Summary

Hjärt Bypass i en musmodell: en ny metod

Published: September 22, 2017
doi:

Summary

Detta dokument beskriver hur man utför hjärt bypass hos möss. Denna nya modell kommer att underlätta utredningen av de molekylära mekanismerna som är involverade i organskada.

Abstract

Som långvarig hjärt bypass blir viktigare under hjärt interventioner, uppstår en ökad klinisk efterfrågan för optimering av förfarandet och för att minimera orgel skador till följd av långvarig extrakorporeala cirkulation. Syftet med denna uppsats var att visa en fullt fungerande och kliniskt relevant modell av hjärt bypass i en mus. Vi rapporterar om enheten design, perfusion krets optimering och mikrokirurgiska tekniker. Denna modellen är en akut, som inte är förenligt med överlevnad på grund av behovet av flera blod ritningar. På grund av spänna av verktyg tillgängliga för möss (t.ex., markörer, knockouts, etc.), kommer att denna modell underlätta utredning av molekylära mekanismer av organskada och effekten av hjärt bypass i förhållande till andra samsjuklighet.

Introduction

Sedan införandet av hjärt bypass (CPB) till kliniken, har den spelat en viktig roll i hjärtkirurgi1. I moderna hjärtkirurgi är långvarig CPB tid viktigt att utföra omfattande aorta rekonstruktioner och kombinerade förfaranden. Även tekniska framsteg har varit enorm, användning av extrakorporeala omsättning är associerad med intra – och postoperativ systemisk och lokala organ skada2,3.

Stora modeller har utvecklats för att undersöka CPB roll den fysiologiska processer4,5. Även om dessa modeller har inblick i några av CPB associerade komplikationer, de är extremt dyrt och molekylära verktyg (t.ex. antikroppar) är mycket begränsad. Ett mer kostnadseffektivt alternativ har tagits fram i små djur. Sedan deras utveckling, har flera studier utförts för att optimera en CPB modell i råttor och kaniner5,6,7,8,9. Dessa modeller ger en bra grund för mätningar av patofysiologiska sjukdomsprocesser; de är dock fortfarande otillräcklig för att undersöka cellulära och humorala immunologi på grund av bristen på relevanta antikroppar och reagenser. Detta försämrar deras roll inom detta forskningsområde.

Vi har nyligen utvecklat en musmodell av CPB. På grund av ett brett utbud av mus-specifika reagens och genetiskt modifierade möss är musmodeller i allmänhet modellen av val för fysiologiska, molekylär och immunologisk forskning10,11. Vår modell kommer därför att underlätta studiet av CPB i förhållande till olika sjukdomstillstånd som det finns många möss stammar tillgängliga med kliniskt relevanta sjukdomar12,13. Således beskriver detta papper, i detalj, hur du utför CPB i möss. Syre och hemodynamiska parametrar övervakas noggrant efter djupt andnings-och cirkulationsstillestånd.

Protocol

alla djurförsök har utförts i enlighet med den tyska djur skydd lagen (TierSchG) och godkändes av utskottet för lokala djurskydd (lägre Sachsen statens byrå för konsumentskydd och livsmedelssäkerhet, protokoll TSA 14/1556). Minimal mus lämplig för denna modell väger 25 g. 1. preoperativa förberedelser Obs: alla förfaranden genomförs under rena, icke-sterila förhållanden, med Ånghärdad instrument. Plats 50-60 8 cm lång propen …

Representative Results

Det här protokollet beskriver de perfusion krets, kirurgiska ingrepp, och övervakning av fysiologiska parametrar under CPB musklick. När de utförs av en tillräckligt skicklig microsurgeon, erhålls resultaten konsekvent och reproducibly. För att bibehålla adekvat vävnadsperfusion, hålls genomsnittliga arteriella trycket alltid mellan 40 och 60 mmHg genom att justera CPB blodflödet och tillägg av extra volym. Beroende …

Discussion

Vi har utvecklat en fullt fungerande kliniskt relevant modell för CPB i en mus. Med mer än trettio stammar av möss med hjärt-kärlsjukdomar, kan vår modell vara en utgångspunkt för utveckling av nya blivande protokoll relaterade till CPB. Dessutom, på grund av överflödet av mus-specifika reagens och knockout-out möss, denna modell inte bara kan ersätta den nuvarande råtta modellen av CPB men kommer att underlätta dissekering av de molekylära mekanismerna som är involverade i CPB-relaterade organskada. Hit…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Författarna har inga bekräftelser.

Materials

Sterofundin B.Braun Petzold GmbH PZN:8609189 priming volume, 1:1 with Tetraspan
Tetraspan 6% HES Solution B. Braun Melsungen AG PZN: 05565416 priming volume, 1:1 with Sterofundin
Heparin Natrium 25.000 Ratiopharm GmbH PZN: 3029843 2.5 IU per ml of priming solution
NaHCO3 8,4% Solution B. Braun Melsungen AG PZN: 1579775 3% in priming solution
KCL 7,45 % Solution B. Braun Melsungen AG PZN: 2418577 0.1 ml for cardioplegia
Carprofen Zoetis Inc., USA PZN:00289615 08859153 5 mg/kg/BW
1 Fr PU Catheter Instechlabs INC., USA C10PU-MCA1301 carotid artery
2 Fr PU Catheter Instechlabs INC., USA C20PU-MJV1302 jugular vein
Vasofix Safety catheter 20G B.Braun Medical 4268113S-01 orotracheal intubation
8-0 Silk suture braided Ashaway Line & Twine Mfg. Co., USA 75290 ligature
Isoflurane Piramal Critical Care Deutschland GmbH PZN:9714675 narcosis
CLINITUBES blood capillaries Radiomed GmbH 51750132 blood sampling 60 – 95 microliter
Spring Scissors – 6mm Blades Fine Science Tools GmbH 15020-15 instruments
Spring Scissors – 2mm Blades Fine Science Tools GmbH 15000-03 instruments
Halsted-Mosquito Hemostat Fine Science Tools GmbH 13009-12 instruments
Dumont #55 Forceps Fine Science Tools GmbH 11295-51 instruments
Castroviejo Micro Needle Holder – 9cm Fine Science Tools GmbH 12060-02 instruments
Micro Serrefines Fine Science Tools GmbH 18555-01 instruments
Bulldog Serrefine Fine Science Tools GmbH 18050-28 instruments
MiniVent Ventilator for Mice (Model 845) Harvard Apparatus 73-0044 mechanical ventilation
Isoflurane Vaporizer Drager 19.1 Drägerwerk AG & Co. KGaA anesthesia 1.3 -2.5%
PowerLab data acquisition device 4/35 ADInstruments Ltd, New Zealand PL3504 invasive pressure, ECG, temperature
ABL 800 Flex Radiometer GmbH blood gas analysis
NMRI mice Charles River Laboratories Crl:NMRI(Han) male, 30-35 g, 12 weeks old, housed at least 1 week before the experiment

References

  1. Edmunds, L. Cardiopulmonary Bypass after 50 Years. N. Engl. J. Med. 351 (16), 1601-1603 (2004).
  2. Goto, T., Maekawa, K. Cerebral dysfunction after coronary artery bypass surgery. J. Anesth. 28 (2), 242-248 (2014).
  3. Uysal, S., Reich, D. L. Neurocognitive outcomes of cardiac surgery. J. Cardiothorac. Vasc. Anesth. 27 (5), 958-971 (2013).
  4. Ballaux, P. K., Gourlay, T., Ratnatunga, C. P., Taylor, K. M. A literature review of cardiopulmonary bypass models for rats. Perfusion. 14 (6), 411-417 (1999).
  5. Jungwirth, B., de Lange, F. Animal models of cardiopulmonary bypass: development, applications, and impact. Semin. Cardiothorac. Vasc. Anesth. 14 (2), 136-140 (2010).
  6. Günzinger, R., et al. A rat model of cardiopulmonary bypass with cardioplegic arrest and hemodynamic assessment by conductance catheter technique. Basic Res Cardiol. 102 (6), 508-517 (2007).
  7. Waterbury, T., Clark, T. J., Niles, S., Farivar, R. S. Rat model of cardiopulmonary bypass for deep hypothermic circulatory arrest. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (6), 1549-1551 (2011).
  8. Schnoering, H., et al. A newly developed miniaturized heart-lung machine-expression of inflammation in a small animal model. Artif. Organs. 34 (11), 911-917 (2010).
  9. Kim, J., et al. The responses of tissues from the brain, heart, kidney, and liver to resuscitation following prolonged cardiac arrest by examining mitochondrial respiration in rats. Oxid. Med. Cell. Longev. 2016, (2016).
  10. Shappell, S. B., Gurpinar, T., Lechago, J., Suki, W. N., Truong, L. D. Chronic obstructive uropathy in severe combined immunodeficient (SCID) mice: lymphocyte infiltration is not required for progressive tubulointerstitial injury. J. Am. Soc. Nephrol. 9 (6), 1008-1017 (1998).
  11. Majzoub, J. A., Muglia, L. J. Knockout mice. N. Engl. J. Med. , 904-907 (1996).
  12. Houser, S. R., et al. Animal Models of Heart Failure A Scientific Statement From the American Heart Association. Circ. Res. 111 (1), 131-150 (2012).
  13. Russell, J. C., Proctor, S. D. Small animal models of cardiovascular disease: tools for the study of the roles of metabolic syndrome, dyslipidemia, and atherosclerosis. Cardiovasc. Pathol. 15 (6), 318-330 (2006).
  14. Iurascu-Gagea, M., Craig, S., Suckow, M. A., Stevens, K. A., Wilson, R. P. Euthanasia and necropsy. The laboratory rabbit, guinea pig, hamster, and other rodents. , 117-141 (2012).

Play Video

Cite This Article
Madrahimov, N., Natanov, R., Boyle, E. C., Goecke, T., Knöfel, A., Irkha, V., Solovieva, A., Höffler, K., Maus, U., Kühn, C., Ismail, I., Warnecke, G., Shrestha, M., Cebotari, S., Haverich, A. Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach. J. Vis. Exp. (127), e56017, doi:10.3791/56017 (2017).

View Video