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Medicine

Evaluación no invasiva de la cardiaca Anomalías en la miocarditis autoinmune experimental por Resonancia Magnética de imágenes de microscopía en el ratón

doi: 10.3791/51654 Published: June 20, 2014
* These authors contributed equally

Abstract

La miocarditis es una inflamación del miocardio, pero sólo ~ 10% de los afectados muestran manifestaciones clínicas de la enfermedad. Para estudiar los eventos inmunes de lesiones de miocardio, diversos modelos de ratón de la miocarditis se han utilizado ampliamente. Este estudio implicó la miocarditis autoinmune experimental (EAM) inducida con miosina cardíaca de la cadena pesada (MyHC)-α 334-352 en ratones A / J; los animales afectados desarrollan miocarditis linfocítica pero sin signos clínicos aparentes. En este modelo, la utilidad de la microscopía de resonancia magnética (MRM) como una modalidad no invasiva para determinar los cardíacas cambios estructurales y funcionales en los animales inmunizados con MyHC-α 334-352 se muestra. EAM y ratones sanos fueron imágenes utilizando un 9.4 T (400 MHz) 89 mm escáner orificio central vertical equipado con una sonda de imagen radiofrecuencia 4 cm milpiés y 100 g cm gradientes ejes / triples. Imágenes cardíacas fueron compradas a los animales anestesiados utilizando una secuencia de pulsos de cine basado gradiente-eco, y el ánimaLS fueron controlados por la respiración y la oximetría de pulso. El análisis reveló un aumento en el espesor de la pared ventricular en ratones EAM, con la correspondiente disminución en el diámetro interior de los ventrículos, cuando se compara con los ratones sanos. Los datos sugieren que los cambios morfológicos y funcionales en los corazones inflamados pueden ser de forma no invasiva monitoreado por MRM en animales vivos. En conclusión, MRM ofrece una ventaja de la evaluación de la progresión y regresión de las lesiones del miocardio en enfermedades causadas por agentes infecciosos, así como la respuesta a las terapias.

Introduction

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La insuficiencia cardíaca es la principal causa de las muertes, y miocarditis es una causa predominante de la insuficiencia cardíaca en los jóvenes adolescentes 1. La mayoría de los pacientes afectos de miocarditis permanecen asintomáticos y la enfermedad se resuelve espontáneamente 2. Sin embargo, el 10-20% de las personas afectadas pueden desarrollar enfermedades crónicas, lo que lleva a la miocardiopatía dilatada (DCM) 3. Se han desarrollado diversos modelos animales para estudiar la patogénesis inmune de la miocarditis. La enfermedad puede ser inducida en-miocarditis susceptibles de A / J y ratones Balb / c mediante la inmunización de los animales con la miosina cardíaca de la cadena pesada (MyHC)-α o sus fragmentos de péptidos inmunodominantes o mediante la infección con patógenos como el virus Coxsackie B3 4-9. Este estudio implica MyHC-α miocarditis inducida-334-352 en ratones A / J. A pesar de mostrar las infiltraciones miocárdicas, los animales miocarditis afectadas parecen clínicamente normal; diagnóstico se basa en la evaluación histológica de corazones para la inflamación 7 unND ecocardiografía 10.

Microscopía de resonancia magnética (MRM) es un método comúnmente utilizado para obtener imágenes cardiovasculares con aviones de alta resolución en tres dimensiones, que permita la verificación de los detalles funcionales a nivel de los vasos sanguíneos minutos (hasta 10 m de diámetro), pero este nivel de poder de resolución es no alcanzable con la formación de imágenes de resonancia magnética de rutina (IRM) procedimiento de exploración, en el que, la resolución se obtiene generalmente de hasta 1 mm 11-14. MRM ofrece una ventaja, ya que permite la adquisición de imágenes de alta resolución y también para derivar los parámetros de rendimiento en los puntos de tiempo de proceso de la enfermedad 14. Clínicamente, las imágenes MRM se ha aplicado ampliamente para estudiar los parámetros funcionales del corazón enfermo, pulmón o el cerebro 15-17. En este estudio, se muestra el uso de una técnica de MRM como una herramienta no invasiva para determinar anomalías cardíacas en ratones A / J afectadas con miocarditis autoinmune. Específicamente, tél imágenes MRM permite la cuantificación de los parámetros funcionales como ventrículo izquierdo (LV) el volumen diastólico final y la fracción de eyección (FE) con una precisión razonable 18. Las definiciones de los parámetros respectivos son: LV volumen diastólico final, el volumen de sangre en el ventrículo izquierdo al final del ciclo diastólico, y la fracción de eyección, el volumen sistólico / volumen diastólico final. El análisis de los datos se realiza mediante el software desarrollado por segmentos de libre disposición para procesamiento de imágenes cardiovasculares compatible con DICOM adquiridos por los escáneres de resonancia magnética 19. Los datos revelaron un aumento en el grosor de la pared del VI en los animales miocárdico, que corresponde a una disminución en el volumen diastólico final del LV, el volumen sistólico y la fracción de eyección, en comparación con estos parámetros funcionales en ratones sanos.

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Protocol

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ÉTICA DE MOTIVOS:

Todos los procedimientos con animales se realizaron de conformidad con las directrices para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y aprobados por la Universidad de Nebraska-Lincoln, Lincoln, NE.

1. La inducción de miocarditis autoinmune experimental

  1. Preparar la solución de péptido disolviendo MyHC-α 334-352 en 1x solución salina tamponada con fosfato a una concentración final de 2 ml mg/1.5.
  2. Preparar la toxina de pertussis (PT) mediante la adición de 1 ml de 1x PBS estéril a un vial que contiene 50 g de PT se liofilizó para obtener una concentración de solución madre de 50 ng / l. Tomar 20 l de la población en un tubo estéril de 1,5 ml y añadir 980 l de 1x PBS estéril para obtener una concentración de trabajo de 1 ng / l.
  3. Preparar adyuvante completo de Freund (CFA) mediante la adición de 40 mg de Mycobacterium tuberculosis H37Rv (MTB) extraer a 10 ml de CFA para obtener una concentración finalde 5 mg / ml.
  4. Preparar la emulsión péptido CFA. NOTA: Para la inducción de EAM, la emulsión péptido CFA se administró en 150 l que contenía 100 g de MyHC-α 334-352 por animal. Por ejemplo, para inmunizar a diez ratones utilizan 1,5 ml de emulsión de péptido-CFA que contiene 1 mg de MyHC-α 334-352.
    1. Para preparar 1,5 ml de emulsión, parte alícuota de 750 l de MyHC-α solución de péptido 334 a 352 en un tubo de 1,5 ml, y CFA complementan con MTB en otro tubo de 1,5 ml. Usando una jeringa de 3 ml luer-lok, señalar a la solución de péptido primero, seguido por el extracto de CFA / MTB.
    2. Conecte la jeringa a una llave de paso de 3 vías y conectar la otra salida de la llave de paso a un vacío ml jeringa 3. Ajuste de la permeabilidad de la llave de paso de modo que la mezcla de péptido-CFA fluye de una jeringa a la otra con razonablemente buena resistencia.
    3. Mezclar empujando el contenido de una jeringa a la otra repetidamente para ~ 1 min y luego se coloca todo el conjunto en hielo durante ~ 3 min. Repita esteprocedimiento de un mínimo de 10 veces.
    4. Determinar la consistencia de la emulsión mediante la colocación cuidadosamente una pequeña gota en el agua inmóvil en un vaso de precipitados de vidrio de 100 ml. No se espera que la gotita de dispersar en agua. Si lo hace, continuar mezclando hasta que se consigue la consistencia deseada.
    5. Transferir el contenido de emulsión de 3 ml en jeringas de 1 ml jeringas Luer Lok mediante la sustitución de una de las dos jeringas de 3 ml unidos a la llave de paso con la jeringa de 1 ml, y adjuntar una aguja 27 ½ G para la jeringa de 1 ml.
  5. Inyectar 150 ml de la emulsión péptido CFA en dosis divididas por vía subcutánea en ambas regiones inguinales de seis a ocho semanas de edad las mujeres ratones A / J (~ 75 l cada uno).
  6. Administrar 100 l de suspensión de PT (100 ng) por vía intraperitoneal a cada animal en el día 0 y el día 2 después de la vacunación.
  7. Repita el procedimiento de inmunización en el día 7 por la administración de 150 l de péptido-CFA emulsión en dosis divididas por vía subcutánea en ambos lados de tél esternón (~ 75 l cada uno). Preparar esta emulsión fresca como anteriormente. Luego, el día 21, someter a los animales a imágenes MRM, consulte el paso 3.

2. Manejo Animal

  1. Coloque cada ratón en una cámara de inducción anestésica que contiene 2% de mezcla de isoflurano al aire con una almohadilla térmica colocada debajo para mantener el calor, y transferir el animal a un titular de animales especialmente diseñado (Figura 1).
  2. Inmovilizar el animal en la posición boca abajo en el soporte de animal para su hocico encaja en el cono de la nariz para mantener la anestesia (Figura 1). Fije la cabeza del ratón con una barra mordida unidos a los dientes delanteros del ratón.
  3. Encienda el calentador de soplado de aire con su manguera de salida se inserta en el taladro vertical del escáner para mantener la temperatura corporal del animal durante el experimento.
  4. Mantener la anestesia en 0,5 a 2% de isoflurano con una velocidad de flujo de 2 ml / min durante toda la sesión de formación de imágenes. Confirmaranestesia utilizando el método pizca dedo del pie, no hay movimiento esperado.
  5. Establecer un sensor neumático almohada, el ratón de cola / tobillo sensor de oximetría de pulso de fibra óptica, y la sonda de temperatura rectal para monitorear la respiración, la frecuencia cardiaca y la temperatura corporal, respectivamente (Figura 1). Nota: gating cardíaco se realiza a través de la oximetría de pulso, que permite la monitorización no invasiva de la saturación arterial de oxígeno en sangre. El sensor de oximetría de pulso debe estar unido al tobillo izquierdo, y el pie debe ser asegurado con un bucle de hilo y cinta adhesiva para mantener el tobillo en el sensor. De formación de imágenes de MRM se logra por gating la señales cardiacas respiración y sin el uso de cualquier agente de contraste.

3. Adquisición de imágenes

  1. Después de preparar al animal (Figura 1), colocar el ratón en el centro del escáner de MRM con el corazón posicionado en el centro del campo de visión (FOV), donde el campo magnético es máxima homogeneidad. NOTA: Muchas de ánima(89 mm) 9,4 T imán vertical taladro equipado con gradientes ejes triples de 100 G / cm y 4 cm de radio-frecuencia (RF) de la bobina de imagen se va a utilizar para obtener imágenes de alta resolución en tres dimensiones (3D). Nota: Asegúrese de que los suministros no magnéticos cuando se utiliza un escáner de resonancia magnética.
  2. Ejecutar la interfaz de imagen y seleccionar "Nuevo Estudio" en el menú "Opciones de estudio". Escriba "mtune" en la barra de comandos y ejecutarlo para levantar el "Tune GUI". A continuación, seleccione "Start Sonda Tune" y haga clic en el botón "Escala automática". La GUI Tune cambiará para mostrar la RFsignal. Utilice los mandos de sintonía / partido remotas en el extremo de la bobina para sintonizar la bobina de RF a la frecuencia de resonancia de protones (400 MHz). En la pestaña "Inicio", vaya a la página "Prescan" para ejecutar la calibración de frecuencia y potencia haciendo clic en los botones correspondientes. Pulsa el botón de XYZ (rápida) en la "ficha" de "Shim Estudio pestaña para tirar de la página calce.Ir a la página de cuña, seleccionar todas las iteraciones, y pulsa el botón para realizar shim calce automático.
  3. Seleccione una secuencia de explorador desde la pestaña "Estudio" de la interfaz de imágenes para localizar el corazón de ratón. En la pestaña "Acquire" cambiar el campo de visión de 35 mm 2 y mantener la configuración predeterminada de la máquina. Haga clic en Inicio para ejecutar la secuencia; ajustar la posición del soporte de animal si el corazón no está en el centro de campo de visión FOV, volver a sintonizar la bobina de RF y obtener las imágenes de exploradores de nuevo.
  4. Haga clic en el botón de secuencia de "joyas" en la pestaña de "Estudio" y luego introducir los parámetros de adquisición en la pestaña "Acquire" correspondiente a la obtención de dos planos ortogonales a lo largo del eje corto y eje largo del corazón 20,21. NOTA: los parámetros de adquisición típicas para una exploración eco de gradiente son: grosor de corte, 1 mm; tiempo de repetición (TR), 200 ms; tiempo de eco (TE), 2,67 ms (mínimo); ángulo de inclinación, 25 °; tamaño de la matriz de rigidización, 128 x 128; FOV, 22 mm2; número de adquisiciones, 4; y un tiempo de adquisición aproximada de 1 min y 30 seg.
  5. En la pestaña "Avanzado", seleccione la secuencia "CINE" para recoger los pulsos de eje corto de cine de las imágenes de RM-oximetría cerrada con el fin de medir los parámetros anatómicos y funcionales del VI. Ajuste la posición y el ángulo de los cortes de imagen basado en el eje largo del corazón solo pasar el mouse y arrastrando. Introduzca los siguientes parámetros de imagen en la ficha "Acquire" para obtener la secuencia de eco de gradiente de cine: TR, 500 ms; TE, 5 mseg; FOV, 22 mm 2; matriz de adquisición, 256 x 256; grosor de corte, 1 mm; número de adquisiciones, 8; número de tramas, 6; y un tiempo de adquisición de ~ 17 min. Haga clic en Iniciar para iniciar la adquisición.
  6. Convertir las imágenes adquiridas a formato DICOM utilizando la pestaña "I / O" del software de imagen y transferir los archivos correspondientes a los centros de datos para su procesamiento.
  7. Al final del procedimiento de imagen, todoOW los ratones se recuperen de la anestesia dentro de las jaulas de filtro-top. No deje que los ratones sin vigilancia hasta que recobren el conocimiento suficiente para mantener decúbito esternal y mantenerlos para otros estudios, según sea necesario.

4. Análisis de datos de resonancia magnética cardiaca de imágenes de microscopía

  1. Utilice software de Segmento para analizar los parámetros anatómicos y funcionales del VI 19. Al cargar el formato DICOM las imágenes de cine en el software utilizando el "Archivo de imagen abierta (s)" submenú del menú "Archivo". En la GUI seleccione 'MRGE "como la técnica de imagen,' Cine 'como el tipo de imagen y' de eje corto medioventricular" como el plano de la vista de la imagen.
  2. Especifique los marcos de tiempo que se utilizará para la telediástole y al final de la sístole a través del "Set Plazo actual para poner fin a Diástole" y "Set Plazo actual para poner fin a la sístole" submenús del menú "Editar", respectivamente.
  3. Primero haga clic en el botón de comando "LV" y luego el botón de comando "PAI" en el panel inferior derecho "ENDO" y para dibujar manualmente el endocardio y el epicardio del ventrículo izquierdo, respectivamente. Quitar los músculos papilares pulsando el botón de comando correspondiente con el fin de aumentar la precisión de los cálculos.
  4. Leer los parámetros LV cuantificados, como el volumen diastólico, volumen sistólico, el volumen sistólico y la fracción de eyección en el panel superior derecho. Haga clic en el botón de comando "Misc" y luego el botón de comando "medición del calibre" para medir los parámetros de baja tensión tales como el grosor de la pared, y el diámetro ventricular 22.
  5. Haga clic en la opción "Guardar imagen Tanto Pilas y Segmentación" submenú del menú "Archivo" para guardar las imágenes, incluidas las segmentaciones, en '. Mat' Formato de volver a procesar las imágenes según sea necesario.

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Representative Results

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En este informe, se muestra la utilidad de la técnica de MRM como una modalidad no invasiva para determinar los cambios estructurales y funcionales en el corazón de los animales afectados con EAM. La miocarditis se indujo en ratones A / J mediante la inmunización de los animales con MyHC-α 334-352 en CFA 7, y los animales se sometieron a experimentos de GRM en el día 21 después de la inmunización. La proyección de imagen de MRM se realizó en animales vivos bajo anestesia con isoflurano al 9,4 T (400 MHz para los protones) usando un imán verticales de calibre 89 mm equipado con gradientes ejes triples (fuerza máxima de 100 G / cm). Una imagen del explorador fue adquirido para ubicar y posicionar el corazón del ratón en el centro del campo de visión, seguido de imágenes axiales para obtener el eje largo de 4 cámaras. El ángulo en el que el corazón fue fotografiada para la vista 2-cámara se muestra en la Figura 2A. Imágenes cardíacas fueron adquiridos utilizando una sonda de imagen RF milpiés 4 cm con una secuencia de pulsos de cine basado gradiente-eco-. Medición de la función cardíacamensiones (imagen: espesor de la pared del VI, salida: volumen diastólico final del VI y la fracción de eyección) fueron analizados utilizando el software del segmento. Los defectos estructurales de los corazones de los ratones afectados por EAM fueron evidenciados por un aumento en el grosor LV en aproximadamente 1,5 veces (p = 0,018) (Figura 2B y el Cuadro 1), con la correspondiente disminución en el volumen diastólico final del VI [18,0 ± 4,2 l vs . 37,5 ± 3,5 l, la figura 2C (i); p = 0,002] y la fracción de eyección [49,4 ± 2,3% frente a 71,5 ± 6,0%, p = 0,00066; Figura 2C (II)] en comparación con los ratones sanos. Como era de esperar, la evaluación histológica de los corazones de miocárdico, pero no sana, ratones mostró infiltrados de linfocitos multifocales, como hemos demostrado previamente 7; Figura 2D). Los datos sugieren que los cambios morfológicos y funcionales en los corazones inflamados pueden ser de forma no invasiva monitoreado por MRM in los animales vivos.

Figura 1
Figura 1. Animal preparación y la colocación de sondas para la adquisición de imágenes de GRM desde el corazón del ratón. Para adquirir imágenes del corazón, el ratón anestesiado se coloca en el soporte de los animales especialmente diseñado para formación de imágenes de MRM y conectado al calentador de soplado de aire para mantener la la temperatura del cuerpo. Bajo anestesia continua, el animal se inmoviliza en la posición de decúbito prono. Una almohada neumática, sensor de oximetría de fibra óptica y el sensor de temperatura se establecen para controlar la respiración, el pulso y la temperatura del cuerpo, respectivamente, hasta la adquisición de imágenes cardiacas MRM está completa. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.


Figura 2. Formación de imágenes de MRM de ratones afectados con miocarditis autoinmune revela anomalías cardíacas. La miocarditis se indujo en ratones A / J mediante la inmunización de los animales con MyHC-α 334-352 en CFA. Los animales fueron sometidos a imágenes de MRM en el día 21 después de la vacunación para evaluar anomalías cardíacas. (A) Posición de corte MRM. El ángulo en el que el corazón se cortó para la adquisición de imágenes se muestra. (B) de imágenes MRM. Cortes de eje corto del corazón fueron capturados utilizando secuencia de pulsos de cine basado echo-en ocho plazos con un TR de 500 ms (TE, 5 ms; ángulo de inclinación, 20 °, número de adquisiciones, 4; matriz de adquisición, 256 x 256) .. [flechas: espesor de la pared del VI] (C) El gasto cardíaco El gasto cardíaco se mide en base a (i) el volumen diastólico final del VI y (ii) la fracción de eyección en ratones sanos y miocárdico ucantar análisis de imágenes médicas cuantitativa con el software del segmento. Se muestran los valores SEM significa para un grupo de ratones (n = 2 a 5 por grupo). (D) Histología. Corazones de los grupos de tratamiento anteriores se evaluaron para la inflamación por tinción con hematoxilina y eosina. Círculos:. Infiltraciones linfocíticas multifocales Por favor clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Animales Sanos (n = 3) EAM (n = 5)
Ratón 1 1.03 1.48
Mouse 2 1.3 1.59
Ratón 3 0.94 1.44
Ratón 4 2.11
Ratón 5 1.92
Media ± SEM 1,71 ± 0,1

Tabla 1. Comparación de ventrículo izquierdo (VI) espesor de pared entre sano y miocarditis autoinmune experimental (EAM) de tres ratones. (MRM) de formación de imágenes saludable y cinco ratones inducida-EAM se sometieron a microscopía de resonancia magnética en el día 21 después de la inmunización. Después de la adquisición de las imágenes cardíacas por MRM, se midió el espesor de la pared del VI utilizando el software de segmento como se describe en el protocolo. Los valores que se muestran en la tabla representan espesor de la pared del VI en mm.

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Discussion

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Este estudio describe el procedimiento de MRM y su utilidad como una herramienta no invasiva para determinar anomalías cardíacas en ratones afectados con miocarditis autoinmune. Dado que las características histológicas de EAM se asemejan a la miocarditis postinfeccioso de los seres humanos, los modelos de ratón se emplean comúnmente para delinear los mecanismos inmunes de las lesiones del miocardio 23-25. Sin embargo, los animales afectados con miocarditis parecen clínicamente normales, y el diagnóstico se hace con base en la histología en la terminación de los experimentos 7. Los animales se sacrificaron por lo general en el día 21 después de la inmunización. La evaluación de proceso de la enfermedad en esta forma en una sola vez señala limita el uso de estos modelos, especialmente en la investigación farmacéutica, donde el monitoreo de la progresión de la enfermedad en respuesta a los tratamientos es un requisito crítico.

Para determinar anomalías cardíacas en animales vivos, el uso de modalidades no invasivas como la MRM es útil. La técnica que se describe aquí MRMofrece una ventaja de la obtención de las características estructurales y funcionales de corazones sin la necesidad de utilizar agentes de contraste. Sin embargo, esta técnica requiere la adquisición de imágenes de alta resolución en 3D anatómicos en campos magnéticos fuertes. Sin embargo, una vez que las imágenes se adquieren, parámetros funcionales, tales como los volúmenes telediastólico y la fracción de eyección LV pueden ser analizados posteriormente utilizando un software disponible comercialmente, sin la necesidad de montar el aparato además de MRM. Como se muestra en la Figura 2, MRM examen de los animales inmunizados con MyHC-α 334-352 espesor de la pared del VI revelado a ser mayor que en ratones sanos (Figura 2B), con una disminución correspondiente en salidas funcionales (volúmenes diastólica final LV y fracciones de eyección ; Figura 2C). Como era de esperar, los corazones de los vacunados, pero no es saludable, los animales tenían infiltrados inflamatorios (Figura 2D). Por lo tanto, los resultados de la técnica de MRM y cor histologíaroborate entre sí.

Sin embargo, para obtener resultados reproducibles por MRM, los tres factores siguientes deben ser abordados. (A) Los animales deberán ser colocados en el escáner de modo MRM corazones se colocan en el centro del imán para exponerlos al campo magnético con la máxima homogeneidad. (B) Movimiento artefacto es una preocupación en los experimentos con animales vivos. Para disminuir la imagen borrosa debido a la respiración y los movimientos cardíacos, oximetría de pulso y respirometría se utilizaron para MRM puerta de adquisición, es decir, la adquisición de señales de imagen separadas en puntos de tiempo específicos dentro de los sistemas respiratorio y ciclos cardiacos que requieren el uso de un sistema de seguimiento de los animales . (C) Adquisición de imágenes de alta resolución en 3D cardiacas es un requisito fundamental para permitir el análisis detallado de las anomalías cardíacas. Para obtener imágenes en las tres dimensiones, y para aumentar la relación señal a ruido, es importante diseñar bobinas de imagen más sensibles específicas para MRM que permiten precisa y comcompleta captación de imágenes en campos magnéticos fuertes en una orientación de eje corto plazo de los escáneres de los animales.

En conclusión, el desarrollo de una técnica de MRM para evaluar anomalías cardíacas en animales vivos es un reto. Esto es especialmente cierto para los ratones, debido a sus tamaños más pequeños del corazón (~ 1/2, 000 la masa de un corazón humano) y las frecuencias cardiacas elevadas (~ 600 latidos por minuto) en comparación con los seres humanos 26. Sin embargo, una vez desarrollado y validado, la técnica de MRM puede ser utilizado para comparar los cambios anatómicos y funcionales de corazones entre animales sanos y enfermos. Por lo tanto, la técnica de MRM podría servir como una herramienta valiosa, no invasivo para evaluar la progresión longitudinal de patologías cardíacas inflamatorias relacionadas tanto a la naturaleza aguda y crónica del proceso de la enfermedad, y para controlar las respuestas a las terapias en animales vivos.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Myhc-a 334-352 (DSAFDVLSFTAEEKAGVYK) Neopeptide, Cambridge, MA Store at 4 °C
CFA Sigma Aldrich, St Louis, MO 5881 Store at 4 °C
MTB H37Rv extract Difco Laboratories, Detroit, MI 231141 Store at 4 °C
PT List Biologicals Laboratories, Campbell, CA 181 Store at 4 °C
1x PBS Corning, Manassas, VA 21-040-CV Store at 4 °C
Isoflurane Piramal Healthcare, Mumbai, India NDC66794-013-25
Female A/J mice Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME 646
Luer-lok sterile 1 ml syrringe BD, Franklin Lakes, NJ 309628
Luer-lok sterile 3 ml syrringe BD, Franklin Lakes, NJ 309657
Sterile needle, 18 G BD, Franklin Lakes, NJ 305195
Sterile needle, 27 1/2 G BD, Franklin Lakes, NJ 305109
3-way stopcock Smiths Medical ASD, Inc. Dublin, OH MX5311L
Kerlix gauze bandage rolls Covidien, Mansfield, MA 6720
Kimwipes Kimberly-Clark Professional, Roswell, GA 34155
Protouch Stockinette Medline Industries, Mundelein, IL 30-1001
Sterile surgical scissors and forceps INOX tool Corporation
Micro oven GE Healthcare, 
ThermiPAQ hot and cold therapy system  Theramics Corporation, Springfield, IL
Reptile heating lamp Energy Savers Unlimited, Inc. Carson, CA
3M Transpore tapes Target Corporation, MN
Up and Up Polymyxin B sulfate/Bacitracin/Neomycin sulfate antibiotic ointment Target Corporation, MN
North Safety DeciDamp-2PVC foam ear plugs North Safety Products, Smithfield, RI
Cotton tipped applicator, 6’’ wooden stem  Jorgensen Laboratories, Inc. Loveland, CO
Anesthesia induction chamber  Summit Anesthesia Solutions, Ann Harbor, MI
Summit Anesthesia Support system for regulating flow of anesthesia  Summit Anesthesia Solutions, Ann Harbor, MI
Specially designed animal holder Agilent Technologies, Santa Clara, CA
Bickford Omnicon F/Air anesthesia gas filter unit  A.M. Bickford, Inc. Wales Center, NY
Pulse-oximeter module, MR compatible small animal monitoring and gating system  Small Animal Instruments, Inc. Stony Brook, NY
Oxygen cylinder  Matheson-Tri Gas, North-Central Zone, Lincoln, NE
Gas regulator  Western Medica, West Lake, OH
Signal breaking module, MR compatible small animal monitoring and gating system Small Animal Instruments, Inc. Stony Brook, NY
9.4 T (400 MHz) 89 mm vertical core bore MR scanner Agilent Technologies, Santa Clara, CA
4 cm millipede micro-imaging RF coil Agilent Technologies, Santa Clara, CA
SAM PC monitor Small Animal Instruments, Inc. Stony Brook, NY
Quantitative Medical Image analysis software http://segment.heiberg.se;  Segment v1.8 R1430,  Medviso, Oresunds region, Sweden
Matlab software The Mathworks, Inc.  Natick, MA
Computer-Unix operating system

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Evaluación no invasiva de la cardiaca Anomalías en la miocarditis autoinmune experimental por Resonancia Magnética de imágenes de microscopía en el ratón
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Massilamany, C., Khalilzad-Sharghi, V., Gangaplara, A., Steffen, D., Othman, S. F., Reddy, J. Noninvasive Assessment of Cardiac Abnormalities in Experimental Autoimmune Myocarditis by Magnetic Resonance Microscopy Imaging in the Mouse. J. Vis. Exp. (88), e51654, doi:10.3791/51654 (2014).More

Massilamany, C., Khalilzad-Sharghi, V., Gangaplara, A., Steffen, D., Othman, S. F., Reddy, J. Noninvasive Assessment of Cardiac Abnormalities in Experimental Autoimmune Myocarditis by Magnetic Resonance Microscopy Imaging in the Mouse. J. Vis. Exp. (88), e51654, doi:10.3791/51654 (2014).

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