Summary
والهدف من هذا البروتوكول هو لإظهار كيفية رصد ديناميات البروتين fluorescently الموسومة على أسطح الخلايا النباتية مع متغير الزاوية المجهر epifluorescence، والتي تبين وامض النقاط من الموسومة GFP PATROL1، وهو بروتين الاتجار الغشاء، في القشرة خلية من مجمع الثغور في نبات الأرابيدوبسيس thaliana.
Protocol
1. إعداد الشتلات
- تعقيم البذور.
- تحضير محلول التعقيم عن طريق إضافة 500 ميكرولتر NaClO (الكلور المتاحة: 5.0٪) و 1 ميكرولتر 10٪ تريتون X-100-500 ميكرولتر الماء المعقم.
- مكان كاليفورنيا 10 المعدلة وراثيا A. thaliana البذور تحمل GFP-PATROL1 8 في أنبوب 1.5 مل.
- إضافة 1 مل 70٪ محلول الإيثانول، ومزيج جيد من قبل قلب خمس مرات. يترك لمدة 1 دقيقة.
- مراقبة البذور تنزل الى قاع الأنبوب. في نظيفة مجلس الوزراء تدفق الصفحي، وإزالة بلطف الايثانول 70٪ باستخدام micropipette، وإضافة 1 مل من محلول التعقيم. مزيج جيد من قبل قلب خمس مرات ويترك لمدة 5 دقائق.
- تغسل البذور. لا تزال تعمل تحت ظروف معقمة على مقاعد البدلاء النظيفة، وإزالة بلطف الحل باستخدام micropipette، وإضافة 1 مل من الماء المعقم. كرر هذه خمس مرات. يمكن تخزين البذور المعقمة في الماء المعقم عند 4 درجة مئوية لمدة 2 أيام.
- هكذاث البذور المعقمة على 0.5٪ جيلان-عزز اللثة 1/2 Murashige وسكوغ لوحة المتوسطة (درجة الحموضة 5.8) 9. الشريط غطاء على لوحة باستخدام طبقتين من الشريط الجراحية.
- احتضان لوحة في الظلام في 4 درجة مئوية مع غرفة التخزين البارد، O / N.
- نقل لوحة في غرفة النمو وضعت في 23.5 درجة مئوية مع / 12 ساعة دورة ضوء الظلام لمدة 12 ساعة باستخدام 100 ميكرومول م -2 ثانية -1 أضواء بيضاء، واحتضان لمدة 7 أيام. الشتلات مع النبتات من حوالي 1 مم طويل ويمكن بعد ذلك أن تحصد.
2. السماء قطرة تركيب النبتة العينات
ملاحظة: ثمة عامل مهم في إعداد العينات للمراقبة VAEM هو تجنب إدراج فقاعات الهواء بين العينة وغطاء زجاجي. فقاعات يقلل كثيرا من جودة الصورة من خلال التسبب في VAEM الاختلافات في معامل الانكسار. وهناك طريقة بسيطة، والتي طالبنا 'قطرة السماء "تصاعد مستمر، ويمكن استخدامها لتجنب الفقاعاتبين A. النبتات thaliana وغطاء زجاجي. ينبغي أن يتم ذلك مباشرة قبل المراقبة.
- ضع 30 ميكرولتر من العازلة القاعدية [5 ملي 2- (N -morpholino) -ethanesulfonic حمض تريس (MES-تريس) في درجة الحموضة 6.5، 50 ملي بوكل، 100 ميكرومتر CaCl 2] في وسط شريحة زجاجية (الحجم: 76 × 26 مم، سمك: 1،0-1،2 مم).
- إزالة فلقة من الشتلات القديمة لمدة 7 أيام باستخدام مقص تشريح. تعويم فلقة مع الجانب المراقبة تواجه حتى على قطرة القاعدية العازلة (الشكل 1، الخطوة 1).
- ضع 30 ميكرولتر من العازلة القاعدية في وسط غطاء زجاجي (الحجم: 18 × 18 مم، سماكة: 0،12-0،17 مم) (الشكل 1 الخطوة 2). تحويل الزجاج غطاء رأسا على عقب بلطف. والتوتر السطحي منع انخفاض عازلة من السقوط. عقد غطاء زجاجي مع ملاقط على حافة واحدة. ضع حافة المعاكس على شريحة زجاجية بحيث انخفاض عازلة تقريبا فوق فلقة.
- مع حافة غطاء زجاجي لا يزال على الشريحة، والاستمرار في الضغط على الحافة المقابلة مع ملاقط، وضبط الموقف من الانخفاض عازلة تحت غطاء زجاجي بحيث تكون مباشرة فوق العينة فلقة (الشكل 1، الخطوة 3). ترك من الزجاج غطاء. جبل انخفاض على عينة مما أدى إلى إعداد دون فقاعات الهواء.
- تمحو عازلة الزائد باستخدام أنسجة خالية من الوبر. مراقبة إعداد فورا (راجع الخطوة 3).
ملاحظة: ليست هناك حاجة لختم العينات.
3. VAEM مراقبة واكتساب السينما
ملاحظة: نظام المجهر TIRF 9 المستخدمة في هذه الدراسة يوصف على النحو التالي: تم تجهيز مجهر مقلوب مع وحدة TIRF وعدسة موضوعية TIRF مع الفتحة العددية 1.49. من أجل السيطرة الآلية لزاوية دخول الليزر، يتم استخدام مربع عنصر التحكم. بروتين الفلورية الخضراء (GFP) هو متحمس مع 488 نانومتر ضخ بصريا ليزر أشباه الموصلات، وروقال انه تم الكشف عن مضان من خلال 510-550 نانومتر الفرقة تمرير فلتر لمنع تألق ذاتي من البلاستيدات الخضراء. القيمة القصوى المقاسة من انتاج الألياف السلطة هي 13،0-13،5 ميغاواط. للكشف، إلكترون تتضاعف الجهاز المسؤول عن جانب (EM-CCD) نظام الكاميرا رئيس وحدة تغير الكاميرا التكبير C-جبل تستخدم.
- معايرة معدات الاختبار والتركيز وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
ملاحظة: هذه الخطوة الحاسمة لملاحظات VAEM دقيقة. فمن المستحسن أن فحوص دورية للإجراءات تعديل مسار الليزر، ومناسبة لالمجهر، يتم تنفيذها.- تحديد الموقف المركزي مضيئة مع موضوعي مسار الضوء خالية من العدسة على سقف الغرفة المجهري. بمناسبة موقعا مركزيا، ووضع ختم دائرة الملونة على السقف (الشكل 2، الخطوة 1، 2).
- إلقاء الضوء على السقف مع العدسة الشيئية (الشكل 2 الخطوة 3، 4). نقل طlluminated المنطقة إلى موقف وسط (الشكل 2، الخطوة 5). تركيز الليزر (الشكل 2، الخطوة 6). صقل موقف ليزر مركز لمركز (الشكل 2، الخطوة 7).
- وضع العينة على مرحلة المجهر وتحديد خلايا للمراقبة باستخدام إضاءة حقل مشرق.
- تأكد من أن بروتين فلوري يمكن ملاحظة في الخلايا، وتحديد موقف ض -axis على سطح الخلية باستخدام epifluorescence إضاءة (الشكل 3A).
- أداء الملاحظات VAEM.
- تركنوا زاوية دخول شعاع الليزر تدريجيا مع مربع وحدة تحكم. وفي الوقت نفسه، رصد صورة حية بعناية. في البداية، سوف يكون واضحا للصورة (الشكل 3B).
- كما يزيد زاوية الليزر، فإن الصورة VAEM تصبح أقل واضح، في نهاية المطاف إنتاج صورة واضحة (الشكل 3C وD). في هذه المرحلة، ووقف increaالغناء زاوية الليزر. في حالة فقدان إشارة مضان، تنخفض إلى زاوية الضحلة.
- صقل زاوية دخول ليزر للحصول على أفضل صورة. صقل موقف ض -axis يمكن أيضا تحسين الصورة. إذا لزم الأمر، وضبط المعلمات البصرية (قوة الليزر، والطول الموجي ومجموعة فلتر) والمعلمات صورة الاستشعار [حجم الصورة، وقت التعرض، كسب، التحويل الرقمي وبضرب الإلكترون (EM) أرباح].
ملاحظة: في حالة المعدات المجهر TIRF المذكورة أعلاه، المعلمات التمثيلية هي على النحو التالي. التكبير من عدسة عادل امام الكاميرا: 2X. انتاج الليزر: 1،0 ميغاواط. حجم الصورة: 512 × 512 بكسل. وقت التعرض: 100 مللي ثانية. كسب: 5 ×؛ التحويل الرقمي: 11 ميغاهرتز؛ وEM مكاسب: 100.
- الحصول على الفيلم باعتباره TIFF ملف صورة متعددة الصفحات باستخدام برنامج المجهر التجاري. هنا، والفيلم هو من النقاط المسمى GFP امض على سطح خلايا الثغور.
ملاحظة: التمثيلية شروط الحصول على الصور هي كما فلأدنى مستوياته. الوضع الاستحواذ: تيار لذاكرة الوصول العشوائي؛ عدد الإطارات: 600؛ وحجم متعدد الصفحات ملف TIFF: ~ 302 MB.
4. تحليل مخطاط التموج لالكمي لالمسمى GFP دوت الإقامة الوقت عن طريق فيجي البرمجيات
- تثبيت فيجي ('فيجي هو فقط يماغيج') برنامج 10 باستخدام إرشادات المؤلفين (http://fiji.sc/Fiji).
- تشغيل فيجي وفتح ملف TIFF متعددة الصفحات المكتسبة باستخدام القائمة فيجي "ملف المفتوحة".
- وضع خط على موقع مصلحة، وذلك باستخدام أداة فيجي شريط القوائم "خط مستقيم أداة التحديد". اختياريا، واستخدام "مقطع الخط أداة التحديد" أو "حر الخط أداة التحديد". في النتائج المعروضة هنا، وضعت خط مستقيم من 100 بكسل (الموافق 8،0 ميكرون) على خلية تابعة الشكل (4A).
- تقديم صورة مخطاط التموج باستخدام القائمة فيجي "صورة-الأكوام-الديناميكي Reslice (الشكل 4B). اختياريا، "الوجه عموديا" و "استدارة 90 درجة" في إطار خانة الاختيار متاحة (لا تستخدم في النتائج المقدمة هنا). وX- و y-axis في الصورة مخطاط التموج تشير إلى موقف خط (100 بكسل المقابلة لكما 8.0 ميكرون)، ووقت رصد (600 بكسل الموافق 60 ثانية)، على التوالي. إذا كانت الصورة مخطاط التموج ليست مرضية، وموقف ونوع (على التوالي، مجزأة ومرفوعة) من خط على الصورة متعدد الصفحات قد تغيرت. كما التغييرات الخط، صورة مخطاط التموج يتغير بشكل حيوي. حفظ صورة مخطاط التموج كملف TIFF باستخدام القائمة فيجي "ملف-حفظ باسم-المشاجرة".
- قياس طول النقطة في اتجاه محور الزمن.
- لأداء الحد من الضوضاء، وتطبيق فلتر التمويه على الصور مخطاط التموج باستخدام القائمة فيجي "عملية-فلاتر التمويه الضبابي". و"سيغما (رادالناهية) "المعلمة غير الانضباطي (يستخدم 1 بكسل دائرة نصف قطرها عن النتائج المقدمة).
- الجزء المناطق إشارة من العتبة، وذلك باستخدام القائمة فيجي "صورة-ضبط-عتبة".
ملاحظة: هناك العديد من الخوارزميات العتبة للاختيار من بينها. في النتائج المقدمة، تم اختيار خوارزمية "الين" (الشكل 4C). - الاستعداد لقياس الوقت (ص) -axis طول النقطة باستخدام القائمة "القياسات تحليل-مجموعة". التحقق من "المستطيل إحاطة" في "مجموعة قياسات" النافذة. من الناحية المثالية ينبغي أن تكون مجموعة منطقة صغيرة قدر الإمكان، على أن تستبعد الضوضاء. هنا، تم تعيين الحد الأدنى من المنطقة في 50 بكسل. قياس الوقت (ص) -axis طول النقطة باستخدام القائمة "تحليل-تحليل الجزيئات". للحصول على القيم نتيجة وإثبات مصداقية المناطق القياس، والتحقق من "عرض النتائج" و "إضافة إلى مدير </ م> "صناديق.
- القيم في العمود "الطول" هي الوقت (ص) -axis أطوال لسائل قياس (الشكل 4D). حفظ القيم باستخدام القائمة جدول نتائج "ملف-حفظ باسم" وحساب ومعالجة بيانات من فترات صورة النقطة باستخدام الحزمة الإحصائية و / أو برنامج جداول البيانات (الشكل 4E).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في هذه المقالة الفيديو، وبروتوكولات لمراقبة VAEM من GFP-PATROL1 في A. وتقدم خلايا معقدة thaliana فلقة الثغور. انخفاض السماء تصاعد هي طريقة إعداد بسيط قد يساعد على التقليل من حدوث فقاعات الهواء في الأعمال التحضيرية VAEM من A. النبتات thaliana (الشكل 1). سوف Overtilting ليزر الدخول و / أو ض المواقع من العينات للVAEM تقديم صورة واضحة. وإذا حدث ذلك، فمن المستحسن أن تبدأ من جديد من موقع مباشرة فوق العينة، كما تقرره epifluorescence الإضاءة. بعد تجربة بضعة أيام من المراقبة VAEM، ينبغي أن يكون من الممكن الحصول على الأفلام VAEM بنجاح وبشكل روتيني، مثل واحد هو مبين هنا من GFP-PATROL1 دوت امض. باستخدام تحليل مخطاط التموج المعروضة في الشكل (4)، والأوقات إقامة 185 النقاط GFP-PATROL1 من 12 خلايا فرعية مستقلة في A. تم قياس النبتات thaliana. كثافة المجهزةكشفت وظيفة أن معظم النقاط GFP-PATROL1 كانت مقيمة في خلية تابعة لمدة تتراوح بين 2 و 10 ثانية، مع ذروة بلغت نحو 3.5 ثانية (الشكل 4E)، مما يشير إلى إيماس سريع / الإلتقام بروتون مضخات على سطح الخلية فرعية.
الشكل 1. تخطيطي للسماء إسقاط تصاعد أسلوب الخطوة 1: عينة نبات الأرابيدوبسيس يتم طرح thaliana النبتات على قطرة من العازلة القاعدية على شريحة زجاجية. يتم وضع قطرة قطرة القاعدية عازلة على غطاء زجاجي: الخطوة 2. يتم تشغيل غطاء زجاجي مع انخفاض رأسا على عقب ويتم وضع قطرة فوق العينة على الشريحة الزجاجية: الخطوة 3. الخطوة 4: يتم تحرير غطاء زجاجي وانخفاض يقع على لعينة. (الأعلى) عرض الطيور العين. (القاع) الجانبي وعرض موسع. التنوير القائل بورصة عمان انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
يتم تحديد موقف فارغ من مسدس المجهر لإرسال ضوء الليزر على السقف فوق المجهر: الشكل 2. معايرة تمركز ليزر، والتركيز الخطوة 1. الخطوة 2: يتم وضع علامة على موقف المركزي باستخدام الختم دائرة الملونة على السقف. الخطوة 3: تم تحديد الهدف. الخطوة 4: التحقق من موقف تنيره ضوء الليزر من خلال عدسة موضوعية. خطوة 5: تم تعديل الإضاءة إلى موقف وسط ملحوظ. خطوة 6: يركز ضوء الليزر. خطوة 7: يتم نقل ضوء الليزر تركيزا على المركز الأساسي ملحوظ الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
ه = "دائما"> 
الشكل 3. مقارنة المجهر epifluorescence وزاوية متغيرة المجهر epifluorescence (VAEM). (A) تخطيطي لمسار ضوء الليزر في المجهر epifluorescence. (B) صورة epifluorescence التمثيلية للGFP-PATROL1 على المصادر فلقة في العمر الشتلات لمدة 7 أيام من نبات الأرابيدوبسيس thaliana. يشير الشريط على نطاق و5 ميكرون. (C) تخطيطي لمسار ضوء الليزر في VAEM. لاحظ أنه يميل دخول الليزر، وينير سطح العينة مع عمق متغير. الصور (D) VAEM من المنطقة نفسها كما هو مبين في (B). يشير الشريط على نطاق و5 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
رقيقة الصفحة = "دائما"> 
الشكل 4. تحليل مخطاط التموج لقياس الوقت مسكن GFP-PATROL1 نقطة ل. (A) VAEM صورة مع خط مستقيم وضعت لجعل مخطاط التموج. يشير الشريط على نطاق و5 ميكرون. (B) صورة مخطاط التموج على طول الخط هو مبين في (A). (C) وثنائي صورة (B) بناء على خوارزمية الين الياباني، ولدت في البرنامج فيجي. خطوط صفراء تظهر منطقة الكشف عن تلقائيا للإشارة GFP-PATROL1. (D) لقطة من نتائج الجدول من فيجي "تحليل الجزيئات" وظيفة. (E) والرسم البياني للوقت الإقامة GFP-PATROL1 نقطة في خلايا تابعة. الخط الأحمر يظهر دالة الكثافة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذه المقالة الفيديو، الذي يتم إعطاء بروتوكولات لرصد وقياس السلوك الديناميكي من النقاط GFP-PATROL1 على مجمع الثغور من نبات الأرابيدوبسيس thaliana. كما هو موضح هنا، والمراقبة VAEM هو أداة قوية لتصوير حي لأسطح الخلايا النباتية. تحت ظروف تجريبية تستخدم هنا لرصد GFP-PATROL1، كان هناك القليل جدا photobleaching من مضان في العينة المستخدمة لمدة 1 دقيقة من تسجيل الفيديو، لأن حساسة للغاية EM-CCD يسمح استخدام ضعيفة نسبيا ليزر الإثارة في البصريات VAEM. معدات الاختبار والتركيز، وذلك قبل بداية كل تجربة، هي مهمة لمراقبة VAEM ناجحة. ينبغي تدريب المستخدمين عن طريق الموظفين الفنيين من الشركة المجهر اختار قبل استخدام VAEM.
VAEM يكشف عن أن GFP-PATROL1 لديها توطين الديناميكي مع مثل نقطة مقصورة متحركة وامض على غشاء البلازما. وfluorescently المسمى سوء لتر البلازما غشاء مضخة البروتون AHA1ocalizes في patrol1 متحولة خلايا الحرس والخلايا التابعة، كما ذكرت سابقا 8،9. وبالتالي، قد VAEM تصور-GFP-PATROL1 نقطة ديناميات تمثل تسليم مضخة البروتون في غشاء البلازما. هذا السلوك الديناميكي للGFP-PATROL1 من الصعب تصور التقليدية باستخدام الجلفانومتر مرآة من نوع المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهر، مما يدل على فائدة VAEM في الكشف عن ديناميات البروتين في الوقت الحقيقي على سطوح الخلايا النباتية. الملاحظة GFP-PATROL1 هو مجرد مثال واحد من تطبيق VAEM في بيولوجيا الخلية النباتية. سوف VAEM تكون قابلة للتطبيق لرصد العديد من الأحداث في الطبقة القشرية رقيقة من السيتوبلازم في الخلايا النباتية (مثل إفراز أنزيم في التوليف جدار الخلية أو تعديل 11،12، غشاء البلازما ديناميات البروتين 7،13،14، وديناميات أنيبيب القشرية 4، إعادة ترتيب microfilaments الأكتين 4،15 وعضية حركة 6). وهناك مجموعة واسعة من العلماء الخلية النباتية يجب أن بينيتناسب من تقنيات VAEM.
أصبح التقييم الكمي للبيانات الصورة البيولوجية الهامة في الآونة الأخيرة، مدفوعا التقدم في المعدات المجهر والحوسبة. بيانات الفيلم VAEM تحتوي على 512 (س) × 512 (ذ) × 600 (ر) بكسل يمكن الحصول عليها بسهولة في بضع دقائق فقط. تحليل الصور لا يساعد فقط في قياس مدى الحياة أو الحركة من البروتين fluorescently المسمى، بل أيضا في التعدين المعلومات البيولوجية من كبيرة، مجموعات البيانات صورة متعددة الأبعاد. A مخطاط التموج هو نهج أساسي، ولكن قيمة لتحديد الهدف حركة البروتين من بيانات الفيلم VAEM، كما هو مبين من خلال توظيف متتابعة من البروتينات على أغشية البلازما 2. ومخطاط التموج يسمح التصور من الأوقات الإقامة النقاط GFP-PATROL1، والحركة من انخفاض في أغشية البلازما، كما هو مبين في الشكل (4). وعلى العكس، لديه مخطاط التموج فعالية محدودة لتقييم حركات أكثر تعقيدا، مثل تدفق حشوية. لمزيد من compliالحركة تسلمت، وغيرها من تحليل الصور نهج مثل تدفق بصري 16 سيكون مفيدا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
المؤلف ليس لديه ما يكشف.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Inverted microscope | Olympus | IX-73 | |
| TIRF unit | Olympus | IX3-RFAEVAW | |
| TIRF objective lens | Olympus | UAPON 100 × OTIRF | NA = 1.49 |
| Laser angle control box | Chuo Seiki | QT-AK | |
| Optically pumped semiconductor laser | Coherent | SapphireTM LP USB 488-20 CDRH Laser | |
| 510–550 nm band-pass filter | Olympus | U-FBNA | |
| EM CCD camera | Hamamatsu Photonics | ImagEM C9100-13 | |
| C-mount camera magnification change unit | Olympus | U-TVCAC | |
| MetaMorph software | Molecular Devices | MetaMorph version 7.7.11.0 | |
| TIRF microscopy manual | Olympus | AX7385 | Instructions: Total Internal Reflection Illumination System (Printed in Japan on August 24, 2012) |
| Immersion oil | Olympus | Immersion Oil Typr-F | ne = 1.518 (23 degrees) |
References
- Konopka, C. A., Bednarek, S. Y. Comparison of the dynamics and functional redundancy of the Arabidopsis dynamin-related isoforms DRP1A and DRP1C during plant development. Plant Physiol. 147 (4), 1590-1602 (2008).
- Fujimoto, M., et al. Arabidopsis dynamin-related proteins DRP2B and DRP1A participate together in clathrin-coated vesicle formation during endocytosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107 (13), 6094-6099 (2010).
- Higaki, T., Sano, T., Hasezawa, S. Actin microfilament dynamics and actin side-binding proteins in plants. Curr. Opin. Plant Biol. 10 (6), 549-556 (2007).
- Rosero, A., Žársky, V., Cvrčková, F. AtFH1 formin mutation affects actin filament and microtubule dynamics in Arabidopsis thaliana. J. Exp. Bot. 64 (2), 585-597 (2013).
- Axelrod, D. Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology. Traffic. 2 (11), 764-774 (2001).
- Konopka, C. A., Bednarek, S. Y. Variable-angle epifluorescence microscopy: a new way to look at protein dynamics in the plant cell cortex. Plant J. 53 (1), 186-196 (2008).
- Wan, Y., Ash, W. M., Fan, L., Hao, H., Kim, M. K., Lin, J. Variable-angle total internal reflection fluorescence microscopy of intact cells of Arabidopsis thaliana. Plant Methods. 7 (27), (2011).
- Hashimoto-Sugimoto, M., et al. A Munc13-like protein in Arabidopsis mediates H+-ATPase translocation that is essential for stomatal responses. Nat. Commun. 4, 2215 (2013).
- Higaki, T., Hashimoto-Sugimoto, M., Akita, K., Iba, K., Hasezawa, S. Dynamics and environmental responses of PATROL1 in Arabidopsis subsidiary cells. Plant Cell Physiol. 55 (4), (2014).
- Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat. Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
- Chebli, Y., Kaneda, M., Zerzour, R., Geitmann, A. The cell wall of the Arabidopsis pollen tube-spatial distribution, recycling, and network formation of polysaccharides. Plant Physiol. 160 (4), 1940-1955 (2012).
- Fujimoto, M., Suda, Y., Vernhettes, S., Nakano, A., Ueda, T. Phosphatidylinositol 3-kinase and 4-kinase have distinct roles in intracellular trafficking of cellulose synthase complexes in Arabidopsis thaliana. Plant Cell Physiol. 56 (2), 287-298 (2015).
- Li, X., Wang, X., Yang, Y., Li, R., He, Q., Fang, X., Luu, D. T., Maurel, C., Lin, J. Single-molecule analysis of PIP2; 1 dynamics and partitioning reveals multiple modes of Arabidopsis plasma membrane aquaporin regulation. Plant Cell. 23 (10), 3780-3797 (2011).
- Li, R., Liu, P., Wan, Y., Chen, T., Wang, Q., Mettbach, U., Baluska, F., Samaj, J., Fang, X., Lucas, W. J., Lin, J. A membrane microdomain-associated protein, Arabidopsis Flot1, is involved in a clathrin-independent endocytic pathway and is required for seedling development. Plant Cell. 24 (5), 2105-2122 (2012).
- Staiger, C. J., Sheahan, M. B., Khurana, P., Wang, X., McCurdy, D. W., Blanchoin, L. Actin filament dynamics are dominated by rapid growth and severing activity in the Arabidopsis cortical array. J. Cell Biol. 184 (2), 269-280 (2009).
- Ueda, H., et al. Myosin-dependent endoplasmic reticulum motility and F-actin organization in plant cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107 (15), 6894-6899 (2010).
