셀 마이그레이션 개발, 조직 유지 보수 및 수리, 및 tumorigenesis, 필수적 이며, 성장 요인, 발산, 및 cytokines에 의해 규제 됩니다. 이 프로토콜 점 분석 결과를, microenvironmental 신호에 연결 된, 응집력 있는 셀 시트의 철새 형을 평가 하기 위해 2 차원, 무제한 마이그레이션 분석 결과 설명 합니다.
복잡 한 유기 체 정적 표시, 그들의 조직의 지속적인 매출을 받고 있다. 세포 나이, 다이, 그리고 새로운 세포로 대체 셀 이동 조직 내의 긴밀 하 게 조율 된 방식. 종양 개발 하는 동안이 균형을 방해 하 고 종양 세포 두고 침공 지역 microenvironment, 먼 사이트에 여행 하 고 궁극적으로 먼 사이트에서 전이성 종양을 형성 하는 근원의 상피. 점 분석 결과 간단 하 고, 2 차원 무제한 마이그레이션 분석 결과, 셀 무료 영역에 셀 시트의 net 움직임을 평가 하 고 셀 마이그레이션 시간 경과 화상 진 찰을 사용 하 여 매개 변수를 분석 하는. 여기, 점 분석 결과 셀 표 피 성장 인자 (EGF), 유방암 세포의 악성 가능성을 높이기 위해 알려진 철새 응답을 분석 하는 인간의 침략, 유 방 암 세포 선, MCF10CA1a, 형성 하는 폐 식민지를 사용 하 여 증명 되 고 변경 셀의 철새 형 하.
마이그레이션 분석 널리 종양 세포에서 생체 외에서의 침략과 전이성 잠재력을 평가 하는 데 사용 됩니다. 가장 일반적으로, 상처 또는 스크래치 분석 결과 상피 시트의 셀 허가 지역1,2,3로 마이그레이션 평가 하는 데 사용 됩니다. 스크래치 시험을 수행 하기 위해 세포는 단층으로는 도금 고 “처음” 또는 셀 자유로운 지역 피 펫 팁으로 만들어집니다. 스크래치 분석 결과 일반적으로 사용 가능한 조직 문화 공급 설정 쉽게 이며 여러 샘플의 처리에 대 한 수 다 잘 접시에서 수행할 수 있습니다. 그러나, 스크래치로 세포는 단층에서 물리적으로 제거 되 고 종종 세포의 죽음을 받 다. 또한, 접시에 부착 된 세포 외 기질 자주 긁 과정에서 손상 되었습니다. 마찬가지로, 실리콘의 사용 (예: Ibidi 챔버4) 삽입 또는 스텐실의5,,67 이어질 수 있는 세포의 기계적 파괴 및 코팅에 사용 되는 매트릭스 단백질의 부분적인 제거는 접시입니다. 다른 상처 나 긁힌의 폐쇄를 모니터링 분석 실험의 단점은 그들의 한정 된 시간 코스 스크래치 닫힐 때까지 셀 마이그레이션 분석만 수 있습니다.
수행 점 분석 결과, 세포는 코팅 또는 코팅 접시8에 원형 식민지로 도금. 이 도금 전략에 대 한 근거는 셀 이나 삽입의 제거로 문화를 방해 하지 않고 주변 셀 자유로운 지역으로 침공 하거나 마이그레이션할 수 있는 정의 된 가장자리와 셀 시트를 얻을 것입니다. 점 분석 결과의 전반적인 목표 셀 시트 지 변위 또는 식민지, 뿐만 시간 경과 영상 spatio 시간적 해상도에 셀의 철새 표현 형 분석을 수행 하 여 측정으로의 마이그레이션을 관찰 하는 것입니다.
셀 마이그레이션 microenvironmental 신호 발산, cytokines, EGF 등 성장 요인 등의 다양 한 영향을 받을 수 있습니다. EGF는 그것의 수용 체, EGF 수용 체9, 바인딩을 통해 그것의 생물학적 효과 행사 하 고 침략과 전이성 종양 세포4,,910의 행동을 증가 하는 성장 인자. 점 분석 결과 사용 하 여 공부 하는 여기, EGF 셀 마이그레이션 인간의 침략, 폐 식민지 형성 유 방 암 세포 선 (MCF10CA1a)8,,1112에 자극.
종양 진행 셀 동안 주변 조직 침입 하 고 먼 사이트15전이 기원의 조직에서 마이그레이션하십시오. 셀 서식에서 셀의 마이그레이션 점 분석 결과에서 관찰할 수 있습니다. 여기, 점 분석 결과에 EGF 인간 유방암 세포의 철새 형을 분석 하 여 그림입니다.
결과 얻기 위해 정확 하 고 복제할 도트의 설정에서 몇 가지 단계 분석 실험은 중요 합니다. 첫째, 접시의 ?…
The authors have nothing to disclose.
저자는 Bhagawat 수브라마니안, 이순신 (제이슨) 장 폴 란다 조, 그리고 캐롤 부모 읽기 및 원고에 대 한 코멘트에 대 한 감사를 기원 합니다. 이 작품은 국립 암 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원 되었다 건강의 국가 학회.
MCF10CA1a cells | Karmanos Research Institute | N/A | cells used for asay |
mouse collagen IV | BD Biosciences | 354233 | used to coat plates |
trypsin / EDTA | Thermo Fisher | 25300054 | used to remove cells from tissue culture plates |
DPBS | Mediatech | 21-031-CV | used to wash cells |
DMEM / F12 | Thermo Fisher | 11320082 | used as culture medium |
horse serum | Thermo Fisher | 26050088 | used to supplement culture medium |
12well glass bottom plate | MatTek | P12G-1.5-14-F | used to grow cells for imaging |
LPA (1-Oleoyl Lysophosphatidic Acid ) | Cayman | 10093 | used to stimulate cells |
EGF (epidermal growth factor, human recombinant) | Peprotech | AF-100-15 | used to stimulate cells |
fatty acid free BSA | Sigma | A8806-1G | used to make buffer for LPA and EGF |
hematoxylin | Sigma | HHS32 | used to stain colonies |
eosin | Electron Microscopy Sciences | 26051-10 | used to stain colonies |
37C, 5% CO2 incubator | Sanyo | model MCO-18AIC (UV) | |
Zeiss AxioObserver with incubator chamber and motorized stage | Zeiss | model Axio Observer.Z1 | used for time lapse imaging |
ORCA Flash LT sCMOS camera | BioVision | C11440-42U-KIT | used for timelapse imaging in combination with Zeiss AxioObserver |
Metamorph | BioVision | MMACQMIC | software used for time lapse imaging |
inverted microscope | Olympus | model IX70 | used to count cells and to check colonies in tissue culture |
plastic box | Lock&Lock | N/A | used as humid chamber (any tight closing plastic box that fits the plates can be used) |