Summary
Detta manuskript beskriver ett förfarande för att spåra ombyggnad av cerebrovasculature under amyloida plack ackumulering in vivo med hjälp av längd två-foton mikroskopi. En förtunnas-skalle beredningen möjliggör visualisering av fluorescerande färgämnen för att bedöma progressionen av cerebrovaskulär skada i en musmodell av Alzheimers sjukdom.
Abstract
Remodellering av hjärnan kärlsystemet är ett gemensamt drag av hjärn patologier. In vivo avbildningstekniker är grundläggande för att upptäcka cerebrovaskulär plasticitet eller skador uppkommer övertid och i förhållande till nervaktivitet eller blodflöde. In vivo två-foton mikroskopi tillåter studiet av strukturella och funktionella plasticitet stora cellulära enheter i vardags hjärnan. I synnerhet tillåter tunnas-skalle fönster förberedelse visualisering av kortikala regioner av intresse (ROI) utan att framkalla betydande hjärninflammation. Repetitiva avbildning sessioner av kortikal ROI är möjliga, vilket ger karakterisering av sjukdoms kännetecken över tiden under utvecklingen av ett stort antal CNS-sjukdomar. Denna teknik att komma åt de pial strukturer inom 250 | im av hjärnan är beroende av detekteringen av fluorescerande prober som kodas av genetiska cellulära markörer och / eller vitala färgämnen. De senare (t.ex. fluorescerande dextraner) används för att kartlägga den luminal utrymmet i cerebrovaskulära strukturer. Relevant för det protokoll som beskrivs häri är användning av en in vivo-markör av amyloidavsättningar, metoxi-O4, för att bedöma Alzheimers sjukdom (AD) progression. Vi beskriver även efter förvärvet bildbehandling används för att spåra kärlförändringar och amyloidavsättningar. Även för närvarande fokuserar på en modell av AD, är den beskrivna protokollet är relevant för andra CNS-sjukdomar där patologiska cerebrovaskulära förändringar inträffar.
Introduction
Hjärnan vaskulaturen är en multi-cellulär struktur, som anatomiskt och funktionellt är kopplad till neuroner. En dynamisk remodellering av kärl förekommer i hela hjärnans utveckling och under framskridandet av patologier i det centrala nervsystemet (CNS) 1,2. Det är allmänt accepterat att cerebrovaskulär skada är ett kännetecken för flera CNS-sjukdomar, inklusive epilepsi, Alzheimers sjukdom (AD), traumatisk hjärnskada och hjärninflammation 3,4. Därför, spårning cerebrovaskulära förändringar in vivo blir betydande när modellering CNS-sjukdomar, från början och till kroniska faser. Som cerebrovaskulära ändringar förekommer ofta tillsammans med nervskada eller plasticitet, avbildning av neurokärl utgör en viktig inkörsport för att dechiffrera CNS-sjukdom patofysiologi.
Detta protokoll beskriver en längsgående två-foton-baserat förfarande för att spåra ombyggnaden av cerebrovasculature i en musmodell avAD, en progressiv patologi kännetecknas av cerebrovaskulära defekter på stora och små kaliber fartyg på grund av amyloidogena plack nedfall 5-7. Detta förfarande gör det möjligt för visualisering av amyloidavsättningar och spårning av deras position och tillväxt med avseende på neurovaskulära ombyggnad hela sjukdomsförloppet. Vitala fluorescerande färgämnen injiceras före varje bildsession för visualisering av de cerebrovasculature och amyloida plack i transgena AD möss 8. Upprepade avbildning sessioner av en ROI genom en förtunnad skallen transkraniell fönster är icke-invasiv och metoden för valet att bedöma neurovaskulära ombyggnad i vardags mushjärna 2,5,9,10.
Proceduren nedan visar den kirurgiska protokollet, bildtagning och behandling. Den tidiga utvecklingen av cerebral amyloid angiopati (CAA) mestadels i stort leptomeningeal och penetrerande arterioler karaktäriseras.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Möss får fri tillgång till mat, vatten, och hölls på en 12-hr ljus-mörker cykel. Alla förfaranden som rör försöksdjur överensstämde med nationella och europeiska lagar och godkändes av det franska ministeriet för utbildning och forskning (CEEA-LR-00.651-01). Totalt 6 transgen 5xFAD och fyra kull vildtyp (WT) kontrollmöss användes för detta förfarande.
1. Preoperativ Förberedelse
- Intraperitonealt (IP) injicera Metoxi-X04 (10 mg / kg) 48 h före operation för att märka Ap-insättningar 11.
- Förbereda steril artificiell cerebrospinalvätska (aCSF) (120 mM NaCl, 26,2 mM NaHCOs 3, 2,5 mM KCl, 1 mM NaH 2 PO 4, 1,3 mM MgCl2, 10 mM glukos; bubbla med 95% O2 / 5% CO2 före tillsats av 2,5 mM CaCl2).
- Sterilisera kirurgiska instrument (sax, pincett, rakblad och borr), med hjälp av en autoklav eller en varm pärla autoklav före aseptiskkirurgi.
- Rengör kirurgiska bänk och mikroskop platta med 70% etanol och täck med en ren trasa.
- Injicera ketamin / xylazin (75 mg / kg och 10 mg / kg, respektive) och den analgetiska ketoprofen (2,5 mg / kg) IP.
- Kontrollera lämplig nivå av anestesi med tass eller svans nypor.
- Applicera sterilt oftalmisk salva för ögonen och raka pälsen (näsan öron) samtidigt som man undviker morrhår. En hårborttagningskräm kan användas så länge som det följs av noggrant skölja med vatten för att förhindra hudirritation. Raka återstående päls med ett rakblad. Sterilisera huden med povidonjod antiseptisk lösning.
- Placera musen under binokulärt mikroskop och göra ett hudsnitt från öronen till näsan. Dra huden sidled för att exponera skallen. Incisionsfilm benhinnan och upprepade gånger skölja skallen med steril aCSF för att stoppa eventuell blödning.
2. kärl Märkning och förtunnade skallenFönster Preparation (40 min)
- Ta bort ögonsalva med en bomullstopp. Applicera en droppe topisk oftalmisk bedövningsmedel (tetrakain 1%) och försiktigt pressa huden runt ögonhålan för att uppnå utstick.
- Injicera Fluorescein isotiocyanat (FITC) konjugerat med Dextran (70 kDa) (100 mg / kg eller 50 | il av en 50 mg / ml lösning; injektioninsulin nål) i retroorbital sinus att följa det förfarande som beskrivs av Yardeni och kollegor 12. Applicera sterilt oftalmisk salva för ögonen.
- Se till att huden är indragna och skallen är ren och torr runt den valda avbildningsområdet. Applicera en liten mängd cyanoakrylsyra lim runt fönstret av huvudfästet enheten (bestående av staplade knivbladen, se figur 1), och lim runt målområdet ett lätt tryck under flera sekunder 10.
- Dra ändarna i huden till kanten av fönstret i huvudfästet enheten, och se till att området ärtorr. Säkra huden och kanten av fönstret med en liten mängd av veterinär grad cyanoakrylsyra lim och vänta tills det är torrt (Figur 1).
- Säkra djuret i det skede med hjälp av head-mount enhet. Skölj med sterilt aCSF och se till att väl mellan huden och huvudmonterade enheten är perfekt tätad. Linda musen i en överlevnads filt att upprätthålla normotermi.
- Utför gallring av skallen i aCSF lösning som tidigare beskrivits 10. Observera att hårbotten inte är helt bort. Regelbundet ändra aCSF att rensa ben skräp och för att undvika vävnads överhettning. Eventuellt kvarvarande ben skräp kan tas bort med korta luftpuffar. Den aCSF lösning dämpar också vibrationer som skapas genom borrning.
OBS: Musen skallen tjocklek varierar mellan 80 till 150 | im beroende på ålder hos djuret och regionen av intresse. - Med hjälp av en tandläkarborr (vid medelhastighet och en 0,7 mm Burr) börjar gallring skallen ytan i ett område 1.0 mm i diameter med användning av en vanlig vertikal rörelse parallellt med skallen och ta bort det mesta av det spongiösa benet (första 40-70 | j, m). Kom ihåg att ersätta aCSF varje 20-30 sek och begränsa oavbruten borrning till 3-4 sek. Observera att ben nära suturer är mycket vaskulariserad. Applicera aCSF förindränkta gelfoam att stoppa eventuell blödning.
- Använd en vass engångsögonmikroblad för att fortsätta med gallring av skallen, försiktigt så att inte för hårt tryck. Den slutliga regionen är av ca 0,5 mm i diameter och med en tjocklek av 20-35 | im.
OBS: På grund av benåterväxt och ärrbildning, är det nödvändigt att ytterligare tunna fönstret vid varje bildsession.
3. Två-foton mikroskopi (45 min)
- Om det behövs, injicera med 19 mg / kg ketamin att upprätthålla tillräcklig anestesi.
- Överför musen (fast till headmount stadiet) under två-photon laser mikroskop. Med hjälp av en 20X vatten nedsänkning objektiva med en numerisk bländare på 1,0, lokalisera den förtunnade kraniala fönstret i mitten av det optiska fältet med hjälp av epi-lysrör. Se till att målet alltid är nedsänkt i aCSF.
- Börja laserskanning med ett läge låst pulsad laser (Ti-Sapphire 680-1040nm). Ställ excitationsvåglängden vid 750 nm för att detektera den emitterade fluorescensen av metoxi-XO4 och FITC-dextran i de blå och gröna kanaler respektive.
OBS: Mikroskopet har två stråldelare vid 506 nm och 555 nm. Blått ljus fångas av en NDD detektor utrustad med en 470 ± 12 nm filter. Grönt ljus fångas upp av en hög känslighet GaAsP detektor utrustad med en 525 ± 25 nm filter. Den maximala lasereffekt som emitteras från målet bör inte överstiga 10 mW för att undvika laserinducerad vävnadsskada. - Skaffa en låg förstoring stack (500 pm x 500 pm, 512 x 512 bildpunkter, 2 pm steg) vid en 0,7X numerisk zoom för att skapa en 3D-karta för exakt relocalization av ROIvid senare tidpunkter.
- Skaffa en mosaik av 4 höga digital förstoring bilder med en 2X numerisk zoom (200 pm x 200 pm, 512 x 512 pixlar, en pm steg). Med hjälp av bildbehandlingsprogram flytta fönstret i 200 | j, m steg för att fånga in alla regioner. Djup av stackar är typiskt 250 | im, med början från den pial ytan i varje bild av mosaiken.
- Innan du tar bort musen från mikroskopet, ta en bild eller göra en handritade 2D karta över pial kärl för framtida relocalization av bildfältet.
4. Återvinning och Re-imaging
- Ta bort huvudmonterade enheten med hjälp av dragkraft medan du håller skallen nedanför. Om något lim sitter kvar på skallen eller hud, skrapa försiktigt med fin pincett. Sutur hårbotten och placera musen i en uppvärmd bur för att övervaka återhämtning från anestesi innan han återvände till hemmaburen. Tillämpa aktuell antibiotika kräm till suturen och injicera ketoprofen (2,5 mg / kg) IP följande 2 dagar.
- Upprepa steg 1,1-2,5 för upprepade avbildning sessioner. Om det behövs, raka ben med en mikroblad för att säkerställa optimal bildkvalitet.
OBS! Ytterligare gallring med tandläkarborr kan vara nödvändigt när intervallet mellan avbildning sessioner är längre än en månad. - Placera musen under mikroskop med hjälp epifluorescent ljus enligt 2D karta över pial kärl tas från föregående session (steg 3,6).
- Starta två-foton-laserskanning och justera mikroskop skede för att uppnå inriktning på mikrometerskalan med 3D-karta som erhållits i steg 3,4. Fortsätt till detaljerad avbildning som beskrivs i steg 3,5.
5. Post-förvärv Tredimensionell återuppbyggnad och bildanalys
- Erhålla tredimensionella rekonstruktioner av kärlsystemet och amyloidavsättningar med hjälp av 3D-bildanalysprogram såsom Imaris (version används 8,0 och 7.7.2). Använd Normalisera Layer plugin på bildbehandlings menyn och kontrastförändringar menyn för att få perfekt kontrast av de två kanalerna i hela djupet av bilden stacken.
- Öppna bilderna från samma region vid alla tidpunkter samtidigt och alltid behandla dem parallellt för att jämföra de olika tidpunkterna.
- Spår fartyg som använder trådspårmodulen.
- Klicka på ikonen filament för att skapa en ny glödtråd, hoppa över automatiska spår och välj auto-path metod.
- Var noga med den valda kanalen motsvarar kärl bilden och använda funktionen för val av pekaren, klicka på ett fartyg förgrening som är konserverat över avbildning sessioner medan du håller skift + kontrollknapparna för att bestämma en startpunkt. Använd select funktion av pekaren och klicka medan du håller Skift-tangenten för att välja ändpunkter trådarna.
OBS: Jämförelse av obtaiNed skelett visar strukturella förändringar i kärlsystemet.
- Utföra plan med flyg analys för att spåra nya placken. Applicera ytan modul till den blå kanalen för att spåra tillväxten av Ap-plack. Klicka på ikonen ytan för att skapa en ny yta och fortsätta med den automatiska yta skapas. Använda tröskling metod för att ställa och subtrahera bakgrundssignalen. Statistikmenyn tillhandahåller data i förhållande till ytan av enskilda amyloidavsättningar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Detta protokoll beskriver en metod för att visualisera den cerebrovasculature och amyloidavsättningar övertid. Fluorescerande färgämnen injicerades för att märka amyloidavsättningar (metoxi-XO4) 11 och för att fylla de cerebrovaskulära lumen (FITC-Dextran) 1. 3D bildanalys mjukvarumoduler användes för att skapa 3D-bilder av en konstant synfält fångade på varandra följande tidpunkter. Representativa bilder som erhållits i somatosensoriska cortex av 5XFAD möss 5 (genetisk modell av AD) visar att de flesta Ap insättningar visas mellan 3 och 4 månaders ålder, växer i parenkymet (Figur 2) och runt penetrerande fartyg (Figur 3). Plackavsättning sker samtidigt med betydande ombyggnad och tillfällig ocklusion av den angränsande cerebrovasculature (Figur 2). Endast sällsynta fall av minskning plackstorlek observerades, vilket tyder på att detta är en process av plack en ccumulation. Figurerna 2 och 3 illustrerar att den amyloidogeniska lasten i parenkymet och runt fartyg är associerad med angiogenes och vaskulär ocklusion i somatosensoriska cortex. Förhållandet mellan vaskulära amyloidplack och kärlocklusion fortfarande oklart, med tanke på att de flesta kärl plack samlats på stora penetrerande artärer, medan ocklusion inträffade mestadels på finkalibriga fartyg.
Figur 1. experimentuppställning. (A) huvud inställning; Stage är skräddarsydd. Huvud montera enhet består av staplade rakblad byggda som tidigare beskrivits 10. (B) Vy över musen låst i huvudfästet enheten. (C) Vy av anordningen och huden limmas till skallen. Kanterna är centrerade på målområdet.s / ftp_upload / 54.796 / 54796fig1large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Jämförelse av två rekonstruerade bilder av mikrovaskulaturen och Amyloid Depositioner på en 5xFAD mus vid 4 och 5 månaders ålder. Amyloid plack indikeras med en vit asterisk är nya placken uppträder vid 5 månader indikeras med gula asterisker. En sällsynt exempel på plackreduktion indikeras med en orange asterisk Nybildade mikrokärl indikeras med en gul pil medan vaskulär ocklusion indikeras med en röd pil. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Stora och finkalibrig Fartyg i Somatosensoriska Cortex vid 3, 4 och 5 månaders ålder. (A) Tillväxt av amyloid vaskulära avlagringar på grovkalibriga fartyg (vita asterisker). (B) amyloida plack kan också observeras på finkalibriga fartyg (gula asterisker). Röda pilar indikerar tilltäppta kärl. Vita asterisker anges växande amyloida plack. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den öppna skallen teknik för in vivo två-foton mikroskopi erbjuder fördelen av obegränsad avbildning sessioner stora avbildningsfält 13,14. Emellertid denna teknik producerar också inflammation i regionen av intresse 14, ofta inkompatibla eller impac neuro-vaskulära read-outs 15. Tvärtom gör den uttunnade skallen transkraniell teknik som inte resulterar i neuro-inflammation, vilket möjliggör tillförlitlig avbildning av de cerebrovaskulära strukturer och plackansamling 10,14. En andra fördel presenteras av denna teknik är att förtunnad-skalle fönster framgång kan nå upp till 80% till 90% för en erfaren manipulator. En stort bakslag för framgång är bristen på uppskattning av ben tjocklek leder till överdriven gallring och slutlig fraktur; erfarenhet och utmärkta optiken i binokulärt mikroskop kommer att begränsa detta problem. Ett antal begränsningar påverkar denna teknik dock. För det första är bilddjup begränsat samarbetempared de öppna skallen förfaranden. För det andra, med tiden, kan ärrvävnad som ligger över benet minskar kvaliteten på den transkraniell avbildning. För det tredje är det svårt att gå vidare till mer än 4 avbildning sessioner med tanke på att skallen måste tunnas lite mer vid varje session. Följaktligen är det viktigt att bestämma det antal avbildning sessioner vid början av ett experiment, i syfte att optimera den gallring inkrementet mellan sessioner. Alternativt har en kronisk transkraniell fönster består av en förtunnad-skalle preparat limmas med en coverglass tidigare beskrivits för att begränsa återväxt av benvävnaden med tiden 16. Även effektiv, fann vi att denna teknik endast fördröjd skelett återväxt i flera veckor så småningom störa kvalitet, djup och subcellulär upplösning av bilder när åter avbildning efter längre tidsperioder (Margarita, Arango-Liévano och Freddy Jeanneteau, opublicerade data). Trots sina begränsningar, två-foton transkraniell Microscopiera genom upprepade förtunnade skallen förberedelser är en metod för val för att spåra fluorescerande markörer i kroniska sjukdomsmodeller där neuro vaskulära förändringar och inflammation uppstå.
En optimal gallring av skallen representerar ett stort tekniskt steg, som tryck som appliceras på benet bör minimeras för att undvika blödning och för att säkerställa en flat skalle fönster. Blödning och en ojämn skalle fönster kan underlätta ärrbildning och ojämn återväxt av ben. Överdriven förtunning under första avbildning session, överhettning efter överdriven borrning eller laserskada kan också äventyra klarhet signalen genom skallen fönstret. De senare problemen kan styras genom att regelbundet ändra aCSF mediet under borrning, kylning av preparatet, borrning intermittent, och med hjälp av rena skarpa verktyg vid polering benet. Ytterligare kritiska steg inkluderar (i) fixering av skallen till huvudfästet plattan för att minska förflyttning i samband med andning, (ii) retroo-orbital injektion och tillförlitlig synlighet för alla fartyg, (iii) att kartlägga området av intresse för framtida flytt, och (iv) före, per- och postoperativ vård i mellan avbildning sessioner.
Den metod som sammanfattas här möjliggör studier för att utvärdera effekt och säkerhet av CNS läkemedel riktade neuro vaskulära strukturer, t.ex. molekyler minska eller förhindra amyloid nedfall i hjärnan parenkymet och på fartyg. Dessutom, längd två-foton mikroskopi av levande hjärna tillåter spårning av amyloidogenesis och dess inverkan på neurovasculature i de tidiga stadierna av AD, före uppkomsten av kognitiv försämring. Brist på clearance av stora amyloida plack kan ha skadliga effekter på hjärnans kärl, förvärrar sjukdomen patofysiologi 17. Tillkomsten av nya fluorescerande vitala färgämnen för att märka Lewy bodies, synucleopathy, prion aggregat, huntingtin aggregat, stödja framtida attainability av neurovasculature REMODEling studier under utvecklingen av andra neurodegenerativa sjukdomar 18. Denna teknik är anpassad för flera musstammar kombinerar färgämnen (SR101, metoxi-X04, dextraner, lektiner) och genetiska markörer (thy1YFP, CX3CR1-GFP, NG2-dsRed) för att undersöka cellulära interaktioner in vivo och i experimentella modeller där struktur och funktion av neurovasculature avviker från normal fysiologi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
Författarna vill tacka för Ligue Francaise contre l'épilepsie (MA-L), Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Grant AVENIR R12087FS (till FJ), bevilja från universitetet i Montpellier (till FJ) och bidrag från Federation pour la Recherche sur le Cerveau (till NM). Vi erkänner tekniskt stöd från Chrystel Lafont på IPAM in vivo imaging kärnplattform anläggningen i Montpellier. Vi tackar också Mary Vernov (Weill Cornell Medical College) för korrekturläsning manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| methoxy-X04 | tocris | 4920 | use 10 mg/kg |
| FITC-Dextran 70 Kda | sigma | 46945 | use 100 mg/kg |
| gelfoam/Bloxang | Bausch and Lomb | ||
| micorsurgical blade | surgistar | 6900 | must be sharp and not dented |
| povidone-iodine | betadine | antisceptic solution | |
| binocular stereomicroscope | olympus | SX10 | optimal image contrast is crucial for this procedure |
| 2-photon microscope | zeiss | Zeiss LSM 710mp | |
| fine scissors-toughcut | Fine science tools | 14058-09 | this scissors are optimized for cutting skin and soft tissue |
References
- Harb, R., Whiteus, C., Freitas, C., Grutzendler, J. In vivo imaging of cerebral microvascular plasticity from birth to death. J Cereb Blood Flow Metab. 33 (1), 146-156 (2013).
- Whiteus, C., Freitas, C., Grutzendler, J. Perturbed neural activity disrupts cerebral angiogenesis during a postnatal critical period. Nature. 505 (7483), 407-411 (2014).
- Masamoto, K., et al. Microvascular sprouting, extension, and creation of new capillary connections with adaptation of the neighboring astrocytes in adult mouse cortex under chronic hypoxia. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (2), 325-331 (2014).
- Marchi, N., Lerner-Natoli, M.
- Giannoni, P., et al. Cerebrovascular pathology during the progression of experimental Alzheimer's disease. Neurobiol Dis. 88, 107-117 (2016).
- Kimbrough, I. F., Robel, S., Roberson, E. D., Sontheimer, H. Vascular amyloidosis impairs the gliovascular unit in a mouse model of Alzheimer's disease. Brain. 138 (Pt 12), 3716-3733 (2015).
- Herzig, M. C., et al. Abeta is targeted to the vasculature in a mouse model of hereditary cerebral hemorrhage with amyloidosis. Nat Neurosci. 7 (9), 954-960 (2004).
- Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. J Neurosci. 26 (40), 10129-10140 (2006).
- Liston, C., et al. Circadian glucocorticoid oscillations promote learning-dependent synapse formation and maintenance. Nat Neurosci. 16 (6), 698-705 (2013).
- Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. B. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nat Protoc. 5 (2), 201-208 (2010).
- Klunk, W. E., et al. Imaging Abeta plaques in living transgenic mice with multiphoton microscopy and methoxy-X04, a systemically administered Congo red derivative. J Neuropathol Exp Neurol. 61 (9), 797-805 (2002).
- Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S.
- Cao, V. Y., et al. In vivo two-photon imaging of experience-dependent molecular changes in cortical neurons. J Vis Exp. (71), (2013).
- Holtmaat, A., et al. Long term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Heppner, F. L., Ransohoff, R. M., Becher, B. Immune attack: the role of inflammation in Alzheimer disease. Nat Rev Neurosci. 16 (6), 358-372 (2015).
- Marker, D. F., Tremblay, M. E., Lu, S. M., Majewska, A. K., Gelbard, H. A. A thin-skull window technique for chronic two-photon in vivo imaging of murine microglia in models of neuroinflammation. J Vis Exp. (43), (2010).
- Joseph-Mathurin, N., et al. Amyloid beta immunization worsens iron deposits in the choroid plexus and cerebral microbleeds. Neurobiol Aging. 34 (11), 2613-2622 (2013).
- Sadowski, M., et al. Targeting prion amyloid deposits in vivo. J Neuropathol Exp Neurol. 63 (7), 775-784 (2004).
