Test Görsel Fonksiyonu için Basit Bir Davranış Testi<em> Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus tadpoles siyah / beyaz tankın beyaz tarafında yüzme tercih laevis'den. Bu davranış, onların vizyonu tarafından yönlendirilir. Bu davranışa dayanarak, iribaşların görme fonksiyonunu test etmek için basit bir test sunuyoruz.
Abstract
Kurbağa kurbağa yavruları görsel fonksiyon ölçümü, Xenopus laevis, canlı hayvanlarda körlüğe için tarama sağlar. Optokinetik yanıtı, test edilen bütün omurgalı gözlenmiştir bir görüntü-bazlı, dönüşlü bir davranıştır. Böylece kuyruk kapak tepkisi ince yanıtı kaydetmek için eğitimli bir teknisyen gerektirir alternatif tedbir olarak kullanılan Tadpole gözler küçük. Biz tadpoles siyah ve beyaz her iki taraf ile bir tank içinde yerleştirilen zaman bir tank beyaz tarafında yüzmek için tercih ettiği gerçeğine dayalı alternatif bir davranış testi geliştirdi. Burada sunulan deney, kolaylıkla ölçülür bir yanıt oluşturan bir basit, ucuz bir alternatiftir. Kurulum en Ksenopus laboratuarlarında hazır bir tripod, web kamerası ve iç içe test tanklar, oluşur. Bu makalede önce ve optik sinir kesilmesinin ardından, iribaşların davranışını gösteren bir film içermektedir. Bir gözün işlevini test etmek için, biz de Repre dahilHer göz ardışık günlerde retina axotomy uygulanan hangi bir kurbağa yavrusu bir sentative sonuçları. Gelecek çalışmalar seferde birçok iribaşların vizyonunu test etmek için bu testte bir otomatik versiyonunu gelişebilir.
Introduction
Xenopus laevis göz oluşumunu çalışmak için bir model organizma olarak kullanılmaktadır. Gözleri görme gelişimi ve fonksiyonu üzerinde bir etkiye sahip test genlerin ya da yollar için en az bir hafta içinde vadeye kadar büyüyen, hızla gelişir. Görme fonksiyonunu test etmek için, optokinetik ve optomotor yanıtı sırasıyla 1,2, Zebra balığı ve Xenopus iribaşlara kullanılmaktadır. Xenopus iribaşların gözleri zebrabalıkları nispeten daha küçük olduğundan, bu deney Xenopus'ta ince kuyruk-Flip ve göz hareketleri davranışları tespit için özel ekipman kullanımı ve eğitimli personel gerektirir. Xenopus'ta daha sağlam bir davranış, burada 3 tanımlanan bir beyaz arka plan ile bir tank içinde yüzme için tercihtir. Bir buçuk siyah / yarı-beyaz tankı bir iribaş yerleştirirken, ön-metamorfik iribaş hızla tankın beyaz tarafına yüzer. Daha önce pluripotent hücre-türevli olmadığını belirlemek için bu tahlil kullanılmıştırGözleri 4 fonksiyonel vardı. Burada, premetamorphic Xenopus iribaşların görme fonksiyonunu test etmek için kullanılabilir, bu tahlilde ayrıntılı bir versiyonu, rapor etmektedir.
Sadece en Ksenopus laboratuvarlarda bulunan bir monte dijital video kamera, dijital kamera yazılımı ve standart ekipman gerektirir çünkü bu deney, optomotor tepki deneyi daha basittir. Buna ek olarak, kaydedilen tepki taksitli sonuçlarına özel bir eğitim gerektirir. Bizim temsilcisi sonuçları çift retina axotomy geçirmiş iribaşların aynı grup, tankın etrafına rastgele yüzmek olduğunu göstermektedir. Ayrıca bir göz görsel tepki açısından test edilebilir gösteren temsili bir tadpole arasındaki davranış deney sonuçları dahil ettik. Deneyde sırasında elde edilen sayı eklenir ve analiz edilebilir, böylece bir çalışma dahil edilmiştir. Bu çalışma, test edilen tadpoles görsel bir tepki var olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Biz burada kolayca az eğitimli laboratuvar personeli tarafından bir hafta altında yapılabilir basit bir vizyon eşliğinde davranış deneyi rapor. Diğer deneyler hayvan davranışları, özel ekipman ve uzmanlık gerektiren, bu tahlil hızlı bir test görme fonksiyonunu belirlemenize olanak sağlar. Başka bir davranışsal deney, Görsel Kaçınma tahlil, TECTUM Xenopus'ta 10 görsel algı nasıl katkıda belirlemek için geliştirilmiştir. Istikrarlı bir arka plan karşı hareketli, ve…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe tarafından finanse edildi: EY015748, EY017964 (MEZ) ve EY019517 (ASV). Bu çalışma aynı zamanda Göz Hastalıkları Anabilim Dalı ve Orta New York Lions Körlük Serbest Grant Engellenir Research tarafından desteklenmiştir. Biz de hayvanların onun mükemmel bakım için ve bu video yıldız için adım için bizim hayvan teknisyeni, Matthew Mellini, teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| 1/2-gal. Flex-Tank with Cover | eNasco | SB19271M | size: 5-3/8" x 7" x 3-3/4" |
| Black electrical tape | |||
| White tissue paper | |||
| Large Inoculating Turntable | VWR | 50809-022 | size: Dia 114.3 x H 76.2 mm (4 1/2 x 3") |
| Durasorb Underpad | VWR | 82004-836 | size: 43.2 x 60.1 cm (17 x 24") |
| Kim wipe | Krackeler Scientific, Inc. | 1945-34155-CS | |
| Standard Tripod | various | ||
| iSight camera or webcam | Apple | M8817LL/A | Good for larger tadpoles but small ones are difficult to see |
| Portable computer | Apple/PC | various | We used a 13" MacBook, 2 GHz Intel Core 2 Duo running MacOSX Lion 10.7.5 |
| MiniDV Handycam Camcorder | SONY | DCR-HC42 | Connected by firewire to the computer with a 6-conductor and 4-conductor alpha FireWire 400 |
| Handycam Station | SONY | DCRA-C121 | This can be used for connecting firewire to camera |
| QuickTime Player software | Quicktime | Version 10.1 | |
| 26 Gauge Needle (5/8" length) | VWR | BD305115 | |
| Dumont #5 Forceps Biology | Fine Science Tools | 11295-10 | |
| Disposables | |||
| Gentamicin Sulfate [50 mg/ml] | Fisher Scientific | 17-528Z | Stored at room temperature |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer | Fisher Scientific | NC9644388 | |
| Instant Ocean | Doctors Foster and Smith | CD-116528 | Stock solution = 100 g/L stored at room temperature |
| Sodium phosphate dibasic | Sigma Aldrich | S0876 | Stock solution = 0.4 M stored at room temperature |
| Tricaine (Ethyl-3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Sigma Aldrich | A5040 | Stock solution = 10% stored at -20˚C |
| In vitro fertilized embryos | eNasco | LM00490MX | 100 embryos/unit |
References
- Maurer, C. M., Huang, Y. Y., Neuhauss, S. C. Application of zebrafish oculomotor behavior to model human disorders. Rev Neurosci. 22 (1), 5-16 (2011).
- Solessio, E., Scheraga, D., Engbretson, G. A., Knox, B. E., Barlow, R. B. Circadian modulation of temporal properties of the rod pathway in larval Xenopus. J Neurophysiol. 92 (5), 2672-2684 (2004).
- Moriya, T., Kito, K., Miyashita, Y., Asami, K. Preference for background color of the Xenopus laevis tadpole. J Exp Zool. 276 (5), 335-344 (1996).
- Viczian, A. S., Solessio, E. C., Lyou, Y., Zuber, M. E. Generation of functional eyes from pluripotent cells. PLoS Biol. 7 (8), (2009).
- Choi, R. Y., et al. Cone degeneration following rod ablation in a reversible model of retinal degeneration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (1), 364-373 (2011).
- Viczian, A. S., Zuber, M. E. Tissue determination using the animal cap transplant (ACT) assay in Xenopus laevis. J Vis Exp. 16 (39), (2010).
- Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal table of Xenopus laevis (Daudin) : a systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis. , (1994).
- Blackiston, D., Shomrat, T., Nicolas, C. L., Granata, C., Levin, M. A second-generation device for automated training and quantitative behavior analyses of molecularly-tractable model organisms. PLoS One. 5 (12), (2010).
- Rosemberg, D. B., et al. Differences in spatio-temporal behavior of zebrafish in the open tank paradigm after a short-period confinement into dark and bright environments. PLoS One. 6 (5), (2011).
- Dong, W., et al. Visual Avoidance in Xenopus Tadpoles is Correlated With the Maturation of Visual Responses in the Optic Tectum. J Neurophysiol. 101 (2), 803-815 (2009).
- Lan, L., et al. Noggin Elicits Retinal Fate In Xenopus Animal Cap Embryonic Stem Cells. Stem Cells. 27 (9), 2146-2152 (2009).
- De Robertis, E. M., Kuroda, H. Dorsal-ventral patterning and neural induction in Xenopus embryos. Annu Rev Cell Dev Biol. 20, 285-308 (2004).
