Summary
Bu protokolün amacı stoma kompleksinin hücre korteks içinde, GFP etiketli PATROL1, bir membran kaçakçılığı protein noktalar yanıp sönen gösteren değişken açılı Epifloresans mikroskobu ile bitki hücre yüzeylerinde floresan etiketli protein dinamikleri izlemek için nasıl göstermek için Arabidopsis thaliana.
Protocol
Fidan 1. Hazırlık
- Tohum sterilize edin.
- Ve 1 ul% 10 Triton X-100 500 ul steril su: 500 ul NaClO (% 5.0 mevcut klorin) eklenerek sterilizasyon solüsyonu hazırlayın.
- Yeri yaklaşık 10 transgenik A. Bir 1.5 ml tüp içine GFP PATROL1 8 taşıyan thaliana tohumları.
- 1 ml% 70 etanol solüsyonu ekleyin ve beş kez ters yüz edilerek iyice karıştırın. 1 dakika boyunca bekletin.
- Tohumlar tüpün dibine çöker gözlemleyin. Temiz bir laminer akış kabininde, yavaşça bir mikropipet kullanılarak% 70 etanolü çıkarmak ve 1 ml sterilizasyon çözeltisi ilave edilir. Beş kez tersini İyice karıştırın ve 5 dakika bekletin.
- Tohum yıkayın. Hala temiz bir bankta aseptik koşullarda çalışan, yavaşça bir mikropipet kullanarak çözüm kaldırmak ve 1 ml steril su ekleyin. Bu beş kez tekrarlayın. Sterilize edilmiş tohumlara, 2 gün boyunca 4 ° C'de steril su içinde depolanabilir.
- Yani% 0.5 gellan zamkı katılaşmış 1/2 Murashige ve Skoog levha (pH 5.8) 9 sterilize edilmiş tohumlar, w. Cerrahi bant iki kat kullanarak plaka üzerine kapağı bantlayın.
- Soğuk depolama odası O / N 4 ° C'de karanlıkta plaka inkübe edin.
- 100 umol m-2 sec -1 beyaz ışık kullanarak 12 saat / 12 saatlik bir ışık-karanlık çevrimi ile 23.5 ° C 'ye ayarlanmış bir büyütme odasında içine plaka aktarın ve 7 gün boyunca inkübe edilir. Uzun yaklaşık 1 mm kotiledonlarında fideler daha sonra hasat edilebilir.
2. Sky Drop Kotiledon Örnekler montajı
NOT: VAEM gözlem numune hazırlama önemli bir faktör numune ve kapak cam arasındaki hava kabarcıkları dahil kaçınmaktır. Kabarcıklar ölçüde kırılma indeksi farklılıkları yol açarak VAEM görüntü kalitesini azaltır. Biz montaj 'gökyüzü bırak' çağrısında bulundu basit bir yöntem, kabarcıkları önlemek için de kullanılabilirA arasında thaliana Kotiledonlar ve kapak cam. Bu gözlem hemen önce yapılmalıdır.
- 76: Bazal tampon [5 mM 2- (N-morfolino) -etansülfonik pH 6.5'te asit tris (MES-Tris), 50 mM KCI, 100 uM CaCl2] Bir cam slayt ortasına (boyut 30 ul koyun × 26 mm, kalınlığı: 1.0-1.2 mm).
- Diseksiyon makas kullanarak 7 günlük bir fide bir kotiledon çıkarın. Gözlem tarafı bazal tampon damla (Şekil 1, aşama 1) üzerinde yukarı bakacak şekilde kotiledon kaydırın.
- Bir kapak cam ortasına bazal tampon 30 ul yerleştirin (boyut: 18 × 18 mm, kalınlığı: 0,12-0,17 mm) (Şekil 1, adım 2). Başaşağı hafifçe cam kapak çevirin. Yüzey gerilimi düşmesini tampon damla önleyecektir. Bir kenarında cımbızla cam kapak tutun. Tampon damla yaklaşık kotiledon üstünde olacak şekilde cam slayt karşı kenarını yerleştirin.
- Bu kotiledon örnek (Şekil 1, aşama 3) üzerinde yer almaktadır, böylece sürgü hala, kapak camın kenarına ve hala cımbız ile karşı kenarını tutarken, kapak camı altında tamponu damla konumunu ayarlamak. Kapak cam gidelim. Hava kabarcığı olmadan bir hazırlık sonucunda numune üzerinde bir damla monte edin.
- Havsız dokuları kullanılarak aşırı tampon siliniz. Hemen hazırlık gözlemleyin (adım 3).
NOT: örnekleri mühür gerek yoktur.
3. VAEM Gözlem ve Toplama Film
Bir ters mikroskop, bir TIRF ünitesi ve 1.49 sayısal diyafram ile bir TIRF objektif lens ile donatılmıştır: NOT: aşağıdaki gibi bu çalışmada kullanılan TIRF mikroskop sistemi 9 açıklanmıştır. Lazer giriş açısının bilgisayarlı kontrol için, bir kontrol kutusu kullanılır. Yeşil floresan proteini (GFP) 488 nm optik pompalanan yarıiletken lazer ve t ile heyecanlıO floresans kloroplast gelen otoflüoresanı önlemek için 510-550 nm bant-geçiş filtresi içinden tespit edilir. Fiber çıkış gücü ölçülen maksimum değeri 13,0-13,5 mW olduğunu. Tespiti için, bir elektron kullanılır (EM-CCD) kamera kafası sistemi ve bir C-mount kamera büyütme değişim ünitesi şarj çiftli cihaz çarparak.
- Lazer üreticinin talimatlarına göre merkezleme ve odaklama kalibrasyonu.
Not: Bu adım hassas VAEM gözlemleri için çok önemlidir. Kuvvetle lazer yolu ayar prosedürlerinin periyodik kontroller, mikroskop uygun, yürütülmektedir tavsiye edilir.- Mikroskopi odasının tavanında bir objektif lens içermeyen ışık yolu ile aydınlatılmış merkezi konumunu belirleyin. Merkezi konumunu işaretlemek için, tavanda renkli daire mühür koymak (Şekil 2, adım 1, 2).
- Objektif lensi (Şekil 2, aşama 3, 4) sahip tavan yakma. I Taşıorta konumda (Şekil 2, adım 5) 'bölgesini lluminated. Lazer (Şekil 2, Adım 6) odaklanın. Ince ayar yapma merkezi (Şekil 2, basamak 7) odaklanmış lazer konumu.
- Mikroskop sahnede bir örnek olarak ayarlayın ve parlak alan aydınlatma kullanılarak gözlem hücreleri seçin.
- Floresan protein hücrelerinde görülebilir kontrol edin ve Epifloresans aydınlatma (Şekil 3A) kullanılarak hücre yüzeyinde z -Axis konumunu ayarlamak.
- VAEM gözlemleri gerçekleştirin.
- Denetleyici kutusu ile yavaş yavaş lazer ışınının giriş açısı eğim. Aynı zamanda, özenle canlı görüntüyü izlemek. Başlangıçta, görüntü (Şekil 3B) bulanık olacaktır.
- Lazer açısı arttıkça, VAEM görüntü sonunda net bir görüntü (Şekil 3C ve D) üreten, daha az bulanık hale gelecektir. Bu noktada, increa durdurmaLazer açısını şarkı. Floresan sinyali kaybolursa, sığ açı azalır.
- İnce ayar lazer giriş açısı daha iyi bir görüntü elde etmek için. İnce ayar z -Axis pozisyon da imajını artırabilir. Gerekirse, optik parametreleri (lazer gücü, dalga boyu ve filtre seti) ve görüntü sensörü parametrelerini [görüntü boyutu, pozlama süresi, kazanç, sayısallaştırıcı ve elektron-çarparak (EM) kazanç] ayarlayın.
NOT: TIRF mikroskop ekipman durumda yukarıda açıklanan aşağıdaki gibi, temsilci parametrelerdir. Sadece kamera önünde lens Büyütme: 2X; Lazer çıkışı: 1.0 mW; Resim boyutu: 512 × 512 piksel; Pozlama süresi: 100 ms; Kazanç: 5 ×; Dijitalleştirici: 11 MHz; ve EM kazanç: 100.
- Ticari mikroskop yazılımını kullanarak çok sayfalı TIFF görüntü dosyası olarak film edinin. Burada, film stoma hücrelerinin yüzeyi üzerinde yanıp sönen GFP-etiketli noktalar taşımaktadır.
NOT: Temsili görüntü alma koşulları fol gibidiralçak. Toplama Modu: Akış RAM'e; Kare sayısı: 600; ve çoklu sayfa TIFF dosya boyutu: ~ 302 MB.
4. kymograph Analizi Niceleme için GFP etiketli Dot Residence Time Fiji Yazılım Kullanma
- Fiji Install yazarların yönergeleri kullanarak yazılım 10 ('Fiji Just ImageJ olduğu') (http://fiji.sc/Fiji).
- Fiji çalıştırın ve Fiji menüsü "Dosya-Aç" kullanılarak elde çoklu sayfa TIFF dosyasını açın.
- Fiji araç çubuğu menüsü "Düz Çizgi Seçim Aracı" seçeneğini kullanarak, ilgi sitede bir çizgi yerleştirin. İsteğe bağlı olarak, "Segment Hattı Seçim Aracı" veya "Serbest Hattı Seçim Aracı" kullanın. Burada sunulan sonuçlar şekilde, (8.0 um karşı gelen) 100 piksellik bir düz çizgi bir yan hücre (Şekil 4A) üzerine yerleştirilmiştir.
- Fiji menüsü "Resim-Yığınları-Dinamik Reslice kullanarak bir kymograph görüntü olun "(http://fiji.sc/Dynamic_Reslice) (Şekil 4B). İsteğe bağlı olarak, bir onay kutusu penceresinde ve "Döndür 90 Degrees" "Dikey Döndürme" de (100 piksel tekabül (Burada sunulan sonuçlar kullanılmaz) kymograph görüntüde. X ve y ekseni hattı konumunu belirtmek mevcuttur 8.0 mikron) ve gözlem süresi (600 piksel sırasıyla) 60 saniyeye tekabül etmektedir. kymograph görüntü tatmin edici değilse, pozisyon ve tip (düz, parçalı ve çok sayfalı görüntü hattın serbest) gibi. değiştirilebilir çizgi değişikliği, kymograph görüntü dinamik olarak değişir. Fiji menüsü "Dosya-Farklı Kaydet-Tiff" kullanarak bir TIFF dosyası olarak bir kymograph görüntüsünü kaydedin.
- Zaman ekseni yönde blob uzunluğunu ölçün.
- Gürültü azaltma gerçekleştirmek için, Fiji menüsü "Süreç Filtreler-Gaussian Blur" seçeneğini kullanarak kymograph görüntüleri Gauss filtre uygulamak. "Sigma (Radius) "parametresi ayarlanabilir (1 piksel yarıçapı sunulan sonuçlar için kullanılan) 'dir.
- Segment Fiji menüsünü kullanarak eşikleme sinyal bölgeleri, "Resim-ayarlayın-Eşik".
NOT: Aralarından seçim yapabileceğiniz çeşitli eşikleme algoritması vardır. Sunulan sonuçlarda, "Yen" algoritması (Şekil 4C) seçildi. - Menüsünü kullanarak blob'un -Axis uzunluğu süresi (y) ölçmek için hazırlanın "Analiz-Set Ölçümleri". "Set Ölçümleri" penceresindeki "Sınırlayıcı dikdörtgen" seçeneğini işaretleyin. İdeal Alan seti gürültü çıkarmak, mümkün olduğunca küçük olmalıdır. Burada asgari alan 50 piksel olarak belirlendi. Zaman (y) menüsünü kullanarak blob'un -Axis uzunluğunu ölçün "Analiz-Analiz Parçacıklar". Yöneticisi Ekle "sonuç değerleri elde ve ölçüm bölgelerinin güvenilirliğini kanıtlamak," sonuçlarını görüntüle "kontrol etmek ve </ em> "kutuları.
- "Yükseklik" sütununda değerler (y) ölçülen damla (Şekil 4D) için uzunlukları -Axis zaman vardır. Sonuçlar tablo menüsü "Dosya-Farklı Kaydet" seçeneğini kullanarak değerleri kaydetmek ve hesaplanması ve istatistiksel paket ve / veya elektronik tablo yazılımı (Şekil 4E) kullanarak blob görüntü süreleri veri kümesi işlemek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu video makalede, A. GFP-PATROL1 ve VAEM gözlem için protokollerde yer thaliana kotiledon stoma karmaşık hücrelerin sağlanmaktadır. Gökyüzü açılan montaj A. VAEM hazırlıkları hava kabarcıklarının oluşumunu azaltmaya yardımcı olabilir basit bir hazırlık yöntemi thaliana kotiledonları (Şekil 1). Giriş lazer ve / veya VAEM için numunelerin z-konumlandırma Overtilting belirsiz bir görüntü sağlayacaktır. Eğer bu gerçekleşirse, bu Epifloresans aydınlatma tarafından değerlendirilecek şekilde, hemen numune üzerinde bir konumdan tekrar başlamak tavsiye edilir. VAEM gözlem birkaç gün deneyimden sonra, bu tür yanıp sönen dot GFP PATROL1 burada gösterilen biri olarak, başarılı ve rutin VAEM filmleri elde etmek mümkün olmalıdır. Şekil 4, A. 12 bağımsız iştiraki hücrelerinden 185 GFP-PATROL1 noktaların ikamet süreleri sunulan kymograph analizi kullanarak thaliana kotiledonlar ölçüldü. Monte yoğunluğuFonksiyon en GFP-PATROL1 noktalar hızlı ekzositoz / protonun endositoz iştiraki hücre yüzeyinde pompaları düşündüren, yaklaşık 3,5 sn (Şekil 4E) bir zirve ile, 2 ila 10 saniye boyunca bir yan hücrede ikamet olduğunu ortaya çıkardı.
. Gökyüzünün Şekil 1. şematik montaj yöntemi damla Adım 1: Numune Arabidopsis thaliana kotiledon bir bardak slayt bazal tampon bir damla süzülüyor edilir. Aşama 2: Bazal tampon damla bir damla bir kapak camı üzerine yerleştirilir. Adım 3: damla ile cam kapak altüst olur ve açılan cam slayt numune üzerine yerleştirilir. Adım 4: kapak cam yayınlandı ve açılan numune üzerine düşüyor. (Üst) Kuşbakışı görünümü. (Alt) Yanal ve büyütülmüş görünüşüdür. Please bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
Şekil 2. Lazer orta kalibrasyonu ve odaklama Adım 1:. Mikroskop revolver boş pozisyon mikroskop yukarıdaki tavan üzerine lazer ışığını göndermeye seçilir. Adım 2: merkezi konumu tavana renkli bir daire mühür kullanılarak işaretlenir. Adım 3: Bir amaç seçilir. Adım 4: objektif lens ile lazer ışığı ile aydınlatılmış pozisyonunu kontrol edin. Aşama 5: aydınlatma işaretlenmiş merkezi bir konumda ayarlanır. Aşama 6: Lazer ışığı odaklanmıştır. Adım 7:. Odaklanmış lazer ışığı işaretlenmiş merkezi konumuna getirilir bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Epifloresans mikroskobu ve değişken açılı Epifloresans mikroskobu (VAEM) Şekil 3. karşılaştırılması. (A) Epifloresans mikroskobu lazer ışık yolu şematik. (B) Arabidopsis thaliana'nın 7 günlük fidelerin kotiledon içinde yüzeylerde GFP PATROL1 Temsilcisi Epifloresans görüntüsü. Ölçek bar 5 mikron gösterir. VAEM lazer ışık yolunun (C) şematik. Lazerin girişi eğildiğinde unutmayın ve değişken derinlikte numune yüzeyini aydınlatır. (B) 'de gösterildiği gibi, aynı bölge (D) VAEM ve görüntüler. Ölçek çubuğu 5 mikron gösterir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 4. kymograph analizi GFP-PATROL1 dot rezidans süresini ölçmek için. (A) VAEM görüntü bir kymograph yapmak için yerleştirilen düz bir çizgi ile. Ölçek bar 5 mikron gösterir. (B) (A) 'da gösterilen hattı boyunca bir kymograph görüntüsü. (B) (C) bir ikili görüntü Fiji yazılımında oluşturulan Yen algoritması göre. Sarı çizgiler GFP-PATROL1 sinyal otomatik olarak algılanan bölgesini gösterir. (D) Ekran Fiji sonuçları tablosunun işlevini "Parçacıklar Analiz". (E) yan hücrelerinde GFP-PATROL1 dot ikamet süresi histogram. Kırmızı çizgi yoğunluk fonksiyonunu gösterir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu video makalede, protokoller izlenmesi ve Arabidopsis thaliana'nın stoma kompleksi üzerine GFP-PATROL1 noktaların dinamik davranışını ölçmek için verilmiştir. Burada gösterildiği gibi, VAEM gözlem bitki hücre yüzeylerinin canlı görüntüleme için güçlü bir araçtır. Son derece hassas EM CCD VAEM optik bir nispeten zayıf uyarım lazer kullanımına izin verir, çünkü GFP PATROL1 izlenmesi için kullanılan deney koşulları altında, bir video yakalama 1 dakika için kullanılan numune çok az floresan ışıkla ağartma vardı. Lazer merkezleme ve her bir deney başlamadan önce, odaklama başarılı VAEM gözlem için önemlidir. Kullanıcılar VAEM kullanmadan önce seçilen mikroskop şirketi profesyonel personel tarafından eğitilmelidir.
VAEM GFP-PATROL1 plazma zarı üzerinde yanıp sönen bir hareketsiz nokta benzeri bölme dinamik bir yerelleştirme sahip olduğunu ortaya koymaktadır. Floresan etiketli plazma zarı proton pompa AHA1 hatalı l, bekçi hücreleri ve yan hücreleri patrol1 mutant olarak ocalizes önce 8,9 olarak bildirdi. Bu nedenle, VAEM-görüntülenmiştir GFP-PATROL1 nokta dinamikleri plazma membranı içine proton pompası teslim temsil edebilir. GFP-PATROL1 bu dinamik davranış, bitki hücre yüzeyleri üzerinde gerçek zamanlı proteini dinamikleri açığa çıkarmak VAEM yararlılığını gösteren geleneksel galvano ayna tipi konfokal lazer tarama mikroskobu kullanılarak görsel zordur. GFP-PATROL1 gözlem bitki hücre biyolojisinde VAEM uygulama yalnızca bir örnektir. VAEM (bitki hücrelerindeki sitoplazmada ince kortikal tabaka çok sayıda olayların izlenmesi için geçerli olacaktır, örneğin, enzim, hücre çeperi sentezinde veya salınımının modifikasyon 11,12, plazma membranı protein dinamiği 7,13,14, kortikal mikrotübül dinamiklerinin 4, aktin mikrofilamanlardan 4,15 yeniden düzenlenmesi ve organel hareketi 6). Bitki hücre bilim adamlarının geniş bir yelpazede önerecekleri gerekirVAEM tekniklerden uygun.
Biyolojik görüntü verilerinin kantitatif değerlendirilmesi son zamanlarda mikroskop ekipman ve bilgisayar gelişmeler tarafından yönlendirilen, önemli hale gelmiştir. 600 (t) piksel x 512 (y) x 512 (x) ihtiva eden VAEM film verileri kolayca sadece bir kaç dakika içinde elde edilebilir. Görüntü analizi floresan etiketli protein ömrünü veya hareketini ölçmek değil sadece yardımcı olur, ama aynı zamanda büyük, çok boyutlu görüntü veri setlerinden biyolojik bilgilerin madencilik içinde. Bir kymograph Plazma zarlarına bağlandıktan 2 üzerine proteinlerin sıralı alımı ile gösterildiği gibi, VAEM film verileri hedef protein hareketi belirlenmesi için temel, ama değerli bir yaklaşımdır. Şekil 4 'de gösterildiği gibi kymograph, GFP-PATROL1 Nokta' kalış süreleri, görselleştirme ve plazma zarları üzerinde düşük hareketliliği izin vermiştir. Tersine, bir kymograph gibi sitoplazmik akışı gibi daha karmaşık hareketleri değerlendirmek için etkinliği sınırlıdır. Daha fazla Compli içinOptik akış 16 faydalı olurdu cated hareket, diğer görüntü analizi gibi yaklaşır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazar ifşa ilgisi yoktur.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Inverted microscope | Olympus | IX-73 | |
| TIRF unit | Olympus | IX3-RFAEVAW | |
| TIRF objective lens | Olympus | UAPON 100 × OTIRF | NA = 1.49 |
| Laser angle control box | Chuo Seiki | QT-AK | |
| Optically pumped semiconductor laser | Coherent | SapphireTM LP USB 488-20 CDRH Laser | |
| 510–550 nm band-pass filter | Olympus | U-FBNA | |
| EM CCD camera | Hamamatsu Photonics | ImagEM C9100-13 | |
| C-mount camera magnification change unit | Olympus | U-TVCAC | |
| MetaMorph software | Molecular Devices | MetaMorph version 7.7.11.0 | |
| TIRF microscopy manual | Olympus | AX7385 | Instructions: Total Internal Reflection Illumination System (Printed in Japan on August 24, 2012) |
| Immersion oil | Olympus | Immersion Oil Typr-F | ne = 1.518 (23 degrees) |
References
- Konopka, C. A., Bednarek, S. Y. Comparison of the dynamics and functional redundancy of the Arabidopsis dynamin-related isoforms DRP1A and DRP1C during plant development. Plant Physiol. 147 (4), 1590-1602 (2008).
- Fujimoto, M., et al. Arabidopsis dynamin-related proteins DRP2B and DRP1A participate together in clathrin-coated vesicle formation during endocytosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107 (13), 6094-6099 (2010).
- Higaki, T., Sano, T., Hasezawa, S. Actin microfilament dynamics and actin side-binding proteins in plants. Curr. Opin. Plant Biol. 10 (6), 549-556 (2007).
- Rosero, A., Žársky, V., Cvrčková, F. AtFH1 formin mutation affects actin filament and microtubule dynamics in Arabidopsis thaliana. J. Exp. Bot. 64 (2), 585-597 (2013).
- Axelrod, D. Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology. Traffic. 2 (11), 764-774 (2001).
- Konopka, C. A., Bednarek, S. Y. Variable-angle epifluorescence microscopy: a new way to look at protein dynamics in the plant cell cortex. Plant J. 53 (1), 186-196 (2008).
- Wan, Y., Ash, W. M., Fan, L., Hao, H., Kim, M. K., Lin, J. Variable-angle total internal reflection fluorescence microscopy of intact cells of Arabidopsis thaliana. Plant Methods. 7 (27), (2011).
- Hashimoto-Sugimoto, M., et al. A Munc13-like protein in Arabidopsis mediates H+-ATPase translocation that is essential for stomatal responses. Nat. Commun. 4, 2215 (2013).
- Higaki, T., Hashimoto-Sugimoto, M., Akita, K., Iba, K., Hasezawa, S. Dynamics and environmental responses of PATROL1 in Arabidopsis subsidiary cells. Plant Cell Physiol. 55 (4), (2014).
- Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat. Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
- Chebli, Y., Kaneda, M., Zerzour, R., Geitmann, A. The cell wall of the Arabidopsis pollen tube-spatial distribution, recycling, and network formation of polysaccharides. Plant Physiol. 160 (4), 1940-1955 (2012).
- Fujimoto, M., Suda, Y., Vernhettes, S., Nakano, A., Ueda, T. Phosphatidylinositol 3-kinase and 4-kinase have distinct roles in intracellular trafficking of cellulose synthase complexes in Arabidopsis thaliana. Plant Cell Physiol. 56 (2), 287-298 (2015).
- Li, X., Wang, X., Yang, Y., Li, R., He, Q., Fang, X., Luu, D. T., Maurel, C., Lin, J. Single-molecule analysis of PIP2; 1 dynamics and partitioning reveals multiple modes of Arabidopsis plasma membrane aquaporin regulation. Plant Cell. 23 (10), 3780-3797 (2011).
- Li, R., Liu, P., Wan, Y., Chen, T., Wang, Q., Mettbach, U., Baluska, F., Samaj, J., Fang, X., Lucas, W. J., Lin, J. A membrane microdomain-associated protein, Arabidopsis Flot1, is involved in a clathrin-independent endocytic pathway and is required for seedling development. Plant Cell. 24 (5), 2105-2122 (2012).
- Staiger, C. J., Sheahan, M. B., Khurana, P., Wang, X., McCurdy, D. W., Blanchoin, L. Actin filament dynamics are dominated by rapid growth and severing activity in the Arabidopsis cortical array. J. Cell Biol. 184 (2), 269-280 (2009).
- Ueda, H., et al. Myosin-dependent endoplasmic reticulum motility and F-actin organization in plant cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107 (15), 6894-6899 (2010).
