Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biochemistry
Click here for the English version

Biochemistry

Små kolorimetriske Assays af intracellulære laktat og pyruvat i at ødelægge Caenorhabditis elegans

Published: October 15, 2018 doi: 10.3791/57807
Automatic Translation
1,2, 3, 3
1Department of Health Science, School of Sports & Health Science, Daito Bunka University, 2Department of Molecular Life Science, School of Medicine, Tokai University, 3Department of Health Management, School of Health Study, Tokai University

Summary

Vi beskriver en modificeret små udvinding og kolorimetriske assays af laktat og pyruvat i fyrretræsnematoden C. elegans. Når udnytte kommerciel assay kits, er den tekniske udvikling af deres følsomhed og nøjagtighed vigtige. Protein nedbør i udvinding er det mest afgørende skridt for kvantitativ bestemmelse af intracellulære metabolitter.

Abstract

Laktat og pyruvat er centrale mellemprodukter af intracellulære energi stofskifteveje. Overvågning laktat/pyruvat forholdet i celler hjælper med at afgøre, om der er en ubalance i aldersrelaterede energimetabolisme mellem mitokondriel oxidativ fosforylering og aerob glykolyse. Her, viser vi udnyttelsen af kommercielle kolorimetriske assay kits til laktat og pyruvat i model organisme C. elegans. For nylig, følsomhed og nøjagtighed af de kolorimetriske/fluorimetri assay kits er blevet forbedret betydeligt de forsknings-og udført af reagens producenter. De forbedrede reagenser har aktiveret brug af små assays med 96 brønde plade i C. elegans. Generelt er en fluorimetri assay overlegen i følsomhed til en kolorimetrisk assay; men den kolorimetriske metode er mere velegnet til brug i almindelige laboratorier. Et andet vigtigt emne i disse assays til kvantitativ bestemmelse er protein udfældning af homogeniseret C. elegans prøver. I vores protein nedbør metode, fælles precipitants (fx., trichloreddikesyre, perchlorsyre og metaphosphoric syre) bruges til forberedelse af prøver. Et protein-fri assay prøven er udarbejdet af direkte tilføje kolde fældningsmiddel (endelig koncentration på 5%) i løbet af homogenisering.

Introduction

Laktat og pyruvat koncentrationer er bredt anerkendt som mellemprodukter af energimetabolisme, og er relateret til stater af glykolyse, tricarboxylic syre (TCA) cyklus og elektron transportkæde i cellerne i aerobe organismer. En serie af reaktionerne i glykolysen oxidere glukose til pyruvat, der ligger ved en metabolisk korsvej og kan konverteres til kulhydrater gennem glukoneogenese, fedtsyrer og energimetabolisme gennem acetyl-CoA og aminosyre alanin. TCA cyklus opstår under tilstedeværelsen af tilstrækkelig opløst ilt og er grundlæggende for konvertering af glukose til energi. Især, ændring af sekundære metabolisme er et interessant fænomen som glykolyse bruges overvejende til energiproduktion og aerob mitokondrie respiration, som omfatter TCA cyklus og elektron transportkæde, er downregulated i pattedyr kræft celler1,2. Vi viste for nylig at laktat niveauer og det deraf følgende laktat/pyruvat (L/P) forholdet faldt under aldring i model organisme Caenorhabditis elegans (C. elegans). Vi fandt ligeledes, at pattedyr tumor suppressor p53 ortholog CEP-1 i C. elegans har en vigtig rolle i de aldersrelaterede ændringer af energimetabolisme gennem aktivering af sin transcriptional mål3.

I biologiske assays, såsom måling af laktat og pyruvat koncentrationer i celler, har følsomhed, nøjagtighed, samplingstørrelse og inkubationstiden for kolorimetriske/fluorimetri assay kits forbedret dramatisk. På grund af teknologiske innovationer er vi nu i stand til at analysere forskellige metabolitter og mellemliggende metabolitter uden den store kultur af C. elegans, som er vanskeligt givet sin lille størrelse. Følsomheden af en kolorimetrisk assay er generelt en størrelsesorden mindre end for en fluorimetri assay; den kolorimetriske metode er dog mere egnet i fastsættelsen af fælles laboratorier. Derudover er en udvinding teknik indeholdende homogenisering og protein nedbør afgørende for kvantitativ bestemmelse af laktat og pyruvat koncentrationer i C. elegans celler, fordi denne nematode er omsluttet af en exoskeleton kaldet neglebånd, i modsætning til pattedyr kulturperler celle linjer4,5. Her, beskriver vi en protokol for at analysere laktat og pyruvat koncentrationer ved hjælp af kommercielle kolorimetriske assay kits herunder tips til prøven udvinding fra C. elegans.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. synkroniseret kultur af C. elegans

  1. Før såning, kultur Escherichia coli (E. coli) stamme OP50 natten over ved 37 ° C i 300 mL Luria-Bertani (LB) bouillon flydende medium. Gemme den kulturperler OP50 på-4 ° C.
    1. For at gøre LB bouillon flydende medium, bruge 10 g trypton, 5 g gær extract, 10 g NaCl og 1,5 mL 1 N NaOH, og tilføje til 1 L med deioniseret vand. Autoklave.
      Bemærk: OP50 og C. elegans stammer er tilgængelige fra Caenorhabditis genetik Center (University of Minnesota, St. Paul, MN, USA).
  2. For at ødelægge vækst medium (NGM) agar, bruge 3 g NaCl, 2,5 g af pepton, 17 g agar og 975 mL deioniseret vand. Autoklave. Afkøles til 55 ° C, så sterilely i orden, 1 mL 1 M MgSO4, 1 mL 1 M CaCl2, tilsættes 1 mL af 5 mg/mL kolesterol i EtOH og 25 mL 1 M kalium fosfat pH 6.0 i 90-mm petriskåle.
    1. For 1 M kalium fosfat pH 6.0, brug 108.3 g af KH2PO4 og 46,6 g K2HPO4, og der tilsættes deioniseret vand til 1 L. autoklave6.
  3. Spredt sig 1-2 mL af den kulturperler OP50 på NGM agar plader. For at gøre et tyndt lag af OP50, der inkuberes plader natten over ved stuetemperatur før du tilføjer nogen nematoder.
    Bemærk: De NGM agar plader podede OP50 kan opbevares ved stuetemperatur i 2-3 uger.
  4. Tilføj mindst 100 orme på en NGM agar plade med OP50 og kultur ved 20 ° C indtil det voksne Stadium. Mindst tre plader er påkrævet.
  5. For at indsamle æg i utero, overføre fælderne hermafroditter fra tre NGM agar plader hver med 5 mL S buffer i en 15 mL konisk slange og vaske orme 3 gange med 15 mL S buffer ved hjælp af centrifugering ved 300 x g for 30 s ved stuetemperatur.
    1. For at gøre S buffer, bruge 5,9 g NaCl og 50 mL af 1 M kalium fosfat pH 6.0, tilføje til 1 L med deioniseret vand. Autoklave6.
  6. Opløse orme i en basisk hypokloritiske løsning for axenization og bulk æg isolation (0,5 mL frisk blegemiddel eller tilsvarende: 5-6% natriumhypochlorit, 0,1 mL 10 M NaOH, ca. 4,5 mL S buffer)6, og står løsningen for 10-15 min. ved stuetemperatur med blanding af invertere.
    Bemærk: Indenfor 15 min, voksne orme bør opløses, efterlader en diset løsning af æg befriet fra deres kroppe (de frigjorte æg bør bekræftes ved hjælp af en stereoskopisk mikroskop). I stedet for 0,1 mL 10 N NaOH, kan 0,2 mL 5 N NaOH også bruges.
  7. Efter hypokloritiske behandling, vask ægget pellet 3 gange med 15 mL S buffer, og pelleten i 5-6 mL S buffer. Klækkes de frigivne æg under en natten inkubation ved 20 ° C i S buffer uden E. coli for en alder-synkron kultur af L1 Stadium larver.
  8. For at bestemme det omtrentlige antal L1 Stadium larver, tælle ormene ved hjælp af en stereoskopisk mikroskop i 10 µL af S buffer efter resuspending larverne mindst 3 gange, og beregne gennemsnitlige. Derefter, overføre L1 Stadium larver til fem NGM agar plader med OP50 (1.500-3.000 orme pr. plade ved hjælp af en 90 mm petriskål), og kultur ved 20 ° C, indtil de er vokset til den unge voksne stadium, når self-fertilization begynder og et par æg er lagt (almindeligvis efter 3 d Ays).

2. udvinding af cellulære fraktion fra C. elegans

  1. Indsamle de unge voksne Stadium (5 dage gamle dyr) orme fra de fem NGM agar plader med S buffer (figur 1A).
    1. For at vælge kun levende orme ved flotation på 30% (w/v) saccharose saccharose metode6 , bland ormene suspenderet i 3-4 mL S buffer med et lige saa stort volumen af iskold 60% (w/v) saccharose i en 15 mL konisk slange. Spin rør ved 1.500 x g i 15 s ved 4 ° C og fjern den flydende orme i en frisk rør ved at flytte dem ud af væggen af røret med Pasteur pipette.
  2. Vaske orme 3 gange med S buffer ved centrifugering ved 1.500 x g i 30 s ved 4 ° C. Tjek den våde volumen af vasket orme efter centrifugering ved hjælp af en 1.000 µL mikropipette tip (figur 1B).
  3. Tilføje vasket orme til et lige saa stort volumen af iskold 10% (w/v) trichloreddikesyre (TCA; endelig koncentration på 5%) for protein nedbør (figur 1 c). I stedet for TCA, kan perchlorsyre (PCA) eller metaphosphoric syre bruges.
  4. Homogeniseres orme med fældningsmiddel med 40 strøg med en pistil i en Teflon homogeniseringsapparat (Potter-Elvehjem væv grinder) med rotation på op til 1.300 rpm på is.
  5. Overførsel af homogenatet til en frisk 1,5 mL microtube med Pasteur pipette, og Læg instrumenterne i ultralydsbad ved hjælp af en ultralyd homogeniseringsapparat for 3 min (3 gange på 1 min.) med en 20% normeret maksimalydelse på is.
  6. Præcisere homogenatet ved centrifugering ved 8.000 x g i 10 min. ved 4 ° C. Neutralisere analysere med 4 M KOH (0,25 volumen til 10% TCA) i 20 min. på isen, og der centrifugeres ved 8.000 x g i 10 min. ved 4 ° C. Supernatant (som en proeve) kan opbevares ved-80 ° C indtil de følgende assays.

3. laktat analyse ved hjælp af en kolorimetrisk Assay Kit

  1. Mål koncentrationen af laktat i de klargjorte prøver ved hjælp af en kolorimetrisk assay kit (Tabel af materialer). Gennemføre duplex undersøgelser for prøverne. Tilføj 5 eller 10 µL af prøverne til en 96-brønd plade og justere lydstyrken til 50 µL pr. brønd med analysebuffer laktat leveres med kittet.
  2. Til standardkurven laktat fortyndes 100 mM L (+)-lactat Standard til 1 mM med laktat analysebuffer. Tilføje 0, 2, 4, 6, 8 og 10 µL af en 1 mM L (+)-lactat Standard, som er forsynet med kit, i en serie af brønde.
  3. Tilsæt 50 µL af reaktionen Mix (som indeholder 46:2:2 af laktat analysebuffer, laktat enzym Mix og laktat sonde i DMSO, vandfri; alle reagenser leveres med kit) eller baggrund kontrol Mix (som indeholder 48:2 af laktat analysebuffer og laktat sonde) i hver brønd og inkuberes ved stuetemperatur i 30-60 min., mens prøverne, der er beskyttet mod lys.
  4. Absorbansen af hver brønd ved 570 nm med en mikrotiterplade læser og fratræk absorbansen af baggrund kontrol Mix fra absorbansen af reaktionen Mix.
  5. Plot laktat standardkurven. Beregne laktat koncentrationer af prøverne fra laktat standardkurven.

4. pyruvat analyse ved hjælp af en kolorimetrisk Assay Kit

  1. Mål koncentrationen af pyruvat i supernatanter (prøver) ved hjælp af en kolorimetrisk assay kit (Tabel af materialer). Gennemføre duplex undersøgelser for prøverne. Tilsæt 10 µL af prøverne og 90 µL arbejder reagens (som indeholder 94:1 af enzym Mix og farvestof reagens, der leveres med kittet) i en 96-brønd plade og inkuberes ved stuetemperatur i 30 min, mens prøverne, der er beskyttet mod lys.
  2. Absorbansen af hver brønd ved 570 nm med en mikrotiterplade læser.
  3. Plot pyruvat standardkurven. Beregne pyruvat koncentrationer af prøverne fra pyruvat standardkurven.

5. protein Assay til normalisering med proteinindhold

  1. Mål koncentrationen af protein i supernatanter (prøver) ved hjælp af en kolorimetrisk assay kit (Tabel af materialer). Men dette trin er ikke begrænset til en assay kit, og andre metoder kan udnyttes til at måle proteinkoncentration.
  2. Normalisere værdier af laktat og pyruvat koncentrationer blandt de klargjorte prøver ved hjælp af hver samlede proteinkoncentration.
    Bemærk: Proteinkoncentration i prøverne opdages tilstrækkeligt selv efter protein nedbør og er udnyttet for trinnet normalisering blandt prøver.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Bruger de kolorimetriske assays til kvantitativ bestemmelse af laktat og pyruvat koncentrationer, viste vi nøjagtigheden af disse assays sammenlignet med tidligere betænkninger i C. elegans7,8. Her var processen med protein nedbør under prøven udvinding det mest afgørende skridt til at generere nøjagtige værdier. Protein fældningen, fælles precipitants (fx., TCA, PCA, eller metaphosphoric syre) kan bruges til at forberede prøverne (figur 1). I C. elegans, men var det nødvendigt at foretage protein nedbør i løbet af homogenisering af orme (tabel 1). Ud over nøjagtigheden, disse assays var tilstrækkeligt følsomme til at måle laktat og pyruvat koncentrationer i små prøver og var i stand til at finde dem i en kort periode (begge assays reaktive Inkubationstiden er mindst 30 min) ( Figur 2-3). Faktisk, vi præsenteres data i en nylig rapport3. Således kunne vi afsløre aldersrelaterede stofskifteforandringer med angivelse af cellulære laktat niveauer og den deraf følgende L/P-forhold faldt under aldring, og vi viste også forskellige energimetabolisme i et cep-1 mutant3.

Figure 1
Figur 1 . Processen for udvinding af cellulære metabolitter. (A) 1.500-3.000 orme blev placeret på en NGM agar plade (90-mm petriskål). Udtræk fra orme på fem plader var tilstrækkeligt for de kolorimetriske assays. B orme indsamlet fra de fem plader af 3.000 og 1.500 pr. plade er angivet til venstre og højre side af panelet, henholdsvis. Både våd mængder i hver 15 mL tube er < 0,5 mL, som var tilstrækkelig til påvisning. C Protein nedbør ved hjælp af 10% TCA i løbet af homogenisering af orme. Tilføjelse af orme i iskold 10% der TCA i en homogeniseringsapparat skal udføres, før ormene er homogeniseret. Ellers, cellulære laktat og pyruvat ikke kan påvises i prøver ved hjælp af en kolorimetrisk assay kit (data er vist i tabel 1). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 . Kolorimetrisk pigmentering mønstre af laktat standarder ved hjælp af en kolorimetrisk assay kit. (A) pladens huller, 96-godt bruges i kolorimetriske analysen og en fortyndingsrække af L (+)-lactat standard. Øget laktat koncentration resulterede i en mere intens pink farve. BG angiver på baggrund af en laktat sonde mod fortynding serien. B laktat Standardkurven for de kolorimetriske assay. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 . Kolorimetrisk pigmentering mønstre af pyruvat standarder ved hjælp af en kolorimetrisk assay kit. (A) pladens huller, 96-brønd ved hjælp af kolorimetriske assay og fortyndingsrække af pyruvat standard. Forøgelse af pyruvat koncentration resulterede i øget lys pink farve. B pyruvat Standardkurven for de kolorimetriske assay. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Teste prøver Laktat (mM) Pyruvat (mM)
Protein-udfældet prøver i løbet af homogenisering 3,07 ± 0,94 0,22 ± 0,08
Protein-udfældet prøver efter homogenisering ND ND
Intakt cytosole brøkdel efter homogenisering og ultracentrifugering 1.12 0,06

Bord 1. Effekter af protein nedbør på forskellige tidsindstillinger til påvisning af cellulære laktat og pyruvat i 5 dage gamle dyr af vildtype N2. Data viser middel + standardafvigelse (SD) af mindst tre målinger. ND angiver ikke opdaget. * Udpakningen blev udført, foreløbigt bruger ultracentrifugering uden protein nedbør.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Når man bruger disse kolorimetriske assay kits, er den mest afgørende skridt i stikprøven udvinding til at opdage cellulære laktat og pyruvat præcist i C. elegans processen med protein nedbør i løbet af homogenisering (figur 1). Det er ikke strengt nødvendigt at bruge en Teflon homogeniseringsapparat, som andre homogenizers (fx., Dounce, og tilspidset væv vinkelslibere eller perle mills) er også velegnet til små udvinding af orme. Vi gjorde ikke opdager cellulære laktat og pyruvat i test prøver, der blev udvundet ved hjælp af en homogeniseringsapparat før protein nedbør. Desuden både laktat og pyruvat niveauer faldt drastisk i det cytosole brøkdel adskilt ved hjælp af ultracentrifugering i stedet for protein nedbør (tabel 1). Disse tyder på, at prøve udvinding er afgørende for at opdage de cellulære metabolitter i biokemiske metode ved hjælp af en nematode C. elegans. Protein fældningen, ikke kun TCA men også flere andre precipitants (PCA eller metaphosphoric syre) kan udnyttes til biokemiske metode7,9. Ifølge en tidligere rapport resulterede brug af TCA i ca. 12% af NADH i enzymatisk måling af blod laktat og pyruvat forsvinder. Forfatterne konkluderede derfor, at 5% metaphosphoric syre bør vælges som protein fældningsmiddel for både laktat og pyruvat, når ved hjælp af enzymatiske undersøgelser vedrørende9. Det tyder på, at TCA delvist denaturerer proteiner, herunder mange enzymer. Men vi havde ingen problemer med hensyn til protein precipitants når af kolorimetriske assays til påvisning af cellulære laktat og pyruvat.

I denne undersøgelse brugte vi kommercielle kolorimetriske assay kits til kvantitativ bestemmelse af laktat og pyruvat (figur 2 ogfigur 3 ). Deres mærkesager og prøvestørrelser var overlegen i sammenligning med tidligere assay kits7; Derfor, vi forberedt de klargjorte prøver ved hjælp af en mindre skala udvinding og rapporteret forskellene i de cellulære laktat og pyruvat koncentrationer i C. elegans3. Vi opdaget en aldersrelaterede fald i laktat og deraf følgende L/P-forhold i wild-type C. elegans og fandt, at p53/CEP-1 har en vigtig rolle i den aldersbetingede ændring af energimetabolisme gennem aktivering af sin transcriptional mål 2 , 3. således analyse af energimetabolisme i nematode C. elegans med fordel udbytte ved at benytte den forbedrede kolorimetriske assay kits, i det mindste i en del.

Som vist i figur 3B, laktat koncentration under 2 mM har tendens til at være faktisk større i denne kolorimetriske assay (ikke fluorometriske analysen). Fluorometriske analysen kan derfor egnet til en mere nøjagtig måling af laktat. Funktionerne i disse assay kits støtte både kolorimetriske og fluorometriske assays, således at analysen er valgt som reaktion på apparatet i laboratoriet af brugeren. Det er stadig dyrere bruge de nuværende kommercielle kolorimetriske assay kits til at bestemme kvantitativt koncentrationen af cellulære metabolitter. Dog kan forsøg udføres tilstrækkeligt i mindre laboratorier ved hjælp af fælles instrumenter og en spektrofotometrisk pladelæseren.

Hidtil, der er relativt få rapporter ved hjælp af konventionelle biokemiske metoder i en model organisme C. elegans, som typisk har brug for den store kultur af orme, sammenlignet med genetiske undersøgelser5. Men de seneste bemærkelsesværdige fremskridt af biologisk styrkebestemmelse systemer (fx., forbedring af den følsomhed og stabilitet af assay kits) gør undersøgelser ved hjælp af fyrretræsnematoden C. elegans, som er små og består af færre end 1.000 celler, mere attraktiv og udføres nemt i laboratoriet. Fremover, effektivt metabolomic analyse ved hjælp af massespektrometri (MS) og gaskromatografi/massespektrometri (GC/MS) kan bidrage til at reducere visse problemer, såsom storstilet kultur, analytiske sensitivitet og specificitet, og vil bidrage til at belyse rolle i cellulære stofskifte i aging og menneskelige sygdomme herunder kræft10. Vendes blikket fremad, ville lettere metode, som kolorimetriske assay kits, være effektiv som en screeningsværktøj før mere præcise instrumentelle analyser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer, at de har ingen konkurrerende finansielle interesser.

Acknowledgments

Dette arbejde blev økonomisk støttet af en særlig forskning tilskud fra Daito Bunka Universitet til Sumino Yanase.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Lactate Colorimetric/Fluorimetric Assay kit  BioVision #K607-100 colorimetric/fluorimetric
100 assays; Store at -20oC
EnzyChrom Pyruvate
Assay Kit		 BioAssay
Systems		 #EPYR-100 colorimetric/ fluorometric
100 assays; Store at -20oC
BCA Protein Assay Kit Thermo Scientific #23225 colorimetric assay; store at
 room temperature
Trichloroacetic Acid Wako Pure Chemical #207-04955 store at room temperature
Teflon homogenizer  Iwaki/Pyrex #358034 (Wheaton) Instead of Iwaki/Pyrex,
available by Wheaton

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Warburg, O. On the origin of cancer cells. Science. 123, 309-314 (1956).
  2. Matoba, S., et al. p53 regulates mitochondrial respiration. Science. 312, 1650-1653 (2006).
  3. Yanase, S., Suda, H., Yasuda, K., Ishii, N. Impaired p53/CEP-1 is associated with lifespan extension through an age-related imbalance in the energy metabolism of C. elegans. Genes to Cells. 22 (12), 1004-1010 (2017).
  4. Page, A. P., Johnstone, I. L. The C. elegans. Research Community. The cuticle. WormBook. , (2007).
  5. Hulme, S. E., Whitesides, G. M. Chemistry and the worm: Caenorhabditis elegans as a platform for integrating chemical and biological research. Angewandte Chemie International Edition. 50, 4774-4807 (2011).
  6. Lewis, J. A., Fleming, J. T. Basic culture methods. Methods in Cell Biology, Volume 48, Caenorhabditis elegans: Modern Biological Analysis of an Organism. Epstein, H. F., Shakes, D. C. , Academic Press, Inc. 3-29 (1995).
  7. Senoo-Matsuda, N., et al. A defect in the cytochrome b large subunit in complex II causes both superoxide anion overproduction and abnormal energy metabolism in Caenorhabditis elegans. The Journal of Biological Chemistry. 276 (45), 41553-41558 (2001).
  8. Butler, J. A., Mishur, R. J., Bhaskaran, S., Rea, S. L. A metabolic signature for long life in the Caenorhabditis elegans Mit mutants. Aging Cell. 12, 130-138 (2013).
  9. Marbach, E. P., Weil, M. H. Rapid enzymatic measurement of blood lactate and pyruvate: Use and significance of metaphosphoric acid as a common precipitant. Clinical Chemistry. 13 (4), 314-325 (1967).
  10. Mishur, R. J., et al. Mitochondrial metabolites extend lifespan. Aging Cell. 15, 336-348 (2016).

Tags

Biokemi spørgsmål 140 Caenorhabditis elegans energimetabolisme laktat pyruvat fælles fældningsmiddel kolorimetrisk assay
Små kolorimetriske Assays af intracellulære laktat og pyruvat i at ødelægge <em>Caenorhabditis elegans</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Yanase, S., Yasuda, K., Ishii, N.… More

Yanase, S., Yasuda, K., Ishii, N. Small-Scale Colorimetric Assays of Intracellular Lactate and Pyruvate in the Nematode Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (140), e57807, doi:10.3791/57807 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter