortsetter å bli omfattende dokumentert. Disse roller inkluderer påvirkninger på infeksiøse og ikke-infeksiøse sykdommer, inkludert forebyggelse av betennelser samt mukosal immunitet mot infeksjonssykdommer. Cholera er en akutt intestinal sykdom forårsaket av bakterien Vibrio cholerae. Det forekommer i utviklingsland, og hvis venstre ubehandlet, kan føre til døden. Mens vaksiner for kolera eksisterer, er de ikke alltid effektive og andre forebyggende metoder er nødvendig. Vi ville finne ut tålelig konsentrasjoner av tre fettsyrer (oljesyre, linolsyre og linolensyre syrer) og kolera toksin ved hjelp av musen BALB / C makrofager og menneskelige intestinal epitelceller, henholdsvis. Vi solubilisert de ovennevnte fettsyrer og celleproliferasjon assays som brukes for å bestemme de konsentrasjonsområder og spesifikke konsentrasjoner av de fettsyrer som er not skadelige for menneskers tarmepitel celle levedyktighet. Vi solubilisert koleratoksin og brukt det i en analyse for å bestemme de konsentrasjonsområder og spesifikke konsentrasjoner av koleratoksin som ikke statistisk redusere cellenes levedyktighet i BALB / C-makrofager.
Vi fant de optimale fettsyrekonsentrasjoner å være mellom 1-5 ng / mL, og at det for koleratoksin å være <30 ng per behandling. Disse dataene kan hjelpe fremtidige studier som tar sikte på å finne en beskyttende slimhinne rolle for fettsyrer i forebygging eller lindring av kolera infeksjoner.
Introduction
De helsemessige fordeler av fettsyrer, som oljesyre, linolsyre og linolensyre har vært og fortsetter å være dokumentert. For eksempel bidrar oljesyre lette penetrering av lipofile legemidler i kroppen 1,2, reduserer koronar hjertesykdom med 24% når erstatte mettede fettsyrer 3, og benyttes for å behandle metabolske sykdommer slik som Adrenoleukodystrophy 4 som er en X-bundet genetisk forstyrrelse av fettsyremetabolisme. . Mens et nødvendig forstadium for arakidonsyre hos pattedyr, linolsyre (i motsetning oljesyre) ikke syntetiseres av kroppen og må innhentes gjennom eksterne kilder som for eksempel ved linfrø forbruk 5 Studier viser flere gunstige helseeffekter av linolsyre slik som: anti-aging egenskaper for huden, 6 anti-inflammatoriske egenskaper, 7 redusert spredning av colorectal og prostata karcinomceller, 8 og evnen til å bekjempe fedme og markedsføring of kardiovaskulær helse. 9. linolensyre spiller en rolle i å redusere periodontal inflammasjon, 10 og modulering av tromboksan og prostacyclin biosyntese. 11.
Arpita 12 studert påvirkning av galle fettsyrer og kolesterol på V. cholerae 's uttrykk for virulens faktorer og bevegelighet. Yamasaki 13 indikerte at metanol ekstrakt fra rød chili peppers, og andre naturlig utvunnet forbindelser, kan potensielt redusere kolera toksin produksjon. Det er tenkelig å vurdere bruken av næringsmidler som er rike på de ovennevnte fettsyrer (slik som linfrø) i forebygging og bekjempelse av infeksjonssykdommer som kolera gjennom gi mukosal immunitet. Vi har utført undersøkelser for å oppløseliggjøre fettsyrer og å bestemme, ved hjelp av celleproliferasjon analyser, den maksimale konsentrasjonen av fettsyrer som humane intestinale epitelceller kan tolerere uten uheldige virkninger på cell levedyktighet. Vi antok at oljesyre, linolsyre og linolensyre og gi en gunstig effekt på cellelevedyktighet ved lavere konsentrasjoner, men at ved høyere konsentrasjoner vil de være toksisk for cellene. Vi har også solubilisert koleratoksin og bestemmes den maksimale konsentrasjonen av koleratoksin som BALB / C-mus-makrofager kan tolerere uten en betydelig reduksjon i cellelevedyktighet. Vi hypotese en toksisk effekt av koleratoksin på cellelevedyktighet selv ved svært lavt nivå. Fremgangsmåten til å oppløseliggjøre en koleratoksin og bruke den til å bestemme den maksimale mengde av det giftstoff som cellene kan tolerere uten en betydelig reduksjon i overlevelsesevne gir en fordel for fremtidige studier. For eksempel kan en kombinasjon av de ovennevnte metoder anvendes for å bestemme hvorvidt fettsyrer gir celler med mukosal immunitet mot kolera infeksjoner. Så langt vi kjenner til, har denne rasjonelle og metodikk ikke blitt utforsket.
Vi discuss hvordan våre foreløpige data som kan brukes i senere undersøkelser for å bestemme om oljesyre, linolsyre og linolensyre og gir celler med mukosal immunitet mot kolera-infeksjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Tissue Culture
- Bruk Mus musculus makrofager (BALB / c mus) for koleratoksin bestemmelser. Utgangspunktet kultur alle M. musculus celler etter leverandørens anvisninger.
- Forplante BALB / c muse-celler i Dulbeccos modifiserte Eagles medium med L-glutamin gjennomført med 10% føtalt bovint serum og 1% antibiotika / antimykotiske eller RPMI 1640 basen media gjennomført med 10% føtalt bovint serum, 5% L-glutamin, og ett % antibiotika / antimycotic reagens.
- Dyrk celler i 75 cm2 kolber med ventilerte CORNING lokk ved 37 ° C, 95% luft og 5% CO2.
- Ta opp menneskelige intestinal epitelceller innen 24 timer for levering i henhold til produsentens instruksjoner for fastsettelse av fettsyrer bestemmelser.
- Forplante menneskelige intestinal epitel celler i 75 cm 2 Corning kolber med ventilerte caps i HybriCare media fullførte med 10% FBS og 30 ng / ml human EGF ved 37 ° C. Ikke bruk antibiotika/ Antimycotic reagenser som i henhold til produsentens instruksjoner.
- Split alle celler (01:03) på ca 70% confluency.
- Fryse og ta opp alle celler i hele studien ved hjelp av standard frysing protokoller.
- Merk: For større skala konsentrasjonsbestemmelse av fettsyrer, bruker raskere voksende, enklere å vedlikeholde, mus makrofager i utgangspunktet. For finskalaen fettsyrekonsentrasjonen besluttsomhet, bruke menneskelige epitelceller. Bruk musen makrofager for alle koleratoksin behandlinger (se diskusjon).
2. Fatty Acid og koleratoksin behandlinger
- Overfør oljesyre, linolsyre og linolensyre syrer fra selskapet gitt glass ampuller til steriliserte hetteglass.
- Overfør hver fettsyre til en separat sterilisert Eppendorf rør og oppløse den først i 100% etanol ved en fortynning på 1:06, og deretter i RPMI 1640 ufullstendige medier for en endelig konsentrasjon på 10 pg / mL.
- Vortex hver løsning og transfeh det til glass-ampuller for lagring i fryseren (-20 ° C).
- Plate cellene ved 2500 celler / brønn i 96 brønners vevskulturplater.
- Tilsett egnede fullstendige media for å bringe det totale volum til vel 200 pl for behandling av celler med fettsyrer i forberedelse for MTT-analyser.
- Etter en 24 timers spredning periode, fjerne mediet og erstatte den med ferske media.
- Tilsett passende konsentrasjoner av hver fettsyre som skal testes til brønnene (se resultater). Legg komplette media for å bringe den totale brønnvolumer til 200 ul.
- Inkuber behandlede plater for 24 timer før du begynner MTT analysen.
- Oppløs koleratoksin i PBS ved en konsentrasjon på 1 mg / ml, og alikvoter løsningen i cryovials og lagre cryovials ved 2-8 ° C.
- For cellen behandlinger, fortynn toksinet 1:100 i enten sterilisert PBS (pH 7,4) eller ufullstendig DMEM for et sluttelig bearbeidingstrinn konsentrasjon på 1 ng / mL.
- Å behandle celler med kolera toksin iforberedelse til MTT-assay, plate-celler som beskrevet ovenfor.
- Etter en 24-timers periode spredning, legge til de riktige konsentrasjoner av koleratoksin (for våre konsentrasjoner, se resultater) som skal testes til brønnene å følge prosedyrene som brukes i fettsyre-applikasjoner (ovenfor).
- Inkuber behandlede plater for 24 timer før du begynner MTT analysen.
- Som en positiv (positiv C hele papir) og negativ kontroll (negativ c), for både fettsyre og koleratoksin-behandlinger, inkuber celler med fullstendig medium og 70% etanol, henholdsvis.
- For alle prøvene og behandlinger bruke et minimum av tre paralleller (n = 3), med flere gjennomkjøringer for positive kontroller (n = 6 i denne studien).
3. MTT analysen
- Gjør en MTT stamoppløsning til en konsentrasjon på 2,5 mg / ml.
- Ta løsningen i hver brønn av 96 brønn plate som skal testes, og erstatte den med 200 ul friskt komplett medium løsning.
- AnnonseD 10 ul av MTT-løsning til hver brønn.
- Inkuber platen ved 37 ° C i 3-4 timer.
- Kast media løsning og tilsett 100 ul av 0,04 M HCl i isopropanol til hver brønn.
- Inkuber platen ved romtemperatur i fem minutter.
- Overfør løsningen fra hver brønn i et nytt sentrifugerør.
- Sentrifuger ved 20.000 xg ved romtemperatur, i 1 min, eller inntil en pellet ble dannet.
- Overføring mellom 20-40 ul av hver prøve til en mikroplateleser.
- Les absorbans ved 570 nm ved hjelp av et spektrofotometer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Fastsettelse av Optimum Konsentrasjon av fettsyrer
Den optimale konsentrasjon for fettsyrer er definert som den maksimale konsentrasjon ved hvilken cellevekst er sammenlignbar med eller høyere enn for kontroll-celler, med relativt lav variasjon i resultatene. For å bestemme den optimale konsentrasjon av oljesyre, linolsyre og linolensyre ble syrer celler innledningsvis behandlet med varierende konsentrasjoner av hver fettsyre i store trinn og senere med mindre trinn. Figur 1 viser overlevelse av celler fremstilt som en funksjon av den positive kontroll for behandlinger ved hjelp økende konsentrasjoner av fettsyrene. Det er åpenbart at cellene ikke tolerere konsentrasjoner på over 100 ng / mL for en hvilken som helst av fettsyrene. En enveis ANOVA viste at det for hver av behandlingene, ett eller flere av de gjennomsnitt som er forskjellige fra de andre (p <0,001). En post-hoc test (Tukey-tallet) viste at for oljesyre alle behandlinger unntattpå 1 ng / mL var forskjellig fra den positive kontrollen. Interessant, på grunn av stor variasjon, var denne behandlingen marginalt ikke signifikant forskjellig fra den negative kontrollen heller. For både linol-og linolensyre og viste en enveis ANOVA at minst en median er annerledes enn de andre (p <0,001). En Tukey post-hoc-test viste at den midlere av 10 ng / mL behandling for enten fettsyren er ikke signifikant forskjellig fra den positive kontrollen, men er fra den negative kontrollen (p <0,05).
Dette forsøk ble gjentatt for konsentrasjoner som var lavere enn 100 ng / mL, i 10 ng / mL trinn (opp til 70 ng / mL, ved hjelp av humane epitelceller). Celleoverlevelse er anordnet for hver konsentrasjon i figur 2.. For oljesyre (figur 2a), en enveis ANOVA viste at ett eller flere av midlene var forskjellige (p <0,001). Imidlertid er det kun de behandlinger ved høyere konsentrasjoner (40 og 50ng / mL) som gjengis betyr statistisk forskjellig fra den for den positive kontroll. Interessant nok var forskjellene observert på grunn av en økning i celle-levedyktighet (med større variasjoner, figur 2a). En måte ANOVA ga lignende resultater for linolensyre og linolenic syrer. Nærmere bestemt, var ingen av behandling middel forskjellig fra middelverdien av den positive kontroll. Igjen synes variabilitet å øke for noen av de høyere konsentrasjoner (figur 2b og 2c).
Bestemmelse av optimal konsentrasjon koleratoksin
Den optimale konsentrasjon for koleratoksin er definert som den konsentrasjon ved hvilken celleviabilitet ikke påvirkes eller nettopp begynner å avta i forhold til ubehandlede celler. For å vurdere den minste konsentrasjon av koleratoksin som minimalt reduserer celle-levedyktighet, ble cellene først ble behandlet med varierende konsentrasjoner av koleratoksin i store inkrementalTS og senere med mindre trinn Figur 3a viser en avtagende tendens for levedyktighet celleoverlevelse som et resultat av koleratoksin-behandlinger for gift nivåer ved relativt store intervaller (mellom 100-1,000 ng, 2 R; = 0,5436).. Som forventet, celleviabilitet varierte sterkt for hver behandling (Figur 3a). Den store observerte variasjon i levedyktighet resulterte i ingen betydning forskjell mellom middelverdien av den positive kontroll med noen av behandlingene (en-veis ANOVA). Basert på disse resultatene, fant vi ut at gift nivåer <100 ng bør testes videre. Figur 3B viser celle levedyktighet for de mindre toksinet nivå behandlinger. Celleviabilitet er meget variabel for nesten alle toxin konsentrasjoner, om enn liten økning ble observert i levedyktighet som et resultat av behandlingene. Disse øker (figur 3b) er ikke statistisk signifikante for noen av behandlingene i forhold til middelverdien av den positive kontroll (én måte ANOVA, Tukey-tallet).
Figur 1. Bestemmelse av brukbare konsentrasjoner av fettsyrer:. Effekt av varierende konsentrasjoner av fettsyrer i relativt store trinn (100-1,000 ng / mL) for oljesyre, linolsyre og linolensyre klikk her for å vise større figur .
Figur 2. Finskalaen fettsyre konsentrasjonsbestemmelse: Effekten av varierende konsentrasjoner av fettsyrer i mindre trinn (10 ng / mL) på human intestinal epithelialcelleoverlevelse. tarmepitel-celler ble behandlet med varierende konsentrasjoner av oljesyre (a), linolsyre (b) og linolensyre (c). Den positive kontrollen er celler behandlet med komplett media bare, og den negative kontrollen med 70% etanol. For hvert forsøk, n = 3 for alle behandlinger unntatt positiv kontroll (n = 6). Klikk her for å se større figur .
Figur 3. Bestemmelse av brukbare koleratoksin-konsentrasjoner basert på vurdering av anvendelsen av varierende konsentrasjoner av koleratoksin på mus makrofag overlevelse: Mus makrofager ble behandlet med varierende konsentrasjoner av koleratoksin i større trinn (a)Da de små (B). Den positive kontrollen er celler behandlet med komplett media bare, og den negative kontrollen med 70% etanol. For hvert forsøk, n = 3 for alle behandlinger unntatt positiv kontroll (n = 6). Klikk her for å se større figur .
Figur 4. Eksperimentell utforming-bestemmelse av fettsyrer og toksin konsentrasjoner til bruk i fremtidige studier: cellelysater kan brukes til å behandle makrofager og cytokin dynamikk kan kvalitativt og kvantitativt analysert ved immunoblotting og ELISA ved hjelp av antistoffer mot spesifikke cytokiner som markører for infeksjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Forslag av Konsentrasjon av fettsyrer og koleratoksin
Mens den eksakte mekanismen for hvordan fettsyrer styrke slimhinnene immunitet er ukjent, har flere studier forsøkt å undersøke sine gunstige virkninger. Vår undersøkelse som mål å gi metode for å bestemme den maksimale konsentrasjon av fettsyrer som celler kan tåle, så vel som den maksimale konsentrasjonen av koleratoksin at cellene kan tolerere uten en betydelig innflytelse på celle-overlevelse.
For å bestemme konsentrasjonen av tre fettsyrer (oleinsyre, linolsyre og linolensyre) samt det av koleratoksin for behandling av celler uten meget vesentlig negativ effekt på cellelevedyktighet vi solubilisert fettsyrene og koleratoksin og behandlet vev dyrkede celler i ulik konsentrasjoner etterfulgt av en MTT-analyse for å vurdere levedyktigheten. Basert på vår metodikk og resultatene gir vi utvalgene av fettsyrer og kolera toksin nyttigfor fremtidige undersøkelser som tar sikte på å bruke disse fettsyrene eller kolera toksin (se nedenfor). Vi anbefaler konsentrasjoner på 1, 5-10 og 5-10 (ng / mL) for oljesyre, linolsyre og linolensyre, henholdsvis for ved hjelp av humane intestinale epitelceller. Vi anbefaler bruk av <30 ng (per 200 pl, se metoder) av koleratoksin ved hjelp av BALB / C-mus-makrofager. Vi er klar over at i det minste for koleratoksin, var det ingen signifikant forskjell observert mellom cellelevedyktighet for den positive kontrollen sammenlignet med behandlinger. Vi er imidlertid anbefaling basert på den relativt høye variasjon i cellelevedyktighet som ble observert som et resultat av høyere toksin nivå eksponeringer.
Fremtidige studier
Dataene som er gitt i denne studien for fettsyrer og koleratoksin-nivåer kan anvendes i fremtidige studier. Vi gir et eksempel på en slik undersøkelse her.
Cholera er en sykdom assosiert med developing land som ikke har skikkelig kloakk og renseanlegg og trygt drikkevann. I 2009 ble en død toll på over 3000 rapportert for en fem måneders periode på grunn av kolera relaterte symptomer i Zimbabwe alene. 14. Per 2011, forblir kolera en epidemi i ulike regioner av verden, inkludert et utbrudd i Haiti (CDC, 2010) . En molekylær genetikk studie i 2010 viste bevis at bakterien i dette utbruddet var av nepalsk opprinnelse. 15. Sykdommen er forårsaket av inntak av fekal-forurenset mat eller drikkevann og kolonisering av tarmen av V. cholerae, etterfulgt av utgivelsen av en enterotoxin. Mens kolera vaksiner eksisterer, er de ikke alltid effektive i å hindre infeksjon under utbrudd. Effektiv og billig tiltak er nødvendig for bestander der kolera utbrudd oppstår. En tilnærming er å undersøke om mat kilder som er rike på derivater som oljesyre, linolsyre og linolensyreyte eller forbedre mucosal immunitet mot kolera infeksjon. Mucosal immunitet funksjoner gjennom bruken av protein reseptorer på overflaten av celler, slik som Toll-lignende reseptorer 16 (TLR) og nukleotid-bindende domener (NLRs). Ved forandringer i membranen sammensetning og frigjøring av ligander som vekselvirker med TLR og NLRs, kan tilsetning av fettsyrer til intestinal epitelium forbedre reseptorfunksjonen i å gjenkjenne farlige mikrober og rekruttere de aktuelle immunresponser. For å bestemme fettsyrer effekter på kolera-infeksjon, cytokin-dynamikk, slik som cellens frigjøring av TNF-α, IL-6, må IL-10 og IL-12, bli studert mer i humane intestinale epitelceller enn i mus makrofager (figur 4). Slik kunnskap fra fremtidige studier vil hjelpe oss til bedre å forstå mekanismen som fettsyrer kan arbeide for å hindre smitte, for å til slutt gi effektive tiltak for å hindre choleret utbrudd. Det er mulig at behandling av celler med fettsyrer før koleratoksin infeksjon vil bidra til å indusere og / eller forsterke den mukosal immunrespons i intestinale epitel, til syvende og sist øker cellenes levedyktighet i løpet av kolera mikrobiell infeksjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne av denne studien har ingen økonomisk interesse av resultatene av denne studien. Finansiering for denne studien ble gitt til FT ved Kean universitet, men er FT for tiden ansatt ved Kingsborough Community College.
Acknowledgments
Vi takker Paula Cobos og Dr. Evros Vassiliou for lab assistanse og gi musen makrofager, henholdsvis. Vi takker også våre lab manager Richard Criasia for veiledning og hjelp med materialer. Til slutt, forfatterne takke Ramanpreet Kaur for å få hjelp med videoproduksjon.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 | |
References
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate. Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).
- Kris-Etherton, P. M. The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health. Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).
- Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels. Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).
- Bozan, B., Temelli, F. Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil. Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).
- Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology. J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).
- Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).
- Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells. Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).
- Granda, M., Sinclair, A. J. Fatty acids and obesity. Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).
- Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).
- Ferretti, A., Flanagan, V. Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).
- Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera. Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).
- Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds. Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).
- WHO | Efforts must be intensified to control Zimbabwe cholera outbreak [WHO PRESS RELEASE] [Internet]. , World Health Organization. Available from: http://www.who.int/csr/don/2009_01_30/en/ (2010).
- Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak. mBio. 2 (4), 1-6 (2011).
- Schaeffler, A., Gross, P., et al. Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity. Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).
