Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

光学相干断层扫描: 成像小鼠视网膜神经节细胞在体内

Published: September 22, 2017 doi: 10.3791/55865
* These authors contributed equally

Summary

这篇手稿描述了一个协议为在体内成像的小鼠视网膜与高分辨率光谱领域光学相干断层扫描 (SD OCT)。它的重点是视网膜神经节细胞 (王国) 在 peripapillary 地区, 有几个扫描和量化的方法描述。

Abstract

视网膜结构改变是眼科疾病的常见表现。光学相干断层扫描 (OCT) 使他们的识别在体内-迅速, 反复, 并在高分辨率。该协议描述 OCT 成像在鼠标视网膜作为一个强大的工具, 研究光学神经病 (OPN)。OCT 系统是一个 interferometry-based, 非侵入性的替代一般的验尸组织学化验。它提供了一个快速和准确的评估视网膜厚度, 使可能跟踪变化, 如视网膜变薄或增厚。我们以 Opa1delTTAG鼠标线为例介绍了成像过程和分析。提出了三种扫描方式, 采用两种定量方法: 标准和自制卡尺。后者是最好的使用在 peripapillary 视网膜的径向扫描;更精确, 更适合分析更薄的结构。这里描述的所有方法都是为视网膜神经节细胞 (王国) 设计的, 但很容易适应其他细胞的数量。总之, OCT 是有效的小鼠模型分, 并有可能用于可靠的评价治疗干预。

Introduction

OCT 是一种诊断工具, 有助于检查视网膜结构1, 包括视神经头 (ONH)。多年来, 它已经成为人类疾病进展的可靠指标2,3, 以及啮齿动物4,5。它使用干涉法来创建2µm 轴向分辨率的视网膜层的横断面图像。最内层是视网膜神经纤维层 (纤维), 含有研资局轴突, 其次是神经节细胞层 (协鑫), 其中大部分为研资机构。其次是内部状层 (彩光), 在那里, 王国的树突满足两极, 水平, 和突细胞轴突。这些, 连同水平的细胞, 形成内部核层 (INL), 并且他们的突起连接与感光轴突在外部状层 (组织)。其次是外核层 (只), 与感光细胞体, 并通过外部限制膜 (OLM) 与感光层分离, 也称为内段/外段 (是/OS) 层。最后, 在小鼠视网膜的最后可见层是视网膜色素上皮 (RPE) 和脉络膜 (C)。单独的纤维通常太薄, 不能用老鼠来测量;因此, 分析纤维/协鑫是最好的4,5。另一个可能性是 GC 复合层, 它包含了后者, 除了光子, 使它更厚, 从而更容易测量 OCT 扫描4。因此, OCT 可以提供洞察的病理状态的视网膜, 如在 OPNs。

另一种方法是, 用剖检组织学来分析小鼠视网膜的厚度。然而, 这项技术面临的限制与组织收集, 固定, 切割, 染色, 安装,因此, 一些缺陷, 如微妙的厚度变化, 无法检测到。最后, 由于同一鼠标不能在多个时间点测试, 所以每项研究的动物数量大大增加, 不像 OCT。所有的侵入、高分辨率、重复的可能性、时间的监控以及 OCT 技术的易用性使其成为视网膜疾病研究的首选方法。

小鼠模型用于识别基因缺陷并阐明 retinopathies6的分子机制。OPN 是一种视网膜病变, 对视神经 (ON) 有很大的损害, 由大约120万王国的神经轴突构成。OPN 可以集中在上, 也可以是次要的其他疾病, 先天或不7, 导致视觉领域的损失, 后来, 失明。OPN 的特征性状为研资损失和损害, 可在人类 OCT 中观察到为纤维和协变细化2,3。同时, OPN 的病理生理学尚不清楚, 因此需要对小鼠视网膜进行检测。

这份手稿描述了视网膜层厚度的成像和量化, 使用 Opa1delTTAG鼠标线8,9的例子, 一个显性光学萎缩 (DOA)10的模型。评估研资局的病理生理学、放射、矩形和环形扫描的数量。这是通过 OCT 软件提供的标准卡尺或为开源图像处理程序开发的自制宏完成的。标准卡尺是难以操作, 往往比纤维/协进会厚, 而自制卡钳是易于使用, 重现性, 更精确。该宏在 peripapillary 区域的 ONH 的两侧对自动检测到的层进行了测量, 在5点和固定位置上。所提出的协议的目的是描述 OCT 扫描获得指定视网膜定位, 重点是视网膜。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

《实验议定书》获得了国家 #233 和 #233;d icale (Inserm; 研究);蒙彼利埃, 法国), 符合欧洲的指示, 并符合帕特声明的使用动物在眼科研究。它是根据《动物实验 (CEEALR; nuCEEA-LR-12123) 》中的《伦理道德的一致性的协议进行的.

1. 设备设置和预成像准备

注意: 在这里, OCT 是利用光谱域 (SD) 眼科成像系统 ( 图 1A ) 在小鼠视网膜上进行的。SD OCT 设备包括一个基地和动物成像坐骑 (AIM) 与啮齿动物对齐阶段 (RAS) ( 图 1B )。该底座包括计算机、oct 引擎、SD oct 探头和鼠标专用镜头。探头安装在目标上, 其中包括 Z 转换器。该 RAS 用于鼠标定位感谢表与 X 和 Y 翻译, 磁带可以旋转和旋转, 以及可移动的叮咬酒吧与鼻带。制造商提供的软件允许对 OCT 文件进行获取和分析, 尽管后者也可以通过开源图像处理程序完成.

  1. 将探测器牢牢地放置在目标中.
  2. 将鼠标特定的镜头连接到探测器.
  3. 调整特定镜头的参考臂设置 (此处为 086, 位置为 964).
  4. 确保鼠标特定的镜头离卡带足够远, 将咬杆与鼻带连接到卡带上.
    注: 镜头与卡带之间的距离可与 Z 型转换器螺钉一起调整, 位于目标背面。鼻带是一个商业上可用的弹性带, 其张力应根据鼠标大小调整.
  5. 打开 "电源 (购物车右下角)" 和 "计算机".
  6. 若要启动图像处理程序, 请双击屏幕上相应的快捷方式.
    注: 这取决于透镜的类型;这里, 老鼠视网膜.
  7. 创建新的临床研究并添加所需的协议。否则, 使用现有的临床研究和/或协议.
    1. 通过选择和 #34 添加新的研究; 研究名称和 #34;; #34; ID 和 #34;; #34; 处理臂规格和 #34; (这里, #34; 未和 #34;); 预定义和 #34; 扫描协议和 #34; 如果它们存在.
  8. 选择 #34; 考官和 #34; 在和 #34; 临床研究和 #34; 部分.
    注意: 对于一个新的 #34; 考官和 #34;, 去和 #34; 设置考官和 #38; 医生和 #34; 定义它.
  9. 通过单击添加患者, 在患者/考试部分添加新病人; 进入 #34; 身份证和 #34;, #34; 姓名和 #34;、#34; 姓氏和 #34;; #34; 性与 #34; #34;d 吃了生与 #34; (可选).
    注意: 在测试每只鼠标之前, 如果更方便的话。请确保该 ID 不长于10字符。对于鼠标, 两个眼睛的折射误差为 0, 轴向长度为 23.0.
  10. 单击和 #34; 添加考试和 #34; 选择所需的和 #34;P rotocol 和 #34; 通过添加和 #34;P 重置扫描和 #34; 从列表中, 从将首先测量的眼睛开始 (这里, 右眼), 或通过自定义扫描.
  11. 若要自定义扫描, 请使用现有的扫描作为模板并对其进行编辑, 或从头开始通过和 #34 创建它; 添加自定义扫描和 #34; 选项。将所有扫描添加到列表后, 使用 "#34" 定义新协议; 输入和 #34; 新协议名称和 #34; 选项 (OS:26 险恶, 左眼;26: 德克斯特, 右眼).
    注意: 在这里, 协议涉及三扫描: (i) 径向扫描, 具有1.4 毫米直径, 0 毫米水平和垂直偏移, 1000 行 a 扫描/b 扫描, 100 b 扫描/卷, 1 帧/b 扫描, 80 行非活动 a 扫描/b 扫描, 和1卷;(二) 矩形扫描, 长度和宽度为1.4 毫米, 0 和 #176; 角度, 0 毫米水平和垂直偏移, 1000 行 a 扫描/b 扫描, 100 B 扫描, 1 帧/b 扫描, 80 行非活动 a 扫描/b 扫描, 和1卷;和 (iii) 环形扫描, 最大直径为0.4 毫米和0.6 毫米, 0 毫米水平和垂直偏移, 1000 行扫描/b 扫描, 3 b 扫描/卷, 48 帧/b 扫描, 80 行非活动 a 扫描/b 扫描, 和1卷.

2。鼠标准备

  1. 眼球扩张和固定
      在数据采集前至少15分钟, 将10% 肾上腺素滴眼液注入老鼠眼中, 除去多余的, 并注入0.5% 卡滴眼液.
    1. 注: 第一次扩张可以做一次对所有的老鼠, 将在会议上进行测试。确保液体在室温下.
    2. 在诱导全麻 (步骤 2.2) 后, 立即管理0.4% 盐酸因滴眼液, 使其保持在3秒的位置以麻醉和固定眼睛。然后, 擦掉掉滴, 再重复10% 肾上腺素和0.5% 卡的灌注, 以确定眼睛是否有很好的扩张.
      注意: 确保液体在室温下, 并且老鼠不会吞下因.
  2. 全麻
    1. 在盐水中制备氯胺酮 (20 毫克/毫升) 和嗪 (1.17 毫克/毫升) 的麻醉液。存储在4和 #176; C 最多2周.
    2. 大约5分钟前测试, 腹腔注射 5-10 和 #181; L 的麻醉液每1克的身体质量, 取决于年龄和大小的鼠标.
      注意: 幼鼠和/或瘦老鼠需要较少的麻醉剂, 少花点时间麻醉, 但也能更快地苏醒。这里, 8 和 #181; 升/克 (160 毫克/千克氯胺酮, 9.33 毫克/千克的嗪).
    3. (可选) 用粘稠滴眼药水或眼部凝胶润滑眼睛, 以避免角膜干燥.

3。鼠标定位

  1. 用粘性 glycol-based 眼药水润滑眼睛以提供角膜水化.
    注意: 如果在考试中眼睛看起来很干燥, 请重新申请眼药水.
  2. 将鼠标包裹在一张外科纱布上以保持体温.
  3. 使用海绵或棉芯, 在每只眼睛上应用一层薄薄的眼部凝胶0.3% 甲, 以减少光的折射, 避免混浊, 并确保角膜水化。这样做的时候, 把睫毛和胡须移到一边.
  4. 将鼠标置于盒式磁带中, 并将其头部伸直并向前指向.
  5. 轻轻打开咬杆钳, 将杆放在嘴里; 用鼻带固定位置.
    注意: 确保咬杆位于卡带的中间.
  6. 如果右 (左) 眼正在测试, 请在右侧 (左) 侧放置一个棉卷.
  7. 同时在鼠标特定的镜头上保持夹紧的瞄准头, 通过逆时针旋转 Z 转换器螺钉将其对准眼睛.
  8. 通过转动和旋转卡带, 并通过转动咬杆和 X 转换器螺钉, 预先设定鼠标的位置; 目标是让右眼直视镜头, 从而使眼睛和镜片的光轴对准.
    注意: 如果鼠标太高或过低, 应首先使用 Y 型转换器螺钉.
  9. 选择 #34 中的第一个扫描; 考试和 #34; 单击 #34; 开始瞄准和 #34; 并对视网膜成像进行进一步的人工调整.
    1. 使用 Z 转换器螺钉, 在左侧面板上垂直移动视网膜 ( 图 2 , 水平 B 扫描对齐), 并水平在 r 上可选面板 ( 图 2 , 垂直 B 扫描对齐).
    2. 旋转盒式磁带, 通过将 ONH 向上或向下移动, 使 ONH 位于右侧面板的中间。使用咬杆螺钉在右侧面板上伸直视网膜。旋转卡带, 将 ONH 放置在左侧面板的中间.
    3. 使用 X 转换器螺钉在左侧面板上水平视网膜。记住每个调制器的主要功能, 进一步调整视网膜的位置以集中 ONH.
      注: 如有必要, 使用 Y 型转换器螺钉在右侧面板上上下移动 ONH。该位置可以在扫描之间的任何时间被细化.

4。ONH 和视网膜的 SD oct 成像

  1. 一旦内容具有调整, 请单击 #34; 启动快照和 #34; 开始 sd oct 扫描.
    1. 如果不需要3D 成像, 请取消选中 OCU 选项.
  2. 保存扫描和报表.
  3. 继续进行下一次扫描.
  4. 图像的第二眼, 在缩回镜头后, 相应地打开卡带, 重复步骤 3.6-4.3.

5。购置完成

  1. 当采集完成时, 将鼠标从卡带上取出, 用0.3% 甲的眼部凝胶涂抹在每只眼睛上, 并将鼠标放在加热板上唤醒.
  2. 上次购置后, 关闭软件并关闭计算机和 OCT 计算机 (电源按钮).
  3. 用消毒剂清洗卡带.

6。分析

  1. 用于视网膜层厚度测量, 请使用制造商提供的自动分割软件.
    1. 单击 和 #34;P atient 和 #34; , 选择所需的 和 #34; 考试和 #34; 然后单击 和 #34; 查看考试和 #34; 选项.
    2. 通过右键单击所需扫描的文件夹图标, 将所需的 oct 数据加载到 oct 软件中.
    3. 右键单击 B 扫描; 通过启用10测量卡尺来配置卡尺; 并输入它们的名称、角度和颜色.
    4. 通过右键单击 B 扫描来选择所需的卡尺; 将其相应放置到视网膜上进行测量.
      注意: 对于以 ONH 为中心的扫描, 在它的每一侧设置5卡尺, 彼此等距。对于 peripapillary 分析, 请确保卡尺没有放置太远的 ONH。对于径向扫描, 分析 OCT 软件选择的每扫描10图片。在 和 #34; 报告和 #34; 文件夹中可以找到它们的编号.
    5. 通过右键单击 B 扫描并单击 并 #34 将结果保存在电子表格软件程序中进行分析; 保存结果和 #34;
      注意: 结果可以在与扫描数据相同的文件夹中找到.
  2. 也可以使用自制的卡尺宏, #34; MRI 视网膜工具和 #34, 为开源图像处理程序开发 (参见材料表).
    1. 确保 #34; MRI 视网膜工具和 #34; 和 #34; 修改多边形剖面工具和 #34; 宏处于活动状态。加载图像。单击 m 按钮开始测量.
      注意: 宏自动在 ONH 的两侧创建一个0.2 毫米长的测量盒。每个卡带包含5测量点, 功能作为卡尺。它们的横向位置是不可更改的, 并为径向扫描中的 peripapilla 定制。盒式磁带的水平位置是预先定义的, 用来测量纤维/协变厚度, 但可以很容易地修改以测量 GC 复杂层。如果扫描质量较差, 则需要调整水平位置, 或者需要从分析中排除图片.
    2. 对于水平调整, 单击 "e" 按钮。在新开的 #34; ROI 管理器和 #34; 窗口中, 选择第一个卡带.
    3. 单击蓝色多边形按钮, 然后通过单击图片中测量图层的边框来调整第一个卡带的位置.
    4. 对第二个卡带进行重复, 首先在 #34 中选择它; ROI 管理器和 #34; 窗口, 然后单击相应的图像。点击 r 按钮测量。查看 #34 中的结果; 测量和 #34; 窗口.
      注意: 结果可以随时复制到电子表格软件程序中。它们包含了正确的卡带 (r), 左卡式 (l) 和总计: Intden-综合密度在卡带内的以下值;面积: 测量面积, 以 mm 2 ;长度的卡尺内的卡带, 在毫米;平均值: 在卡带内的平均信号强度;和 Std: 信号平均强度的标准误差.
    5. 继续执行下一图像.
    6. 进一步分析电子表格软件程序中的数据.
      注意: 要查找层的平均厚度, 请取十 Len 值.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

SD OCT 技术使视网膜的想象和厚度分析可以与组织学相媲美, 但速度更快且更详细 (图 3)。正如野生 C57Bl/6 小鼠所提出的, 即使 SD OCT 扫描 (图 3A, 右) 的质量不如视网膜横断面 (图 3A, 左) 的图像好, 它可视化更多的层 (例如, OLM)。此外, 它只需要大约40分钟, 包括小鼠准备, 与几天或几周的组织学分析。最后, 它不需要加工和染色, 如苏木, 红红, 和藏红花, 这可能损害组织和导致收集错误的数据。在 OCT 很容易测量的视网膜层包括纤维/协鑫, 彩光, INL, 组织, 仅, 是/OS, RPE, 和 C (图 3B), 因此允许对整个视网膜进行复杂的研究。因此, 视网膜结构的变化反映了疾病的发展。在 OPNs 的情况下, 这适用于视网膜和上, 从而纤维/协鑫和光子。

DOA 是最常见的 OPNs 之一, 其特点是纤维的退化和损失的11。由于突变的OPA1基因12, 它导致视力损害和失明。使用 Opa1delTTAG鼠标模型, 它携带人类复发的 c. 2708 delTTAG 突变, 它被发现 Opa1 haplo-不足阻碍视觉在性别依赖性的方式8,9。这是根据 OCT 测量视网膜厚度的基础上确定的, 它显示了 GC 复合层 (图 4A) 和 peripapillary 纤维 (图 4B, 4C) 在 Opa1+/-雌性中的渐进增厚。在这些实验中, 用标准卡尺进行矩形扫描, 并进行环形扫描的开源图像处理程序进行计算。对于径向扫描, 这往往是一个较低的质量, 并产生一个最小的10图像每视网膜分析, 一个自制的宏观发展。标准和自制卡尺 (图 4D) 的比较表明, 纤维/协鑫和 GC 复合层的厚度明显低于后者。这是因为标准卡尺是更厚, 更难以放置在边界的层。因此, 最好避免使用标准卡尺的薄层, 特别是在径向扫描。

总而言之, SD OCT 允许鼠标视觉分, 可以重复多个时间点。然而, OCT 扫描的类型和测量方法必须适应所调查的疾病, 因此视网膜层的问题。然而, OCT 提供了足够的信息来识别视网膜结构的缺陷。但是, 必须用另一种方法进一步分析这一点, 以提供对底层机制的全面理解。

Figure 1
图 1: SD OCT 眼科成像系统(A) 对 SD OCT 设备的底座和目标 RAS 部件的概述。(B) 目标 RAS 组件概述。答: 电脑, B: 电源, C: oct 发动机参考臂, D: SD oct 探头, E: 鼠标专用镜头, F: Z 转换器, G: 目标-RAS 表, H: Y 型转换器, I: 卡带 (旋转), J: 咬杆, K-鼻带, L: 卡式旋转, M: X 翻译, 和 N: 瞄准尖端。此 figute 为 color-coded, 如图 2所示, non-modulators 的视网膜位置以粉红色标记。请单击此处查看此图的较大版本.

Figure 2
图 2: 定位视网膜.B 扫描对齐的水平 (左) 和垂直 (右) 视图。箭头对应于 color-coded 调制器引起的运动。请单击此处查看此图的较大版本.

Figure 3
图 3: 视网膜层.(A) 野生小鼠视网膜组织学后苏木、曙红、红花染色 (左) 和 SD OCT (右);缩放栏:50 µm (B) 视网膜厚度测量3月老野生小鼠;n = 14, 平均± SEM, 比例栏:50 µm. GC: 神经节细胞, 纤维/协的: 视网膜神经纤维层/神经节细胞层, 彩光: 内状层, INL: 内核层, 组织: 外状层, 仅: 外层核层, 是/OS: 感光内段/外裂片, RPE: 视网膜色素上皮, 和 C: 脉络膜。请单击此处查看此图的较大版本.

Figure 4
图 4: 模范 SD-OCT 测量.(A) GC 复杂层厚度, 以矩形扫描 ONH 为中心, 用标准卡尺测量;Opa1delTTAG鼠标线, n = 4, 平均± SEM, ** 和 #60; 0.01 用学生的 t 检验进行评估。(B) Peripapillary 纤维在 SD OCT 中 (C) Peripapillary 纤维在环形扫描中的厚度, 确定为每个场的纤维面积计算;Opa1delTTAG雌性小鼠, n = 5-11, 平均± SEM, * p & #60; 0.05 用学生的 t 检验评定。(D) 纤维/协鑫和 GC 复合层厚度的径向扫描, 测量标准或自制卡尺分别为3或10扫描;野生小鼠, n = 8, 平均± SEM, ** 和 #60; 0.01, *** 和 #60; 0.001 通过学生的 t 检验评定。纤维/协鑫-视网膜神经纤维层/神经节细胞层, GC: 神经节细胞。图 A-c 改编自 Sarzi et al.9.请单击此处查看此图的较大版本.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

OCT 系统是一种非侵入性的活体成像方法, 它提供了高分辨率的视网膜横断面扫描。因此, 它的主要优势是它的详细分析的潜力, 与极好的机会, 转置协议常规适用于人类的鼠标模型。

在 Opa1delTTAG突变小鼠的例子中, SD OCT 结果显示了纤维和 GC 复合层厚度的增加, 这使得对 DOA 病理生理学的进一步探索9。这是不可能完全通过组织学分析。相比之下, 组织学不提供可视化整个视网膜的可能性, 不像环形或径向 OCT 扫描。此外, 考虑到有几个时间点的动物数量增加, 它更费时而且费用更高。事实上, SD OCT 铺平了道路, 在 DOA, m ü ller 细胞9的新的视网膜细胞类型的牵连。这做了尽管事实没有单细胞决议和具体细胞证明是可能的与系统。相反, 以厚度为重点和/或一般的国家重点分析的 peripapillary 地区, 足以检测细胞恶化。然后再进行组织学调查, 可以清楚地知道要找什么。因此, 同样的方法也可以用于评价治疗干预, 以防止或刹车视网膜变性。

为了进一步提高 OCT 的实用性, 国产卡尺的研制和精度要比标准的高得多。尽管标准比纤维/协鑫的更厚, 但有些团队仍然使用它, 但对于更大的层13。在这里, 我们集中了对视网膜的比较分析在10射线扫瞄每视网膜, 所有在 peripapillary 区域。纤维单独不是可测量的在射线扫瞄任一方式。这层是太薄和含糊;因此, 对纤维/协鑫和 GC 复合层进行了测量。同时, 我们成功地测量了纤维使用环形扫描, 这证明有利于小鼠分。然而, 可靠性可能是有争议的。在所有这些方法中, 关键的一步是将扫描集中在 ONH 上, 并在没有阴影和混浊的情况下对视网膜进行可视化。前者可以很容易地按照该协议的步骤来调整视网膜的位置。后者取决于角膜和晶体的透光率。例如, 如果眼胶的分布不均匀, 扫描是模糊的,/或视网膜出现弯曲。为了解决这个问题, 这将是足够的正确重新申请凝胶。如果晶体是不透明的, 则扫描是暗的或不完整的。这里的解决方案是, 如果透明的晶体返回, 将再次扫描一天。另一个可能的原因是质量差的扫描是存在的障碍, 如胡须或睫毛。这些可以很容易地删除, 搁置和应用一小眼凝胶, 以保持它们到位。其他的分析方法, 不同的设备类型, 扫描类型, 角度, 和其他参数也存在, 并有不同数量的分析图像。如果结果质量仍然不理想, 必须考虑这一点。例如, Liu et al.在多个角度进行了径向扫描13, 相比之下, 我们的径向扫描仅有一个, 报告的层数略厚。然而, 本文所提出的 OCT 采集和分析方法适合于 peripapillary 小鼠视网膜视网膜的分析。

总之, OCT 是一项潜力巨大的技术。它能够检测视网膜结构的细微变化--包括视网膜, 特别是在 OPNs--并证明对视觉科学是不可缺少的。因此, 所提出的协议是实用的 OPN 小鼠模型分, 以及评价的新疗法。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

作者没有什么可透露的。

Acknowledgments

这项工作由 Inserm, 大学蒙彼利埃, 视网膜法国, 联合国家 des Aveugles et Déficients Visuels (UNADEV), 协会综合征钨, 基金会倾吐 la 研究 Médicale, 法兰西基金会和卓越实验室支持EpiGenMed 计划。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Mice
Opa1delTTAG mouse Institute for Neurosciences in Montpellier, INSERM UMR 1051, France - Opa1 knock-in mice carrying  OPA1 c.2708_2711delTTAG mutation on C57Bl6/J background
Name Company Catalog Number Comments
Equipment
EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System Bioptigen, Leica Microsystems, Germany - Spectral-Domain Optic Coherence Tomography system
EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System Software Bioptigen, Leica Microsystems, Germany - Software for OCT acquisition and analysis
ImageJ 1.48v Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA - Software for analysis, requires downloading and installing two hommade macros: http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool
Self-regulating heating plate Bioseb, France BIO-062 Protection against hypothermia
Name Company Catalog Number Comments
Supplies
Nose Band - - Elastic band
Gauze pads 3" x 3" Curad, USA CUR20434ERB Protection against hypothermia
Dual Ended Cotton tip applicator Essence of Beauty, CVS Health Corporation, USA - Gel application
Cotton Twists CentraVet, France T.7979C.CS Mouse positioning
Name Company Catalog Number Comments
Reagents and Drugs
Néosynéphrine Faure 10% Laboratoires Europhtha, Monaco - Eye dilatation
Mydriaticum 0.5% Laboratoires Théa, France 3397908 Eye dilatation
Cebesine 0.4% Laboratoire Chauvin, Bausch&Lomb, France 3192342 Local anesthesia
Imalgene 1000 Merial, France/CentraVet, France IMA004 General anesthesia
Rompun Bayer Healthcare, Germany/CentraVet, France ROM001 General anesthesia, analgesia, muscle relaxation
NaCl 0.9% Laboratoire Osalia, France  103697114 Physiological serum
Systene Ultra Alcon, Novartis, USA - Hydration of eyes
GenTeal' Alcon, Novartis, USA - Ophtalmic gel to minimize light refraction and opacities
Aniospray Surf 29 Laboratoires Anios, France 59844 Desinfectant

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Drexler, W., Fujimoto, J. G. State-of-the-art retinal optical coherence tomography. Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).
  2. Grenier, J., et al. WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessment of Clinical Severity. Ophthalmology. 123 (9), 1989-1998 (2016).
  3. Zmyslowska, A., et al. Retinal thinning as a marker of disease progression in patients with Wolfram syndrome. Diabetes Care. 38 (3), e36-e37 (2015).
  4. Fischer, M. D., et al. Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography. PLoS One. 4 (10), e7507 (2009).
  5. Grieve, K., Thouvenin, O., Sengupta, A., Borderie, V. M., Paques, M. Appearance of the Retina With Full-Field Optical Coherence Tomography. Invest Ophthalmol Vis Sci. 57 (9), OCT96-OCT104 (2016).
  6. Chang, B., et al. Retinal degeneration mutants in the mouse. Vision Res. 42 (4), 517-525 (2002).
  7. Mustafa, S., Pandit, L. Approach to diagnosis and management of optic neuropathy. Neurol India. 62 (6), 599-605 (2014).
  8. Sarzi, E., et al. The human OPA1delTTAG mutation induces premature age-related systemic neurodegeneration in mouse. Brain. 135 (Pt 12), 3599-3613 (2012).
  9. Sarzi, E., et al. Increased steroidogenesis promotes early-onset and severe vision loss in females with OPA1 dominant optic atrophy. Hum Mol Genet. 25 (12), 2539-2551 (2016).
  10. Delettre-Cribaillet, C., Hamel, C. P., Lenaers, G., et al. Optic Atrophy Type 1. Gene Reviews. Pagon, R. A. 7 (2007), University of Washington. Seattle. (2007).
  11. Lenaers, G., et al. Dominant optic atrophy. Orphanet J Rare Dis. 7 (46), (2012).
  12. Delettre, C., et al. Nuclear gene OPA1, encoding a mitochondrial dynamin-related protein, is mutated in dominant optic atrophy. Nat Genet. 26 (2), 207-210 (2000).
  13. Liu, Y., et al. Monitoring retinal morphologic and functional changes in mice following optic nerve crush. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (6), 3766-3774 (2014).

Tags

神经生物学 问题 127 光学相干断层扫描 小鼠 视网膜成像 视网膜神经节细胞 视网膜纤维层,在体内 厚度 peripapillary
光学相干断层扫描: 成像小鼠视网膜神经节细胞<em>在体内</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Jagodzinska, J., Sarzi, E.,More

Jagodzinska, J., Sarzi, E., Cavalier, M., Seveno, M., Baecker, V., Hamel, C., Péquignot, M., Delettre, C. Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo. J. Vis. Exp. (127), e55865, doi:10.3791/55865 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter