Summary
여기 억제 쥐에서 꼬리 팁 혈액 샘플링 프로토콜 자주 샘플 컬렉션에 대 한 선물이. 이 메서드는 타악기 황 호르몬 분 비의 사정 패턴에 대 한 유용 하 고 다른 순환 요인의 분석에 대 한 적응 될 수 있습니다.
Abstract
많은 내 분 비 시스템, 순환 요인 또는 호르몬, 해제 되지 않은 하지만 개별 펄스 방출 요인에 대 한 응답에서으로 분 비 됩니다. 싱글 포인트 샘플링 조치 정상적인 생리 적인 조건 하에서 또는 dysregulation의 조건 중 타악기 호르몬의 분 비 패턴의 생물학적 의미를 완전히 이해 하기에 적당 하지 않습니다. 황 호르몬 (LH)는 앞쪽 뇌 gonadotrope 세포에 의해 합성 하 고 펄스 평가 대 한 빈번한 컬렉션의 혈액 샘플을 필요로 하는 타악기 패턴에서 분 비. 이것은 높은 감도 LH 분석 결과의 발전으로 인해 최근까지 쥐에 가능한 되지 하 고 발전 하는 기술에 자주 낮은 볼륨 샘플 컬렉션, 처음 해당와 동료에 의해 설명. 1 여기 우리 LH의 분 비는 타악기를 검출 하기 위하여 충분 한 처리 순응와 쥐에서 자주 주변 혈액 샘플 컬렉션에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. 현재 프로토콜 여러 시간 동안 LH의 강력 하 고 지속적인 펄스의 평가 허용 하는 확장 된 순응 기간을 자세히 설명 합니다. 이 프로토콜에는 꼬리의 끝은 잘리고 휴대용 피 펫을 사용 하 여 꼬리에서 혈액 수집. Gonadectomized 마우스에 타악기 LH의 평가 대 한 직렬 샘플은 중요 한 것은, 90-180 분에 대 한 5-6 분 마다 수집 된 혈액의 수집과 측정 LH의 강력한 펄스의 적절 한 처리를 주어진 깨어, 자유롭게 동작 마우스에서 달성 될 수 있다 순응 그리고 환경 스트레스를 최소화 하기 위해 노력입니다. 충분 한 순응 혈 전에 4-5 주 내에서 얻을 수 있습니다. 이 프로토콜 마우스, 신경 내 분 비 연구에 대 한 강력한 동물 모델에서에서 여러 시간 동안 타악기 LH 분 비 패턴의 평가 대 한 전체 혈액 샘플의 수집을 위해 방법론에 발전을 강조 한다.
Introduction
포유류의 생식 기능 생식 샘 자극 호르몬 분 비, 황 호르몬 (LH)과 여 포 자극 호르몬, 뇌 하 수 체에서 따라 달라 집니다. gonadotropins는 생식 샘 자극 호르몬-방출 호르몬 (GnRH)의 hypothalamic 분 비에 대 한 응답에서 중 타악기 또는 서 지 방지기 패턴에서 은닉 된다. LH와 FSH의 분 비와 합성 hypothalamic GnRH, gonadal 스테로이드 호르몬 그리고 activin-inhibin-follistatin 시스템으로의 무수 한을 포함 하는 분자의 다양 일 분 비, paracrine 및 autocrine 액션을 통해 통제 된다 스트레스와 에너지 균형을 포함 하 여 생리 적 조건입니다. 2
혈액에서 LH의 타악기 패턴 지 수 제거 약 뒤 말 초 혈액으로 LH의 오히려 갑작스러운 방전에서 발생 합니다. 중요 한 패턴의 기능으로는 각 LH 방전의 주파수 및 LH 응답의 진폭, 둘 다, 부분적으로에 의해 규정 됩니다 hypothalamic-뇌 하 수 체의 측정에 대 한 포털 혈액 수집에 어려움에 GnRH 인해 출시 타악기 GnRH, LH의 측정 및 샘플링 hypothalamic-뇌 하 수 체-gonadal 축 GnRH 규제에 대 한 프록시로 사용 됩니다. 따라서, 중요 한 정보는 단일 샘플에서 확인할 수 없는 LH 펄스의 진폭 및 주파수에 인코딩됩니다.
타악기 LH 분 비의 분석 역사적으로 큰 포유 동물 (인간, 영장류, 그리고 양) 그들의 큰 혈액 볼륨 및 빈번한 혈액 샘플 컬렉션에 대 한 내성 때문에 제한 되었습니다. 설치류에 빈번한 혈액 샘플링 쥐에 국한 되었고 내재 심 방 카 테 터를 통해 달성. 3 , 4 상대적으로 저렴 한 비용 및 유전자의 (예: cre-lox, CRISPR) 하 고 복잡 한 신경 회로 (예: optogenetics, chemogenetics) 조작 쥐 매력적인 모델 유기 체; 그러나, 빈번한 혈액 샘플의 달성 및 LH 농도의 후속 분석까지 최근 입증 하기 어려운. 이 기념비적인 작업 해당 및 동료에 의해 개척 되었다. 1 이후 다음, 여러 실험실 자주 혈액 샘플링 및 실험 패러다임의 다양 한 타악기 LH 분 비 평가에 매우 민감한 LH 분석 활용 하기 시작 했다. 5 , 6 , 7 , 8 , 9 그것은 지적 되어야 쥐에서 여러 개의 혈액 샘플을 수집 하는 실용적인 방법 추구 적어도 40의 년10 여러 수정 만든 길을 따라 진행에서 되었습니다. 11 , 12
LH 펄스 패턴 (즉, 주파수와 진폭)의 평가 주요 상세를 모니터링이 유전자 온순한 동물 모델에서 기저 생식 샘 자극 호르몬 분 비를 나타냅니다. 전통적으로, 마우스에 LH 농도 단일 혈액 샘플에서 결정 했다. LH 농도 자연스럽 게 각 펄스 동안 변동 하기 때문에 단일-지점 샘플의 1 개의 약점 높은 변수 데이터 집합입니다. 또 다른 약점은 절연된 측정 본질적으로 LH 분 비는 펄스의 패턴에 의해 전달 하는 중요 한 정보를 보고 싶어요. 따라서, 자유롭게 행동에서 빈번한 혈액 샘플을 수집 하는 방법, 억제 마우스 (샘플링 하는 동안 부드러운 처리) 제외 됩니다 향상 된 정보를 제공을 타악기 호르몬 규칙을 조사 하는 많은 실험실에 유용 합니다.
여기, 우리는 자주의 컬렉션에 대 한 프로토콜을 설명 (매 6 분) 혈액 샘플 깨어, 억제 쥐에서. 우리는 처리를 포함 하는 중요 한 것은, 사전 및 사후 평가 심각한 도전 하는 시간의 길이 확인할 수 있습니다, 동안 전체 혈액 샘플에서 타악기 LH 분 비의 강력 하 고 지속적인 탐지 수집을 허용 하는 순응 프로토콜 같은 동원 정지 및 억제의 사회 심리적인 스트레스에 대응. 전체 혈액 샘플에서 LH 농도 대 한 효과적인 분석 결과 이전; 설명 하고있다 1 이 프로토콜 LH 펄스 측정을 위한 혈액 샘플을 수집 하는 방법에 초점을 맞추고.
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Protocol
여기 설명 하는 방법을 국립 연구소의 건강 동물 관리 및 사용 지침 계약 이며 기관 동물 관리 및 사용, 샌디에고가 주 대학에 위원회에 의해 승인 되었습니다.
1입니다. 처리에 순응
- 처리 절차
- 캐비닛에 biosafety 마우스 케이지를 놓습니다. 감 금 소 그리고 biosafety 내각 내에서 적당 한 표면 (예: 깨끗 한 케이지 뚜껑)에 장소에서 첫 번째 마우스를 제거 합니다.
- 부드럽게 잡고 한 손으로의 손가락 집게와 꼬리의 기지에 의해 작업 화면에서 마우스를 제 지 하십시오. 그런 다음 단단히 집게와 다른 손의 엄지는 꼬리의 끝에 기지에서 꼬리의 복 부 표면 뇌졸중. 6 배를 쓰 다듬어이 반복 (즉, 1 세트) 그것의 감 금 소에는 마우스를 반환.
- 6 분 기다릴 고 1.1.2 단계를 반복 합니다.
참고: 총에서 단계 1.1.2 반복 됩니다 4 번 마우스 (즉 4 세트 6 선), 당을 각 마우스 처리의 매일에 24 꼬리 치기의 총을 받게 됩니다.
- 매일 처리의 주파수
- 5 계획 된 혈액 컬렉션 하루 전에 2 주까지, 단계 1.1, 5 일 / 주 (마우스 토요일 또는 일요일 순응의 마지막 2 주까지 처리 되지 않습니다)에 설명 된 대로 마우스를 처리 합니다.
- 샘플링 기간 동안 실험 치료 (예: scruffing 또는 복 주입) 추가 처리 하지 포함 됩니다, 각 처리 세션 동안이 처리 활동에 쥐를 익히다.
참고: 주입 절차에 순응에 대 한 가짜 주사를 수행 하는 무딘된 바늘을 사용 합니다. - 계획 된 혈액 컬렉션 하루 전에 2 주 동안 주 당 7 일 1.1에 설명 된 대로 마우스를 처리 합니다.
- 적어도 2 주 전에 계획 된 혈액 컬렉션, 샘플링 하는 동안 쥐에 혼란을 최소화 하기 위해 쌍에서 쥐 집.
2입니다. 혈액 컬렉션 튜브의 준비
- 유리병에 磁 LH 분석 결과 버퍼 준비: 0.2% 소 혈 청 알 부 민 및 0.05 %PBS [0.2 g KCl, NaCl, 8 g 1.44 g Na2HPO4 (무수), 0.24 g KH2포4, 1 L, pH 7.4, 필터 및 고압 초순] 트윈-20 4 ° c.에 저장 1
참고: 볼륨 磁 LH 분석 결과 버퍼의 준비를 계산할 수 있다 기반으로 샘플 및 샘플 (2.2 & 토론) 아래 표시 된 대로 당 볼륨의 수에 - 혈액 컬렉션 튜브 (0.6 mL microcentrifuge 튜브)를 준비 합니다. 튜브와 aliquot 분석 결과 버퍼 (버퍼 튜브; 당 57 µ L 참고,이 볼륨 혈액 수집의 볼륨 또는 원하는 버퍼에 혈액의 비율에 따라 다를 수 있습니다). 관 수 샘플링 앞서 일 준비, 4 ° c.에 저장
3. 혈액 컬렉션
- 혈액 수집 자료의 준비입니다.
- 사용을 위한 biosafety 내각을 준비 하 고 후드에 또는 근처 장바구니에 다음과 같은 자료를 준비: 10 µ L 플라스틱 (3 µ L 또는 원하는 혈액 컬렉션 볼륨 설정), 피 펫 팁, 사용된 피 펫 팁, 타이머, 동물 숫자와 샘플 번호 (인쇄물에 대 한 쓰레기통 샘플링 또는 동물 문제에 관한 메모)에 대 한 얼음 양동이 혈액 컬렉션 튜브가 위, 그리고 작은 거 즈 (2 "x 2").
참고:는 "계산" 실험실 타이머에 기능은 유용 그것은 쥐를 방해할 수 있는 청취 가능한 경보 없기 때문에 - 영구 마커를 사용 하 여 샘플링 하는 동안 올바른 마우스의 급속 한 식별을 지원 하기 위해 각 마우스 (기지) 근처의 꼬리를 표시.
- 사용을 위한 biosafety 내각을 준비 하 고 후드에 또는 근처 장바구니에 다음과 같은 자료를 준비: 10 µ L 플라스틱 (3 µ L 또는 원하는 혈액 컬렉션 볼륨 설정), 피 펫 팁, 사용된 피 펫 팁, 타이머, 동물 숫자와 샘플 번호 (인쇄물에 대 한 쓰레기통 샘플링 또는 동물 문제에 관한 메모)에 대 한 얼음 양동이 혈액 컬렉션 튜브가 위, 그리고 작은 거 즈 (2 "x 2").
- 꼬리와 사전 혈액 컬렉션 준비의 클리핑.
- 혈액 컬렉션의 시작 하기 전에 45 분 그것의 감 금에서 최초의 마우스를 제거 하 고 캐비닛는 biosafety 내 (깨끗 한 케이지 뚜껑 잘 작동) 적당 한 표면에 놓습니다.
- 날카로운, 살 균가 위를 사용 하 여 제거 무 균 준비 다음 마우스 꼬리의 끝의 1-2 m m (즉, 잡 목으로 알코올과 betadine).
참고:이 부드러운 구속 또는 isoflurane 마 취에서 깨어 동물에서 수행할 수 있습니다. 또한, 진통 현지 IACUC의 권고에 따라 제공할 수 있습니다. - 위에서 설명한 대로 신중 하 게 마우스의 꼬리를 치기 (1.1.2; 1-2 스트로크는 일반적으로 충분 한) 꼬리 끝에 혈액 형태의 물방울까지.
- 깨끗 한 팁으로는 피 펫을 사용 하 여 꼬리 끝에서 3 µ L의 혈액을 수집 하 여 피 피 펫 팁 삭제.
- 반환 하기 전에 마우스의 케이지를 혈 중지 되었습니다 확인 하십시오. 필요한 경우, 멸 균 거 즈와 부드러운 압력을 적용.
- 모든 마우스 3.2.5 3.2.1-단계를 반복 합니다. 이후 혈액 샘플은 단단히 마우스의 꼬리는 꼬리의 끝에 혈액 형태의 물방울까지 쓰 다듬어 하 여 수집할 수 있습니다.
참고: 회사 선 후 혈액 작은 물방울을 형성 하지 않는 경우 비상 식 염 수에 젖은 거 즈 패드와 함께 발 수 있습니다. 병 더 높습니다 양식 덜 자주 샘플링 하는 동안 (즉, > 15 분 간격). 정 맥에서 혈전은 들어가면 샘플링 계속할 수 있습니다. - 이 사전 혈액 컬렉션 준비 기간 동안 약 45 분 마다 6 분 위에서 설명한 대로 각 마우스에서 3 µ L의 혈액을 수집 계속. 혈액과 피 펫 팁을 삭제 합니다.
- 혈액 샘플링
- 위에서 설명한 대로 꼬리 끝에서 3 µ L의 혈액을 수집 합니다. 전체 3 µ L 샘플 (거품 또는 침구 오염) 없이 피 펫 팁에 고려 되도록 주의. 레이블이 지정 된 튜브에 분석 결과 버퍼에 혈액 샘플을 꺼냅니다. 반전 하 여 혼합 하 고 얼음 튜브를 반환.
- 반환 하기 전에 마우스의 케이지를 혈액 흐름 중지 되었습니다 확인 하십시오. 필요한 경우, 멸 균 거 즈와 부드러운 압력을 적용.
- 미리 정해진된 샘플링 기간 단계 3.3.1-3.3.2 각 마우스, 모든 6 분에 대 한 반복 합니다. 각 동물 조 난 (예: 부분적으로 닫힌된 눈 꺼 풀, 돌출된 위치 [다른 치료에 의해 발생 하지] 또는 처리 응답의 부족)의 표시를 모니터링 하 고 필요한 경우 샘플링, 종료.
참고: 행동 고민 또는 다른 합병증 샘플링의 종료를 필요로 하는 우리의 실험실에서 매우 드물게 발생 합니다. - 동물 혈액 샘플링을 따르는 안락사 하지는, 꼬리 끝에서 혈액의 흐름이 완전히 중지 되었습니다 확인 합니다. 각 동물의 케이지 (또는 변화 감 금 소)의 내부에서 유출된 된 혈액을 닦 고 주택 랙 동물 감 금 소를 반환.
4. 샘플 처리 및 분석
- 분석까지-20 ° C에서 혈액 샘플을 저장 합니다.
참고: LH는 전체 혈액 샘플 분석 결과 버퍼;에 희석에 분석 세라 나 플라즈마의 분리는 저장 하거나 분석 하기 전에 필요 합니다. - 분석 결과 혈액 샘플으로 磁 ELISA에 의해 이전1 및 보고서 값 ng/mL 전 혈 보정 분석 결과 버퍼에 샘플 볼륨의 희석에 대 한 다음의 설명.
- 데이터 집합에서 LH 펄스를 식별 합니다. 계산 하 고 평균 펄스 진폭 및 펄스 주파수 (또는 간 펄스 간격) 데이터 집합에 대 한 적절 한 비교.
참고: 게시 된 기준13,14 및 프로그램,15,16 LH 펄스를 감지 사용할 수 있습니다.
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Representative Results
4 쥐에서 대표적인 LH 펄스 패턴은 그림 1 (2017 양 외.에서 증 쇄 하는 데이터)에 표시 됩니다. LH는 급성 정신 스트레스도 전에 응답을 결정 하기 위해 자주 혈액 샘플에서 측정 했다. 성인 여성 C57/Bl6 마우스 ovariectomized 하 고 빈번한 혈액 컬렉션에 대해이 프로토콜에 설명으로 처리 했다. 혈액 샘플은 LH 타악기 분 비의 사전 처리 기준을 설정 하는 모든 동물에 첫 90 분 동안 수집 되었습니다. 샘플링의 두 번째 90 분 동안 제어 (비 압박) 동물 그들의 감 금 소에 남아 있고 구속 스트레스 동물 설치류 보호 장치에 배치 되었고 새로운 새 장에 격리. 제어 동물 전체 샘플링 기간에 걸쳐 명확 하 고 모호 하지 않은 LH 펄스를 보여주었다. 반면, 사회 심리적인 스트레스의 신속 하 고 명확 하 게 타악기 LH 분 비 억제.
그림 1: ovariectomized 쥐에서 대표적인 LH 펄스 패턴. (A, C) 비 강조 쥐를 제어 합니다. (B, D) 스트레스 자제 0-90 분 (회색 음영된 지역)에서 부과 했다 쥐와 LH 분석 했다. 오픈 데이터 포인트 DynPeak로 식별 하는 펄스를 나타냅니다. 15 이 그림 양 그 외 여러분, 내분비학 158(11)에서에서 수정 되었습니다: 내 분 비 학회, 저작권 2017 허가 3716-3723, 2017. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
여기는 쥐에 있는 타악기 LH 분 비의 평가 대 한 전체 혈액 꼬리 팁 샘플의 빈번한 혈액 컬렉션에 대 한 프로토콜에 설명합니다. 이 프로토콜의 사회 심리적인 스트레스에 노출 다음 타악기 LH 분 비의 급성 변화 탐지에 대 한 샘플의 수집을 가능 하 게 하 고 다른 급성 또는 만성 조작에서 LH 펄스의 평가 적합.
LH 펄스의 안정적이 고 강력한 프로필을 달성 하기 위한이 프로토콜의 중요 한 구성 요소에서 처리 하는 순응 기간. 호르몬 분 비 저하 시킬 수 있습니다 스트레스를 처리 하는 생각은 문학,17 에 따라 추측 되었지만 명시적으로 테스트입니다. 그러나, 최근 간행물에 묘사 된 대표적인 LH 펄스 패턴의 분석 처리를 철저 하 게 순응 하는 이점을 명확 하 게 보여 줍니다. 10 일 처리를 이용 하 여 초기 연구에서 LH 펄스는 아무 lh에서 펄스 발견 된 장기간으로 불규칙 한 간격으로 발생 했습니다. 1 정액 간행물 그 후 계속 있다 추세 문학에서 장시간 처리 (즉, 3 또는 4 매일 처리의 주). 5 , 6 , 8 여기에 설명 된 프로토콜 처리의 5 주 총을 포함 하지만, 세션 처리 및 experimentalists에 대 한 주말 작업을 최소화의 유사한 수를 달성 하는 첫 번째 3 주말에 처리 생략 합니다. 비록 우리가 유효한 임계값 수를 제공할 수 없습니다 세션 처리에 필요한 LH 펄스의 성공적인 탐지 우리 확장된 순응 기간을 고려 하는 것이 절차의 새로운 실무자를 격려 했다. 특정 실험 패러다임 (예: 공부 하는 젊은 동물에 LH 펄스), 아래 순응 처리의 몇 주 실용적 되지 않을 수 있습니다. 이 실험에 대 한 그것은 중요 한 그 충분 한 처리 순응 이루어집니다; 아마도 여러 처리 세션 일 당 충분 한 것입니다.
혈액 컬렉션 기간 동안 환경 스트레스를 최소화 하는 것은 또한이 프로토콜의 성공에 중요입니다. 이 목표를 추구 하 여 우리 전체 순응 기간 동안에 물고기 내 조용한 방에 우리의 쥐 집. 샘플링의 날에 동물 방 문의 외부에 "조용히 하십시오" 표시의 배치는 의도 하지 않은 방해를 제거 하는 데 도움이 있습니다. 혈액 컬렉션 기간 동안 한 천을 사용할 수 있습니다 biosafety 내각에 피펫으로 휴식, 플라스틱 팁 및 펜에, 따라서, 이러한 항목을 조작 하 여 발생 하는 잡음을 최소화 하는 장소를 제공 하. 마지막으로, 한 사람이 쥐를 처리 하 고 실험 당일 모든 혈액 샘플을 수집 해야 하는 것이 좋습니다. 이 개인 주의 그리고 일관 된 시간의 하루 (샘플링 시간 유사 해야 합니다), 동물 처리에 부지런 해야 이후 circadian 입력 스트레스 응답에 영향을 미칠 것으로 알려져 있습니다. 18 만약 LH 펄스는 드문 또는 탐지, 외부 스트레스의 소스를 식별 및 최소화 한다. 혈액 컬렉션 기간 동안 스트레스를 최소화와 관련 된 다른 절차상 세부 사항 꼬리의 클리핑 하 고 LH에 대 한 분석을 샘플 수집 사이 경과 시간의 금액입니다. 우리는 LH 분석 결과 대 한 샘플을 수집 하기 전에 45 분 각 마우스의 꼬리를 클립. 이 지연 샘플링, 동안 부과 된 어떤 추가 치료에서 클리핑 꼬리와 관련 된 스트레스를 일시적으로 분리 하는 역할 꼬리로 혼자 클리핑 입증 되었습니다 순환 corticosterone 농도 상승. 19 혈액 샘플 철회 (하지만 삭제)이 45 분 창 추가 마우스 처리 절차에 순응 하 고이 지연 동안 혈액 응고 형성을 방지.
쥐에 있는 빈번한 혈액 컬렉션에 대 한이 프로토콜을 사용 하는 경우 최종 고려 사항은 이다이 종족의 작은 혈액 볼륨 수와 수집 된 각 샘플의 볼륨을 제한 합니다. 농 무부 동물 검사 가이드에 따르면 쥐의 몸 무게의 킬로그램 당 피 72 mL 있다. 20 생존 실험에 대 한 혈액 량의 7.5%를 수집할 수 있습니다 1 주 복구 기간 주어 단일 샘플링 기간에 하 고 2 주 회복 기간으로 혈액 량의 10%를 수집할 수 있습니다. 우리가 정기적으로 수집 < LH 분 비 패턴에 어떤 부정적인 영향 없이 (를 포함 하 여 대표 결과 여기에 표시), 현재 자주 혈액 컬렉션 프로토콜을 사용 하 여 마우스의 예상된 혈액 볼륨의 7.5%. 우리 물고기에 성인 ovariectomized C57/Bl6 마우스 무게 약 22 g (1.58 mL의 이론적인 혈액 볼륨), 혈액의 118.5 µ L를 수집 허용. 7 사전 컬렉션 처리 샘플 (분석 하거나 분석 하지)에 더하여 30 샘플의 혈액 (샘플 당 3 µ L), 7.5% 혈액 볼륨 제한 아래 111 µ L의 총 180 분 이상 수집 됩니다. 그것은 혈액 샘플의 볼륨 LH 농도 낮을 것으로 예상 하는 경우 특정 조건에서 LH를 감지를 조정 해야 할 수 있습니다 주목 해야한다. Gonadectomized 마우스에서 3 µ L 전체 혈액의 LH 검출 하기 충분 하다. 더 큰 혈액 볼륨 수집은 LH 농도 낮고 따라서 LH 분석 결과의 감도에 가까울 것으로 예상 때 고려 되어야 한다. 따라서, 마우스의 작은 혈액 볼륨에도 불구 하 고 충분 한 혈액 샘플 180 분 동안 타악기 LH 분 비의 탁월한 프로필을 평가 하기 위해 수집할 수 있습니다.
결론적으로,이 자주 혈액 확장 프로토콜 하이라이트를 샘플링 처리 시간의 연장된 기간 동안 쥐에 타악기 LH 분 비의 평가 위해 순응 기간. 우리는이 프로토콜은 이전에 모니터링할 수 있는 LH 및 사회 심리적인 스트레스에 다음 노출의 강력 하 고 일반 펄스 특성 충분 한 증명 하고있다. 이 프로토콜은 다른 유형의 스트레스 나 생식 호르몬 분 비를 변경할 수 있는 다른 치료에 대 한 LH의 응답을 평가 하 적응 될 수 있다. 또한,이 혈액 컬렉션 프로토콜 성장 호르몬에 대 한 보고 되었습니다 시간이 지남에 농도에서 변화 하는 다른 순환 요인의 측정에 대 한 적응 될 수 있습니다. 21 그것은 LH의 분 비 패턴 이제 종에서 모니터링할 수 있습니다 내분비학의 분야에 놀라운 기여 복잡 한 유전 및 LH 맥 박 규칙을 연구를 분자 접근 vivo에서 사용할 수 있는 고 실용.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
저자는 박사 제니퍼 양 및 알렉산더 (사샤) 카우 프만이 기술 뿐만 아니라 수많은 도움과 중요 한 토론 기술 지원에 대 한 감사합니다. 혈 청 호르몬 분석 실험 양 그 외 여러분, 복제 Ligand 분석 결과 및 분석 코어, 유 니스 케네디 슈 라이버 NICHD/NIH (NCTRI) 부여 P50-HD28934에 의해 지원 연구에 대 한 버지니아의 대학 센터에서 2017 수행 했다.
연구 지원의 소스: R01 NICHD 86100 (KMB), RBM T32 NICHD 007203에 의해 지원 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Biosaftey cabinet | Lab Products Inc | L/F-B | |
| Bovine serum albumin | Sigma | A5403 | |
| Tween-20 | Sigma | P2287 | |
| KCl | Sigma | P9333 | |
| NaCl | Sigma | S7653 | |
| Na2HPO4 (anhydrous) | Sigma | S7907 | |
| KH2PO4 | Sigma | P5655 | |
| Ultrapure water | Millipore | Purified and filtered water | |
| Broome Rodent Restraint Device | Harvard Apparatus | 52-0460 | Not necessary for blood collection, but were used in the collection of representative data. |
| DynPeak | n/a | n/a | http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0039001 |
References
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