Summary
Olfaktoriske ensheathing celler (OECS) er neurale kamceller der tillader væksten af de primære olfaktoriske neuroner. Denne særlige egenskab kan anvendes til cellulær transplantation. Vi præsenterer her en model af cellulær transplantation baseret på anvendelse af OECS i en larynx nerve skade model.
Abstract
Olfaktoriske ensheathing celler (OECS) er neurale kamceller som tillader vækst og genvækst af de primære olfaktoriske neuroner. Faktisk er den primære olfaktoriske system kendetegnet ved sin evne til at give anledning til nye neuroner selv i voksne dyr. Denne særlige evne er til dels på grund af tilstedeværelsen af OECS som skaber et gunstigt mikromiljø for neurogenese. Denne egenskab af OECS har været anvendt til cellulær transplantation såsom rygmarvsskader modeller. Selvom det perifere nervesystem har en større evne til at regenerere efter nerveskade end centralnervesystemet, komplet sektioner fremkalde misrouting under axonal genvækst især efter facial af larynx nerve transection. Konkret fuld sektionering af den tilbagevendende larynx nerve (RLN) inducerer afvigende axonal genvækst resulterer i synkinesis af stemmebånd. I denne specifikke model, viste vi, at OECS transplantation effektivt øger axonal genvækst.
ve_content "> OECS udgøres af flere delpopulationer stede i både det olfaktoriske slimhinder (OM-OECS), og de olfaktoriske pærer (OB-OECS). Vi præsenterer her en model af cellulær transplantation baseret på brugen af disse forskellige subpopulationer af OECS i en RLN skade model. Brug dette paradigme blev primære kulturer af OB-OECS og OM-OECS transplanteret i Matrigel efter sektion og anastomose af RLN. To måneder efter operationen, evaluerede vi transplanterede dyr af supplerende analyser baseret på videolaryngoscopy, elektromyografi (EMG) og histologiske undersøgelser. Først videolaryngoscopy tilladt os at vurdere larynx-funktioner, især muskuløse cocontractions fænomener. Derefter EMG analyser demonstreret rigdom og synkronisering af muskulære aktiviteter. Endelig histologiske undersøgelser baseret på toluidinblå farvning tillod kvantificering af antallet og profilen af myelinerede fibre.Alle sammen, vi beskriver her, hvordan man isolere, kultur, identify og transplantation OECS fra OM og OB efter RLN sektion-anastomose, og hvordan man vurdere og analysere effektiviteten af disse transplanterede celler på axonale genvækst og larynx-funktioner.
Introduction
Den primære olfaktoriske system er sammensat af to særskilte dele; olfaktoriske mucosa (OM) i det perifere nervesystem og lugtekolben (OB) i det centrale nervesystem. Den primære olfaktoriske system er kendetegnet ved evnen af de primære olfaktoriske neuroner (PON) til selv at forny hele livet i pattedyrarter. Denne evne er gjort mulig på grund af tilstedeværelsen af neurale stamceller i OM. PON vækst og genvækst fra OM til OB lettes af specialiserede gliaceller kaldet olfaktoriske ensheathing celler (OECS). OECS er neurale kamceller, der skaber en positiv mikromiljø for neurogenese af PON fra OM til OB 1. Derved kan OECS findes i OM og i OB udgør forskellige subpopulationer af celler 2,3. De forskellige egenskaber af OECS have bly forskere til at bruge dem til cellulære transplantationer i flere nervesystem læsioner paradigmer 4. Faktisk OECS producerer vækstfaktorer, reducere glial skræmmer, PRomote axonal genvækst, og frit kan blande sig med astrocytter 5,6. Men langt de fleste af disse undersøgelser er baseret på rygmarvsskade (SCI), få af dem har brugt OECS efter perifer nerveskade (PNI) 7,8.
Selvom det perifere nervesystem har en stor evne til at regenerere efter nerveskade, komplet sektioner fremkalde afvigende axonal genvækst. Faktisk efter fuldstændig transections af ansigtsbehandling eller de tilbagevendende larynx nerver (RLN) fejlsendte axoner forårsager muskulære cocontractions kaldet synkinesis. Det er derfor af største vigtighed at foreslå en model af PNI til ikke kun at kvantificere aksonal genvækst, men også for at vurdere effektiviteten af de muskelsammentrækninger. I litteraturen er den mest almindelige beskrevne model er baseret på facial nerve læsion 9,10. I denne model er funktionelle evalueringer baseret på inddrivelse af knurhår bevægelser 10. Men det er vanskeligt at påvise effektiviteten af movements og til at diskriminere de muskulære cocontractions fænomener. Vi foreslår her en model baseret på en RLN læsion. Denne model giver mulighed for vurdering af ikke blot axonal genvækst og bevægelser af stemmebånd, men også effektiviteten og funktionaliteten af disse bevægelser efter cellulære transplantationer 11,12. Denne protokol giver en trinvis procedure til kultur og transplantation OECS fra OM og OB i en RLN sektion / anastomosemodellen og evaluere dyrene efter operationen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1.. Primære kulturer af olfaktoriske slimhinde og Olfaktoriske Pærer
- Forud for dissektion
- Gør medium, 50 ml ved tilsætning af 44 ml af calcium-frit Dulbeccos Modified Eagles / Hams F12-medium (DMEM/F12) suppleret med 5 ml føtalt bovint serum (FBS) og 1 ml penicillin / streptomycin.
- Coat 75 cm2 kolber med poly-L-lysin (50 ug / ml, 1,5 ug / cm 2), 1 time ved stuetemperatur.
- Skyl kolber med PBS 1x.
- Opbevar overtrukne kolber i køleskabet i op til 1 uge.
- Dissektion
- Enhver metode til eutanasi skal godkendes på forhånd af institutionens dyr pleje og brug udvalg og udføres af kvalificeret personale.
- Vælg indavlede rotter såsom Fischer-rotter.
- Når rotten er blevet bekræftet at have indgået dyb anæstesi med natrium pentobarbital eller andre injicerbare former for anæstesi såsom ketamin / xylazin, halshugge ham og reFlyt huden.
- Åbn kraniet fra den forreste til den bageste del.
- Fjern OB tage sig for at undgå meninges.
- I samme rotte åbne næsehulen sagittaly.
- Fjern OM tage sig for at undgå respiratoriske slimhinde. Bemærk, at OM epitel kan let identificeres ved sin gullig farve.
- Yderligere detaljerede protokoller om dissektion af OM kan finde i en tidligere J. Vis. Exp . publikation 13.
- Kultur
- Placer OB i Hanks pufrede saltopløsning (HBSS) indeholdende 0,1% trypsin i 45 minutter ved 37 ° C.
- Placer OM i HBSS indeholdende 0,05% collagenase A i 45 minutter ved 37 ° C.
- Stop enzymatisk nedbrydning ved tilsætning af 2 ml varmt medium.
- Vask cellerne med medium og centrifugere dem ved 300 xg i 3 min.
- Tritureres prøver af 2ml medium ved anvendelse af en P1000 pipette, indtil en homogen cellesuspension opnået.
- Plate cellerne i forbelagte kolber (5-10 x 10 6 celler / kolbe) med 25 ml varm medium.
- Inkuber og dyrke cellerne ved 37 ° C med 5% CO2.
- Skift halvdelen af medium hver 2 dage.
- Efter 6-8 dage in vitro, kontrollere andelen af p75 positive celler på små celleprøver, antages at være OECS i gnavere ved flowcytometri eller med immuncytokemi. For disse analyser, kan andre markører studeres såsom GFAP og S100β.
- Flowcytometrianalyse
- Saml de celler som beskrevet i "cellulær transplantation" (afsnit 2.2).
- Inkuber dem med p75 primært antistof (1:100) i 15 minutter ved 4 ° C.
- Vask cellerne med 2 ml PBS-EDTA og centrifugere dem ved 300 x g i 3 min.
- Inkubér cellerne med PE-konjugeret anti-muse-sekundært antistof i 15min ved 4 ° C i mørke (1:200).
- Vask cellerne med 2 ml PBS-EDTA og centrifugere dem ved 300 x g i 3 min.
- Resuspender cellerne i 500 pi PBS-EDTA.
- Analyser 10-30 x 10 3 celler med flow-cytometer.
- Immuncytokemi analyse
- Plate cellerne i 6-brønds plader belagt i 48 timer som beskrevet i "kultur" (afsnit 1.1.2 nedenfor).
- Vask cellerne med PBS.
- Fikseres cellerne med PFA 4% i 15 minutter ved stuetemperatur.
- Vask cellerne med PBS.
- Inkubér cellerne med PBS / Triton X100 (0,1%) i 15 minutter ved stuetemperatur.
- Vask cellerne med PBS.
- Inkubér cellerne med primære antistoffer (1:200): p75, S100β og GFAP natten over ved 4 ° C.
- Vask cellerne med PBS.
- Inkuberes cellerne med de sekundære antistoffer (1:500) i løbet af 1 time ved stuetemperatur i mørke.
- Vask cellerne med PBS.
- Inkubér cellerne med Hoechst 10 min ved RT i mørket.
- Vask cellerne med PBS.
- Analyser celler under anvendelse af et fluorescensmikroskop.
- GFP mærkning af celler
- Fem dage før transplantationen, inficere OB og OM kulturer natten over med en lentiviral vektor, der huser forøget GFP (multiplicitet af infektion: 20).
- Før transplantation check på små stikprøver satsen for GFP-positive celler ved flow-cytometri som beskrevet tidligere i "kultur" (afsnit 1.1).
2. Kirurgi og transplantation
- Tilbagevendende nerve anastomosis
- Alle forsøg med dyr skal godkendes på forhånd af institutionens dyr pleje og brug udvalg og udføres af kvalificeret personale.
- Forud for kirurgi autoklave alle instrumenter og opretholde sterilitet i hele kirurgiske procedurer.
- Bedøver rotte ved intraperitoneal injektion af ketamin-hydrochlorid (12,5 mg / kg) og chlorpromazin-hydrochlorid (0,625 mg / kg). Vurdere tilstrækkeligheden af anæstesi ved tå knivspids forud for operationen.
- Placer rotte i dorsale decubitus.
- Udfør en 2 cm lodret medium livmoderhalskræft kutan snit med en skalpel.
- Udfør en lodret indsnit i infrahyoid muskler efter den mediale hvide linje.
- Expose strubehoved ved hjælp autostatic retraktor mellem infrahyoid muskler.
- Udsætte RLN.
- Under mikroskopisk kontrol, klippe nerve fuldt ud med microscissors på niveau med den syvende tracheale ring.
- Udfør anastomose under anvendelse af et punkt på 11,0 sutur under mikroskopisk kontrol. Denne operation medfører en specifik motor denervering af strubehovedet.
- Cellular transplantation
- Lige før transplantation, fjernes cellerne fra skålene ved anvendelse af 0,05% trypsin-EDTA i 5 minutter ved 37 ° C.
- Stop enzymatisk nedbrydning ved tilsætning af 2 ml varmt medium.
- Centrifuger ved 300 x g i 3 minutter.
- Gør cellulær forberedelse med 01:02 mix (30 og 60 ul i dette eksperiment) af DMEM/F12-Matrige l i 1,5 ml rør før podning og placere den på is. For at undgå uspecifikke effekter, brug vækstfaktor reduceret Matrigel.
- Lige før transplantation holde røret i hånden et par sekunder for at varme op Matrigel-medium mix.
- Afsætte mix på anastomosis websted ved hjælp af en pipette og vente, indtil blandingen selv samler på den skadede nerve.
- Luk muskler og hud med en 4,0 sutur.
- Hus rotterne individuelt og holdes under en varmelampe i 24 timer.
3. Evaluering
- Laryngoskopi
- Bedøver rotter ved intraperitoneal injektion af ketaminhydrochlorid (12,5 mg / kg) og chlorpromazin-hydrochlorid (0,625 mg / kg). Bekræft rotter bedøves med en tå knivspids før de går med protokollen.
- Placer rotte i dorsale decubitus.
- Sæt en 30 ° videolaryngoscope justeret til at yde den bedste udsigt over strubehovedet. Bestem anatomiske landmærker at reproducere den samme visning for hver optagelse.
- Optag vokal snor bevægelser ved hjælp af videolaryngoscope (5-10 sekvenser / dyr). For hvert dyr vælge tre sekvenser af successiv maksimal adduktion og maksimal bortførelse.
- Analyser larynx funktion ved hjælp af billedanalyse software. Bestem absolut kantet bevægelse ved at måle forskellen mellem bevægelse af maksimal bortførelse og maksimal adduktion af stemmebånd. Bestem dynamisk score ved at måle bevægelsen amplitude. Bestem funktionel score ved at måle synkinesis og paradoxal bevægelser.
- Elektromyografi (EMG)
- Expose strubehovedet og luftrøret ved at åbne hud og muskler, som tidligere beskrevet i "tilbagevendende nerve anastomose" (afsnit 2.1).
- Expose cricothyroid brusk.
- Åbn cricothyroid brusk at udsætte den bageste cricoarytenoid (PCA) muskel hjælp microscissors.
- Indføre et monopolært nål elektrode (38 x 0,45 mm) i PCA musklen.
- Optag den elektriske muskelaktivitet i PSA muskel ved hjælp af en erhvervelse systemet under spontan ventilation.
- Analyser muskulære aktivitet i form af rigdom og synkronisering med åndedræt. At analysere EMGS, tildele en kvalitativ score på 0-3 ved hjælp af følgende skala: 0: unrhymed opsporing, uden stigning i løbet af inspiration, 1: rimede sporing med inspiratorisk stigende, men dårlig sporing (Neurogen), 2: rimede sporing med rigere aktivitet, 3: rimede opsporing, meget rig, der udgør en Interference mønster, svarende til en maksimal tilsigtet aktivitet.
- Expose vagus nerve til at måle latency og potentielle varighed. Vagus nerve er valgt som stedet for stimulation fordi RLN kan blive beskadiget under stimulation på grund af sin lille størrelse.
- Stimulere vagus nerve med en elektrode.
- Optag elektriske signaler i PCA musklen. Mål ventetid og potentielle varighed. Hvis det er muligt at bruge en erhvervelse modul til at registrere muskelaktivitet, ventetid og potentiel varighed såsom Powerlab system.
- Histologi
- Aflive dyr ved anvendelse af pentobarbital overdosis.
- Fjern den distale stump RLN ved mikroskopisk kontrol. Den distale del af RLN er defineret som den del mellem anastomose og strubehovedet. Bemærk, at det er muligt at finde anastomosen stedet adskillige uger efter operationen, fordi 11,0 suturen er en absorberbar sutur.
- Anbring den distale del af RLN i 2% glutaraldehyd med 0,1 M phosphat(PH = 7,3) i 2 timer ved 4 ° C.
- Orientere forsigtigt prøver at realisere kronafsnit.
- Vask prøverne i phosphatpuffer.
- Skær i mindre segmenter (3-4 mm længde) og Postfix i 60 min ved stuetemperatur i 1% cacodylat bufferet OSO 4 og dehydreret med ethanol.
- Orient prøver i silikone forme og indlejret i harpiks består i POLYBED 812, DDSA og MNA, hvortil der blev tilsat 2% af speederen BDMA.
- Make semi-tynde tværsnit (1 um tyk) med en Pyramitome Ultramicrotomy System.
- Farv med 0,1% toluidinblåt i 1% natriumtetraborat for 75 sekunder ved 70 ° C.
- Analyser RLN prøver med en optælling analysesystem. Tæl antallet af fibre og måle myelinerede nerve fiber profiler ved at bestemme det ydre og indre grænse af myelinskeden.
- Transplantation
- Forbered cellerne til transplantation og transplantation af cellerne som tidligere beskreveti "cellulær transplantation" (afsnit 2.2).
- Analyse
- Aflive dyr ved anvendelse af pentobarbital overdosis. Bemærk, at fiksering af dyrene kan udføres ved hjælp af intrakardial injektion af PFA 4%.
- Fjern omkring 2 cm RLN. Brug proximale og distale dele af RLN.
- Lave RLN prøven i flydende nitrogen.
- Opbevar prøver ved -80 ° C.
- Efterfølgende prøver længderetningen ved hjælp af kryostaten (10-20 um tyk).
- Analysere prøver under fluorescensmikroskop til påvisning af GFP-positive celler. Bemærk, at anti-GFP-antistof kan anvendes til at øge fluorescensemission og udføre costainings.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Illustrationer med kontrol og reinnervated (afsnit / anastomoseres) dyr er blevet valgt som resultater kan variere afhængigt af de cellulære transplantationer (OM, OB eller OM + OB).
Cellekultur
Cellerne klæbe hurtigt til plastoverfladen og blev opdelt i parallelle skår af celler, der er aflang eller tilspidsende, trekantet, multipolær eller tenformet (figur 1A og 1B). Efter 8 dage in vitro flowcytometri analyse viser hastigheden af p75 positive celler, 71% i den primære OB, og 13% i primære OM kulturer (figur 1C og 1D).
Cellulær transplantation og kirurgi
Cellerne er transplanteret i en Matrigel-medium mix på anastomoseret RLN. Anastomose af RLN er lavet af et punkt på 11,0 sutur (figur 2).
Evalueringer
Videolaryngoscopier To måneder efter transplantationen blev larynx funktioner analyseret af videolaryngoscopy og elektromyografi. For at realisere videolaryngoscopy anatomiske kendetegn blev valgt til at måle forskellen mellem bortførelse og adduktion (Figur 3).
Elektromyografi
For at fuldføre disse analyser EMG undersøgelser blev udført ved hjælp af monopolært nåleelektrode implanteret i PCA muskler. Typiske spor for normale og reinnervated (afsnit / anastomoseres) dyr er vist i figur 4..
Histologiske analyser
For disse dyr blev histologiske analyser af RLN udført af toluidinblåt farvning. Typiske fiber profiler til normale og reinnervated (afsnit / anastomoseres) dyr er vist i figur 5A og 5B. For at fuldføre disse histologiske analyser blev sporing af GFP-positive celler udføres. 5C illustrerer t han tilstedeværelsen af GFP-positive celler i iskiasnerven efter intra-nervøs transplantation. Iskiasnerven er blevet anvendt som kontrol som RLN størrelse ikke tillade intra-nervøs transplantation.
Fig. 1. Morfologiske egenskaber og P75-ekspression i primære kulturer af OB (A og C) og OM (B og D) in vitro. (A og B) OECS i OB og OM primære kulturer udtrykt aflange, trekantede eller spindel-formede morfologier . (C og D) Celleoverfladeekspression af p75 i OB og driftsklar tilstand primære kulturer blev bestemt ved flowcytometri. Tallene angiver den samlede befolkning og procentdelen af celler til stede i de angivne gated regioner. Venligst / 50590fig1highres.jpg "> klik her for at se en større version af dette tal. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Billede af en anastomose af RLN udført med 11,0 sutur. (A) sektioneret RLN før operation. (B) Anastomose mellem den proximale og den distale stump af RLN. Klik her for at se en større version af dette tal.
"Src =" / files/ftp_upload/50590/50590fig3.jpg "/>
Figur 3. Typiske endoskopiske visninger af rotte glottis plan. Under evalueringer er landmærker bestemmes for at have samme synsfelt for hver optagelse. Fra den præsenterede opfattelse både den maksimale bortførelse (A) og den maksimale adduktion (B) måles. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4.. Eksempler på EMG spor opnået under respiration i PCA musklen. (A) Dyr i kontrolgruppen præsenteret en rig elektriske muskelaktivitet, med en stigning i løbet af inspiration. (
Figur 5. Histologiske nervøse studier. (A og B) Eksempel på kronafsnit af RLN fra kontrolgruppen. Denne analyse viste, at kontrolgruppen præsenteret en højere antal myelinerede fibre. (A) Forstørrelse 3.960 X og (B) forstørrelse 11.900 X. (C) GFP mærket OB-OECS forblev på læsionssitet i knust rottens iskiasnerven. Forstørrelse 100X.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De teknikker, der præsenteres her gør OECS en nyttig model til at studere cellulære transplantationer i perifere modeller nerveskade. Cellekultur-protokollen er relativt ligetil og kan let udføres. , Kirurgiske procedurer, især afsnit / anastomose af RLN, kræver på den anden side erfaring og skal udføres af kvalificeret personale.
De i denne protokol beskrevne procedurer fremhæver vigtige faktorer til at fokusere på for at opnå de bedst mulige resultater. Først i løbet af dissociation af OM, anbefaler vi omhyggelig dissektion at opnå kun olfaktoriske og ikke respiratorisk epitel. For det andet, for anastomose af RLN, anbefaler vi at udføre kun ét punkt med en 11,0 sutur. For det tredje, i evalueringer er det meget vigtigt at have den samme dybde af anæstesi mellem alle dyr. Især dyb anæstesi reducerer amplituden af bevægelse af stemmebånd under videolaryngoscopy. Vi anbefaler, removing laryngoskopet så hurtigt som muligt for at undgå kvælning af dyrene. Under EMG optagelse på grund af størrelsen af de PCA muskler anbefaler vi omhyggeligt placere monopolære nåleelektrode. Endelig for histologiske undersøgelser er det vigtigt nøje at orientere RLN prøver at opnå kronafsnit. Det er også meget vigtigt at fjerne og analysere den distale del af RLN hvor Wallerian degeneration forekommer.
De her beskrevne protokoller kan let ændres med henblik på at generere oprensede kulturer af OECS fra OB og OM. Til oprensning af OECS fra OB anbefaler vi teknikken beskrevet af Nash 14 og til rensning af OECS fra OM anbefaler vi beskrevet af Bianco 15-metoden. Disse to specifikke oprensningsmetoder muligt at have højt oprenset kulturer af OECS (90%), og er tidligere blevet godt beskrevet af deres forfattere 14,15. En anden mulig modifikation er transplantation procedure uafhængig af hvor retholtene cellerne kan injiceres direkte i en perifer nerve som beskrevet tidligere for iskiasnerven 7. I dette tilfælde kan injiceres cellerne uden Matrigel. Det er vigtigt at bemærke, at på grund af størrelsen af RLN det ikke er muligt at injicere celler direkte ind i denne nerve. Endelig en anden mulig modifikation er optimering af EMG-protokollen. Faktisk kan muskelaktivitet optagelser af PCA og mellemgulvet muskler udføres sammen, hvilket eliminerer behovet for synkronisering mellem larynx og respiratoriske muskler.
De nuværende protokoller kan anvendes i andre nervøse læsioner paradigmer. Vi har allerede transplanteret OECS i flere modeller af PNI såsom ischiadicus og vagusnerverne, kan disse behandlinger nemt bruges i andre PNI paradigmer 8,11,12,16. Mere interessant cellulær transplantation af OECS kan udvides til sygdomme i centralnervesystemet, navnlig SCI. Den her beskrevne til måling af larynx-metodenfunktion efter RLN sektion / anastomose kan også anvendes til andre cellulære transplantationer protokoller. Faktisk kan larynx modeller være meget stærke for at evaluere axonale genvækst og synkinesis fænomener.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at afsløre.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne anerkende Adir (Aide à Hjemsted aux Insuffisants Respiratoires) og Fondation de l'Avenir for deres økonomiske støtte og til Dr. Fanie Barnabé-Heider til redigering af manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM/F12 | Invitrogen | E3521T | |
| FBS | Invitrogen | E3387M | |
| Penicilin/streptomycin | Invitrogen | 1152-8876 | |
| HBSS | Invitrogen | M3467Y | |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | M3513P | |
| Cacodylate | Merck | 1.03256.0100 | |
| DDSA | Biovalley | 00563-450 | |
| MNA | Biovalley | 00886-450 | |
| BDMA | Biovalley | 00141-100 | |
| Polybed 812 | Biovalley | 08791-500 | |
| PE anti-mouse | BD Bioscience | 550589 | |
| Matrigel GFR | BD Bioscience | 356231 | |
| Collagenase A | Roche | 10103586001 | |
| Mouse anti P75 | Chemicon | MAB 365 | |
| 11.0 Wire | Ethicon | FG 2881 | |
| Toluidine Blue | Ral Diagnostics | 361590-0025 | |
| Centrifuge | Sigma | Sigma 2-16PK | |
| Incubator | Thermo Scientific | ||
| Laminar flow hood | Faster | BH-EN 2003 S | |
| Flow cytometer | BD Bioscience | FACSCalibur | |
| Microscope | Zeiss | ||
| Videolaryngoscope | Karl Storz Endoskope | Telecam SL NLSC 20212120 | |
| Acquisition system | AD Instruments | Powerlab system | |
| Pyramitome Ultramicrotomy System | Leica | Ultracut S | |
| Image analysis system | Explora Nova | Mercator |
References
- Barraud, P., et al. Neural crest origin of olfactory ensheathing glia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).
- Guerout, N., et al. Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa. Glia. 58, 1570-1580 (1002).
- Honore, A., et al. Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb. Glia. 60, 404-413 (2012).
- Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord. Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).
- Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes. Glia. 32, 214-225 (2000).
- Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors. Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).
- Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells. Brain Res. 1125, 1-8 (2006).
- Guerout, N., et al. Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats. Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).
- Guntinas-Lichius, O., et al. Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons. Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).
- Makoukji, J., et al. Lithium enhances remyelination of peripheral nerves. Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).
- Guerout, N., et al. Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion. PloS one. 6, 22816 (2011).
- Paviot, A., et al. Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells. Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).
- Girard, S. D., et al. Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans. J. Vis. Exp. , (2011).
- Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb. Glia. 34, 81-87 (2001).
- Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose. Glia. 45, 111-123 (2004).
- Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model. Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).
