Summary
تم استخدام الثقافة الابتدائية الخلايا البطانية القرنية البقري للتحقيق في آلية القرنية الانتقالية البطانية الوسيطة. وعلاوة على ذلك، تم استخدام الفئران بطانة القرنية نموذج cryoinjury لإثبات القرنية الانتقالية البطانية الوسيطة في الجسم الحي.
Protocol
وجاءت جميع الإجراءات في هذه الدراسة يتفق مع جمعية البحوث في الرؤية والعيون بيان لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث الرؤية وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من مستشفى جامعة تايوان الوطنية.
1. عزل، إعداد الثقافة الابتدائية، والمناعية من الأبقار CECS
- الحصول على عيون البقر الطازجة من المسالخ المحلية.
- تطهير العيون في 10٪ ث / ت حل بوفيدون اليود لمدة 3 دقائق. غسلها بمحلول ملحي (PBS) حل الفوسفات.
- حصاد زر القرنية مع مشرط ومقص تحت ظروف معقمة. غشاء قشر ديسميه مع ملقط تشريح تحت المجهر (لاحظ أن في هذه الدراسة، تم منزوعة النواة عيون الأبقار التي المسالخ المحلية، وبالتالي، كان إجراء الدراسة الأولى لتعقيم عيون preenucleated في المختبر).
- احتضان غشاء ديسميه في 1 مل من المحاولةpsin عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. جمع CECS البقري عن طريق الطرد المركزي في 112 x ج لمدة 5 دقائق. Resuspend الخلايا في 1 مل من استكمال المتوسطة طلائي الهرموني (شيم) التي تحتوي على كميات متساوية من HEPES مخزنة Dulbecco لتعديل النسر المتوسطة والمتوسطة F12 هام، وتستكمل مع 5٪ مصل بقري جنيني، و 0.5٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد، 2 نانوغرام / مل من البشرة الإنسان عامل النمو، 5 ملغ / مل من الانسولين، 5 ملغ / مل من ترانسفيرين، 5 نانوغرام / مل من السيلينيوم، 1 نانومول / لتر من بكتيريا الكوليرا، 50 ملغ / مل الجنتاميسين، و 1.25 ملغ / مل من أمفوتيريسين B.
- البذور الخلايا (حوالي 1 × 10 5 خلايا لكل عين) في طبق 6 سم. ثقافة لهم في SHEM. احتضان الطبق عند 37 درجة مئوية في جو من 5٪ CO 2 في الهواء. تغيير ثقافة المتوسط كل 3 أيام.
- وعندما تصل خلايا التقاء، غسلها في برنامج تلفزيوني واحتضان لهم في 1 مل من التربسين عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. جمعها بواسطة الطرد المركزي في 112 x ج لمدة 5 دقائق. إعادة تعليق بيليه خلية في 1 مل من SHEM.
نموذج 2. الجرذ القرنية البطانة Endothelium Cryoinjury وIntracameral حقن
- تخدير الفئران الذكور سبراغ داولي القديمة الأسبوع ال 12 مع الحقن في العضل من 2٪ زيلازين (5.6 ملغ / كلغ) وتلييتامين بالإضافة إلى zolazepam (18 ملغ / كلغ). قرصة بلطف على جلد الحيوانات لتأكيد التخدير المناسبة في غياب الوخز الجلد.
- غرس قطرة واحدة من 0.5٪ بروباراكايين هيدروكلوريد للعين اليمنى من كل الفئران للحد من ألم في العين والتصرفات طرفة. غرسالتتراسيكلين مرهم للعين اليسرى لمنع جفاف القرنية.
- تبريد التحقيق الفولاذ المقاوم للصدأ (القطر = 3 ملم) في النيتروجين السائل. تطبيق مسبار الفولاذ المقاوم للصدأ إلى القرنية المركزية في العين اليمنى لمدة 30 ثانية. كثيرا ما غرس في برنامج تلفزيوني للعين اليمنى خلال الإجراء لمنع جفاف القرنية.
- غرس 0.1٪ الأتروبين و 0.3٪ كبريتات الجنتاميسين على الفور بعد cryoinjury ومرة واحدة يوميا لتخفيف الألم العين الناتجة عن تشنج الهدبية، ومنع العدوى.
- بعد العملية، والحفاظ على الفئران الحارة باستخدام مصباح الحرارة، ومراقبة شفائهم كل 15 دقيقة بعد التخدير حتى يستعيد التحكم في المحركات. بالإضافة إلى ذلك، تطبيق التتراسيكلين مرهم للعين اليمنى لمنع جفاف القرنية خلال فترة النقاهة.
- كرر cryoinjury القرنية لمدة 3 أيام متتالية.
- لتقديم marimastat أو bFGF في الغرفة الأمامية للعين الفئران، تخدير الفئران كما هو موضح سابقا. غرس قطرة واحدة0.5٪ بروباراكايين هيدروكلوريد في العين اليمنى للتقليل من ألم في العين والتصرفات طرفة.
- لري سطح العين مع برنامج تلفزيوني العقيمة. أداء الأمامي بزل غرفة تحت المجهر التشغيل عن طريق إدخال إبرة 30 G تعلق على حقنة 1 مل في القرنية واضحة paralimbal في طائرة أعلاه وبالتوازي مع القزحية.
- تحويل إبرة شطبة يصل، وخفض قليلا الجرح القرنية لاستنزاف بعض الخلط المائي وتقليل الضغط داخل العين. حقن 0.02 مل من المخدرات intracamerally. ضغط بلطف الجهاز إبرة مع طرف القطن خلال سحب الإبرة.
- تصوير العين الخارجية في مرحلة الزمنية المشار إليها تحت المجهر التشغيل.
3. حصاد الجرذ زر القرنية والمناعية
- إلى الموت ببطء الفئران، ووضعها في غرفة القتل الرحيم ويبث 100٪ CO 2 بمعدل ملء من 10-30٪ من حجم الغرفة في الدقيقة الواحدة. الحفاظ CO 2 ضخ لدقيقة إضافية بعد عدم وجود التنفس وتلاشى لون العين.
- اختراق العين الفئران في حوف بشفرة حادة. قطع القرنية مع مقص القرنية على طول حوف. تسطيح القرنية على شريحة. جعل شقوق شعاعي إضافية إذا القرنيات عقص.
- إصلاح القرنيات مع 250 ميكرولتر من 4٪ لامتصاص العرق، ودرجة الحموضة 7.4، لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. Permeabilize مع 250 ميكرولتر من 0.5٪ تريتون X-100 لمدة 5 دقائق، ومنع مع 10٪ البقري ألبومين المصل لمدة 30 دقيقة.
- احتضان القرنيات مع الأجسام المضادة الأولية ضد ABC بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية مع التخفيف من 1: 200 في مخفف الأجسام المضادة. غسل القرنيات مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة، واحتضان لهم مع الأجسام المضادة الثانوية (1: 100 في مخفف الضد) في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. مباين نواة الخلية التي تغطي الخلايا مع 2 ميكروغرام / مل من 4، 6 diamidino-2-phenylindole، وغسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة.
- جبل القرنيات في مكافحة يتلاشى حل المتصاعدة. أوبتين الصور مناعي في موجات الإثارة من 405 و 561 نانومتر مع المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهر في 20X التكبير موضوعي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بعد عزل CECS الأبقار، كانت الخلايا المستزرعة في المختبر الشكل 1 يعرض الصور الطوري من CECS البقري. وأشار شكل سداسي الخلايا في التقاء أن الخلايا لم تكن ملوثة الليفية انسجة القرنية خلال العزلة خلية الشكل 2 يصور المناعية التي تم تنفيذها باستخدام أجسام مضادة ضد اي بي سي، الحلزون، وعريانة في مرحلة الزمنية المشار إليها. وبصرف النظر عن التغيرات المظهرية في الثقافة في المختبر، لوحظ وجود النبات النووي المقابلة من ABC وEMT المنظمين. ويوضح الشكل (3) تأثير marimastat، واسع الطيف MMP المانع، على عملية EnMT للفي المختبر CECS البقري مثقف. الشكل 4 يضم صورا العين الخارجية من الفئران بعد cryoinjury تليها حقن intracameral الشكل 5 يبين المناعية للص في زر القرنية التي تم تنفيذها باستخدام أجسام مضادة ضد اي بي سي بعد cryoinjury تليها حقن intracameral. لوحظ أن النبات النووي ABC في مجموعة برنامج تلفزيوني وزيادة كبيرة في المجموعة bFGF، مشيرا إلى تفعيل إشارات Wnt / β-كاتينين وعملية EnMT. بعد حقن intracameral من bFGF جاء عن طريق الحقن marimastat، وقد تضاءل تلطيخ النووي من اي بي سي، تشير إلى أن الأثر EnMT المثبط للmarimastat.
الشكل 1: المرحلة على النقيض من الصور في المختبر CECS البقري مثقف بعد أن المصنف على لوحة والثقافة، وCECS البقري ظهرت في البداية مثل الخلايا الليفية على أيام 3 و 6. أنها أصبحت أكثر سداسية على الوصول إلى نقطة التقاء كامل في يوم 9. مقياس بار = 50 ميكرون. صور تمثيلية من 3 مكررات.4329fig1large.jpg "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: المناعية في المختبر CECS البقري مثقف خلال الثقافة في المختبر من CECS البقري، والنبات النووي من اي بي سي، الحلزون، وسبيكة تم الكشف خلال يوم 14. ABC: نشط β-كاتينين. شريط مقياس = 100 ميكرون. صور تمثيلية من 3 مكررات. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 3: المناعية في المختبر CECS البقري مثقف مع أو بدون marimastat على مختلف المستويات الخلايا المناعية التقاء الشياطينtrated أن بي سي، كان الحلزون، وسبيكة واضحا في نواة CECS البقري مع أو بدون 10 ميكرومتر من marimastat في اليوم 3. ومع ذلك، marimastat إلى خفض كبير في تلطيخ النووي من اي بي سي، الحلزون، وعريانة في يوم 9 عندما CECS البقري أصبح متموجة بشكل كامل. شريط مقياس = 100 ميكرون. صور تمثيلية من 3 مكررات. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4: الصور العين الخارجية من الفئران عند نقاط الزمنية المشار إليها بعد cryoinjury بعد cryoinjury لمدة 3 أيام متتالية، تعرض الفئران لحقن intracameral من 0.02 مل من برنامج تلفزيوني أو 50 نانوغرام / مل bFGF في اليوم 3. في يوم 6، 0.02 مل من تم حقن 10 ميكرومتر marimastat intracamerally في المجموعة bFGF / ماري، في حين تم حقن برنامج تلفزيوني في 2 جروب الآخرينملاحظة (ن = 9 في كل مجموعة). صور العين الخارجية كشفت خفض وذمة القرنية بعد حقن bFGF، في حين marimastat مزيد من خفض وذمة القرنية مقارنة مع bFGF وحده. ن = 9 في كل مجموعة. شريط مقياس = 1 مم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5: المناعية من أزرار الفئران القرنية المناعية من الأزرار القرنية الفئران التي تم حصادها في يوم 9 كشفت تلطيخ النووي القليل من ABC في مجموعة برنامج تلفزيوني. في المجموعة bFGF، كان هناك تلطيخ النووي واسعة من اي بي سي، الذي انخفض بشكل كبير في المجموعة bFGF / ماري. شريط مقياس = 100 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من ثيالصورة الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ومن المعروف CECS لميلها للخضوع EnMT خلال تكاثر الخلايا. لوضع استراتيجيات لقمع عملية EnMT لأغراض علاجية، فهم دقيق لآلية EnMT ضروري. وصفنا 2 نماذج للتحقيق EnMT، وهي لجنة الانتخابات المركزية البقري في نموذج الثقافة المختبر والفئران بطانة القرنية نموذج cryoinjury. أظهرت نتائجنا عملية EnMT في كلا النموذجين. وعلاوة على ذلك، تمت إعادة إظهار تأثير قمع EnMT من marimastat في كلا النموذجين، مما يشير إلى أن هذه النماذج 2 تشترك في نفس آلية.
لجنة الانتخابات المركزية البقري في نموذج ثقافة المختبر يوفر سهولة التلاعب. وبالإضافة إلى ذلك، بالمقارنة مع لجنة الانتخابات المركزية الإنسان أو الرئيسيات في نماذج الثقافة المختبر المستخدمة في الدراسات السابقة 17،18، عيون البقر أكبر وأسهل للحصول على، وبالتالي الحصول على مزيد من CECS المتاحة. في دراستنا، حصلنا على عيون البقر منزوعة النواة من المسالخ المحلية. بسبب FRES ح طبيعة عيون البقر، العدد الدقيق للCECS البقري تحصد يخضع للتغيير، ففي حوالي 1 × 10 5 خلايا لكل عين. على النقيض من ذلك، فإن عدد CECS الإنسان في القرنية العادية حوالي 3 × 10 5 في العين. هذا الرقم هو أقل في القرنيات دراسة الصف وأقل من ذلك في الحافات القرنية المتبقية بعد الزرع. والتلاعب أثناء عملية الحصاد إلى تقليل عدد الخلايا التي تم الحصول عليها. وعلاوة على ذلك، يمكن CECS البقري تتكاثر والخضوع EnMT من تلقاء أنفسهم. ولذلك، فإن لجنة الانتخابات المركزية البقري في نموذج الثقافة المختبر هي مفيدة في التحقيق في آلية EnMT وفحص المواد الكيميائية EnMT-قمع، مثل marimastat. على الرغم من أنه لا يزال هناك قلق بشأن الخلافات المتعلقة الأنواع، مثل القدرة التكاثري من CECS، أظهرت نتائجنا أن يشير المسار EnMT من الأبقار CECS مماثلة لتلك التي من CECS الإنسان، بما في ذلك تفعيل WNT / β-كاتينين 18،19.
خيمة "> وخلال عزل البقري CECS، تقشير الغشاء ديسميه أمر بالغ الأهمية. وفي بعض عيون البقر، غشاء ديسميه قد يكون الالتصاق الوثيق مع سدى القرنية، مما يؤدي إلى الأنسجة اللحمية الزائدة على الغشاء ديسميه مقشر. المزيد trypsinization قد يؤدي إلى الافراج عن keratocytes انسجة أن تتحول إلى الخلايا الليفية القرنية، التي تؤثر على نقاء الخلية وبالتالي فإن النتائج التجريبية. وفي دراستنا، ونحن مقشر غشاء ديسميه بعناية تحت المجهر. لمزيد من ضمان نقاء خلية، ونحن أول مثقف الخلايا التي تحصد في 6 كانت سم طبق حتى التقاء خلية. فقط عندما كانت خلايا سداسية الشكل كانوا في مزيد من التجارب.لمزيد من إثبات النتائج التي توصلت إليها لجنة الانتخابات المركزية البقري في نموذج الثقافة المختبر، استخدمنا الفئران بطانة القرنية نموذج cryoinjury المعتمدة في الدراسات السابقة 20،21. بعد cryoinjury، خضعت CECS الفئران EnMT خلال تجديد، manifeSTED من قبل النبات النووي النشط β-كاتينين، مشيرا إلى أن تفعيل WNT / β-كاتينين الإشارات والمحافظة عليها بين الأنواع خلال تجديد لجنة الانتخابات المركزية. وبالإضافة إلى ذلك، وهذا النموذج هو مفيد في التحقيق في وظيفة CECS بسبب انخفاض وظيفة لجنة الانتخابات المركزية يؤدي إلى وذمة القرنية واضحة. جنبا إلى جنب مع غيرها من المعدات، مثل biomicroscope الموجات فوق الصوتية، الجزء الأمامي التماسك البصري المقطعي، والفحص المجهري متحد البؤر، سمك القرنية يمكن تقييمها كميا وبالتالي تعكس وظيفة لجنة الانتخابات المركزية.
لتحفيز تجديد CECS وقمع EnMT بعد التئام الجروح، ونحن تدار الحقن intracameral من bFGF تليها حقن marimastat. تخفيض العلاج إلى حد كبير مدى ذمة القرنية. وقد استخدمت دراسات سابقة التطبيق الموضعي للعوامل المحفزة للنمو لجنة الانتخابات المركزية، مثل مثبط ROCK، وكلاء EnMT-قمع، مثل 21،22 الشق المانع. ومع ذلك، فإن انتشار المخدرات إلى لجنة الانتخابات المركزية يكمنإيه محدودة بسبب ظهارة القرنية وسدى، والتي قد تؤثر على فعالية العلاج 23. وعلى النقيض من التطبيق الموضعي، حقن intracameral يتيح الوصول المباشر إلى بطانة القرنية عن طريق إدخال الأدوية مباشرة إلى الغرفة الأمامية. ولذلك، فإن تأثير وEnMT-قمع تحفيز النمو من المواد الكيميائية يمكن تقييم unbiasedly التالية cryoinjury. في دراستنا، أجرينا الأمامي بزل غرفة على خفض ضغط العين قبل الحقن intracameral. دون بزل، زيادة مفاجئة في ضغط العين يسبب وذمة القرنية أو حتى هبوط القزحية من خلال المسالك الإبرة. ضغط بلطف الجهاز خلال الوسائل سحب إبرة في ختم الجرح والوقاية من العدوى داخل العين.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| trypsin | ThermoFisher Scientific | 12604-013 | |
| Dulbecco’s modified Eagle medium and Ham's F12 medium | ThermoFisher Scientific | 11330 | |
| fetal bovine serum | ThermoFisher Scientific | 26140-079 | |
| dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| human epidermal growth factor | ThermoFisher Scientific | PHG0311 | |
| insulin, transferrin, selenium | ThermoFisher Scientific | 41400-045 | |
| cholera toxin | Sigma | C8052-1MG | |
| gentamicin | ThermoFisher Scientific | 15750-060 | |
| amphotericin B | ThermoFisher Scientific | 15290-026 | |
| paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 111219 | |
| Triton X-100 | Sigma | T8787 | |
| bovine serum albumin | Sigma | A7906 | |
| marimastat | Sigma | M2699-25MG | |
| anti-active beta-catenin antibody | Millpore | 05-665 | |
| anti-snail antibody | Santa cruz | sc28199 | |
| anti-slug antibody | Santa cruz | sc15391 | |
| goat anti-mouse IgG (H+L) secondary antibody | ThermoFisher Scientific | A-11001 | for staining of ABC of bovine CECs |
| goat anti-mouse IgG (H+L) secondary antibody | ThermoFisher Scientific | A-11003 | for staining of ABC of rat corneal endothelium |
| goat anti-rabbit IgG (H+L) secondary antibody | ThermoFisher Scientific | A-11008 | for staining of snail and slug of bovine CECs |
| antibody diluent | Genemed Biotechnologies | 10-0001 | |
| 4',6-diamidino-2-phenylindole | ThermoFisher Scientific | D1306 | |
| mounting medium | Vector Laboratories | H-1000 | |
| laser scanning confocal microscope | ZEISS | LSM510 | |
| xylazine | Bayer | N/A | |
| tiletamine plus zolazepam | Virbac | N/A | veterinary drug |
| proparacaine hydrochloride ophthalmic solution | Alcon | N/A | veterinary drug |
| 0.1% atropine | Wu-Fu Laboratories Co., Ltd | N/A | clinical drug |
| 0.3% gentamicin sulfate | Sinphar Group | N/A | clinical drug |
| basic fibroblast growth factor | ThermoFisher Scientific | PHG0024 | clinical drug |
References
- Maurice, D. M. The location of the fluid pump in the cornea. J Physiol. 221 (1), 43-54 (1972).
- Joyce, N.
- Morishige, N., Sonoda, K. H. Bullous keratopathy as a progressive disease: evidence from clinical and laboratory imaging studies. Cornea. 32, Suppl 1 77-83 (2013).
- Bates, A. K., Cheng, H., Hiorns, R. W. Pseudophakic bullous keratopathy: relationship with endothelial cell density and use of a predictive cell loss model. A preliminary report. Curr Eye Res. 5 (5), 363-366 (1986).
- Wilson, S. E., Lloyd, S. A. Epidermal growth factor and its receptor, basic fibroblast growth factor, transforming growth factor beta-1, and interleukin-1 alpha messenger RNA production in human corneal endothelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 32 (10), 2747-2756 (1991).
- Chen, K. H., Harris, D. L., Joyce, N. C. TGF-beta2 in aqueous humor suppresses S-phase entry in cultured corneal endothelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 40 (11), 2513-2519 (1999).
- Senoo, T., Obara, Y., Joyce, N. C. EDTA: a promoter of proliferation in human corneal endothelium. Invest Ophthalmol Vis Sci. 41 (10), 2930-2935 (2000).
- Yue, B. Y., Sugar, J., Gilboy, J. E., Elvart, J. L. Growth of human corneal endothelial cells in culture. Invest Ophthalmol Vis Sci. 30 (2), 248-253 (1989).
- Peh, G. S., Beuerman, R. W., Colman, A., Tan, D. T., Mehta, J. S. Human corneal endothelial cell expansion for corneal endothelium transplantation: an overview. Transplantation. 91 (8), 811-819 (2011).
- Zhu, C., Rawe, I., Joyce, N. C. Differential protein expression in human corneal endothelial cells cultured from young and older donors. Mol Vis. 14, 1805-1814 (2008).
- Ko, M. K., Kay, E. P. Regulatory role of FGF-2 on type I collagen expression during endothelial mesenchymal transformation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (12), 4495-4503 (2005).
- Lee, H. T., Kay, E. P. FGF-2 induced reorganization and disruption of actin cytoskeleton through PI 3-kinase, Rho, and Cdc42 in corneal endothelial cells. Mol Vis. 9, 624-634 (2003).
- Pipparelli, A., et al. ROCK Inhibitor Enhances Adhesion and Wound Healing of Human Corneal Endothelial Cells. PloS one. 8 (4), e62095 (2013).
- Roy, O., Leclerc, V. B., Bourget, J. M., Theriault, M., Proulx, S. Understanding the process of corneal endothelial morphological change in vitro. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (2), 1228-1237 (2015).
- Jakobiec, F. A., Bhat, P. Retrocorneal membranes: a comparative immunohistochemical analysis of keratocytic, endothelial, and epithelial origins. Am J Ophthalmol. 150 (2), 230-242 (2010).
- Okumura, N., et al. Involvement of ZEB1 and Snail1 in excessive production of extracellular matrix in Fuchs endothelial corneal dystrophy. Lab Invest. 95 (11), 1291-1304 (2015).
- Okumura, N., et al. Enhancement on primate corneal endothelial cell survival in vitro by a ROCK inhibitor. Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (8), 3680-3687 (2009).
- Zhu, Y. T., Chen, H. C., Chen, S. Y., Tseng, S. C. G. Nuclear p120 catenin unlocks mitotic block of contact-inhibited human corneal endothelial monolayers without disrupting adherent junctions. J Cell Sci. 125 (15), 3636-3648 (2012).
- Ho, W. T., et al. Inhibition of Matrix Metalloproteinase Activity Reverses Corneal Endothelial-Mesenchymal Transition. Am J Pathol. 185 (8), 2158-2167 (2015).
- Kay, E. D., Cheung, C. C., Jester, J. V., Nimni, M. E., Smith, R. E. Type I collagen and fibronectin synthesis by retrocorneal fibrous membrane. Invest Ophthalmol Vis Sci. 22 (2), 200-212 (1982).
- Li, C., et al. Notch Signal Regulates Corneal Endothelial-to-Mesenchymal Transition. Am J Pathol. 183 (3), 786-795 (2013).
- Okumura, N., et al. The ROCK Inhibitor Eye Drop Accelerates Corneal Endothelium Wound Healing. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 2493-2502 (2013).
- Mannermaa, E., Vellonen, K. S., Urtti, A. Drug transport in corneal epithelium and blood-retina barrier: emerging role of transporters in ocular pharmacokinetics. Adv Drug Deliv Rev. 58 (11), 1136-1163 (2006).
