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Biology

संयंत्र / सूक्ष्मजीव आणविक संबंधों और सिगनलिंग के एक साथ और व्यवस्थित विश्लेषण के लिए एक हाइड्रोपोनिक सह-खेती प्रणाली

Published: July 22, 2017 doi: 10.3791/55955
Automatic Translation
1,2, 2, 3, 1,3
1London Research and Development Centre, Agriculture & Agri-Food Canada, 2Department of Biology, University of Western Ontario, 3Department of Microbiology and Immunology, University of Western Ontario

Summary

वर्णित हाइड्रोपोनिक cocultivation प्रणाली धातु जाल स्क्रीन के साथ बरकरार पौधों का समर्थन करता है और बैक्टीरिया के साथ उन्हें cocultivates। संयंत्र के ऊतक, बैक्टीरिया और स्रावित अणुओं को फिर से नीचे की ओर के विश्लेषण के लिए अलग-अलग काटा जा सकता है, साथ ही साथ दोनों पौधों के मेजबानों के आणविक प्रतिक्रियाओं की जांच की जा सकती है और जांच की जाने वाली सूक्ष्मजीवों या सूक्ष्मजीवों के बारे में बातचीत की जा सकती है।

Abstract

जटिल पौधे-सूक्ष्म सिग्नल प्रक्रियाओं को चित्रित करने के लिए प्राकृतिक पौधे-सूक्ष्म जीवों की बातचीत का अनुकरण करना एक प्रायोगिक डिजाइन है। अरबिडोप्सिस थालियाना - एग्रोबैक्टीरियम ट्यूमेफिएन्स जीवाणु रोगजनन और पौधों की बातचीत का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल प्रणाली प्रदान करता है। पौधे का पिछला अध्ययन - एग्रोबैक्टीरियम परस्पर क्रियाएं बड़े पैमाने पर संयंत्र सेल निलंबन संस्कृतियों, पौधों के कृत्रिम घावों या कृत्रिम रूप से माइक्रोबियल वायरलेंस कारक या कृत्रिम रसायनों द्वारा पौधे की सुरक्षा पर भरोसा करती हैं। हालांकि, पौधों और सूक्ष्म जीवों को स्थानिक और लौकिक शिष्टाचारों में पहचान और जवाब देने में पौधों में प्राकृतिक सिगनलिंग से ये विधि अलग-अलग हैं। यह काम हाइड्रोपोनिक कोकोल्टीविएशन सिस्टम को प्रस्तुत करता है जहां बरकरार पौधों को धातु जाल स्क्रीनों द्वारा समर्थित किया जाता है और एग्रोबैक्टीरियम के साथ उर्वरित होता है। इस cocultivation प्रणाली में, कोई सिंथेटिक phytohormone या रासायनिक कि micr लाती हैओपिअल वायरलेंस या प्लांट डिफेन्स पूरक है। हाइड्रोपोनिक cocultivation प्रणाली बारीकी से प्राकृतिक पौधों-सूक्ष्म जीव बातचीत और planta में संकेत समस्थिति जैसा दिखता है। संयंत्र जड़ों को एग्रोबैक्टेरियम युक्त माध्यम से अलग किया जा सकता है, और दोनों संयंत्र मेजबानों के संकेत और प्रतिक्रियाएं और इंटरैक्टिंग रोगाणुओं की एक साथ और व्यवस्थित रूप से जांच की जा सकती है। किसी भी समय के अंतराल / अंतराल पर, पौधों के ऊतकों या बैक्टीरिया को विभिन्न "ओमिक्स" विश्लेषणों के लिए अलग से काटा जा सकता है, इस प्रणाली की शक्ति और प्रभावकारिता का प्रदर्शन। हाइड्रोपोनिक कोकोलिटिवेशन सिस्टम को आसानी से अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है: 1) विविध पौधे-सूक्ष्म जीवों के सिस्टम के पारस्परिक संकेत, 2) एक प्लांट होस्ट और कई माइक्रोबियल प्रजातियों ( यानी माइक्रोबियल कॉन्सर्टिया या माइक्रोबोमास) के बीच सिग्नलिंग, 3) पोषक तत्वों और रसायनों को किस प्रकार फंसाया जाता है पौधे-सूक्ष्म सिग्नलिंग में, और 4) कैसे रोगाणुओं संयंत्र मेजबान के साथ बातचीत करते हैं और जैविक ओ के लिए पौधे की सहिष्णुता में योगदान करते हैंआर एबियोटिक तनाव

Introduction

संयंत्र से जुड़े रोगाणुओं में जैव-रासायनिक साइक्लिंग, बायोरेमेडिएशन, जलवायु परिवर्तन, पौधों की वृद्धि और स्वास्थ्य का शमन, जैविक और अबायटीक तनावों के लिए पौधे सहिष्णुता में महत्वपूर्ण भूमिका निभाएं। सूक्ष्मजीव पौधों की कोशिका दीवार संपर्क के माध्यम से और परोक्ष रूप से रासायनिक स्राव के माध्यम से और 1 , 2 , 3 के संकेत के माध्यम से पौधों के साथ बातचीत करते हैं। जीवाणुओं द्वारा संक्रमण का विरोध करने के लिए पौधों ने प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष तंत्र विकसित किए हैं। डायरेक्ट डिफेंस में स्ट्रक्चरल डिफेंस और रक्षा प्रोटीन की अभिव्यक्ति शामिल है, जबकि अप्रत्यक्ष सुरक्षा में द्वितीयक पौधे के मेटाबोलाइट उत्पादन और रोगज़नुओं 4 , 5 पर हमला करने वाले जीवों के आकर्षण शामिल हैं। प्लांट-व्युत्पन्न रूट एक्स्टेट्स, स्राक्र्रिज, म्यूसीलाज, म्यूसिगेल, और लाइसेट्स, रेजोस्फीयर की भौतिक-रासायनिक गुणों को आकर्षित करने या पीछे हटानारोगाणुओं की मेजबानी 6 मूल स्राव की रासायनिक संरचना प्रजाति-विशिष्ट है, जिससे एक चयनात्मक फिल्टर के रूप में कार्य किया जाता है जो ऐसे सूक्ष्मजीवों को ऐसे यौगिकों को पहचानने में सक्षम बनाता है जो कि rhizosphere 6 में पनपने में सक्षम है। इस प्रकार, संगत माइक्रोबियल प्रजातियों को अपने संगठनों को सक्रिय करने और बढ़ाने के लिए प्रोत्साहित किया जा सकता है, या तो संयंत्र होस्ट 1 के लाभ या हानि के लिए।

पौध-सूक्ष्म जीवों की बातचीत को समझना, पौध उत्पादकता और पारिस्थितिक तंत्र के कामकाज को बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण है, चूंकि अधिकांश माइक्रोबियल और रासायनिक एक्सपोजर रूट स्ट्रक्चर और मिट्टी-एयर इंटरफेस 2 , 6 , 7 , 8 में होता है । हालांकि, भूगर्भीय पौधे-सूक्ष्म जीवों की बातचीत और पारस्परिक प्रतिक्रियाओं की परीक्षा इसकी चतुराई से एक चुनौती रही है जटिल और गतिशील प्रकृति और प्राकृतिक रूट संरचना और पौधों के आकारिकी के साथ उपयुक्त प्रायोगिक मॉडल की कमी, कसकर नियंत्रित होने वाली वृद्धि स्थितियों के तहत। सबसे ज्यादा अध्ययन किए गए फाइटॉपैथोजेन के रूप में, एग्रोबैक्टेरियम , चेरी, सेब, नाशपाती, अंगूर और 9 गुलाब सहित कृषि और बागवानी महत्व के साथ पौधों की एक विस्तृत श्रृंखला को संक्रमित करता है। एग्रोबेक्टेरियम संयंत्र-रोगज़नक़ व्यवहार को समझने के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल जीव है और संयंत्र परिवर्तन और संयंत्र इंजीनियरिंग 10 , 11 , 12 , 13 , 14 में एक शक्तिशाली उपकरण है।

आणविक पौधे- एग्रोबैक्टेरियम बातचीत का कई दशकों से अच्छी तरह से अध्ययन किया गया है, और एग्रोबैक्टीरियम रोगजनकता की वर्तमान समझ 9 व्यापक है ,एफ "> 11 , 15 , 16. एग्रोबैक्टेरीयम रोगजनकता काफी हद तक पौधों से प्राप्त संकेतों को समझने की अपनी विकसित क्षमताओं को जिम्मेदार ठहराता है, जिसके परिणामस्वरूप इसके खतरे कार्यक्रम और सेल-टू-सेल संचार, तथाकथित कोरम सेंसिंग 17 का ठीक स्वरुपरण हो जाता है। एग्रोबैक्टेरियम वायरलेंस प्रोग्राम को कई सिग्नल द्वारा विनियमित किया जाता है जो कि रेजोस्फीयर में उपलब्ध होता है और इसमें 2-घटक प्रणालियों के दो सेट, च्वीजी / आई सिस्टम और वीरिया / जी सिस्टम शामिल होते हैं। रेजोस्फ़ेयर में एसिडिक सिस्टम्स , सीएचजी / आई , वीएए / जी के प्रतिलेखन को सक्रिय करते हैं। , और कई अन्य virE0, virE1, virH1, virH2, और प्रकार छठी स्राव प्रणाली (T6SS) 18। के जीन सहित एग्रोबैक्टीरियम pathogenicity, में शामिल जीनों संयंत्र व्युत्पन्न acetosyringone (4'-हाइड्रोक्सी-3 ', 5 सहित फेनिलक यौगिकों, '-डिमैथॉक्सीएसीटोपोनोन), वी को सक्रिय करेंफास्फारिलीकरण संकेत तंत्र 19 के माध्यम से ईरा / जी 2-घटक प्रणाली। वीरा / जी तो पूरे वीर regulon सक्रिय करता है, इसके ट्यूमर उत्प्रेरण (ती) प्लाज्मिड से हस्तांतरण और एक ~ 20 केबी बैक्टीरियल डीएनए टुकड़ा बुलाया हस्तांतरण डीएनए (टी डीएनए) के एकीकरण संयंत्र नाभिक 16 में हो जाती है। टी डीएनए संयंत्र के संश्लेषण के लिए जिम्मेदार जीनों वहन करती हार्मोन इण्डोल-3- एसिटिक एसिड (आईएए) (iaaM और iaaH) और साइटोकिनिन (IPT), और एक बार पौधों की कोशिकाओं में व्यक्त किया, इन phytohormones की बड़ी मात्रा में उत्पादन कर रहे हैं। यह असामान्य ऊतक प्रसार और पौधे के ट्यूमर के विकास का परिणाम है, जिसे ताज पल रोग कहा जाता है, जो पौधों 9 , 11 , 20 के लिए एक पुरानी और पुनरुत्थान समस्या है। एएएए एग्रोबैक्टेरियम विषाक्तता को दबाने के लिए या एग्रोबैक्टीरियु को कम करने के लिए साल्लिसिलिक एसिड और गामा-एमिनो बोटोइरिक एसिड के साथ सामूहिक रूप से कार्य करता है मीटर कोरम संवेदन (QS) 17, 21, 22। इस दमन का मुकाबला करने के लिए, टी-डीएनए ऑप्लेन बायोसिंथेथेसिस के लिए जीन भी करता है, जो एग्रोबैक्टेरीयम कोरोमम को एग्रोबैक्टेरीयम पैथोजेनिकता को बढ़ावा देने के लिए सक्रिय करता है और यह 22 , 23 रोगज़नक़ों के लिए पोषक स्रोत के रूप में भी कार्य करता है।

एग्रोबैक्टीरियम -प्लान्ट इंटरैक्शन की पूरी गहरी समझ और परिणामस्वरूप प्लांट होस्ट में टी-डीएनए हस्तांतरण के बावजूद, बातचीत के प्रारंभिक चरण में जटिल सिग्नलिंग इवेंट कम अच्छी तरह से समझ गए हैं। यह एग्रोबैक्टीरियम- प्लांट सिग्नलिंग की जांच के लिए पारंपरिक तरीकों की सीमाओं के कारण आंशिक रूप से है। प्लांट सेल निलंबन संस्कृतियों और कृत्रिम साइट-विशिष्ट घावों को आम तौर पर आणविक पौधे-सूक्ष्म जीवों की बातचीत का अध्ययन करने के लिए 24 ,26 , 27. हालांकि, सेल निलंबन में विशिष्ट पौधों के आकारिकी की कमी होती है, विशेष रूप से, पौधे निलंबन कोशिकाओं में जड़ संरचना और रूट एक्सयूड्स नहीं होते हैं, जो कि माइक्रोबियल केमोटाक्सिस और वायरलेंस 28 , 29 को सक्रिय करने के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैं। और रूट संरचना कृत्रिम रूप से घायल हुए पौधों द्वारा संबोधित किया गया है, जो साइट-विशिष्ट संक्रमण की सुविधा देता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रत्यक्ष रूप से संक्रमित पौधे के ऊतक 30 , 31 में प्रेरित पौधे रक्षा संबंधी जीनों का पता लगाना पड़ता है। हालांकि, कृत्रिम घाव प्रकृति में रोगज़नक़ों के संक्रमण से काफी अलग है विशेष रूप से घायल होने से जशोनीक एसिड (जेए) संचय होता है, जो प्राकृतिक रूप से प्राकृतिक पौधों के संकेत और बचाव के साथ हस्तक्षेप करता है 26. इसके अलावा, सिंथेटिक रसायनों को आम तौर पर कृत्रिम रूप से पौधों के मेजबान प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करने के लिए प्रयोग किया जाता हैया रोगजन विषाक्तता हालांकि planta में सांद्रता को प्रतिबिंबित करता इस तरह के रासायनिक यौगिकों के पूरकता संभव है, इस तरह के पूरकता जड़ रिसाव के प्रसार धीरे-धीरे आसपास के rhizosphere है, जो एक कीमोटैक्टिक ढाल रोगाणुओं 28, 32 द्वारा महसूस उत्पन्न में के लिए खाते में नहीं है। पौधे-सूक्ष्म जीवों की बातचीत का अध्ययन करने के लिए पारंपरिक दृष्टिकोण की सीमाओं को देखते हुए, प्राप्त आंकड़ों की सटीकता और गहराई को बाधित और प्रतिबंधात्मक बनाया जा सकता है, और परंपरागत तरीकों से उत्पन्न ज्ञान सीधे पौधे में अनुवाद नहीं हो सकता है। पौधे के कई पहलू- एग्रोबेक्टेरियम सिगनलिंग अभी तक पूरी तरह से समझा नहीं गया है, विशेष रूप से अंतःक्रियाओं के प्रारंभिक चरण में, जब बीमारी के लक्षण अभी तक विकसित नहीं हुए हैं।

पारंपरिक तरीकों की सीमाओं में संशोधन करने के लिए, यह काम एक सस्ती, कसकर नियंत्रणीय, और लचीला हाइड्रोपोनिक सी प्रस्तुत करता है।ऑक्विलिवेशन सिस्टम जो शोधकर्ताओं को आणविक पौधे-सूक्ष्म जीवों की बातचीत के प्रारंभिक चरण में जटिल संकेत और प्रतिक्रिया के रास्ते में गहरी अंतर्दृष्टि प्राप्त करने की अनुमति देता है। पौधों के पौधों, जड़ exudates, विकास की स्थिति, और पौधों 33 , 34 पर धातु विषाक्तता के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए हीड्रोपोनिक्स का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। छोटे स्थानिक आवश्यकताओं, विभिन्न पौधे के ऊतकों की पहुंच, पोषक तत्व / पर्यावरणीय परिस्थितियों के नियंत्रण और कीट / बीमारी नियंत्रण के साथ हीड्रोपोनिक मॉडल के कई फायदे हैं। हाइड्रोपोनिक प्रणालियों, एगर / फिटोआगर चढ़ाना तकनीक की तुलना में पौधे वृद्धि के लिए सीमित हैं, जो आमतौर पर 2-3 सप्ताह के बाद वृद्धि को सीमित करती हैं। महत्वपूर्ण रूप से, पूरे संयंत्र संरचनाओं के रखरखाव से माइक्रोबियल केमोटाक्सिस और वायरलेंस इंश्योशन 8 , 2 9 के लिए आवश्यक प्राकृतिक रूट स्राक्रिशन की सुविधा मिलती है। प्रणाली descriयहां पर बिस्तर 33 , 34 के मुकाबले सरल और कम श्रमिक है यह कम भागों का उपयोग करता है और मानक कैंची के अलावा किसी अन्य उपकरण की आवश्यकता नहीं होती है। यह धातु के जाल (जैसा नायलॉन 33 का विरोध करता है) का उपयोग करता है, पौधों की वृद्धि के लिए एक मजबूत समर्थन और माइक्रोबियल विकास का समर्थन करने के लिए मिलाते हुए बाँझ शर्तों के तहत वातन की एक सरल विधि के रूप में। इसके अलावा, सिस्टम पौधों की वृद्धि का समर्थन करने के लिए विभिन्न आकारों के धातु के जाल का उपयोग कर सकता है, जो अपनी जड़ों की चौड़ाई को सीमित किए बिना विविध पौधों की प्रजातियों को समायोजित करता है।

यहां प्रस्तुत हाइड्रोपोनिक नगरीय तंत्र में, पौधों को एक बाँझ हीड्रोपोनिक प्रणाली में खेती की जाती है जहां पौधों की जड़ों में इनोक्लेटेड बैक्टीरिया के विकास के लिए कार्बनिक यौगिकों को छिपाना होता है। इस cocultivation प्रणाली में, कोई कृत्रिम रसायनों, जैसे संयंत्र हार्मोन, रक्षा elicitor, या virulence-inducing रसायनों, पूरक हैं, जो प्राकृतिक सेल को दर्शाता हैपौध-सूक्ष्म अंतर के दौरान साइनऑनिंग होमोस्टेसिस इस हाइड्रोपोनिक cocultivation प्रणाली के साथ, यह संभव था एक साथ एग्रोबैक्टीरियम द्वारा संक्रमण पर Arabidopsis थालिअना कर्नल -0 जड़ ऊतकों में जीन की अभिव्यक्ति है, साथ ही Arabidopsis साथ cocultivation पर एग्रोबैक्टीरियम जीन की सक्रियता निर्धारित करने के लिए। यह आगे दिखाया गया कि यह तंत्र एग्रोबैक्टीरियम ( चित्रा 1 ) के साथ सिकुड़ना (संक्रमण) पर पौधे जड़ों के साथ-साथ पौधे की जड़ों के लिए एग्रोबैक्टीरियम लगाव का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है।

आकृति 1
चित्रा 1: नमूना विश्लेषण के साथ, हाइड्रोपोनिक कोकिल्टी सिस्टम का अवलोकन। पौधों मेष के शीर्ष पर बढ़ी जाती हैं (जाल के ऊपर गोली मारती है), जलीय वायुमंडल में डूबे जड़ों के साथ, जो तब जीवाणुओं के साथ inoculated हैया कोकल्चर संयंत्र के ऊतकों और बैक्टीरिया को एक साथ निष्कर्षों और विश्लेषण के लिए अलग किया जाता है। यह आंकड़ा संदर्भ 35 से संशोधित किया गया है।

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Protocol

1. प्रायोगिक योजना

  1. प्रयोग के विशिष्ट लक्ष्यों को निर्धारित करें
  2. नीचे पूरे प्रोटोकॉल के माध्यम से पढ़ें। निर्धारित करें कि कौन सा अनुभाग विशिष्ट लक्ष्यों के लिए प्रासंगिक हैं और क्या कोई संशोधन किया जाना चाहिए। उदाहरण के लिए नीचे देखें
    1. विचार करें कि क्या प्रयोग ए थलियाना पौधों और ए। त्युफासाइंस बैक्टीरियम, नीचे, या किसी अन्य पौधे-सूक्ष्म जीव संयोजन का उपयोग करेगा।
      नोट: जबकि विभिन्न पौधों की प्रजातियों का उपयोग किया जा सकता है, पौधों की जड़ों की मोटाई को एक अलग-आकार के जाल (चरण 3.3), और वृद्धि पैरामीटर (चरण 3.10-3.11, और 4.4) और हाइड्रोपोनिक टैंक आकार और मध्यम मात्रा (चरण) की आवश्यकता हो सकती है 4.2) को भी समायोजन ( चित्रा 2 ) की आवश्यकता हो सकती है। सूक्ष्मजीवों को आसानी से शुद्ध संस्कृतियों, मिश्रित प्रजातियों (संयोजी), या पर्यावरण के नमूनों (सूक्ष्मजीवों) से ढक दिया जा सकता है, लेकिन कोई भी परिवर्तन प्रोटोकॉल को प्रभावित कर सकता है, विशेष रूप से कदम 4.5।
    2. इसपर विचार करेंउन प्रयोगों के प्रकार जिन्हें नमूने का विश्लेषण करने के लिए उपयोग किया जाएगा।
      नोट: प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी (चरण 5) एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर के निर्माण के साथ लेबल किए जाने वाले जीवों की आवश्यकता होती है।
  3. डिजाइन उचित नियंत्रण हाइड्रोपोनिक टैंकों को बिना रोपे के नियंत्रण वाले जीवाणुओं और टैंकों से संक्रमित किए जाने वाले पौधों को बिना बैक्टीरिया से निरुपित किया जा सकता है।
  4. उचित संख्या में बीज और हाइड्रोपोनिक टैंकों के साथ प्रयोग करें। नियंत्रणों पर विचार करें, जैविक प्रतिकृतियां (न्यूनतम में 3), और सभी विश्लेषणों के लिए आवश्यक ऊतक की मात्रा।
  5. प्रायोगिक लक्ष्यों (चरण 4.8) के लिए उपयुक्त लंबाई निर्धारित करें।
  6. आवश्यकतानुसार, नीचे दिए गए किसी भी चरण में संशोधन करें।

चित्र 2
चित्रा 2. चित्रा 2. अन्य पौधों के उदाहरण जो कि एक पी द्वारा समर्थित, हाइड्रोपोनिक सिस्टम में खेती की जा सके मेटल मेष के लेटफॉर्म पौधों के बीज और खेती के विभिन्न प्रकार के धातु के एक सेट की संगतता। ( ए ) स्टेनलेस स्टील के प्रकार 304 वेल्डेमेश 3 × 3 जाश × .047 " विकिया फैबाना के लिए डाय वायर। ( बी ) स्टेनलेस स्टील के प्रकार 304 वेल्डेमेश 4 × 4 जाश × .035" ज़िया मेस के लिए डाय वायर ( सी ) स्टेनलेस स्टील के प्रकार 304 वेल्डेमेश 4 × 4 जाश × .032 " ग्लाइसिन मैक्स (सोयाबीन) के लिए डाय वायर। ( डी ) स्टेनलेस स्टील के प्रकार 304 वेल्डेमेश 6 × 6 मेष ×047" रेफानस सैटिवास के लिए डाय वायर (सर्दियों मूली)। (ई) स्टेनलेस स्टील प्रकार 304 weldmesh 6 × 6 × जाल 0.047 "ट्रिटिकम एसपीपी के लिए व्यास तार। (एफ) स्टेनलेस स्टील प्रकार 304 weldmesh 6 × 6 × जाल .035" मुझे एक ई सैटाईवस के लिए व्यास तार। यह आंकड़ा संदर्भ 35 से संशोधित किया गया है।955fig2large.jpg "target =" _ blank "> कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

2. संयंत्र बीज सतह नसबंदी

  1. भंवर (उच्च गति पर) ए थेलियाना के लगभग 200 बीज एक सूक्ष्मदर्शी ट्यूब में 500 μL विआयनीकृत पानी के साथ। बड़े बीज के साथ पौधों की प्रजातियों के लिए, सतह नसबंदी की सुविधा के लिए एक बड़ी ट्यूब का उपयोग करें।
  2. इस तालिका को शीर्ष-क्रम में माइक्रोसॉसिटरिफ्यू में 30 एस के लिए लगभग 9 000 XG में अपकेंद्रित्र करें। एक विंदुक का उपयोग कर पानी (सतह पर तैरता) निकालें
  3. बीज और भंवर के लिए 300 μL 2% सोडियम हाइपोक्लोराइट जोड़ें। 1 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दें बड़े बीज के साथ पौधों की प्रजातियों के लिए, बीज को कवर करने के लिए बड़ी मात्रा का उपयोग करें।
  4. तालिका शीर्ष माइक्रोप्रोसिफ में 30 एस के लिए लगभग 9 000 xg पर अपकेंद्रित्र। एक विंदुक का उपयोग कर सोडियम हाइपोक्लोराइट समाधान निकालें।
  5. बीज और भंवर के लिए 500 μL बाँझ, विआयनीकृत पानी जोड़ें। लगभग 9,000 XG के लिए अपकेंद्रित्र30 एस और एक बाँझ पिपेट का उपयोग कर पानी को हटा दें।
  6. चरण 2.5 एक अतिरिक्त 4 बार दोहराएं।
  7. बीज और भंवर में 500 μL 70% इथेनॉल जोड़ें। 1 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दें
  8. तालिका शीर्ष माइक्रोप्रोसिफ में 30 एस के लिए लगभग 9 000 xg पर अपकेंद्रित्र। एक विंदुक का उपयोग कर 70% इथेनॉल निकालें।
  9. चरण 2.5 एक अतिरिक्त 5 बार दोहराएं।
  10. 500 μL बाँझ, अल्ट्रापरेर पानी में निष्फल बीज को फिर से बाँट दें।

3. बीज अंकुरण और पौधों की अर्ध-ठोस खेती

  1. अर्ध-ठोस मर्सिगेज और स्कूॉग (एमएस) माध्यम तैयार करें: 2.165 ग्राम / एल एमएस बेसल लवण; 10 जी / एल सुक्रोज; 0.25 ग्राम / एल एमईएस; और 59 एमएल / एल बी 5 विटामिन मिश्रण, पीएच 5.75, 4 जी / एल फ़्योटोगर के साथ।
  2. एमएस मध्यम आटोक्लेव करें प्रत्येक बाँझ गहरे पेट्री डिश (100 x 25 मिमी 2 ) में इसे 25 एमएल डालो।
  3. प्रत्येक पेट्री डिश के लिए, स्टेनलेस स्टील के जाल के एक 90 x 90 मिमी वर्ग का काटा।
    नोट: ए थीलियाना <के लिए अनुशंसित मेष / Em> 304 (मानक ग्रेड) का ग्रेड, 40 x 40 की जाली गिनती (रैखिक इंच के छेदों की संख्या) और 0.01 "(0.0254 सेंटीमीटर) के एक व्यास व्यास है। बड़े हाइड्रोफोनिक टैंकों के लिए एक बड़ा जाल वर्ग आवश्यक है या उच्चतर प्लेटफार्म
  4. प्रत्येक वर्ग जाल के कोनों को मोड़ो बस इतना है कि मेष पेट्री प्लेट के अंदर फिट बैठता है कोने से मोटे तौर पर जाल के लिए 90 ° कोण पर कोनों को मोड़ दें, जिससे रूट को विकास के लिए पर्याप्त जगह छोड़कर जाल को छोड़ दें ( चित्रा 3 ए )।
  5. एक बीकर में कटे हुए जाल वर्ग रखो, एल्यूमीनियम पन्नी के साथ कवर करें, और 30 मिनट के सूखे चक्र का उपयोग करके आटोक्लेविंग से निष्फल।
  6. एक बार जब माध्यम पेट्री डिश में मजबूत हो जाता है और जाल बाँझ हो जाता है, अर्ध-ठोस माध्यम के ऊपर प्रत्येक निर्बाध मेष वर्ग को घुमाएं, नीचे के किनारों के नीचे के किनारों के साथ।
  7. मेष को पुश करें ताकि कोने मध्यम में प्रवेश कर सकें और मेष के थोक मध्यम के ऊपर की सतह को छू लेते हैं (> चित्रा 3 बी)।
  8. अलग-अलग सतह-निर्जलित ए थैलियाना बीज (बीज वैक्यूम बल के कारण विंदुक की नोक पर बने रहें) को आकर्षित करने के लिए 200 μL स्थानांतरण विंदुक का प्रयोग करें और धीरे-धीरे मेष के ऊपर प्रत्येक बीज को स्थानांतरित करें। बीज रखें ताकि वे प्रायोगिक आवश्यकताओं ( जैसे, 4 6 बीज / प्लेट) के लिए उचित स्थान पर रहे।
  9. ढक्कन के साथ पेट्री प्लेटें सील करें, किनारों के आसपास छिद्रपूर्ण शल्य टेप रखे।
  10. पूरे पेट्री डिश को 4 डिग्री सेल्सियस के लिए अंधेरे में 2 डिग्री के लिए रखकर बीज को मजबूत करें ( जैसे, अंधेरे को अनुकरण करने के लिए टिनफ़ोइल में लपेटें।)
  11. पेट्री डिश में 22-24 डिग्री सेल्सियस पर 10-14 दिनों ( चित्रा 3 सी ) के लिए 16 घंटे के फोटोनोडिड में बीज की खेती करें।

चित्र तीन
चित्रा 3: हाइड्रोपोनिक प्लांट-सूक्ष्मजीव कैबिनेट सिस्टम। बायां पेनील एक प्रवाह चार्ट को दर्शाता है जिसमें हाइड्रोपोनिक सह-खेती प्रणाली को इकट्ठा करने और संचालित करने के छह प्रमुख कदम शामिल हैं। अरबीडॉप्सिस -एग्रोबैक्टीरियम इंटरैक्शन का अध्ययन करते समय सही पैनल हाइड्रोपोनिक कोकिलिटी सिस्टम के लिए वास्तविक प्रयोगात्मक सामग्री, उपकरण और संचालन प्रक्रिया को दर्शाता है। प्लांट या बैक्टीरिया नमूनाकरण के लिए टीकाकरण चरण और अंतिम चरण अब दिखाए जा रहे हैं। यह आंकड़ा संदर्भ 35 से संशोधित किया गया है। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

4. हाइड्रोपोनिक कोकिलिविटी सिस्टम

  1. तरल मुराशिगे और स्काउप (एमएस) माध्यम तैयार करें: 2.165 ग्राम / एल एमएस बेसल लवण, 10 ग्राम / एल सुक्रोज, 0.25 ग्राम / एल एमईएस, और 59 एमएल / एल बी 5 विटामिन मिश्रण, पीएच 5.75
  2. आटोक्लेव माध्यम प्रत्येक बाँझ बेलनाकार ग्लास या स्पष्ट प्लास्टिक की टंकी में 18 एमएल डालो (क्रिस्टलीकरण व्यंजन, 100 x 80 मिमी2) बाँझ लेड्स के साथ।
    नोट: एल्यूमीनियम पन्नी और आटोक्लेविंग में लपेटकर टैंकों और लिड्स को छेड़ें।
  3. एक निष्प्रभावित प्रवाह हुड में, अर्ध-ठोस माध्यम से एक हाइड्रोपोनिक बेलनाकार टैंक ( चित्रा 3 डी ) के लिए 10-14 दिन पुरानी पौधों के साथ प्रत्येक जाल वर्ग को धीरे-धीरे स्थानांतरित करने के लिए बाँझ संदंश का उपयोग करें। छिद्रपूर्ण शल्य टेप का उपयोग कर टैंकों पर लीड्स को सील करें।
  4. टैंक में जाल पर 22-24 डिग्री सेल्सियस के लिए जाल पर पौधों की खेती करें, एक 16 घंटे के साथ photoperiod और वातना ( चित्रा 3 ई ) के लिए 50 आरपीएम पर मिलाते हुए।
    नोट: इससे पौधों को सूक्ष्मजीवों के साथ टीकाकरण (सघनता) से पहले हाइड्रोपोनिक पर्यावरण के अनुकूल होने की अनुमति मिलती है। यह प्रतीक्षा अवधि, आकस्मिक माइक्रोबियल प्रदूषण को भी टीका से पहले स्पष्ट होने की अनुमति देगा।
    1. ऊष्मायन अवधि के अंत से पहले दिन अगले चरण को शुरू करें
  5. ए। मध्यम मध्यम में ए28 डिग्री सेल्सियस में 0.5 डिग्री सेल्सियस खमीर निकालने, 0.5% वाय / वी ट्रीप्टन, 0.5% वाय / वी सुक्रोज़, 50 एमएम एमजीएसओ 4 , पीएच 7.0) में रात भर मिलाते हुए संस्कृति 600 पर एक अंतिम ऑप्टिकल घनत्व तक पहुंचने तक एनएम (ओडी 600 ), जो एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करते हुए मापा जाता है, जो कि बिना किसी बीम के माध्यम से रिक्त है
    नोट: 1.0 का एक ओडी 600 लगभग 10 9 कोशिकाओं / एमएल के बराबर है
  6. 0.85% NaCl के बराबर मात्रा में तीन बार ए । बाँझ डबल डिस्टिल्ड वॉटर के बराबर मात्रा में रिसासपेंड
  7. इनोक्यूलेशन से पहले, पौधों को ध्यान में रखकर टैंक की जांच करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि कोई संदूषण नहीं है; अप्रतिरोधित टैंकों में मध्यम स्पष्ट और पारदर्शी होना चाहिए।
    1. बादल छाए हुए तरल (प्रदूषण) के साथ किसी भी टैंक को छोड़ दें और शेष टैंकों की संख्या दें। प्रत्येक गिने हुए टैंक से हीड्रोपोनिक माध्यम की एक छोटी राशि (20 μL) का नमूना करें और इसे लुरीया शोरबा (एलबी) से भरा पेट्री डिश पर रखें। सेते28 डिग्री सेल्सियस पर डिश
  8. तत्काल, प्रत्येक गिने हुए हाइड्रोपोनिक टैंक में ए। ट्यूमेफ़िएन्स निलंबन (लगभग 5 x 10 7 कोशिकाओं, ओडी 600 से अनुमानित) के 50 μL जोड़ें। ए थालिअना अंकुर Cocultivate और ए एक 16 घंटे photoperiod के साथ 22-24 डिग्री सेल्सियस पर tumefaciens और 50 आरपीएम (चित्रा 3F) में मिलाते हुए।
    1. चरण 4.7.1 से स्पॉटेड एलबी प्लेट की जांच करें। टैंक की बाँझपन की पुष्टि के लिए 12 और 28 एच के ऊष्मायन के बाद यदि कोई संदूषण होता है, तो आगे की ओर वाले एशेज के लिए संबंधित संख्याबद्ध टैंक (जीवाणुओं के साथ inoculated) का उपयोग न करें।
  9. यदि आप चाहें, पर नजर रखने के ए के विकास के टैंक से मध्यम का एक नमूना को दूर करने और एक रिक्त (चित्रा 4) के रूप में एक गैर-टीका नियंत्रण से मध्यम के साथ एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग कर आयुध डिपो 600 को मापने के द्वारा नियमित अंतराल पर tumefaciens।
    नहींते: 7 डी ( चित्रा 5 ) के बाद संयंत्र रोग के लक्षण स्पष्ट होना चाहिए।
  10. जाल प्लेट उठाने के द्वारा जीवाणु निलंबन से पृथक ए। थिलियन जड़ों; इस चरण का समय डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं पर निर्भर करता है। विवरण के लिए चरण 5-8 देखें
  11. यदि बाद के विश्लेषण के लिए जड़ का इस्तेमाल करते हैं, तो जल्दी से डबल डिस्टिल्ड वॉटर में जड़ों को कुल्ला। यदि पत्ती या अन्य ऊतक का उपयोग करना, ऊतक काट दिया। आरएनए विश्लेषण के लिए, चरण 7.1 के तुरंत आगे बढ़ें।

चित्रा 4
चित्रा 4: हाइड्रोपोनिक कोकिल्टी सिस्टम में एग्रोबैक्टेरिअम ग्रोथ। एक प्लांट होस्ट ( अरबएपोप्सिस ) की मौजूदगी या अनुपस्थिति में एग्रोबैक्टेरिअम का विकास हर 4 घंटे में निगरानी रखता था। एग्रोबेक्टेरियम कोशिकाओं को एबी मध्यम ओ / एन में उगाया गया, 0.85% NaCl के साथ 3x धोया गया, और हाइड्रोपोनिक प्रणाली में inoculated, या के साथArabidopsis सह खेती ithout, चारों ओर 0.1 की एक प्रारंभिक आयुध डिपो 600 से। ओडी 600 मूल्य मानक विचलन ( ओडी 600 के 1.0 = 1 x 10 9 कोशिकाओं / एमएल) के साथ तीन जैविक प्रतिकृतियों के साधन हैं।

चित्रा 5
चित्रा 5: कोकिलिविएशन के दौरान प्रतिनिधि प्लांट फीनोटाइप और निरीक्षण योग्य रोग लक्षण। भीतर 4 घ टीका के बाद, कोई रोग के लक्षण दिखाई दे (ए) noninoculated पौधों (बी) की तुलना में कर रहे हैं। कोकोलिवेशन (संक्रमण) के 7 घने के बाद, बीमारी के लक्षण संक्रमित पौधों ( सी ) में मनाए जाते हैं, जबकि गैर-निषिद्ध पौधे स्वस्थ रहते हैं ( डी )।

5. प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी

  1. उपयोग ए। एक रिपोर्टर harboring के लिए एक autofluorescent प्रोटीन के लिए निर्माणकदम 4.5 में सशक्तिकरण सेटअप
    नोट: डीसीआरड 36 के एक व्युत्पन्न, pCherry को व्यक्त एक संशोधित पीजेपी 2 प्लाज्मिड, यहां प्रयोग किया जाता है।
  2. चरण 4.8 में उचित सह-खेती ( जैसे, 48 घंटे) के बाद, बाँझ कैंची का उपयोग करके अलग-अलग अलग-अलग माध्यमिक जड़ें (मुख्य रूट की साइड शाखा)।
  3. ढीले बाध्य सामग्री को हटाने के लिए जड़ें डबल आसुत जल में कुल्ला। एक खुर्दबीन स्लाइड पर 30 μL पानी में प्रत्येक रूट को दबाएं और एक गिलास कसलीप के साथ कवर करें।
  4. जड़ों की निर्जलीकरण को रोकने के लिए नेल पॉलिश के साथ कवच के टुकड़े को सील करें।
  5. कल्पना ए की कुर्की प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा ए थालिअना जड़ों को tumefaciens।
    नोट: यहां, हेलियम-नीयन (हे-ने) 543/594 एनएम लेजर से उत्तेजना के साथ एक confocal सूक्ष्मदर्शी का उपयोग औपनिवेशिक 63x पानी के लेंस उद्देश्य के तहत 590-630 एनएम पर 1.4 के एक संख्यात्मक एपर्चर के साथ pCherry लाल प्रतिदीप्ति को कल्पना करने के लिए किया जाता है

चित्रा 6
चित्रा 6: एग्रोबैक्टेरियम रूट अटैचमेंट, कन्फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा निर्धारित। 560-630 एनएम पर पीसीआररी लाल प्रतिदीप्ति-लेबल एग्रोबैक्टीरियम की कल्पना की गई थी, जिसमें हीलियम-नीयन (हे-ने) 543/594 एनएम लेजर से उत्तेजना था। विज़ुअलाइज़ेशन एक औंधा 63 एक्स पानी लेंस उद्देश्य के तहत किया गया था, जिसमें 1.4 के एक संख्यात्मक एपर्चर थे। स्केल सलाखों = 11 सुक्ष्ममापी इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें

6. बैक्टीरियल ट्रांसक्रिप्ट विश्लेषण

  1. चरण 4.8 में उपयुक्त सह-खेती ( जैसे, 8 घंटे) के बाद, जड़ें 4.9 के चरण के अनुसार हीड्रोपोनिक माध्यम से अलग करें। हाइड्रोपोनिक माध्यम के 1.5 एमएल को 1.5 एमएल सूक्ष्म में स्थानांतरित करेंकोशिकाओं को पैलेट करने के लिए 2 मिनट के लिए 12,000 xg पर अपकेंद्रित्र ट्यूब और अपकेंद्रित्र
  2. सतह पर तैरनेवाला निकालें उसी 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब के लिए हाइड्रोपोनिक माध्यम के एक और 1.5 एमएल और कोशिकाओं को गोली मारकर 2 मिनट के लिए 12,000 ग्राम पर अपकेंद्रित्र स्थानांतरित करें।
  3. सतह पर तैरनेवाला निकालें
    नोट: प्रोटोकॉल का उपयोग करने तक -80 डिग्री सेल्सियस पर नमूनों को फ्रीज करके यहां रोका जा सकता है।
  4. डी.एन.ए. प्रदूषण से बचने के लिए मानक तरीकों 37 या एक उपयुक्त वाणिज्यिक आरएनए अलगाव और डीएनएस उपचार के साथ शुद्धिकरण किट का प्रयोग करते हुए ए। ट्यूमेफ़ेसेंस कोशिकाओं से आरएनए निकालें।
    नोट: प्रोटोकॉल का उपयोग करने तक -80 डिग्री सेल्सियस पर आरएनए के aliquots ठंड द्वारा यहां रोका जा सकता है।
  5. निम्नलिखित तरीकों सहित मानक तरीकों का उपयोग करते हुए विभिन्न प्रकार के विश्लेषणों के लिए पृथक आरएनए का उपयोग करें।
    1. निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार एक वाणिज्यिक माइक्रोएरे का उपयोग जीन सेटों का पता लगाने के लिए करें जो अलग-अलग कॉकल्टीटाइड बनाम कंट्रोलसंस्कृति।
    2. विशिष्ट जीनों की अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए या माइक्रोएरे डेटा 38 को मान्य करने के लिए मात्रात्मक वास्तविक समय पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (qRT-PCR) का उपयोग करें।

7. संयंत्र प्रतिलेख विश्लेषण

  1. चरण 4.8 में उचित उपयुक्तता ( उदाहरण के लिए, 8 घंटे) के बाद, जरूरी चरण 4.9 के अनुसार हीड्रोपोनिक माध्यम से जड़ें या जरूरत के अनुसार अन्य ऊतकों को अलग करें। तरल नाइट्रोजन में लगभग 150 मिलीग्राम जड़ या अन्य पौधे के ऊतकों को तुरंत रखें।
    नोट: प्रोटोकॉल का उपयोग करने तक -80 डिग्री सेल्सियस पर नमूनों को फ्रीज करके यहां रोका जा सकता है।
  2. एक मोर्टार और मूसल का उपयोग करके तरल नाइट्रोजन में जमे हुए नमूनों को पाउडर में पीसें।
  3. डीएनए संदूषण से बचने के लिए डीएनएस उपचार के साथ मानक तरीकों 39 या एक उपयुक्त वाणिज्यिक आरएनए अलगाव और शुद्धि किट का उपयोग करके पाउडर से आरएनए निकालें।
    नोट: प्रोटोकॉल को आरएएनए के अलियंत्रकों को फ्रीज करने से रोक दिया जा सकता हैउपयोग करने तक -80 डिग्री सेल्सियस
  4. निम्नलिखित तरीकों सहित मानक तरीकों का उपयोग करते हुए विभिन्न प्रकार के विश्लेषणों के लिए पृथक आरएनए का उपयोग करें।
    1. निर्माता की प्रोटोकॉल के अनुसार वाणिज्यिक माइक्रोएरे का उपयोग करें जो कि सह-खेती वाली बनाम नियंत्रण पौधों में भिन्न रूप से व्यक्त किए गए जीन सेटों का पता लगाने के लिए है।
    2. विशिष्ट जीन की अंतर अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए या माइक्रोएरे डेटा 38 को मान्य करने के लिए qRT-PCR का उपयोग करें।

8. गुप्तप्रोफ़ाइल प्रोफाइलिंग

  1. चरण 4.8 में उपयुक्त सह-खेती ( जैसे, 72 घंटे) के बाद, जड़ें 4.9 के रूप में हीड्रोपोनिक माध्यम से अलग करें। इसे 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूबों में 0.2 माइक्रोन छिद्रण फिल्टर के माध्यम से पास करके 18 मिलीलीटर हीड्रोपोनिक माध्यम को जड़ें।
  2. नमूनों को -80 डिग्री CO / N पर रुकें
  3. 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूबों पर कैप्स को ढो दें और उन्हें 36 घंटे के लिए फ्रीज-सुखाने मशीन में रखें। नमूनों को स्टोर या प्रोसेस करने के लिए आगे बढ़ें (डेस के रूप मेंएचपीएलसी विश्लेषण और मिश्रित पहचान के लिए नीचे लिखे गए)।
    नोट: प्रोटोकॉल को यहां रोका जा सकता है
  4. एक नमूना परीक्षण ट्यूब में 5 मील का डबल डिस्टिल्ड पानी में प्रत्येक नमूना को फिर से खोलें।
  5. एलीथ एसीटेट के 5 एमएल जोड़ें और ट्यूब को कई बार जोड़कर मिलाएं।
  6. चरणों को कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए अलग करने दें
  7. शीर्ष (कार्बनिक चरण) को पिपेट करने के द्वारा एक नए कंटेनर में स्थानांतरित करें। यदि आवश्यक हो, तो पूल के कई कार्बनिक अंश
  8. नाइट्रोजन गैस (~ 45 मिनट) के कोमल प्रवाह के तहत सूखी
  9. नमूना को एचपीएलसी ( जैसे, 100% मेथनॉल) के लिए उपयुक्त समाधान में पुन: निलंबित करें।
  10. मानक तरीकों के अनुसार एचपीएलसी प्रदर्शन 40
  11. उपयुक्त साधनों से यौगिकों का पता लगाएं।
    नोट: इलेक्ट्रास्प्रोय आयोनाइजेशन टाइम-ऑफ-फ़्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री (ईएसआई-टीओएफ-एमएस) 40 यहां इस्तेमाल किया जाता है।

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Representative Results

हाइड्रोपोनिक सह-खेती प्रणाली में वृद्धि

ए। ट्यूमफेसीएन्स सी 58 की वृद्धि की क्यूई ने प्रारंभिक 16 घंटे के सघनता में एक महत्वपूर्ण अंतराल चरण का प्रदर्शन किया, जिसके बाद एक बहुत ही स्थिर विकास हुआ जब ए थलियाना कर्नल के साथ सह-खेती, अधिकतम ओडी 600 तक के लगभग 0.9 0 48 घंटे पोस्टिनोकुलेशन इसके विपरीत, अनिवार्य रूप से ए थैलियन ( चित्रा 4 ) के बिना नियंत्रण संस्कृति में कोई बैक्टीरिया विकास नहीं देखा गया था। ये परिणाम बताते हैं कि कृत्रिम रूप से आपूर्ति किए गए अतिरिक्त पोषक तत्वों के बिना, पौधे जड़-गुप्त रासायनिक यौगिकों हाइड्रोपोनिक्स कोकोल्टीटीकरण प्रणाली में एग्रोबैक्टेरीयम की वृद्धि का समर्थन करने में सक्षम हैं। आरंभिक 16 घंटे के सघनता के दौरान महत्वपूर्ण अंतराल चरण को जटिल होस्ट धारणा और रोगजनन के साथ सशक्तिकरण पर क्रमिक रूट स्राव के कारण दिया जा सकता है।/ P>

Cocultivated ए थालिअना पौधों, पहले 3 दिनों के दौरान कोई रोग लक्षण देखे गए ए tumefaciens के अभाव में हो गई पौधों को नियंत्रित करने के रिश्तेदार (चित्रा 5 ए, 5 ब)। हालांकि, 5 दिनों के सघनता के बाद, मतभेद धीरे-धीरे दिखाई दिए और नकली-इलाज नियंत्रण वाले संयंत्र हरियाली और स्वस्थ थे। एग्रोबैक्टेरियम के साथ 7 दिनों के सघनता के बाद, पौधे के ऊतक ने क्लोरोसिस और नेक्रोसिस दिखाया, साथ ही साथ जल्दी फूल ( चित्रा 5 सी, 5 डी )। अरबिडोप्सिस में प्रारंभिक फूल, फिजोजेनेटिक रूप से भिन्न पाथोजेन्स 41 , 42 की एक सीमा से संक्रमण का एक सामान्य परिणाम है।

पौधों की जड़ों के लिए एग्रोबैक्टीरियम लगाव के सूक्ष्म दृश्य

ए tumefaciens pCherry लाल प्रतिदीप्ति के साथ लेबल पौधे जड़ संरचना के लिए एक ठेठ रॉड की तरह या filamentous आकार के साथ स्थानीयकृत था, लगभग 0.5 माइक्रोन चौड़ाई और लंबाई में 3-5 माइक्रोन ( चित्रा 6 )। बैक्टीरियल कोशिकाओं में से अधिकांश ऊर्ध्वाधर सेल दीवार की सतह से जुड़ी हुई थीं, पिछले निष्कर्षों के अनुसार कि एग्रोबैक्टेरियम एक ध्रुवीय फैशन 32 में सेल की दीवार से बाँधता है।

इन परिणामों से पता चलता है कि हाइड्रोपोनिक सोकिल्टिवेशन सिस्टम का उपयोग रोना में जीवाणु गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है, जैसे कि वास्तविक संरचना में जड़ संरचना और संक्रमण की प्रक्रिया के लिए लगाव। वास्तव में, अन्य रोगाणुओं के अभाव में, इस cocultivation प्रणाली planta में जीवाणु-संयंत्र लगाव का प्रत्यक्ष अवलोकन के लिए एक शोर से मुक्त मंच प्रदान करता है। एग्रोबैक्टेरियम वायरलेंस ट्रांसक्रिप्ट का सक्रियण

8 घंटे के संकाय के बाद, ए। तुमेफिएन्स कोशिकाओं को आरएनए अलगाव के लिए काटा गया था, और प्रतिनिधि वायरलेंस जीनों का प्रतिलेखन स्तर का मूल्यांकन किया गया था qRT-PCR ( चित्रा 7 )। ए थलियाना के बिना नियंत्रण के मुकाबले संयंत्र होस्ट के साथ सह-खेती के दौरान अतिसंवेदनशील जीनों आरओपीबी, वीरा, वाइरडी 1, विर एच 1, वीर ई 0 , और सीवीजीजी की अभिव्यक्ति को काफी हद तक नियंत्रित किया गया था। विशेष रूप से, mRNA की बहुतायत में 100% की chvG के लिए virD1 के लिए वीरा के लिए virE0 के लिए ropB के लिए वृद्धि हुई है, 70% तक, 94% से 40% से 330% तक, और virH1 के लिए 48% द्वारा।

इन परिणामों से सुझाव मिलता है कि, पूरक बिनासिंथेटिक विषाणु-उत्प्रेरण रसायनों के साथ ntation, hydroponic cocultivation प्रणाली में रसायनों को स्रावित पौधों Agrobacterium virulence प्रोग्रामिंग सक्रिय करने में सक्षम हैं। एग्रोबैक्टीरियम डाह जीन की प्रेरण Agrobacteria प्रतिक्रिया का संकेत हाइड्रोपोनिक cocultivation प्रणाली में संयंत्र व्युत्पन्न करने के लिए संकेत है। यह बहुत ही रोचक है कि एग्रोबैक्टेरीयम आरओपीबी और सीवीजी , अरबिडोप्सिस के साथ सघनता पर प्रेरित होते हैं , क्योंकि पिछले अध्ययनों से पता चला है कि ये जीन अम्लीय परिस्थितियों 18 से प्रेरित हैं, लेकिन एसीटोसिरीनोन द्वारा नहीं, एक प्रसिद्ध विषादता-उत्प्रेरण संयुग्मित 19 । इस परिणाम से पता चलता है कि अरबिडोप्सिस जड़ों से अज्ञात यौगिकों आरओपीबी और सीवीजी अभिव्यक्ति उत्प्रेरण करने में सक्षम हैं। हालांकि, ऐसे खतरे-प्रेरित रसायनों को आगे पहचाना जाना चाहिए।

चित्रा 7 चित्रा 7। हाइड्रोपोनिक कोकिलेशन सिस्टम में एग्रोबैक्टेरियम विरसपन की सक्रियता। छह एग्रोबैक्टेरियम विषाणु कारकों के एमआरएनए स्तर मात्रात्मक रूप से qRT-PCR द्वारा मापा गया था। 16 एस आरआरएनए टेप के अतिसंवेदनशील कारक टेप की बहुतायत सामान्यीकृत थी आंकड़े 3 जैविक प्रतिकृतियों के मानक ± मानक विचलन (त्रुटि बार) का प्रतिनिधित्व करते हैं, जिसमें छात्र की टी-टेस्ट द्वारा प्राप्त पी- वेल्यू होते हैं।

संयंत्र प्रतिलेखों की अभिव्यक्ति

क्यूआरटी-पीसीआर विश्लेषण पाँच जीनों के लिए किया गया था, जिन्हें पहले ए थलियाना (अप्रकाशित डेटा) में भिन्न रूप से व्यक्त किया गया था। अपेक्षित होने पर, क्यूआरटी-पीसीआर ने पुष्टि की कि एजीपी 30 (एटी 2 जी 337 9 0) और एनएएस 1 (एटी 5 जी 0 9 50) को क्रमशः (97 और 89%, क्रमशः), जबकि एचएसपी21 (एटी 4 जी 27670), पीजीआईपी 1 (एटी 5G06860), और एलीप 1 ( एटी 3 जी 22840) को 3 (3,800, 540, और 510% क्रमशः) के द्वारा नियंत्रित किया गया था (3 चित्रा 8 )।

आंकड़ा 8
चित्रा 8: ए थलियाना रूट ट्रांसक्रिप्ट के qRT-PCR। प्रत्येक एमआरएनए प्रतिलिपि की बहुतायत उस पर सामान्यीकृत थी ACTIN II टेप। डेटा 3 जैविक की औसत मानक विचलन (त्रुटि बार) की नकल करता है, जिसमें छात्र की टी-परीक्षा से प्राप्त पी- वेल्यू होते हैं।

स्राक्रान प्रोफाइल होस्ट करने के लिए बदलाव

रूट-व्युत्पन्न यौगिकों को पौधे प्रजातियों 6 , 8 के बीच काफी हद तक अलग-अलग दिखाया गया है। रोOt exudates आणविक संकेतों में शामिल है जो पौधे सूक्ष्म अंतर 1 , 43 के दौरान विभिन्न सिगनल प्रतिक्रियाओं को प्राप्त करते हैं। हालांकि, माइक्रोब इंटरेक्शन के बाद के समय में होस्ट स्राक्रिटी प्रोफाइल में प्रगतिशील अंतर बहुत कम समझा जाता है, सिवाय इसके कि जड़ स्रावित यौगिकों फायदेमंद बैक्टीरिया 29 के आकर्षण के लिए आवश्यक हैं। ए। ट्यूमफेसीएन्स सी 58 के साथ 72 घंटे की सघनता के बाद, ए। थलियाना कर्नल-0 के सिकोटेम प्रोफाइल में अंतर सकारात्मक आयन मोड एलसी-एमएस विश्लेषण और गैर-इनोक्लाइटेड ए थैलियाना कर्नल ( यानी एग्रोबैक्टीरियम की अनुपस्थिति में) की तुलना द्वारा स्थापित किया गया था । )। एग्रोबैक्टीरियम टीका ( चित्रा 9 ) के परिणामस्वरूप दिखाई देने वाले नए यौगिकों के साथ, गुप्तोम में एक स्पष्ट बदलाव देखा गया था। कुल मिलाकर, 35 यौगिकों को एग्रोबैक्टीरियम- निषिद्ध योजना के गुप्तगमन में तुलनात्मक रूप से बढ़ाया गया थाटीएस, जबकि 76 को गैर-निषिद्ध पौधों ( 9 चित्रा ) के रहस्यमय में बढ़ाया गया था। बाद की संभावना यौगिकों का प्रतिनिधित्व करते हैं कि ए। ट्यूमेफ़ेसिएन्स सी 58 संक्रमण से पहले सामना करेंगे। यद्यपि इन यौगिकों की पहचान नहीं हुई थी, और इस अध्ययन के संदर्भ में विशिष्ट जड़-व्युत्पन्न यौगिकों के विभेदक स्राव को निर्धारित नहीं किया गया था, लेकिन गुप्तनोम विश्लेषण ने इस हाइड्रोपोनिक नगरीय तंत्र का उपयोग करते हुए होस्ट स्राक्रिटी प्रोफाइल में पता लगाने योग्य अंतर का प्रदर्शन किया।

9 चित्र
9 चित्रा: ए। थालियाना कर्नल 0 रूट गुप्तमन विश्लेषण ए थलियाना कर्नल-0 के गुप्तमन प्रोफाइल का विश्लेषण नकली-अनियंत्रित और निषिद्ध नमूने के लिए तीन गुना में पूरा किया गया। प्रत्येक उपचार समूह में स्राव प्रोफाइल में पाए गए 138 अद्वितीय द्रव्यमान संकेतों (यौगिकों) के लिए पीक क्षेत्रों औसत थे, औरपता लगाने योग्य यौगिकों में अंतर को देखने के लिए प्रत्येक मिश्रित (नकली inoculated minus inoculated) की बहुतायत में अंतर की गणना करने के लिए औसत मूल्यों का इस्तेमाल किया गया था। बड़े नकारात्मक अंतर के साथ यौगिकों inoculated पौधों के secretome में प्रचुर मात्रा में थे, जबकि बड़े सकारात्मक मतभेदों के साथ नकली inoculated पौधों के secretome में अधिक प्रचुर मात्रा में थे, जबकि।

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Discussion

जड़ स्राव की क्रमिक प्रकृति को देखते हुए, प्लाया में उत्पन्न होने वाली जहरीले -उत्प्रेरण रसायनों की एकाग्रता और गतिशील पौधे-सूक्ष्म जीवों के संबंधों पर उनके प्रभावों को स्थानिक और लौकिक ग्रेडिएंट में होता है। इस हाइड्रोपोनिक सह-खेती प्रणाली में, कोई सिंथेटिक फाइटोहोर्मोन या रासायनिक जो माइक्रोबियल विषाणु या पौधे की सुरक्षा को प्रेरित करता है, पूरक है। इसके विपरीत, पारंपरिक दृष्टिकोणों का उपयोग करते हुए सिंथेटिक रसायनों के अतिरिक्त, जैसे कि एसिटोसिंगन, सांद्रता में अचानक, कृत्रिम स्पाइक बनाता है। इसलिए, यह हाइड्रोपोनिक सिकुल्टिविटी सिस्टम प्राकृतिक वातावरण की नकल करता है, जहां रोगाणुओं और मेजबान पौधों को स्थानिक और लौकिक शिष्टाचारों में पहचान और जवाब देते हैं।

यहां, यह प्रदर्शित करना संभव था कि एग्रोबैक्टेरियम विषाणु जीन अरबिडोप्सिस के साथ सह-खेती पर सक्रिय हो गया। इससे पता चलता है कि प्राकृतिक पौधे-व्युत्पन्न रसायनों से एग्रोबैक्टीरियम विषमता उत्पन्न होती है। भविष्य ईइन रसायनों की पहचान करने और यह सत्यापित करने के लिए कि उनके बीच में जहरीला-उत्प्रेरण परिसर एसिटोसिंगन होता है, इसके अलावा, Arabidopsis रूट जीन अभिव्यक्ति में महत्वपूर्ण परिवर्तन और secretome प्रोफाइल एग्रोबैक्टीरियम साथ cocultivation पर देखा गया, संयंत्र-सूक्ष्म जीव बातचीत के दौरान संयंत्र मेजबान प्रतिक्रियाओं और स्राव प्रोफाइल का अध्ययन करने के हाइड्रोपोनिक cocultivation सिस्टम की क्षमता का प्रदर्शन है। वास्तव में, हाइड्रोपोनिक कॉकल्टीटीन तकनीक का उपयोग करते हुए, पौधों की मेजबानों की जीन अभिव्यक्ति और रहस्यमय प्रोफाइल का अध्ययन किया जा सकता है और माइक्रोबियल इंटरेक्शन के चलते किसी भी स्तर पर अध्ययन किया जा सकता है, जिससे यह स्पष्ट किया जा सकता है कि ये ट्रांस्क्रिप्शनल या गुप्तता में बदलाव कैसे बाद में संयंत्र-सूक्ष्म जीवों की बातचीत ।

Arabidopsis का अध्ययन करने के अलावा - एग्रोबैक्टीरियम सिगनल, हाइड्रोपोनिक cocultivation प्रणाली अन्य महत्वपूर्ण संयंत्र-सूक्ष्म जीव प्रणालियों का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। यह करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैपौधकारी या लाभकारी सूक्ष्मजीवों की एक विस्तृत विविधता को स्पष्ट रूप से स्पष्ट करना, व्यक्तिगत या सामूहिक रूप से कार्य करना, और अपेक्षाकृत "प्राकृतिक" स्थितियों में विभिन्न पौधों के मेजबानों के लिए माइक्रोबियल लगाव और प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करना। आणविक पौधे-सूक्ष्म जीवों के अंतर को स्पष्ट करने के लिए विशिष्ट बीजों के आकारिकी का रखरखाव महत्वपूर्ण है। अन्य बैक्टीरिया, कवक या हर्बावियोरी रोगजनकों के मामले में, पोषक तत्वों के दौरान सूक्ष्म वृद्धि के समर्थन के लिए अतिरिक्त पोषक तत्वों को पूरक बनाया जा सकता है।

हालांकि, विभिन्न पौधे-सूक्ष्म जीवों के सिस्टम के साथ सांस्कृतिक रूप से विचार करने के लिए कुछ पैरामीटर हैं। बीज के आकार और जड़ के आकारिकी पर निर्भर करते हुए, बड़े छेद वाले धातु के जाल और बड़े विकास कंटेनर को बड़े बीज और पौधों के लिए आवश्यक हो सकता है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि जड़ संरचना पूरी तरह से जाल सतह से नीचे विकसित हो और उस ऊतक को ऊपर उगने वाला हो। एक उच्च मंच को शामिल करने के लिए सेटअप को भी बदलना पड़ सकता है इसे पूरा किया जा सकता है bY एक बड़े वर्ग के जाल को काटने और कोने से आगे झुका, कंटेनर के नीचे से जाल सतह को ऊंचा करने के लिए, या यूनानी क्रॉस के आकार में जाल को काटने और इंडेंटेशन्स पर प्रत्येक प्रालंब झुकने से। बेशक, वहाँ हर प्रणाली के लिए सीमाएं हैं, और जो यहां प्रस्तुत किया गया है वह बड़ा पौधों के लिए उपयोगी नहीं होगा जो लंबी अवधि ( जैसे, परिपक्व मक्का) के लिए उगाए जाते हैं। इसके अलावा, कुछ जीवों को इस प्रणाली का उपयोग करते समय मिलाते हुए अधिक वातन की आवश्यकता हो सकती है।

निस्संदेह, प्रयोगशाला में एक प्रणाली को डिजाइन करना बहुत कठिन या असंभव है, जो कि प्रकृति में होने वाले डायनामिक प्लांट-सूक्ष्म जीवों के इंटरैक्शन की सटीक और पूरी तरह प्रतिकृति करता है। यद्यपि हीड्रोपोनिक सघनता तंत्रिकाय संरचनाओं और पौधों के आकारिकी के साथ कम से कम अवधारणा के साथ, रेजोस्फीयर में प्राकृतिक परिस्थितियों का अधिक बारीकी से प्रतिनिधित्व करती है, इस प्रणाली में कोई मिट्टी या मिट्टी सूक्ष्मजीव नहीं होती है। हालांकि, इस प्रणाली को अनुकूलित किया जा सकता हैअलग-अलग जरूरतों को पूरा करने के लिए, जैसे कि एक नियंत्रणीय वातावरण में माइक्रोबायॉम्स का अध्ययन करना और यह जानने के लिए कि पौधों या सूक्ष्म जीवों को विभिन्न जैविक या अबाउटिक उत्तेजनाओं का क्या अनुभव होता है यह हाइड्रोपोनिक cocultivation प्रणाली भी हाइड्रोपोनिक्स या पारिस्थितिकी तंत्र में सूक्ष्मजीवों और उनके कार्यों की समझ की सुविधा हो सकती है। हाइड्रोपोनिक ग्रीनहाउस उद्योग के लिए या पौधों और रोगाणुओं के जलीय पारिस्थितिकी के लिए यह रोग प्रबंधन और संयंत्र स्वास्थ्य के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।

इसके अलावा, इस हाइड्रोपोनिक सोकिल्टिवेशन सिस्टम को जैविकीकरण के अध्ययन के लिए अनुकूलित किया जा सकता है और सूक्ष्म जीवों या पौधों में प्रासंगिक चयापचय प्रक्रियाओं और नियामक पथ को स्पष्ट करने के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, इस हाइड्रोपोनिक कोकोलिटीकरण प्रणाली पूर्व-विद्यमान (एलेलोकेमिकल्स) के प्रभावों और / या लागू (सिंथेटिक) पोषक तत्वों और रासायनिक संकेतों / यौगिकों पर सूक्ष्मजीवों या पौधों के मेजबान 44 पर जांच की सुविधा प्रदान करती है । परोक्ष रूप से पौधे के ऊतकों को प्रभावित करने की उपलब्धता ( यानी0; पत्ती, शूट) हाइड्रोपोनिक सोकिल्टिवेशन सिस्टम में पौधे की रक्षा के लिए अन्य पौधे रक्षात्मक प्रक्रियाओं का पता लगाने का अवसर प्रदान करता है, और इन संकेतों को कैसे पार किया जाता है।

इस सह-खेती प्रणाली का सबसे महत्वपूर्ण हिस्सा प्रदूषण को रोकने के लिए है। विशेष रूप से, अर्ध-ठोस माध्यम से पौधों को टैंक में ट्रांसफ़र करना बहुत ही सावधानी से किया जाना चाहिए ताकि हाइड्रोपिक माध्यम के प्रदूषण को रोक दिया जाए। इसलिए यह प्रयोगात्मक कदम एक जैव सुरक्षा कैबिनेट में बाँझ शर्तों के तहत किया जाना आवश्यक है, और प्रयोगकर्ताओं को प्रयोग के लिए किसी भी सूक्ष्मजीवों को निस्तब्ध होने से पहले स्थानांतरण के 2-3 दिनों के बाद इंतजार करना चाहिए।

संक्षेप में, हाइड्रोपोनिक सोकिल्टिवेशन सिस्टम पारंपरिक प्रायोगिक प्रक्रियाओं के दौरान ठेठ पौधों के आकारिकी और पौधे की जड़ संरचनाओं की अखंडता को बनाए रखने से परंपरागत दृष्टिकोणों की विभिन्न सीमाएं बढ़ाती है। इसके अतिरिक्त, सिस्टम supplementati से बचा जाता हैसिंथेटिक रसायनों पर, जैसे कि संयंत्र हार्मोन या रक्षा / जहरीला-उत्प्रेरण रसायनों इस प्रकार, यह प्राकृतिक परिवेश की अधिक बारीकी से नकल करता है, जहां रोगाणुओं और मेजबान पौधे स्थानिक और अस्थायी व्यवहारों में पहचान करते हैं और उनका जवाब देते हैं। इस cocultivation प्रणाली endophytic या epiphytic रोगाणुओं सहित अधिक "प्राकृतिक" और प्रबंधनीय स्थितियों में विभिन्न पौधों-सूक्ष्म जीव प्रणाली का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। पौधा में सहभागिता के विभिन्न पहलुओं जैसे कि रोगजनन, सहजीवन, या पौधे विकास को बढ़ावा देने, जांच की जा सकती है। हीड्रोपोनिक सोकिल्टिवेशन सिस्टम पौधों और रोगाणुओं के दोनों शारीरिक, जैव रासायनिक और आणविक प्रतिक्रियाओं में नई जानकारी प्रदान कर सकती है। किसी भी समयरेखा / अंतराल या विकास स्तर पर, बैक्टीरिया या पौधों को हाइड्रोपोनिक सोकिल्टिवेशन सिस्टम में बढ़ते हुए विभिन्न "ओमिक्स" विश्लेषणों के लिए अलग-अलग नमूना लगाया जा सकता है, जिसमें पौधे और माइक्रोबियल ट्रांस्क्रिप्टमिक्स, प्लांट और माइक्रोबियल मेटाबोलामीक्स, प्लांट और माइक्रोबियल सोकोटेम और बायोयोरिडायटी शामिल हैं।पर। इसके अलावा, इस हाइड्रोपोनिक सह-खेती प्रणाली को एक नियंत्रणीय माहौल में पौधों के मेजबानों और सूक्ष्मजीवों के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। संक्षेप में, हाइड्रोपोनिक सघनता के फायदे आणविक पौधे-सूक्ष्म जीवों के संपर्क और संकेतों को उजागर करने के लिए बेहतर प्रणाली का उदाहरण देते हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

हम ब्रायन वस्लोव्स्की और सिकंदर डब्ल्यू ईस्टमैन को उनकी मदद और उपयोगी चर्चा के लिए धन्यवाद देना चाहेंगे। हम भी डीआरएस को धन्यवाद देना चाहेंगे। यूजीन डब्ल्यू। नेस्टर, लिंगुई झांग, हेटाओ शेन, यूहई कुई, और ग्रेग थॉर्न उनकी मदद के लिए, उपयोगी बातचीत, और पांडुलिपि का महत्वपूर्ण पढ़ना। इस शोध को कृषि और कृषि-खाद्य कनाडा, ग्रोइंग फॉरवर्ड-एग्रीफ्लक्स (आरबीपीआई नंबर 2555) और फॉरवर्ड II प्रोजेक्ट संख्या 1670 की बढ़ोतरी के लिए वित्त पोषित किया गया था, जो उनके कर्तव्यों के एक हिस्से के रूप में लेखकों द्वारा आयोजित किया गया था। इस अध्ययन को आंशिक तौर पर प्राकृतिक विज्ञान और इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल ऑफ कनाडा (एनएसईआरसी) डिस्कवरी ग्रांट आरजीपीआईएन-2015-06052 द्वारा ज़ेडसी युआन को प्रदान किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
plant seeds (Arabidopsis thaliana Col-0) Arabidopsis Biological Resource Centre CS7000 https://abrc.osu.edu/order-stocks
bacteria (Agrobacterium tumefaciens C58) University of Washington N/A
labeled bacteria in-house optional, depends on downstream analyses
vortex (various)
microcentrifuge tubes (various)
microcentrifuge (various)
5% sodium hypochlorite (various)
double distilled water (various)
autoclave (various)
micropipette  (various)
70% ethanol (various)
Murashige and Skoog (MS) basal salts Sigma-Aldrich M5524
sucrose (various)
MES (various)
B5 vitamin mix Sigma-Aldrich G1019
phytoagar (various)
Deep Petri dishes (various)
stainless steel mesh Ferrier Wire Goods Company Ltd N/A grade: 304; mesh count: 40 × 40; wire DIA: 0.01
micropore tape, 1" 3M 1530-1
diurnal growth chamber (various)
cylindrical glass tanks, 100 × 80 mm  Pyrex 3250 other sizes can be used, in which case liquid content may need adjustment
flow hood (various)
forcepts (various)
yeast extract (various)
tryptone (various)
MgSO4 (various)
shaking incubator (various)
spectrophotometer (various)
NaCl (various)
shaker (various)
scissors (various) optional, depends on downstream analyses
fluorescence microscope (various) optional, depends on downstream analyses
microscope slides and cover slips (various) optional, depends on downstream analyses
nail polish (various) optional, depends on downstream analyses
Bacterial RNA extraction kit (various) optional, depends on downstream analyses
plant RNA extraction kit (RNeasy Plant Mini Kit) Qiagen 74903 or 74904 optional, depends on downstream analyses
material and equipment for qRT-PCR (various) optional, depends on downstream analyses
material and equipment for microarray analysis (various) optional, depends on downstream analyses
liquid nitrogen (various) optional, depends on downstream analyses
mortar and pestle (various) optional, depends on downstream analyses
0.2 µm pore filter (various) optional, depends on downstream analyses
50 mL conical tubes (various) optional, depends on downstream analyses
freeze dryer (various) optional, depends on downstream analyses
sealable test tubes (various) optional, depends on downstream analyses
ethyl acetate (various) optional, depends on downstream analyses
nitrogen gas (various) optional, depends on downstream analyses
material and equipment for HPLC (various) optional, depends on downstream analyses
material and equipment for ESI-TOF-MS (various) optional, depends on downstream analyses

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आणविक जीवविज्ञान अंक 125 आणविक पौधे-सूक्ष्म जीव बातचीत, हाइड्रोपोनिक्स सह-खेती पौधे तनाव प्रतिक्रिया रोगजनकता जीवाणु सूक्ष्मजीव
संयंत्र / सूक्ष्मजीव आणविक संबंधों और सिगनलिंग के एक साथ और व्यवस्थित विश्लेषण के लिए एक हाइड्रोपोनिक सह-खेती प्रणाली
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Nathoo, N., Bernards, M. A., MacDonald, J., Yuan, Z. C. A Hydroponic Co-cultivation System for Simultaneous and Systematic Analysis of Plant/Microbe Molecular Interactions and Signaling. J. Vis. Exp. (125), e55955, doi:10.3791/55955 (2017).

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