Abstract
श्वेतपटल एक घने संयोजी ऊतक कि कवर और आंख की रक्षा करता है। यह मुख्य रूप से घने कोलेजन बंडलों (प्रकार मैं, तृतीय, चतुर्थ, पंचम, षष्ठम, और सप्तम) के होते हैं। इसकी autofluorescence, opaqueness, और मोटाई के कारण, यह confocal माइक्रोस्कोपी के लिए उपयुक्त नहीं पाया गया है। जो, formalin तय श्वेतपटल immunohistochemistry के लिए पैराफिन में एम्बेडेड का उपयोग करता तकनीकी चुनौतियों का सामना किया है, खासकर जब प्रतिजन पुनः प्राप्ति के लिए ऊतक preheating यहाँ प्रस्तुत एक है, के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण। चूंकि श्वेतपटल दोनों कोशिकाओं और जहाजों में अपेक्षाकृत गरीब है, बड़ा ऊतकों के नमूनों के उपयोग अनदेखी कोशिकाओं को रोकने और जहाजों और अन्य संरचनात्मक साइटों के संबंध में उनके स्थानीयकरण को समझने में मदद करने के लिए पता लगाया था। confocal खुर्दबीन के नीचे बड़ा ऊतकों के नमूनों के विश्लेषण के लिए अनुमति देने के लिए, एक laminating तकनीक श्वेतपटल से पतली परत बनाने के लिए किया गया था। CD31 रक्त वाहिकाओं और लसीका पोत endothelial hyalu के परिणामों के विश्लेषण के बादरोनन रिसेप्टर 1 (LYVE1) सकारात्मक कोशिकाओं है, जो के लिए वैज्ञानिक परीक्षा के लिए अनुमोदन प्राप्त किया गया था, फायदे और इस विधि की सीमाओं पर विचार-विमर्श कर रहे हैं।
Introduction
श्वेतपटल कठोर बाहरी परत है कि आंख है, जो घने संयोजी ऊतक से बना है शामिल किया गया है। यह intraocular संरचनाओं की रक्षा के लिए और intraocular दबाव बनाए रखने के लिए मदद करता है। इस प्रकार, श्वेतपटल स्पष्ट दृष्टि के लिए आवश्यक है। यह लसीका वाहिकाओं 1,2 से रहित है और इस तरह यह और लसीका-मुक्त भीतर की आंख 3-7 के बीच एक बाहरी लसीका-मुक्त सीमा रूपों। यह भी extraocular की मांसपेशियों के लिए लगाव साइटों प्रदान करता है, जिससे tendons के साथ शारीरिक समानता साझा। श्वेतपटल मुख्य रूप प्रकार मैं कोलेजन के घने बंडलों के होते हैं और कोलेजन प्रकार तृतीय, चतुर्थ, पंचम, षष्ठम, आठवीं 8,9 और इलास्टिन 10,11 की छोटी संख्या है क्योंकि, इस ऊतक immunohistochemistry के लिए उपयोग करने के लिए आसान नहीं है।
(1) सतही vascularized episclera, कंजाक्तिवा और चूल के कैप्सूल के नीचे पाया और पक्षों और वें की ओर: anatomically, श्वेतपटल तीन मुख्य परतों में विभाजित किया जा सकता हैआंख की कक्षा का सामना करना पड़ ई वापस; (2) scleral स्ट्रोमा, श्वेतपटल का मुख्य हिस्सा; और (3) पटल fusca है, जो एक पतली, रंजित सीधे uvea के ऊपर स्थित परत है। हमारे बारे में श्वेतपटल संरचनात्मक ज्ञान 20 वीं सदी की पहली छमाही से मुख्य रूप से उपजा है। उस समय, शोधकर्ताओं ने मुख्य रूप से भारत स्याही इंजेक्शन का उपयोग कर 12 और नाड़ी कास्टिंग 13-15 से वाहिका का शरीर रचना विज्ञान का अध्ययन किया। बाद में, यह angiographic अध्ययनों 16-19 में शोध किया था।
उस समय के बाद से, पुरानी तकनीक में सुधार किया गया है और नए लोगों को विकसित किया गया है कि हमें पिछले संरचनात्मक ज्ञान के पूरक के लिए अनुमति दी है। उदाहरण के लिए, यह केवल बारे में एक दशक के लिए किया गया है के बाद से हम के रूप में लसीका संवहनी endothelium विशिष्ट हयालूरोनान रिसेप्टर 1 (LYVE1) 20 या 21 podoplanin ऐसी विश्वसनीय लसीका मार्कर पड़ा है। Confocal माइक्रोस्कोपी अलग तिवारी की शारीरिक विशेषताओं के अध्ययन के लिए नई संभावनाओं प्रदान करता हैआंख की ssues। यह अनुमति देता है कई दाग के लिए कोशिकाओं के मार्कर के फर्क के लिए या रक्त वाहिकाओं और अन्य शारीरिक संरचनाओं के संबंध में कोशिकाओं के स्थानीयकरण के लिए इस्तेमाल किया जाएगा। यह एक सिंहावलोकन प्रदान करता नमूना एक बड़े आकार का है और जब एक विशिष्ट प्रकार की कोशिका की खोज में हमें एक नमूना के माध्यम से स्कैन करने की अनुमति देता है। Z ढेर तकनीक के साथ, confocal माइक्रोस्कोपी 100-200 माइक्रोन तक की नमूने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। श्वेतपटल मांसपेशियों सम्मिलन के पीछे 0.3 मिमी और पीछे ध्रुव 11 में 1 मिमी मोटाई के बीच में अलग है। दोनों इसकी मोटाई और opaqueness के कारण, श्वेतपटल confocal माइक्रोस्कोपी पारंपरिक तरीकों का उपयोग के लिए उपयुक्त नहीं है।
इस उपाय, scleral ऊतकों confocal माइक्रोस्कोपी के साथ अपने विश्लेषण के लिए अनुमति देने के लिए टुकड़े टुकड़े कर रहे थे। इस तकनीक का मानव श्वेतपटल में दोनों शारीरिक और रोग की स्थितियों की एक बेहतर समझ पाने के लिए उपयोगी है।
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Protocol
मानव ऊतकों के उपयोग की समीक्षा की और एक संस्थागत समीक्षा बोर्ड या समकक्ष द्वारा अनुमोदित किया जाना चाहिए। काम यहाँ वर्णित स्थानीय आचार समिति ने मंजूरी दे दी है और वैज्ञानिक परीक्षा के लिए अनुमोदन किया था। इस काम के हेलसिंकी की घोषणा के अनुसार प्रदर्शन किया गया था। मानव scleral नमूनों (अधिकतम पोस्टमार्टम के समय 24 घंटा) ग्लोब दाताओं की आँखों से प्राप्त किया गया नेत्र विज्ञान विभाग के नेत्र बैंक, कोलोन विश्वविद्यालय, जर्मनी में।
1. प्रायोगिक तैयारी
- 96% इथेनॉल को तैयार है और अलग अलग ट्यूबों में बफर खारा (पीबीएस) फॉस्फेट। पीबीएस 2% गोजातीय सीरम albumin (बीएसए) युक्त की सिफारिश की कमजोर पड़ने में प्राथमिक एंटीबॉडी तैयार है और बर्फ पर सभी समाधान रहते हैं। नमूना प्रति 100 μl तैयार करें।
- सभी उपकरणों को साफ और तेज नलियां का उपयोग करें। एक ही छुरी से काटने दोहराया बाद, छुरी बदल जाते हैं।
- 1-2 Colibri संदंश, सीधे सूक्ष्म विदारक कैंची, एक # 10 छुरी प्राप्तया नेत्र छुरी सूक्ष्म पंख, और चार 26 जी सुइयों।
- एक polystyrene थाली के चारों ओर एल्यूमीनियम पन्नी की चादर या ऊतक प्रत्यय करने के लिए एक काग प्लेट का उपयोग करें। एक दूरबीन स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे काम करते हैं। एक लामिना airflow के नीचे बाँझ काम अगर जरूरत है।
2. श्वेतपटल तैयार
- धीरे बल्ब पकड़ और corneoscleral ओर से एक perforating trepanation प्रदर्शन करते हैं, तो trepan घुमाएगी। सतह पर ध्यान से और समान रूप से trepan घुमाएँ एक समान रूप दौर कट प्रदर्शन करने के लिए। एक 15.5 मिमी आकार trepan का प्रयोग करें। घुमावदार कैंची के साथ शेष संलग्नक कट। corneoscleral trepanation निकालें। यह एक पूर्व खोला बल्ब का परिणाम देगा।
- ऊपर की तरफ खुले भाग के साथ एक झाड़ू पर श्वेतपटल रखो। रेटिना और uvea निकालें, Colibri संदंश का उपयोग श्वेतपटल से दोनों परतों (रेटिना और uvea) खींच करने के लिए। भीतरी श्वेतपटल पर pigmented uvea मत छोड़ो। घुमावदार कैंची का प्रयोग papilla से रेटिना और uvea हटा दें। रेम हटायेaining कंजाक्तिवा, extraocular मांसपेशियों, और सतही श्वेतपटल से चूल कैप्सूल।
- सीधे-प्रकार कैंची और Colibri संदंश का उपयोग करके आवश्यक आकार में scleral नमूना निकालें। के बारे में 2 सेमी विभिन्न स्थानों से 2 आकार scleral नमूने ले लो। छोटे आकार की वजह से, धीरे श्वेतपटल पकड़ और सीधे-प्रकार कैंची का उपयोग वर्गों के रूप में अपेक्षित आकार में कटौती। corneoscleral trepanation scleral नमूने के पूर्वकाल मार्जिन को परिभाषित करता है।
- ऐसा क्षेत्र है जहां ऊतक को पकड़ा गया था के लिए confocal माइक्रोस्कोपी का विश्लेषण करती उपयुक्त नहीं है के रूप में संदंश के साथ हथियाने दोहराया से बचें। (जैसे पूर्व बनाम पीछे चित्रा 1 की तुलना) प्रयोग प्रकार के आधार पर नमूने के लिए आवश्यक संख्या को तैयार है और इस्तेमाल किया एंटीबॉडी की राशि।
- बाद में उपयोग के लिए 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों में नमूने रखो। 15 मिनट के लिए 1.5 मिलीलीटर 96% इथेनॉल में नमूनों को ठीक करें, और फिर उन्हें 5 मिनट के लिए प्रत्येक तीन बार धोनेप्रकार के बरतन पर 1.5 मिलीलीटर पीबीएस में। जमे हुए ऊतक के साथ काम कर रहे हैं, स्नैप ठंड से पहले यह कदम प्रदर्शन करते हैं।
- ताजा ऊतक का प्रयोग करें। हालांकि, अगर यह संभव नहीं है, स्नैप तरल नाइट्रोजन में श्वेतपटल फ्रीज और इसे बाद में उपयोग के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर रहते हैं। तो जमे हुए ऊतक, उपयोग करने से पहले पिघलना के साथ काम कर रहे। दोहराया विगलन और ठंड के चक्र से बचें।
- पीबीएस में प्रत्येक नमूना 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर 1.5 मिलीलीटर 5% BSA युक्त रखें। यह कदम नमूना है कि laminating के लिए उपयोगी है की सूजन लाती है और यह भी unspecific बाध्यकारी रोकता है।
- बाद नमूने बढ़कर है, फाड़ना के लिए scleral चौकों तैयार करते हैं। एक माइक्रोस्कोप, जैसे एक दूरबीन स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे काम करते हैं। polystyrene झिल्ली एल्यूमीनियम पन्नी या काग प्लेट 26 जी सुइयों का उपयोग करने में लिपटे को पीछे scleral नमूने प्रत्यय।
- सुइयों के किनारों झुको तो वे माइक्रोस्कोप के नीचे दृश्य क्षेत्र के साथ हस्तक्षेप नहीं करते।
- पूर्ण मोटाई scleral samp टुकड़े टुकड़ेलेस।
- सबसे पहले, पूर्वकाल scleral बढ़त Colibri संदंश का उपयोग कर पकड़। तो ध्यान से सतही श्वेतपटल # 10 छुरी, नेत्र छुरी सूक्ष्म पंख, या एक रंग के ब्लेड का उपयोग की एक पतली परत में कटौती। छुरी क्षैतिज पकड़ो और अंतर्निहित परत के रूप में बारीकी से संभव के रूप में सतही परत काटा।
- scleral वर्ग से एक पतली परत scleral काटना। मानक शल्य चिकित्सा तकनीक trabeculectomy के दौरान एक फ्लैप तैयार करने के लिए और 30-80 माइक्रोन मोटी परतों (चित्रा 2 तुलना) में परिणाम चाहिए करने के लिए इस विधि तुलनीय है।
- , जैसे 50 μl पीबीएस एक पिपेट का उपयोग ऊतकों को पीबीएस की थोड़ी मात्रा जोड़कर श्वेतपटल के सूखने रोकें।
- एक निविड़ अंधकार रंग के साथ 96 अच्छी तरह से थाली में पीबीएस के 100 μl में कटौती परतों डाल दिया और दोनों ओर रुख लेबल (प्रति extern और प्रशिक्षु) और परत (सतही और गहरा) जैसे।
- दोहराएँ कदम 2.7-2.9 जब तक ऊतक पूरी तरह से टुकड़े टुकड़े में है। </ Li>
3. immunohistochemistry प्रदर्शन
- की सिफारिश की कमजोर पड़ने में आवश्यक प्राथमिक एंटीबॉडी के 100 μl जोड़ें। यहाँ, उदाहरण के लिए उपयोग सीडी 31 (मोनोक्लोनल माउस विरोधी मानव) और LYVE1 एंटीबॉडी (खरगोश विरोधी मानव), दोनों 1 के एक कमजोर पड़ने में: पीबीएस में 100 (2% बीएसए युक्त) और रात में 4 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। 96 अच्छी तरह से थाली में मध्यम बदलने के लिए, अच्छी तरह से दीवार के लिए पिपेट पकड़ और तरल पदार्थ को हटा दें।
- अगले दिन, नमूने प्रत्येक तीन बार 5 मिनट के लिए 200-300 μl पीबीएस के साथ एक प्रकार के बरतन पर धो लें। इसी माध्यमिक एंटीबॉडी के 100 μl जोड़ें; यहां बकरी विरोधी माउस fluorescein आइसोथियोसाइनेट (FITC) और बकरी विरोधी खरगोश जाती रंगों 3 (Cy3) का उपयोग करें, और 1-2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर नमूने सेते हैं। पीबीएस 2% बकरी सीरम युक्त 300: पतला माध्यमिक एंटीबॉडी 1।
- नमूने फिर से एक प्रकार के बरतन पर 200-300 μl पीबीएस में 5 मिनट के लिए प्रत्येक तीन बार कुल्ला।
- नाभिक धुंधला प्रदर्शन करना है, जैसे
- नमूने बाद में उपयोग के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर फ्लोरोसेंट बढ़ते मध्यम 1-2 बूंदों में खुर्दबीन स्लाइड पर स्थानांतरण, एम्बेड कर उन्हें एक coverslip जोड़ने के लिए, पारदर्शी वार्निश के साथ किनारों को कवर द्वारा इसे सील, और दुकान या सीधे confocal साथ स्लाइड की जांच माइक्रोस्कोप।
- नमूनों का विश्लेषण करने के लिए एक confocal खुर्दबीन (या समतुल्य) का प्रयोग करें। वांछित बढ़ाई, जैसे 10-40X बढ़ाई प्रयोग करें।
- नमूनों की मोटाई को सत्यापित करने के लिए, confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग जेड के ढेर के साथ मापने। संभव scleral वर्गों की राशि श्वेतपटल के स्थान पर निर्भर करता है, के रूप में मोटाई equatorially और पीछे (परिचय तुलना) अलग है।
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Representative Results
यहां प्रदर्शन प्रतिनिधि प्रयोगों में, वहाँ इस विशेष laminating तकनीक के उपयोग से प्राप्त प्रत्यक्ष लाभ कर रहे हैं। पहला प्रयोग तीन प्रतिनिधि चित्र (चित्रा 3) में अधिश्वेतपटल सम्बन्धी रक्त वाहिका जाल के विविध नेटवर्क को दिखाता है। वाहिकाओं CD31 के लिए सकारात्मक रहे हैं।
दूसरे प्रयोग विशेष LYVE1 + episclera और CD31 सकारात्मक रक्त वाहिकाओं के लिए उनके रिश्ते की कोशिकाओं में, प्रतिरक्षा कोशिकाओं से पता चलता। यहाँ Z ढेर प्रौद्योगिकी 10X बढ़ाई पर इस्तेमाल किया गया था ऊतकों के माध्यम से स्कैन और रक्त वाहिकाओं और प्रतिरक्षा कोशिकाओं (चित्रा 4) के तीन आयामी संबंधों को समझते हैं।
श्वेतपटल, साथ ही संलग्न extraocular मांसपेशियों, रक्त वाहिकाओं या प्रतिरक्षा कोशिकाओं की उपस्थिति के लिए विश्लेषण किया जा सकता है। 5 शो चित्राLYVE1 सकारात्मक कोशिकाओं और CD31 सकारात्मक रक्त वाहिकाओं।
चित्रा 1:।। मानव नेत्र के योजनाबद्ध तस्वीर यहाँ मानव आँख के पार अनुभाग का एक योजनाबद्ध है यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2:। Laminating तकनीक के योजनाबद्ध चित्र श्वेतपटल ध्यान Colibri संदंश के साथ आयोजित की और एक छुरी का उपयोग कर ठीक परतों में टुकड़े टुकड़े में है। इस कदम दोहरा पतली ऊतक स्लाइड्स कि confocal माइक्रोस्कोपी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है की ओर जाता है। इस फाई का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करेंgure।
चित्रा 3:। अधिश्वेतपटल सम्बन्धी रक्त वाहिका जाल, CD31 ए और बी के लिए immunopositive, पूर्वकाल episclera से निकाली गई है, जबकि सी पीछे स्थान से है। स्केल बार 100 माइक्रोन इंगित करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4:। CD31 + रक्त वाहिकाओं और एक z ढेर में LYVE1 + कोशिकाओं, उन दोनों के बीच शारीरिक संबंध को दर्शानेवाला छोटे जहाजों और बड़े लोगों ओवरलैप हो सकता है। स्केल बार 100 माइक्रोन इंगित करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 5: श्वेतपटल में संलग्न extraocular मांसपेशियों रहे हैं वे एक समान ठीक रक्त वाहिका नेटवर्क और कुछ LYVE1 + कोशिकाओं होते हैं।। स्केल बार 200 माइक्रोन इंगित करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
मानव श्वेतपटल Laminating इस ऊतक पर confocal माइक्रोस्कोपी के प्रदर्शन के लिए एक विधि है। इस प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण कदम इथेनॉल के बजाय ऊतक affixing के लिए formalin इस्तेमाल होता है। हमारे अनुभव में, बेहतर परिणाम जब निर्धारण के लिए की बजाय इथेनॉल formalin का उपयोग कर प्राप्त कर रहे हैं। ब्लंट नलियां प्रक्रिया बढ़ और बचा जाना चाहिए। इसी तरह, श्वेतपटल के सूख बचा जाना चाहिए, क्योंकि यह प्रक्रिया पेचीदा और छवियों की गुणवत्ता को कम कर देता।
immunohistochemical धुंधला के बारे में, यहाँ लागू लोगों की तुलना में अन्य एंटीबॉडी का इस्तेमाल किया जा सकता है। सामान्य तौर पर, कोलेजन अधिक ऑटो प्रतिदीप्ति और ग्रीन चैनल में पृष्ठभूमि, इसलिए लाल, नीले, और दूर लाल चैनलों कम पृष्ठभूमि के साथ बेहतर परिणाम दिखाने से पता चलता है।
हालांकि, वहाँ तकनीक के कई सीमाएं हैं। के रूप में यह एक microsc के तहत प्रदर्शन एक microsurgical प्रक्रिया है श्वेतपटल laminating, अभ्यास का एक बहुत आवश्यकता हैope। क्योंकि इस तकनीक को मैन्युअल रूप से प्रदर्शन कर रहा है, एकल टुकड़े टुकड़े में स्लाइस वास्तव में एक ही आकार नहीं कर रहे हैं और ऊतक का एक टुकड़ा के भीतर उनकी मोटाई में मतभेद है। वास्तव में एक ही आकार के ऊतकों के लिए, trepanation एक विकल्प हो सकता है, हालांकि परतों की मोटाई अभी भी अलग-अलग होगा। scleral वर्गों के लिए एक बिल्कुल परिभाषित मोटाई को प्राप्त करने के लिए, एक स्वचालित microkeratome भविष्य प्रयोगों के लिए एक विकल्प हो सकता है। अगर फाड़ना परतों वह भी मोटी हैं साथ किया जाता है, कवर स्लाइड भंग हो सकती है, और ऊतक संभावित सूखे से बाहर कर सकते हैं। episclera और स्ट्रोमा के बीच सटीक सीमाओं एक बार laminations प्रदर्शन कर रहे अंतर करना मुश्किल हो सकता है।
इस के बावजूद, श्वेतपटल laminating खासकर जब formalin तय आयल एम्बेडेड immunohistochemistry, जो वर्तमान नैदानिक स्थिति में मानक तरीका है की तुलना में immunohistochemistry के उपयोग में कई फायदे हैं। श्वेतपटल Laminating confocal microsc की अनुमति देता हैप्रतिलिपि बनाएं प्रदर्शन करने के लिए किया जा सकता, श्वेतपटल के बड़े आकार के क्षेत्रों का विश्लेषण किया जाए, श्वेतपटल की विभिन्न परतों की जांच की जाए, साथ ही स्क्रीनिंग और ऊतकों की स्कैनिंग। इसके विपरीत, जब formalin तय आयल एम्बेडेड नमूनों के साथ काम कर रहे हैं, श्वेतपटल एक बेकार तरह से अपनी स्थिरता प्रतिजन पुनः प्राप्ति के लिए preheating के दौरान बदलता है। गर्म करने की प्रक्रिया के दौरान, कोलेजन फाइबर सूखना और ऊतक स्लाइड के साथ संपर्क खो देता है। इससे पहले, episclera में पोत जाल केवल angiographic तकनीक का उपयोग करके या पूरे माउंट दृश्य में दिखाई दे रहा है, लेकिन पार वर्गों में नहीं है।
तकनीकी कठिनाइयों के अलावा, श्वेतपटल अपेक्षाकृत avascular और अपेक्षाकृत ऐसी रेटिना के रूप में आंख में अन्य ऊतकों की तुलना में प्रतिरक्षा कोशिकाओं में गरीब है। इसलिए, जब formalin तय आयल एम्बेडेड स्लाइड, जो आम तौर पर 4 माइक्रोन मोटी, एकाधिक स्लाइड इस्तेमाल कर रहे हैं श्वेतपटल में सकारात्मक कोशिकाओं का पता लगाने की जरूरत है। हाल ही में, यह इस laminat का उपयोग करते हुए दिखाया गया थातकनीक है कि मानव श्वेतपटल अकोशिकीय नहीं है, लेकिन रक्त वाहिकाओं 1 चारों ओर जमा करने के लिए LYVE1 + मैक्रोफेज के बहुत सारे शामिल हैैं।
संक्षेप में, टुकड़े टुकड़े में scleral वर्गों पर confocal माइक्रोस्कोपी प्रदर्शन ऐसे श्वेतपटलशोध, यूवाइटिस, या मानसिक आघात के रूप में भविष्य में रोग विकारों, जांच के लिए एक होनहार उपकरण है।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 96% ethanol | Merck Chemicals, Darmstadt, Germany | P075.4 | |
| binocular stereo microscope | Motic, Hongkong, China | n.a | |
| 26 G needles | Terumo, Leuven, Belgium | 303800 | |
| 15.5 mm trepan | Geuder, Heidelberg, Germany | n.a | |
| no.10 scalpel | Feather, pfm medical, Osaka, Japan | 2E+08 | |
| ophthalmic scalpel micro feather | Feather, pfm medical, Osaka, Japan | no. 7657BR | |
| CD 31 antibody (monoclonal mouse anti human) | Dako, USA | IR610 | |
| LYVE1 antibody (polyclonal rabbit anti human) | Zytomed, Germany | RBK014-05 | |
| goat anti mouse FITC antibody | Sigma Aldrich, Steinheim, Germany | F0257 | |
| goat anti rabbit Cy3 antibody | Dianova, Germany | 111-165-003 | |
| Goat Serum normal | Dako, Glostrup, Denmark | X090710-8 | |
| DAPI | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany | 6335.1 | |
| microscope slides | Engelbrecht, Edermünde, Germany | WC7695002 | |
| Coverslips 24 mm x 24 mm | Th. Gayer, Lohmar, Germany | 7695026 | |
| DAKO fluorescent mounting medium | DAKO, USA | S3023 | |
| LSM Meta 510 confocal microscopy | Carl Zeiss AG, Jena, Germany | n.a |
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