对急性和亚急性鼠下肢缺血的方法
Summary
Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion.
Abstract
外周动脉疾病（PAD）是心血管发病率和在发达国家死亡率，和动物模型可靠地再现人类疾病是需要开发新的治疗这种疾病的一个主要原因。小鼠后肢缺血模型已广泛用于这一目的，但通过股动脉结扎诱导急性肢体缺血的标准做法可能会导致大量的组织坏死，损害研究者的研究血管和骨骼肌组织反应缺血能力。另一种方法，以股动脉结扎是渐进的股动脉闭塞，通过使用AMEROID蟒蛇的诱导。当在如股动脉结扎的位点相同或不同的位置周围放置股动脉，这些装置阻塞动脉用1 – 3天，导致更渐进的，亚急性缺血。这导致更少实质性骨骼肌组织坏死，WHICH可能更接近地模拟人类的PAD看到的响应。由于遗传背景的影响在这两个急性和亚急性缺血模型成果，考虑到小鼠品系正在研究是选择最好的模型非常重要的。本文介绍了适当的程序和鼠标股动脉结扎或AMEROID蟒蛇解剖位置，以引起亚急性或急性下肢缺血的鼠标。
Introduction
外周动脉疾病（PAD）是心血管发病率和死亡率在发达国家1的主要原因。 PAD结果从外周动脉，导致肢体缺血与产生劳累或休息痛，偶尔不愈合使得需要截肢溃疡和坏疽的动脉粥样硬化阻塞。针对PAD疗法涉及主要针对血管内2或血管重建手术3，本质上是没有有效的药物治疗存在4。
不幸的是，血管重建术往往有限的好处是，由于旁路移植具有高失败率（可达50％5年内）5，其在某些人群（ 如吸烟者，妇女，非隐静脉移植）6,7-更糟。血管内的方法，如血管成形术和支架置入术，也被高再狭窄率受到影响（超过50％，1年内），我格外ñ股腘疾病8，虽然使用药物洗脱球囊和支架有所提高9-11的结果。为了开发新的治疗的PAD它是开发的动物模型能可靠地再现人类疾病至关重要。
迄今为止，PAD的最常见的模式是后肢缺血模型（HLI），其在小鼠中12,13最常进行的。在其最常见的表现，该模型引起该近端和远端股骨动脉的手术结扎并随后在容器的切除其居间侧分支，从而导致血流和急性肢体缺血诱导的闭塞。 HLI已主要用来研究在周肢体肌肉组织中的血管生成和动脉生成反应和各种疗法（ 例如 ，药物，基因递送，干细胞）对这些反应的影响。最近，我们的团队已经用这个模型来研究骨骼肌细胞的作用，我n个回应肢体缺血和对结果的14遗传差异的影响。
该HLI模型促进了我们目前的理解是，血管和肌肉响应缺血取决于遗传学（ 即 ，近交系）15，16岁，及其它疾病或相关的动脉粥样硬化的条件，包括糖尿病17和存在或不存在高胆固醇血症18。然而，传统的挡拆模型的一个重要的弱点是，它是急性肢体缺血12,13的典范，而人PAD引起慢性缺血作为外周动脉闭塞性动脉粥样硬化的逐步发展的结果。
在试图绕过这个弱点，唐和他的同事最初开发利用AMEROID蟒蛇逐渐19股动脉闭塞的大鼠模型，同组随后ðeveloped类似的小鼠模型20。 AMEROID蟒蛇是在慢性心肌缺血21,22的犬最初描述20世纪50年代。这些设备有一个外金属套包围吸湿材料的内层，通常是酪蛋白，并且当周围放置一个动脉它们诱导逐渐血管闭塞，因为它们吸收来自周围组织的水分。在他们的模型中的修饰，Yang等放置在近端和在类似于手术结扎网站的网站远侧股动脉都蟒蛇，和它们连接的股动脉的侧分支，如在传统模式。相比急性HLI，AMEROID缩诱导缺血导致炎症和剪切应力依赖性的基因的低表达，降低血流量恢复4 -第5周后，可操作地，少肌坏死20。根据这些意见，有人认为，渐进的动脉闭塞可能提供P的模型广告更贴近人类疾病。
值得注意的是，在原有的报告中，只在C57BL / 6小鼠19，这是对缺血诱导的肌肉坏死15相对耐审查AMEROID缩引起缺血的效果。我们最近修改的逐渐缺血模型进一步探索和其在缺血更为敏感的BALB / c小鼠品系23的效果。在该模型的第一表现，我们放置在近端和股骨远端动脉既蟒蛇但留下的所有侧分支完好。在第二，较温和的变形例中，我们只放在近端股动脉单缩并再次左动脉的所有侧设有分公司完好无损。在该模型中的两个变型，我们发现，BALB / c小鼠，但不C57BL / 6小鼠，尽管具有相似的血流和血管密度显示显著肌肉坏死。类似我们以前的研究14，这些研究结果表明，肢体肌肉伤不仅仅由血流的影响，但是部分取决于遗传背景。此外，我们发现，肢体血流3天之内下降到最低点，因此该模型似乎更'亚急性'，而不是渐进的肢体缺血之一。
根据这些以前的研究，似乎明显，用于诱导后肢缺血一个单一的方法可能不适合于所有情况。因为各种条件（ 例如 ，遗传差异和存在或不存在的共同病态条件）影响既血管和骨骼肌肉特异性反应，调查可能发现需要修改慢性和/或后肢缺血的最好的严重性适合自己的目的。此外，该模型的现有描述通常缺乏合适的解剖学界标，以促进技术的可靠-研究者间重现性。在本文中，在小鼠诱导的急性或亚急性下肢缺血的方法被描述，并提供精确的解剖标志。
Protocol
Representative Results
Discussion
或许在此过程中的最具挑战性的步骤是从股静脉股动脉的分离。的较大直径和相比，这些动脉的股静脉的壁更薄提高其敏感性穿刺和手术操作过程中撕裂。可以通过使用用PBS浸湿的无菌拭子保持伤口湿润减少破坏静脉的可能性。同样重要的是，以确保所有的钳子削尖，对齐，并且为了使血管和周围组织的精确操纵自由断裂。在该出血确实发生的情况下，直到出血停止施加压力的区域用无菌纱布。?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This study was supported by NIH grants R21HL118661, R56HL124444, and R01HL124444 to CDK, and by NIH grants R00HL103797 and R01HL125695 to JMM.
Materials
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | Dumoxel |
| Dumont Style 5 Mini Forceps | Fine Science Tools | 11200-14 | Inox |
| Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | |
| 7-0 Silk Suture | Sharpoint | DA-2527N | |
| 5-0 Coated Vicryl Suture | Ethicon | J463G | |
| Graefe Forceps | Fine Science Tools | 11053-10 | |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Artifical Tears Ointment | Rugby Laboratories | 0536-6550-91 | |
| Surgical Tape | 3M | 1530-0 | |
| Fine Cotton Swabs | Contec | SC-4 | |
| Temperature Controller | Physitemp | TCAT-2DF | |
| Ameroid Constrictors | Research Instruments SW | MMC-0.25 x 1.00-SS | |
| Hot Bead Sterilizer | |||
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | 10010-023 | |
| Moor LDPI | Moor Instruments | moorLDI2 | |
| moorLDI Measurement software | Moor Instruments | v. 6.0 | |
| Hair Removal Cream | Nair |
References
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