Protocol
1. Scaffold Fabrication
- Mala NaCl i en laboratorieblandare under 20 min och torka den på en varmare vid 100 ° C.
- Sätta den torkade NaCl (45 g vid tiden) i en siktningsmaskin under 30 minuter vid den högsta tillgängliga frekvens utan förekommer i resonans. Samla sex saltfraktioner, som sträcker sig från 500 pm till 1000 pm (M 500); från 300 ^ m till 500 ^ m (M 300); från 100 ^ m till 200 ^ m (M 100); från 90 ^ m till 100 (M 90); från 45 ^ m till 65 ^ m (M 45) och slutligen M 10 med saltpartiklar storlek mindre än 45 um som schematiseras i fig 1.
- Vakuum torka över natten allt material i syfte att undvika hydrolytisk klyvning under bearbetningen. För varje material, väljer temperaturen för att maximera graden av torkning utan att övervinna - i fråga om polymerer - glas. Välj därför T = 90 ° C i PLA och T = 25 ° C under PEG, T = 105 ° C i NaCl.
- UtfodraPLA, PEG och NaCl, med en viktprocentsammansättning av 20/5/75 respektive till en satsblandare rörelse vid T = 190 ° C, och n = 60 varv per minut och sedan bearbeta dem tills att uppnå ett konstant värde på vridmomentet, vanligtvis efter omkring 10 minuter. Därefter snabbt samla det resulterande materialet.
- Framställa de monoskikten med hjälp av en laboratoriepress som arbetade vid 210 ° C, satte blandningarna i lämpliga cylindriska formar med en diameter av 10 mm och en höjd av 3 mm och hålla dem under 60 sekunder vid omgivande tryck och 3 minuter vid 180 bar . Därefter kyler blandningarna vid rumstemperatur, upprätthållande av trycket av 180 bar.
- Montering av tre lager via formpressning
- Framställa varje enskilt lager på samma sätt som det som beskrivs i (1,5) men med användning av olika formar, dvs med en diameter av 10 mm och en höjd av 1 mm. Slutligen, erhålla 6 skivor med en diameter på 10 mm och en höjd av 1 mm, innehållande sex olika partikelstorlekar: M 500, M 300, M 100,
- for montering tre-skikt byggnadsställning A (TLS A), stapla upp M 500, M 300 och M 100 inuti den cylindriska formen och kompressions forma dem i en laboratoriepress som arbetade vid 210 ° C under 60 sek vid omgivningstryck och 3 minuter vid 180 bar och kyldes sedan vid rumstemperatur, upprätthållande av trycket av 180 bar.
OBS: Förbered TSL B genom att stapla på varandra M 90, M 45 och M 10 i samma formar och utföra formpressning drift genom att följa samma förfarande som det som användes för TLS A.
- Ta skivorna från de cylindriska formarna och lägg dem i en kokande demineraliserat vattenbad utan omrörning. 3 h efter, ta bort de resulterande porösa strukturer från badet och låt dem torka i 12 timmar vid rumstemperatur i en kemisk huv.
2. Morfologisk analys
- Utvärdera morfologier i de ställningar genom svepelektronmikroskopi.
- Bryt ner proverna under flytande kväve och sedan bifogaprov på en aluminium stump med hjälp av en klister kol tejp. Slutligen, sputter-Coate med guld för 90 s under argonatmosfär före avbildning för att undvika elektrostatiska urladdningar under testet.
3. Scaffold Porstorlek
- Utarbeta de bilder som erhållits genom SEM-analys med en bildbehandlings programvara kan känna igen porstorleksfördelningen av byggnadsställningen.
OBS: I detta arbete analys porstorleksfördelning den utfördes med användning av ett MATLAB-baserad programvara tidigare beskrivits 33
4. Porositet
- Väg provexemplaren före urlakning och utvärdera den teoretiska porositeten i enlighet med följande uttryck:
OBS: M NaCl, m PEG och m PLA, är respektive den teoretiska massan av NaCl, PEG, och PLA, genom att anta homogena blandningar. Than densiteter (ρ) av NaCl, PEG och PLA är respektive 2,16 g / cm 3, 1,12 g / cm 3 e 1,24 g / cm 3. - Väg proverna efter urlakning och torkning för att bedöma den skenbara densiteten av proverna (ρ byggnadsställningar), och sedan utvärdera den verkliga porositet som det reciproka värdet av förhållandet mellan den skenbara densiteten av ställningen och densiteten av icke-porös PLA genom med användning av uttrycket (2).
OBS: Det uttrycker förhållandet mellan den tomma volymen av ställningen och hela volymen av ställningen (tom + full).
5. Mekaniska egenskaper
- Testa av proverna under kompressionsläge med hjälp av en dragmaskin, utrustad med en 1 kN lastcell. Ställ en konstant töjningshastighet av 1 mm min -1.
- För att undersöka de mekaniska egenskaperna hos proverna i fysiologisk miljö, utrusta dynamometer med ett bad innehållande (PBS), (pH = 7,4) vid 37 ° C och utföra testet med samma konfiguration som den som beskrivs i punkt 5.1.
- Före varje mätning i fuktig miljö, blöt proverna med PBS i en termos i 5 minuter för att låta PBS fylla alla porer. Därefter tillåter skeletten att stanna kvar i PBS vid 37 ° C under 15 min för att nå börvärdestemperaturen.
- Bestäm gränsyteadhesion styrka (IAS) mellan skikten av TL A och TL B med hjälp av ett skräddarsytt gräns styrka testutrustning, som är ansluten till en mekanisk Testing Machine enligt en metod som beskrivs i litteraturen 32,34.
- Fäst ställningen på riggen och se till att rätt inriktning med maskinens lastcellen och bas plattan. Fäst ställnings prover till aluminiumprov Män med hög viskositet lim och placera dem i utrustningen för att testa.
- För den våta konditionstest, återfukta proven i PBS under 1 timme prieller provning. Använda en 1 kN lastcell, vid en dragpåkänning appliceras vid en töjningshastighet av 1 mm min -1.
OBS: Ta hänsyn till att fel kan inträffa antingen vid den ultimata draghållfastheten för ett av skikten eller på grund av delaminering vid gränsytorna. Utvärdera IAS som den maximala styrkan i spännings-töjningskurvan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Inverkan av NaCl partikelstorlek på porerna arkitektur stöden bedömdes kvalitativt och kvantitativt genom att undersöka morfologin av proverna och beräkna porstorleksfördelningen genom bildanalys, respektive figur 2a -. F visar SEM-mikrofotografier av mono-lager byggnadsställningar följd från salt urlakning av material som innehåller olika partikelstorlekar NaCl.
Mer i detalj, M 500 (figur 2a) visade porer med en medeldiameter av 500 | im, förmodligen på grund av brott av saltpartiklar med en diameter större än 500 | im under smältblandning. Som tydligt från samma siffra är porarkitektur kännetecknas av ett lågt antal oregelbundna porer, dåligt sammankopplade, omgiven av murar av ca 10 pm. Figur 2b rapporterar morfologi M 300. I dettafall var porerna befanns uppvisa en genomsnittlig diameter inom samma intervall av saltpartiklarna som fyllts under smältblandning (300-500 um), vilket bekräftar att ingen partikelbrott inträffade i smältblandningsprocessen. Porväggar befanns vara tunnare (ca 5 pm) än de som observerats hos M 500 skikt. M 100, (figur 2c), visar en bimodal porös struktur, som kännetecknas av ett heterogent nätverk sammansatt av stora porer (100-200 pm) omgivna av mindre. Denna por arkitektur ger en bättre sammankoppling och en ökad por täthet för volymenhet, trots att bestämma en drastisk gallring väggar tjocklek. Morfologin för M 90, tillhandahålls i figur 2d, visar ungefär kubiska porer, homogent fördelade i hela polymermatrisen, på grund av den mindre saltstorleksområdet (90-100 | j, m) som används i detta fall. Mikroporer, på grund av PEG solvatisering var närvarande som mikro tunnlar innanför murarna som i själva verket visas mycket grov. SEM mikroskop av M 45, som visas i figur 2e, visar en hög täthet av porer, vilka diametrar sträcker sig från 45 ^ m till 65 ^ m. M 10 (Figur 2F) uppvisade den högsta tätheten av porer per volymenhet, en genomsnittlig porstorlek ungefär lika med 20 pm, med en hög grad av sammankoppling och mycket tunna (<1 mikrometer) väggar.
Figur 3a, en ", en" visar ett tvärsnitt av TLS A, efter läkningen vid olika förstoringar. I figur 3a är det möjligt att tydligt identifiera de tre skikten, var och en kännetecknas av olika medelporstorlek, medan paneler a 'och a "hänvisar till M 100-M 300 och M 300-M 500 gränssnitt orter. Som klart synliga behöver hela anordningen inte några interna klyvningar eller matris diskontinuitet mellan de olika lagren. Analogt är TLS B och besläktade gränssnitt rapporteras i figur 3b, b ',b ". Bilderna visade en morfologi liknande den för TLS A. I själva verket tre skikt med porer av olika storlekar kan lätt kännas igen (panel b), medan både M 10-M 45 (panel b ') och M 45-M 90 (panel b ") gränsregioner uppvisade ingen avflagning eller diskontinuitet. Som väntat behåller varje enskilt lager samma porarkitektur efter montering och urlakningssteg.
Tabell 1 rapporterar den kompressiva elasticitetsmoduler av materialen, mätt i luft (torr) och i PBS (våt) miljö. Den här egenskapen befanns följa en monoton ökning med medelporstorleken. Den elastiska moduler av de slutliga enheter främst bestäms av deras respektive svagare skikt (dvs. M 100 för TLS A och M 10 för TLS B) för både TLSs utredas. Tabell 2 rapporterar IAS för TLS A och TLS B i torr och våt miljö . Inga mellanskiktsdelamineringsfenomen observerades, eftersom misslyckandealltid inträffade i mitten av de svagaste skikten av TLS A (M 100) och TLS B (M 10). TLS A visas den bästa IAS prestanda.
Figur 1:. Scheman NaCl granulometri Korn siktat NaCl-partiklar och motsvarande provkoder.
Figur 2: Morfologi av monolager byggnadsställningar SEM-mikrofotografier av monolager ställningar som kännetecknas av olika porstorleksfördelningar:. M 500 (a), Scale bar = 400 | im; M 300 (b), Skalstreck = 400 pm; M 100 (c), Scale bar = 400 | im; M 90 (d), Skala bar = 200 pm; M 45 (e), Scale bar = 40081, m. Och M 10 (f), Skalstreck = 100 um klicka god här för att se en större version av denna siffra.
. Figur 3: Morfologi av tre-skikts ställningar (a, a ', a' ') SEM-mikrografer av tre skikt bestående scaffold typ A (TLS A): (a) hela tvärsnittet, Skalstreck = 500 | im; (A ') M 100-M 300-gränssnitt, Skalstreck = 250 pm; (A ') M 300-M 500-gränssnitt, Skalstreck = 250 nm. (B, b ', b' ') SEM-mikrografer av tre skikt bestående scaffold typ B (TLS B): (b) hela tvärsnittet, skala bar 500 | j, m; (B ') M 10 M 45 gränssnitt, Skala bar; = 100 pm; (B '') M 45-M 90-gränssnitt, Skalstreck = 100 nm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| exempelkod | Dry - E (MPa) | Wet - E (MPa) |
| M 500 | 40,33 ± 6,04 | 33,23 ± 4,96 |
| M 300 | 37,62 ± 6,89 | 31,42 ± 5,83 |
| M 100 | 32,12 ± 5,11 | 28,03 ± 4,04 |
| M 90 | 30,87 ± 4,93 | 26,91 ± 3,79 |
| M 45 | 25,36 ± 5,82 | 22,83 ± 5,01 |
| M 10 | 21 0,76 ± 3,91 | 19,87 ± 3,93 |
| TL A | 33,08 ± 5,21 | 29,55 ± 4,09 |
| TL B | 22,31 ± 5,46 | 20,54 ± 3,87 |
Tabell 1: Tryck mekaniska resultat Tryck Ung modul av mono- och treskiktade ställningar med olika porstorlekar i vått och torrt.. Värdena är angivna som medelvärden ± SD.
| exempelkod | Dry - IAS (kPa) | Wet - IAS (kPa) |
| TL A | 350,8 ± 51,2 | 299,6 ± 35,1 |
| TL B | 262,3 ± 62,2 | 220,5 ± 31,3 |
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den första kritiska steget är optimeringen av sikt effektivitet. Den höga kontroll av NaCl partikelstorleken är grundläggande för att framställa byggnadsställning med önskad porstorleksfördelning. En annan avgörande steg är att undvika brott på de tunna PLA mono under provet tas ur formen. Analysen bildbehandling kan inte vara representativa för hela anordningen.
Under dragprov kan provet slita bort från utrustningen.
Före siktning steg, förvissa sig om att saltet har väl torkats för att få en högre kontroll av NaCl partikelstorleken. Denna fråga är särskilt viktigt för de minsta saltpartikelstorlek, på grund av sin extremt höga hygroskopicitet. Före formpressning steg, applicera ett tunt teflonspray-beläggning på formarna för att underlätta prov avlägsnande från formarna. Analysen bildbehandling måste utföras genom att beakta olika bilder tagnafrån olika regioner i byggnadsställningen att vara säker på att de är representativa för hela anordningen. Slutligen före dragproven (särskilt de som utförts i våt miljö), noggrant kontrollera limmet till prov vidhäftning.
Den principiella begränsningen av tekniken ligger i att det är omöjligt att erhålla en kontinuerlig gradient av porstorlek. Faktum är att metoden som beskrivs häri tillåter att uppnå en diskret gradient av porstorlek, eftersom den är baserad på montering av olika skikt. I de flesta fall kan en väl definierad flerskiktsbyggnadsställning att föredra framför en kontinuerligt graderad ett men inte någonsin. Denna begränsning kan delvis överskridas genom att öka antalet skikt, som i sin tur skulle resultera i tunnare skikt, uppenbarligen svårare att hantera.
Till skillnad från många andra produktionsteknik, kan strategin här antas anses miljövänlig, eftersom det inte kräver någon giftiga lösningsmedel potentiellt farligaför miljön och för levande celler och vävnader. Vidare ger partikelformig urlakning en hög kontroll av både porstorlek och porositet genom att ställa respektive storleken och mängden av NaCl blandas med PLA.
Framtida framsteg med denna teknik är beroende av möjligheten att samla skikt uppvisar andra kemo-fysiska skillnader. Till exempel kan en montera olika biopolymerer eller förstärka varje skikt med olika nanopartiklar, såsom hydroxiapatit 28 nanocellulosa 27 grafen 35 eller dess derivat 9,36,37 för att ge ännu fler funktioner 38. Faktum är att denna metod säkerställer en hög kontroll på så sätt gör det möjligt att enkelt ställa varje region av flerskiktsbyggnadsställning. Denna utmaning att spela en avgörande roll i ITE, eftersom närvaron av flera phasic och / eller anisotropa biologiska strukturer som gradvis förändras från en vävnad till en annan är typiska egenskaper hos gränssnitts vävnader, såsom ligament-to-Ben, senor-till-ben och brosk-to-bone.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Poly(lactic acid) | NatureWorks | PLA 2002D | |
| Poly(ethylene glycol) | Sigma | 83797-1KG-F | |
| Sodium Cloride | Sigma | 793566-5KG-D | |
| Phosfate Buffer Solution | Sigma | P5368-10PAK | |
| Laboratory Mixer | Brabender | PLE 330 - Plasticorder | |
| Laboratory Press | Carver | ||
| Scanning Electron Microscopy | Phenom-world | ProX | |
| Universal Testing Machine | Instron | 3365 (UK) | |
| BioPuls Bath | Instron, Norwood | ||
| Sieving Machine | Endecotts | E.V.F.1. | |
| Vacuum Oven | ISCO | NSV9035 | |
| Precision Balance | Sartorius | AX224 |
References
- Scaffaro, R., Morreale, M., Lo Re, G., Mantia, F. P. La Degradation of Mater-Bi®/wood flour biocomposites in active sewage sludge. Polymer Degradation and Stability. 94 (8), 1220-1229 (2009).
- Scaffaro, R., Botta, L., Passaglia, E., Oberhauser, W., Frediani, M., Di Landro, L. Comparison of different processing methods to prepare poly(lactid acid)-hydrotalcite composites. Polymer Engineering & Science. 54 (8), 1804-1810 (2014).
- Thakur, V. K., Thakur, M. K. Recent advances in graft copolymerization and applications of chitosan: A review. ACS Sustainable Chemistry and Engineering. 2 (12), 2637-2652 (2014).
- Thakur, V. K., Thakur, M. K. Recent advances in green hydrogels from lignin: A review. International Journal of Biological Macromolecules. 72, 834-847 (2015).
- Thakur, V. K., Kessler, M. R. Self-healing polymer nanocomposite materials: A review. Polymer. 69, 369-383 (2015).
- Thakur, V. K., Thakur, M. K. Recent trends in hydrogels based on psyllium polysaccharide: a review. Journal of Cleaner Production. 82, 1-15 (2014).
- Voicu, S. I., Condruz, R. M., et al. Sericin Covalent Immobilization onto Cellulose Acetate Membrane for Biomedical Applications. ACS Sustainable Chemistry & Engineering. 4 (3), 1765-1774 (2016).
- Scaffaro, R., Botta, L., Sanfilippo, M., Gallo, G., Palazzolo, G., Puglia, A. M. Combining in the melt physical and biological properties of poly(caprolactone) and chlorhexidine to obtain antimicrobial surgical monofilaments. Applied Microbiology and Biotechnology. 97 (1), 99-109 (2013).
- Scaffaro, R., Maio, A., et al. Synthesis and self-assembly of a PEGylated-graphene aerogel. Composites Science and Technology. 128, 193-200 (2016).
- Scaffaro, R., Botta, L., Gallo, G., Puglia, A. M. Influence of Drawing on the Antimicrobial and Physical Properties of Chlorhexidine-Compounded Poly(caprolactone) Monofilaments. Macromolecular Materials and Engineering. 12 (300), 1268-1277 (2015).
- Scaffaro, R., Lopresti, F., et al. Effect of PCL/PEG-Based Membranes on Actinorhodin Production in Streptomyces coelicolor Cultivations. Macromolecular bioscience. 16 (5), 686-693 (2016).
- Scaffaro, R., Lopresti, F., Botta, L., Rigogliuso, S., Ghersi, G. Melt Processed PCL/PEG Scaffold With Discrete Pore Size Gradient for Selective Cellular Infiltration. Macromolecular Materials and Engineering. 301 (2), 182-190 (2016).
- Yousefi, A. -M., Hoque, M. E., Prasad, R. G. S. V., Uth, N. Current strategies in multiphasic scaffold design for osteochondral tissue engineering: A review. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 103 (7), 2460-2481 (2015).
- Gillette, B. M., Rossen, N. S., et al. Engineering extracellular matrix structure in 3D multiphase tissues. Biomaterials. 32 (32), 8067-8076 (2011).
- Seidi, A., Ramalingam, M., Elloumi-Hannachi, I., Ostrovidov, S., Khademhosseini, A. Gradient biomaterials for soft-to-hard interface tissue engineering. Acta Biomaterialia. 7 (4), 1441-1451 (2011).
- Son, J. S., Kim, S. G., et al. Hydroxyapatite/polylactide biphasic combination scaffold loaded with dexamethasone for bone regeneration. Journal of Biomedical Materials Research - Part A. 99 (4), 638-647 (2011).
- Sundararaghavan, H. G., Burdick, J. A. Gradients with depth in electrospun fibrous scaffolds for directed cell behavior. Biomacromolecules. 12 (6), 2344-2350 (2011).
- Zou, B., Liu, Y., Luo, X., Chen, F., Guo, X., Li, X. Electrospun fibrous scaffolds with continuous gradations in mineral contents and biological cues for manipulating cellular behaviors. Acta biomaterialia. 8 (4), 1576-1585 (2012).
- Nedjari, S., Schlatter, G., Hébraud, A. Thick electrospun honeycomb scaffolds with controlled pore size. Materials Letters. 142, 180-183 (2015).
- Yusong, P., Qianqian, S., Chengling, P., Jing, W. Prediction of mechanical properties of multilayer gradient hydroxyapatite reinforced poly(vinyl alcohol) gel biomaterial. Journal of Biomedical Materials Research - Part B Applied Biomaterials. 101 (5), 729-735 (2013).
- Kim, Y. B., Kim, G. Functionally graded PCL/β-TCP biocomposites in a multilayered structure for bone tissue regeneration. Applied Physics A: Materials Science and Processing. 108 (4), 949-959 (2012).
- Sudarmadji, N., Tan, J. Y., Leong, K. F., Chua, C. K., Loh, Y. T. Investigation of the mechanical properties and porosity relationships in selective laser-sintered polyhedral for functionally graded scaffolds. Acta biomaterialia. 7 (2), 530-537 (2011).
- Molladavoodi, S., Gorbet, M., Medley, J., Kwon, H. J. Investigation of microstructure, mechanical properties and cellular viability of poly(L-lactic acid) tissue engineering scaffolds prepared by different thermally induced phase separation protocols. Journal of the mechanical behavior of biomedical materials. 17, 186-197 (2013).
- Oh, S. H., Kim, T. H., Il Im, G., Lee, J. H. Investigation of pore size effect on chondrogenic differentiation of adipose stem cells using a pore size gradient scaffold. Biomacromolecules. 11 (8), 1948-1955 (2010).
- Lin, L., Gao, H., Dong, Y. Bone regeneration using a freeze-dried 3D gradient-structured scaffold incorporating OIC-A006-loaded PLGA microspheres based on β-TCP/PLGA. Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 26 (1), 3 (2015).
- Yoo, D. Heterogeneous minimal surface porous scaffold design using the distance field and radial basis functions. Medical engineering & physics. 34 (5), 625-639 (2012).
- Soon, Y. -M., Shin, K. -H., Koh, Y. -H., Lee, J. -H., Choi, W. -Y., Kim, H. -E. Fabrication and compressive strength of porous hydroxyapatite scaffolds with a functionally graded core/shell structure. Journal of the European Ceramic Society. 31 (1-2), 13-18 (2011).
- Scaffaro, R., Lopresti, F., Botta, L., Maio, A. Mechanical behavior of Polylactic acid/Polycaprolactone porous layered functional composites. Composites Part B: Engineering. 98, 70-77 (2016).
- Halili, A. N., Hasirci, N., Hasirci, V. A multilayer tissue engineered meniscus substitute. Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 25 (4), 1195-1209 (2014).
- Bai, H., Wang, D., et al. Biomimetic gradient scaffold from ice-templating for self-seeding of cells with capillary effect. Acta Biomaterialia. 20, 113-119 (2015).
- Algul, D., Sipahi, H., Aydin, A., Kelleci, F., Ozdatli, S., Yener, F. G. Biocompatibility of biomimetic multilayered alginate-chitosan/β-TCP scaffold for osteochondral tissue. International Journal of Biological Macromolecules. 79, 363-369 (2015).
- Scaffaro, R., Lopresti, F., Botta, L., Rigogliuso, S., Ghersi, G. Preparation of three-layered porous PLA/PEG scaffold relationship between morphology , mechanical behavior and cell permeability. Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials. 54, 8-20 (2016).
- Lo Re, G., Lopresti, F., Petrucci, G., Scaffaro, R. A facile method to determine pore size distribution in porous scaffold by using image processing. Micron. 76, 37-45 (2015).
- Levingstone, T. J., Matsiko, A., Dickson, G. R., O'Brien, F. J., Gleeson, J. P. A biomimetic multi-layered collagen-based scaffold for osteochondral repair. Acta Biomaterialia. 10 (5), 1996-2004 (2014).
- Scaffaro, R., Botta, L., Maio, A., Mistretta, M. C., La Mantia, F. P. Effect of Graphene Nanoplatelets on the Physical and Antimicrobial Properties of Biopolymer-Based Nanocomposites. Materials. 9 (5), 351 (2016).
- Maio, A., Fucarino, R., Khatibi, R., Rosselli, S., Bruno, M., Scaffaro, R. A novel approach to prevent graphene oxide re-aggregation during the melt compounding with polymers. Composites Science and Technology. 119, 131-137 (2015).
- Maio, A., Agnello, S., et al. A rapid and eco-friendly route to synthesize graphene-doped silica nanohybrids. Journal of Alloys and Compounds. 664, 428-438 (2015).
- Maio, A., Giallombardo, D., Scaffaro, R., Piccionello, A. P., Pibiri, I. Synthesis of a fluorinated graphene oxide-silica nanohybrid: improving oxygen affinity. RSC Advances. 6 (52), 46037-46047 (2016).
