Summary

Aortopathy aort anevrizması β-aminopropionitrile-indüklenen ve diseksiyon, fare modeli nicel mikro-CT Analizi

Published: July 16, 2018
doi:

Summary

Bu makalede ayrıntılı bir metodoloji radyoopak .Kurşun bazlı silikon kauçuk fare damarlara aort çapı miktar aort anevrizması ve diseksiyon, bir fare modeli için sıvı için kullanma.

Abstract

Aort anevrizması ve diseksiyon önemli morbidite ve mortalite nüfus ile ilişkilidir ve son derece öldürücü olabilir. Aort hastalığı hayvan modelleri mevcut iken, damarlara in vivo görüntüleme sınırlı olmuştur. Son yıllarda, mikro bilgisayarlı tomografi (mikro-CT) büyük ve küçük damarları görüntüleme için tercih edilen bir yöntemi olarak ortaya çıkmıştır in vivo ve ex vivo. Vasküler döküm yöntemi ile birlikte, biz başarıyla frekans ve β-aminopropionitrile-tedavi C57/Bl6 farelerde aort patoloji dağılımı ayırdetmek için mikro-CT kullanmıştır. Bu yöntemin teknik sınırlamalar zavallı hayvan hazırlık, gemi boyutu miktar için uygun yöntemleri uygulanması ve sigara-Beka Bu yordam tarafından perfüzyon kalitesini varyasyonları içerecek. Bu makalede anevrizması ve diseksiyon, fare modeli aortopathy nicel karakterizasyonu için bir kurşun tabanlı radyoopak silikon kauçuk intravasküler perfüzyon için bir metodoloji ayrıntıları. Aort patoloji görselleştirme ek olarak, bu yöntem diğer vasküler yatak vivo içinde veya vasküler yatak kaldırıldı öldükten sonra incelenmesi için kullanılabilir.

Introduction

Aort diseksiyonu insidansı başına 100.000 yıl13 vaka var. Aort diseksiyonu aneurysmal hastalıklar 10.000’den fazla kişinin ölümünden Amerika Birleşik Devletleri’nde her yıl, Batı ülkelerinde2‘ deki tüm ölümlerin % 1-2 için muhasebe hesap ve. Aort diseksiyonu damar intimal tabaka kan aort duvar fizyolojik baskılar altında katmanları yayılması ile bir yırtık tarafından başlatılır. Yükseltilmiş hasta nabız basınçları artmış insidansı diseksiyon ve komplikasyonlar ile ilişkilidir. Artan duvar kesme stres bir anevrizma oluşumu3,4‘ e lider aort duvar genişleme ile ilişkilidir. Aort diseksiyonu sonuçlarını tıkanıklığı kan akımı uzak organlara beyin, böbrek, bağırsakları ve bacaklarda, kronik anevrizma rüptürü veya Ölüm5,6,7oluşumu da dahil olmak üzere içerir.

Şu anda, hala kötü biyokimyasal ve hücresel işlemleri başlatma ve aort anevrizmalarının ve diseksiyonu dahil anlaşılır. Aort anevrizması ve diseksiyon tekrarlanabilir hayvan modelleri onların patofizyolojisi anlama anahtarıdır. Β-aminopropionitrile (BAPN) kolajen ve elastin cross-linking engeller ve önemli ölçüde damar duvar hücre dışı matriks ve onun biyomekanik bütünlüğü6yapısını değiştirmek için gösterilen bir lysyl oksidaz inhibitörü olduğunu, 8. BAPN ile tedavi kemirgenler aort anevrizması ve diseksiyon9,10ortak hayvan modeli olarak kullanılmıştır.

Vasküler görüntüleme yöntemleri vasküler patoloji belirlenmesi, gemi a_ılabilinirse teyit ve organ perfüzyon değerlendirilmesi instrumental vardır. Son zamanlarda, mikro bilgisayarlı tomografi (mikro-CT) damarlara fareler ve benzer şekilde ölçekli hayvanlar eğitim için kullanılmıştır. Kemik, intraluminal kan doğal olarak nispeten x olduğu gibi bilgisayarlı tomografi tarafından kan damarlarının Aksiyel görüntüleme sınırlıdır. Ancak, intravasküler kontrast ajanlar ile birleştirildiğinde, mikro-CT makro-anatomik vasküler patoloji11incelenmesi için hayvan vasculatures detaylı üç boyutlu rekonstrüksiyon sağlar.

Seçili kontrast ( Tablo reçetesigörmek) kurşun kromat ve Kurşun sülfat içeren bir radyoopak silikon kauçuk ajandır. Bir katalizör varlığında perfüzyon bunu hızlı bir şekilde damarlara damarlara arka plan doku aksine son derece radyoopak yapma gemiler, makro-anatomik mimarisinde minimal değişiklikler ile bir döküm oluşturmak üzere sertleşir zaman röntgenlerle inceledi. Bu kontrast Ajan avantajlı çünkü işlemek kolay ve doku bozulması ve gemi kaybı genellikle vasküler döküm korozyon ile ilgili kırılması nedeniyle önler. En az büzülme12ile tedavileri, damarları kandan temizlenir patent kalır ve hayatta kalma sigara deneylerde hayvan makro-damarlara doğru bir değerlendirme için izin. Önceki iş başarıyla radyoopak silikon kauçuk-kontrast hayvan çalışmaları çeşitli kullandı. Özellikle, koroner, glomerular, plasenta ve beyin dolaşımları11,12,13,14,15 görselleştirme içinde uygulanabilirliği gösterilmiştir. Bu yazıda, biz kurşun tabanlı radyoopak silikon kauçuk kantitatif aort patoloji BAPN kaynaklı bir fare modeli mikro-CT tarafından karakterize damar içi perfüzyon için açık sol ventriküler ponksiyon metodolojisi detay

Protocol

İşleme hayvan protokollerde kurumsal hayvan bakım ve Maryland Üniversitesi, Baltimore (hayvan iletişim kuralı numarası 0116024) kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve AAALAC uluslararası standartlara göre yapılmıştır. 1. hazırlanması reaktifler Heparin 1000 250 µL seyreltik U/mL heparin sülfat 50 ml fosfat tamponlu tuz 5 U/mL nihai bir konsantrasyon yapmak. Heparinized (5 U/mL) sıcak fosfat tamponlu tuz, 37 ° C’ye ayar…

Representative Results

Bu iletişim kuralı değerlendirmek için 20 erkek yetişkin fareler, karışık arka plan olarak yukarıda açıklanan19 ve 20-30 hafta-in yaş, ile ya da ezelî BAPN tedavi, bir kurşun tabanlı radyoopak silikon kauçuk ile derin (bkz: malzemeler tablo ) yukarıda ayrıntılı iletişim kuralını kullanarak. Ertesi gün mikro-CT tarama yapıldı (resim 1 ve Şekil 2)…

Discussion

Mikro-CT görüntüleme son derece detaylı ve üç boyutlu rekonstrüksiyon hayvan modellerinde vasküler patoloji sağlamak için kullanılabilir. İntravasküler kontrast-artırılmış medya aracılığıyla, bir kan damarı lümen gibi sigara gelişmiş yumuşak doku artırılması insanlardan farklı. Lazer Doppler, microangiography, manyetik rezonans anjiyografi, sırasında Histoloji confocal veya iki fotonlu mikroskobu ile vasküler yatak değerlendirmek için kullanılan, onlar genellikle çalışma sınırlı …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Mark Smith radyografik görüntüleme ile yaptığı yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser kardiyovasküler hastalığı (BOA), Amerikan Kalp Derneği (SMC) ve NIH R35 Grant (DKS) disiplinlerarası araştırma NIH T32 Grant tarafından desteklenir.

Materials

Microfil Flow Tech, Inc MV-122 We use yellow, a different color can be ordered as desired. Kit includes MV-Compound, MV-Diluent, and MV-Curing Agent.
Heparin (1000 U/mL) Sagent Pharmaceuticals 25021-400-10
Phosphate buffered saline Corning 21-031-CV
Isoflurane Vet One, MWI 502017
3-Aminopropionitrile fumarate salt Sigma-Aldrich A3134
Single syringe pump Fisher Scientific 14-831-200
27-gauge scalp vein set needle Exel Int 26709 27G x 3/4", 12" tube
Inveon Micro-CT scanner Siemens Medical Solutions
Osirix MD Pimxmeo SARL Version 8.0.2
Inveon Research Workplace Siemens Medical Solutions Version 4.2
Rodent Chow Harlan Teklad 2018sx

References

  1. Meszaros, I., et al. Epidemiology and clinicopathology of aortic dissection. CHEST. 117 (5), 1271-1278 (2000).
  2. Kochanek, K. D., et al. Deaths: final data for 2009. National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1-116 (2011).
  3. Li, J. S., Li, H. Y., Wang, L., Zhang, L., Jing, Z. P. Comparison of beta-aminopropionitrile-induced aortic dissection model in rats by different administration and dosage. Vascular. 21 (5), 287-292 (2013).
  4. Huffman, M. D., Curci, J. A., Moore, G., Kerns, D. B., Starcher, B. C., Thompson, R. W. Functional importance of connective tissue repair during the development of experimental abdominal aortic aneurysms. Surgery. 128 (3), 429-438 (2000).
  5. Wu, D., Shen, Y. H., Russel, L., Coselii, J. S., LeMaire, S. A. Molecular mechanisms of thoracic aortic dissection. Journal of Surgical Research. 184 (2), 907-924 (2013).
  6. Bruel, A., Ortoft, G., Oxlund, H. Inhibition of cross-links in collagen is associated with reduced stiffness of the aorta in young rats. Atherosclerosis. 140 (1), 135-145 (1998).
  7. Martinez-Revelles, S., et al. Lysyl oxidase induces vascular oxidative stress and contributes to arterial stiffness and abnormal elastin structure in hypertension: Role of p38MAPK. Antioxidants & Redox Signaling. 27 (7), 379-397 (2017).
  8. Kumar, D., Trent, M. B., Boor, P. J. Allylamine and beta-aminopropionitrile induced aortic medial necrosis: Mechanisms of synergism. Toxicology. 125 (2-3), 107-115 (1998).
  9. Ren, W., et al. β-Aminopropionitrile monofumarate induces thoracic aortic dissection in C57BL/6 mice. Scientific Reports. 6, 28149 (2016).
  10. Kanematsu, Y., et al. Pharmacologically-induced thoracic and abdominal aortic aneurysms in mice. Hypertension. 55 (5), 1267-1274 (2010).
  11. Weyers, J. J., Carlson, D. D., Murry, C. E., Schwartz, S. M., Mahoney, W. M. Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging. J Vis Exp. (60), e3740 (2012).
  12. Cortell, S. Silicone rubber for renal tubular injection. Journal of Applied Physics. 26 (1), 158-159 (1969).
  13. Bentley, M. D., Ortiz, M. C., Ritman, E. L., Romero, J. C. The use of microcomputed tomography to study microvasculature in small rodents. American Journal of Physiology – Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 282 (5), R1267-R1279 (2002).
  14. Marxen, M., et al. MicroCT scanner performance and considerations for vascular specimen imaging. Medical Physics. 31 (2), 305-313 (2004).
  15. Yang, J., Yu, L. X., Rennie, M. Y., Sled, J. G., Henkelman, R. M. Comparative structural and hemodynamic analysis of vascular trees. American Journal of Physiology – Heart and Circulatory Physiology. 298 (4), H1249-H1259 (2010).
  16. Jia, L. X., et al. Mechanical stretch-induced endoplasmic reticulum stress, apoptosis, and inflammation contribute to thoracic aortic aneurysm and dissection. The Journal of Pathology. 236 (3), 373-383 (2015).
  17. Kurihara, T., et al. Neutrophil-derived matrix metalloproteinase 9 triggers acute aortic dissection. Circulation. 126 (25), 3070-3080 (2012).
  18. Dillavou, E. D., Buck, D. G., Muluk, S. C., Makaroun, M. S. Two-dimensional versus three-dimensional CT scan for aortic measurement. Journal of Endovascular Therapy. 10 (3), 531-538 (2003).
  19. Muratoglu, S. C., et al. LRP1 protects the vasculature by regulating levels of connective tissue growth factor and HtrA1. Arterioclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33, 2137-2146 (2013).
  20. Badea, C. T., Dragova, M., Holdsworth, D. W., Johnson, G. A. In vivo small animal imaging using micro-CT and digital subtraction angiography. Phys Med Biol. 53 (19), R319-R350 (2008).
  21. Zhou, Y. Q., et al. Ultrasound-guided left-ventricular catheterization: A novel method of whole mouse perfusion for microimaging. Laboratory Investigation. 84, 385-389 (2004).

Play Video

Cite This Article
Aicher, B. O., Mukhopadhyay, S., Lu, X., Muratoglu, S. C., Strickland, D. K., Ucuzian, A. A. Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of β-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection. J. Vis. Exp. (137), e57589, doi:10.3791/57589 (2018).

View Video