Summary
ここでは、ウイルス不活化全血から急速なウイルス核酸抽出のためのプロトコルを提案する.抽出は、採血管に直接行い機器や電気を必要としません。メソッドは実験施設に依存しないとすることができます (例えば、野戦病院で) どこでも使用されます。
Abstract
アウトブレイク管理、リスクの抑制、および患者のケアのための感染症の迅速診断が欠かせません。以前、真空採血管に直接商業換/結合バッファーを追加することによって安全な核酸 (NA) テストのための血液採取中にエボラ ウイルスの急速なベッドサイド不活性化する方法を示しました。このベッドサイド不活化アプローチを使用して、我々 手法を開発した安全、迅速かつ簡単なベッドサイド NA 抽出換/結合バッファー不活化全血中のウイルスの後続の検出。NA の抽出は、採血管で直接実行され、機器や電気を必要としません。
換/結合バッファーには採血後チューブを手で弾くことによってのコンテンツが混在し、混合物は室温で 20 分間インキュベートします。チューブに磁性ガラス粒子 (MGPs) が追加され、コレクション チューブを手で弾くことによってのコンテンツが混在します。ゴムや磁石マグネット ホルダーを使用して、採血管の側面に、MGPs を収集します。MGPs 3 回洗浄し、コレクションの管に直接溶出バッファーの追加により、NAs NA 試験、qPCR 反応から MGPs を取り外すことがなく等温ループ増幅 (ランプ) などの準備が整います。NA の抽出法があらゆる所に依存しないと簡単にすることができます (例えば、野戦病院の隔離病棟) どこでも使用されます。この NA 抽出法をランプとポータブル機器と組み合わせれば、血液のコレクション 40 分以内で診断が可能です。
Introduction
ウイルスの発生状況は、患者が隔離病棟または迅速な診断が必要な場合に限られているとき、安全で簡単、かつ正確なポイント ・ オブ ・ ケアの分子診断は患者のケアとリスクの封じ込めのため不可欠です。2 つウイルスの最近の発生、エボラ出血熱ウイルス (EBOV) 西アフリカ (2013)、南アメリカ (2015)、ジカの改善ポイント ・ オブ ・ ケアの診断テスト分子、逆のトランスクリプションのループを介した等温などに対する関心が高まってください。増幅 (RT ランプ)1,2編シュプリンガー ・ ポリメラーゼ増幅 (RPA)3,4。RT ランプ、RPA は、簡単なサンプル準備を行うことが急速な敏感な特定の分子テストです。ジカ ウイルスの RT ランプは 30 分1; 内非精製の全血試料中ジカ ウイルスを検出することができます側方流動試金 (LFA) と結合されていますただし、リスク グループ 4 病原体として分類される、非常に伝染性、EBOV のサンプルは、バイオ セーフティの下で処理する必要がある 4 (BSL-4) 条件、任意の安全な診断手順を実行前に不活化します。
EBOV、3,2,54,サンプル、換散バッファーの追加など簡略化された不活化方法が発生; 中に使用されました。ただし、これらのメソッドには、BSL 3 バイオ セーフティ キャビネット、遠心分離機、加熱ブロック、最低、ピペットなどの実験装置と BSL 4 条件下で処理が不要です。病棟別や野戦病院でこの装置は通常ありません。このような課題を克服するために、スーツケース3診断を実行する試みがなされ、いくつかのポータブル デバイスとマシンを開発 [例えば核酸 (NA) 抽出のためのポータブル デバイス] されている6。ただし、この EBOV 肯定的なサンプルは、これらのデバイスを使用することができます前に不活化する必要があります。
について報告した急速なベッドサイド ウイルス不活化法による EBOV7、ワクシニア ウイルス、牛痘ウイルス8商業換/結合バッファーの添加による普通の真空採血管に直接を可能にします。患者から不活化バッファー7へ血液の転送。クローズド システムのこの直接および即時の不活化 BSL 4 条件7など、厳密な包含を使用してサンプルを処理する必要がある、通常の BSL 2 条件下でサンプルを処理できます。この不活化方法はロボットや手浄化キット7など、いくつかの NA 抽出システムとの互換性ただし、これらのメソッドには、実験装置、ロボット、遠心分離機、や電気のフィールドの設定または隔離病棟内存在とは限らないなどが必要があります。
本報告で述べる安全・迅速かつ簡易マニュアル NA 抽出換/結合バッファー不活化全血中のウイルスのそれに続く分子検出のため。NA の抽出法では、マグネット ・ マグネット ホルダー以外の装備は必要ありません。NA を抽出するための遠心分離機、ブロック、または電気暖房は不要です。したがって、このメソッドは実験施設に依存しないとすることができます簡単に任意の場所 (例えば、野戦病院、病棟の分離または低リソースの設定で) 使用します。NA 抽出法は、迅速かつ簡単な qPCR、RT qPCR、ランプ、または RT ランプなどのすべてのダウン ストリーム NA テストで直接使用することができます。この NA 抽出法をランプとポータブル バッテリー駆動の恒温器と組み合わせれば、血液のコレクション 40 分内ベッドサイド診断を取得できます。
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Protocol
生物医学研究倫理委員会、首都圏は、インフォームド コンセントを与えているし、ここで説明したすべてのメソッドは、アッセイ開発プロジェクトに関するデンマークの法律に従って、倫理委員会システムによってレビューから除外されています。
1. ウイルス不活化と急速な NA 抽出真空採血管の準備
注意: このプロトコルに使用されるバッファーには、刺激であるためチオシアン酸 (GITC) および非イオン性界面活性剤が含まれています。適切な研究室安全対策流フードを使用し、それを処理するときは、手袋を着用します。皮膚と眼との接触を避けます。バッファーがこぼれたら、この混合物は有毒なシアン化物の形成につながる可能性がありますので汚染された表面が消毒クロラミンや次亜塩素酸ナトリウム (「漂白剤」の成分) を直接決してする必要があります。最初、吸収性組織とこぼれたバッファーを拭いてください。次に、70% のエタノールと水の表面をきれいにし最後に、クロラミンまたはナトリウム次亜塩素酸を使用します。
- 血液コレクション真空管を準備するには、25 x 1 針と 3 mL シリンジを使用してチューブの蓋を貫通して 4 mL EDTA 真空管に特定商業換散バッファーの 1.6 mL を注入します。
注: は、真空管式のふたを削除しないでください。真空を維持する必要があります。 - 真空管を使用するまで室温でバッファーを含むを保存します。
注: 少なくとも 1 年間の準備の後のチューブは安定しています。
2. NA 抽出バッファーの準備
- NA 抽出バッファーを準備するには、ラックに 2 つ 1.8 mL、2 4.5 mL および 1 つの 3.6 mL チューブを配置します。
- 磁性ガラス粒子 (MGPs) きれいな 1.8 mL チューブ、MGPs。 それと再懸濁します MGP サスペンション完全にそれをピペッティングする前にラベルの 960 μ L をピペットで追加します。
注: MGPs は、管の下部を迅速に収集する傾向があります。 - 追加、ピペッティング、4 mL の洗浄バッファー私きれいな 4.5 mL 管によっておよび WB 1 としてラベルを付けます。
注意: 洗浄バッファー私は刺激性であるため塩化物を含んでいます。適切な研究室安全対策流フードを使用し、それを処理するときは、手袋を着用します。皮膚と眼との接触を避けます。 - 洗浄バッファー II きれいな 3.6 mL チューブ 1.5 mL をピペットで追加し、WB 2 としてラベルを付けます。
- きれいな 4.5 mL の管に洗浄バッファー III の 3 mL をピペットで追加し、WB 3 としてラベルを付けます。
- きれいな 1.8 mL チューブに溶出バッファーの 100 μ L をピペットで追加し、EB としてラベルを付けます。
- 使用するまで室温で検体のバッファーを格納します。
注: チューブは、最低 1 ヶ月の準備期間を経て安定しました。
3. ウイルス感染の徴候と症状を持つ患者からの採血
注意: は、患者から全血を収集するときに適切な研究室安全措置を講じます。手袋、眼鏡を着用します。患者は単独では、バイオ セーフティ レベル 4 の手順に従ってください。
- 患者から静脈全血を収集するには、小口径の延長チューブと蝶針と換/結合バッファーを含む血液コレクション真空管を使用します。下方の位置に患者の腕を置き、コレクション チューブ蝶針よりも下の位置します。蝶針を患者の静脈に挿入し、血液コレクション真空管を小口径拡張に添付します。
注: これは逆流を防ぐ。 - 血液採取後 5-10 回チューブを反転して管の内容をミックスします。
注: 1.6 mL の溶解/結合バッファーを含む血のコレクションの管に残りの掃除により採取された試料の量自動的に 1.6 mL。 - 70% のエタノールを使用してチューブの外側を消毒します。
- 室温で 20 分間チューブを孵化させなさい。
注: プロトコルをここで一時停止することができます、完全な血のコレクションの管は-20 ° C、5 ° C、25 ° C または少なくとも 1 月7の 37 ° C で保存できます。 - 簡体字の NA 抽出方法に直接進みます。
4. 全血中の NA 抽出の簡略化
- 換/結合バッファー不活化収集した血液、ミックスから NA を浄化するために真空を反転による管の内容管手で 5-10 倍です。
- 慎重にチューブの蓋を取り外し、蓋を放電します。
- 血のコレクションの管に直接 MGPs (1 mL) の準備の因数を注ぐ。
- サンプルを格納筒、未使用採血管から新しいふたを配置します。
- チューブがしっかり閉じていることを確認し、採血管をひっくり返すこと手で 5-10 倍管の内容をミックスする蓋の上に指を置きます。
- マグネット ホルダーにチューブを置き、指を離さないように、管を密閉蓋。
- マグネット チューブの側ですべての MGPs を収集できるように手で数回チューブ マグネット ホルダーを反転します。
注: マグネット ホルダーは細長い磁石とゴムバンドで置き換えることができます。 - チューブの蓋を取り外し、使い捨てのピペットを使用するか、コレクション、50 mL のチューブに内容を注ぐことによって単に管の内容を破棄します。
注: は、ふた付き管を閉じることにより 50 mL コレクションの管からのエアロゾルを回避します。 - 血のコレクションの管に直接 WB 1 (4 mL) の準備の因数を注ぐ。
- チューブのふたを閉めてチューブをしっかり閉じていることを確認するための蓋の上に指を置きます。
- 指でしっかり蓋をしながら、マグネット ホルダーからチューブを削除します。
注: 場合磁石、ラバー バンドを使用して、単に削除ゴムバンドとマグネット チューブから。 - 手で 5 ~ 10 回の血のコレクションの管をひっくり返すこと、MGPs を再懸濁します。
- 4.6 4.8 の手順を繰り返します。
- 血のコレクションの管に直接 WB 2 (1.5 mL) の準備の因数を注ぐ。
- チューブの蓋を置き、マグネット ホルダーからチューブを取り外します。
注: 場合磁石、ラバー バンドを使用して、単に削除ゴムバンドとマグネット チューブから。 - チューブをしっかり閉じていることを確認するための蓋の上に指を置きます。
- 数秒間血のコレクションの管を手で弾くことによって、MGPs を再懸濁します。
- 4.6 4.8 のステップを繰り返します。
- 血のコレクションの管に直接 WB 3 (3 mL) の準備の因数を注ぐ。
- チューブの蓋を置き、マグネット ホルダーからチューブを取り外します。
注: 場合磁石、ラバー バンドを使用して、単に削除ゴムバンドとマグネット チューブから。 - チューブをしっかり閉じていることを確認するための蓋の上に指を置きます。
- 手で 5 ~ 10 回の血のコレクションの管をひっくり返すこと、MGPs を再懸濁します。
- 4.6 4.8 の手順を繰り返します。
- 理事会の準備の因数を注ぐ (100 μ L) 血のコレクションの管に直接。
- チューブの蓋を置き、マグネット ホルダーからチューブを取り外します。
注: 場合磁石、ラバー バンドを使用して、単に削除ゴムバンドとマグネット チューブから。 - 5-10 回指で採血管を叩くことによって理事会で、MGPs を再懸濁します。
注: プロトコルがここでは、一時停止にできるし、チューブが-20 ° C で保存できます。 - 再懸濁 mgps 1.5 mL 使い捨てピペット (任意の下位診断 NA 増幅分析などランプ/RT-ランプまたは qPCR/Rt-qpcr アッセイを使用できます) を使用して、ダウン ストリーム NA 増幅反応混合物に 1 つの液滴 (5-8 μ L) を転送します。
注: NAs が、MGPs に固執するので、必ず下流 NA 増幅反応で、MGPs を使用します。使用する前に MGP サスペンションをミックスします。混合した後、管の下部に、MGPs を収集します。
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Representative Results
ここで提示されたプロトコルは単純で効率的と換/結合バッファーで不活化感染全血サンプルで実行される任意の分子アッセイに広く適用できます。血の不活性化および NA 抽出のワークフローはに示す図 1血コレクション真空管7 (図 1 a)、血液コレクション7 (図 1 b)、NA 抽出 (の準備を含む図 1 - 1 H)、および下流の NA 分析 (図 1I)。
簡体字の NA の抽出のプロトコルにより、MGPs は溶出のステップから削除されず、したがって、NAs、MGPs に固執する傾向があります。QPCR やランプ解析などの任意の下流の分子分析は MGPs (図 1Iおよび図 2) 肯定的な結果を確保するためで直接実行する必要があります。
NA 抽出法は、効率的であり、RNA や DNA ウイルス陽性血液サンプルからのウイルス負荷 130 3,000 コピー/mL 抽出でき、qPCR または RT qPCR (図 3) を用いて低です。
ポータブル バッテリー駆動の等温デバイスや RT ランプ、ランプ NA 抽出法を用いたウイルス陽性全血サンプル、診断は採血 (図 4) から 40 分以内に取得できます。
図 1: 全血試料の簡易 NA 抽出ワークフロー 。(A) 準備を換/結合バッファーの真空の血のコレクションの管針と注射器を使用します。(B) 収集血蝶針を使用しています。(C) 場所、採血管をホルダーには、ふたを外すし、チューブに、MGPs を注ぐ。(D) は新しいふた付き管を閉じてチューブを手で弾くことによって内容をミックスします。(E) 収集、採血管側に MGPs マグネット ホルダーでチューブを反転させる。(F) 使い捨てのピペットを使用して上清を削除します。(G) は血のコレクションの管洗浄や溶出バッファーを直接注ぎし、パネルD - Fに表示されるアクションを繰り返します。(H) このパネルは、qPCR で直接使用するための準備ができて MGPs を示します RT ランプやランプ、RT qPCR 反応。(私) 転送 1 滴 (5-8 μ L) mgps 1.5 mL 使い捨てピペットを使用して PCR またはランプ反応管に。パネルAとB: この図は、Rosenstierneらから変更されています。7.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: 簡略化された NA 抽出法を用いて抽出したウイルス陽性血液サンプルからの 28 の NA 検出します。全血サンプル (1.6 mL) テスト陰性のためのウイルスが DNA ウイルス スパイク [エプスタインバー ウイルス (EBV) (2.0 × 104 - 103コピー/ml × 1.0)] または RNA ウイルス [C 型肝炎ウイルス (HCV) (6.0 × 105 - 103コピー/mL x 3.0)]やデング熱ウイルス (DENV) (1.7 × 108 - 106コピー/ml × 1.7)。上記で説明した方法を使用して NAs を抽出し、抽出された NAs は、特定の社内 qPCR、RT-PCR、ランプ、または RT ランプによって重複で分析された MGPs の有無.X-軸 = NA 検出法、 y-軸 = qPCR/ランプで肯定的なサンプルの割合。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: 簡易型 NA 抽出法の感度。メソッドのコンセプトの証明、定義されたウイルス ロードを含む異なる RNA または DNA ウイルスの準備をしたウイルス否定的な全血と NAs は、簡略化された NA 抽出法を用いて抽出しました。Guéckédou/ギニア (106コピー/ml × 2.0) の最近の流行から調製した EBOV 標準の診断 (ENIVD) のために準備の 10 倍希釈液 200 μ L を (A) 否定的な全血 (1.4 mL) をしました。抽出された NAs を社内 EBOV 固有 Rt-qpcr7 MX3005P サーマルサイクラーを使用して重複して行った。(B) 全血 (1.2 mL) の c 型肝炎者標準化された血清サンプルの 10 倍希釈 400 μ L でした (1.2 × 106 IU/mL)。抽出した NAs は、重複して、社内 HCV 特異 Rt-qpcr MX3005P サーマルサイクラーを使用してによって分析されました。(C) 全血 (1.2 mL) は、EBV (2.0 x 104コピー/ml、103コピー/mL x 8.0、103コピー/mL、x 2.7 102コピー/mL x 9.3) の異なる濃度の 400 μ L でスパイクだった。抽出された NAs を社内の eb ウイルス特異 qPCR による重複で行った。(D) 全血 (1.2 mL) は、BK ウイルス (1.3 × 104コピー/mL) の 10 倍希釈液の 400 μ L でスパイクだった。抽出された NAs を社内の BK 固有 qPCR による重複で行った。X-軸スパイク全血のサンプル (コピー/ml または IU/mL) のウイルスの最終的な集中を = y-軸 Ct 値 (平均 ± SD) を =。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4: NA 抽出と RT ランプや等温のポータブル デバイスを使用してランプを簡略化します。(A)、EBOV の異なる希釈液 200 μ L とスパイクは負の全血の 1.4 mL EBOV 正全血試料部ウイルス ・微生物の特殊診断、Statens 血清研究所、デンマークの不足のため標準診断目的 (ENIVD) のために準備します。スパイクのサンプルは簡易 NA 抽出法を用いた NA 抽出を施行し、EBOV 固有 RT ランプ反応による検討を行った.ネガティブ コントロールとして負の全血のサンプルは含まれていた。X-軸スパイク全血サンプル (コピー/mL)、 yの EBOV の最終的な集中を =-軸 = ポジティブに分。(B)の概念実証、NA を受けた 7 患者から全血 (1.6 mL) 因数診断部ウイルス ・微生物の特殊な診断、Statens 血清研究所、デンマーク、EBV (13,000 500 コピー/mL) の肯定的です簡略化された NA 抽出法を用いて抽出とポータブル バッテリー駆動魔神 II 等温デバイスを用いた eb ウイルス特異ランプ反応による検討を行った。ネガティブ コントロールとしてパルボ B19-肯定的なサンプルが含まれていた。X-軸 = 患者サンプル (コピー/mL)、 yでは eb ウイルスのウイルスの負荷-軸 = ポジティブに分。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
本報告で述べる安全、迅速かつ簡単なマニュアル ベッドサイド NA 抽出換/結合バッファー不活化全血中のウイルスの下流分子検出のため。換/結合バッファー (材料表)7を含む真空採血管で収集された全血サンプルで直接実行するのに記載されている NA 抽出法が開発されました。この特定のバッファー EBOV7を不活性化し、メソッドの重要なコンポーネントです。血液採取後、サンプルの完全な不活化を確保するために、少なくとも 20 分7管の培養をお勧めします。ベッドサイドの EBOV 不活化 BSL 4 条件などの厳密な包含条件の下で任意の EBOV 陽性検体を処理する必要があるができ通常の BSL 2 条件下で処理されるサンプル。その他リスク グループ 4 つの病原体など、ラッサ ウイルス、マールブルグ ウイルス、クリミア ・ コンゴ出血熱ウイルスはまたにこのバッファーによる不活化は、この遺骨が表示されることです。
説明 NA 抽出法は野戦病院、病院の隔離病棟で患者のそばに実行する開発し、したがって、実験装置、遠心分離機、ヒーター ブロック、電気などを必要としません。すべて NA 抽出法は、チューブには MGPs または洗浄バッファー、マグネット ホルダーと使い捨てピペットの固定量を含む必要があります。ピペット、必要があるし、検体のバッファーが代わりに、サンプル チューブに直接注がれているために、バッファーを含む管の事前の準備はプロトコルを簡素化します。マグネット ホルダーは、NA を含む MGPs をキャッチし、洗浄手順の簡単な処理を仲介します。マグネット ホルダーは利用可能なない場合に、普通の磁石、ゴム製のバンドをマグネット ホルダーを代えることがただし、マグネット ホルダーは、チューブを削除し、磁石とゴムバンドを適用するときに内容をこぼすのハンズオンの危険を減らします。換/結合バッファー不活化全血試料の粘度のため使い捨てのピペットを使用して、チューブから清/液体/洗浄バッファーを削除します。使い捨てのピペット廃棄物収集管にチューブから内容の直接注入によって置き換えることができますが、管の外側、液滴を作成しないようにご了承します。ドロップレットを作成すると、この混合物は有毒なシアン化物の形成につながる可能性がありますので汚染された表面が消毒クロラミンや次亜塩素酸ナトリウム (「漂白剤」の成分) を直接決してする必要があります。したがって、最初にこぼれた場合は、吸収性組織に流出を拭いてください。次に、70% のエタノールとし、水をたっぷり表面をきれいにし最後に、クロラミンまたはナトリウム次亜塩素酸を使用します。(廃棄物のコレクションの管および使い捨てピペット含む) 換散/結合バッファーと接触したすべての廃棄物が含まれています。代わりに、すべての別の廃棄物容器に廃棄物を収集し、のみ 70% エタノールでコンテナーの外側を消毒します。
NAs は通常加熱ステップ中に、MGPs から溶出が、この加熱段階は電気器具の使用を排除するために簡略化された NA の抽出のプロトコルで削除されています。したがって、NAs は、したがって、下流 NA NA 検出検出法に追加する必要があります、MGPs に固執する傾向があります。MGPs は 1.5 mL 使い捨てピペットの 1 滴を使用して下流の反応混合物に転送されます。このほかは、フィン先端のピペット; を使用して通常の加算として正確ではありません。ただし、unprecise 添加 NA/mgps ランプに、RT ランプ、qPCR、または RT qPCR 反応混合物しない反応を抑制するか、または当社の社内診断アッセイの蛍光信号に影響を与えます。しかし、これは試金の試金を異なる場合があります、すべての下流の NA のテストを検証して簡体字の NA 抽出法を使用してアッセイの感度をテストすることをお勧めします。NA 抽出法は比較的敏感と血液サンプルからの DNA または RNA ウイルスとして低 3,000 コピー/ml を簡単に抽出、qPCR など下流分子のテストで検出を含みます。臨床試料中のウイルス量は、感染症の急性期に通常非常に高い、10 以上5コピー/ml9 を通常含む、EBOV などの出血熱ウイルス、ラッサ ウイルス、クリミア ・ コンゴ出血熱ウイルス、10,11。したがって、これらのサンプルのウイルス簡単に検出できますこの NA 抽出法を用いたします。ただし、MPLB の不活性化以外の EBOV7, ワクシニア, と牛痘ウイルスのウイルス8遺骨が表示されます。
簡体字の NA 抽出法は隔離病棟またはフィールドの設定で実行でき、ポイント ・ オブ ・ ケア分子診断に最適です。ただし、メソッドは開管の実践的な処理のための高スループット NA の抽出のために適当ではありません。高スループット NA 抽出が必要な場合、NA 抽出ロボット7を使用して、容易に不活化全血サンプルを浄化することができます。別の欠点は換/結合バッファー [20-30% ポリエチレング リコール p-(1,1,3,3-tetramethylbutyl) フェニル エーテルと 30-50% のためチオシアン酸 (GITC)]17と洗浄バッファーなど有害な試薬の取り扱い (30-50% のための私塩化)17流フード外オープン チューブ。(V/v) 1:1 の血のコレクションと真空管内に濃縮された形で換/結合バッファーが含まれている、チューブを開く前に、濃度が減少します。開口部の真空管と MGPs または洗浄バッファーの追加/削除私が数秒以内実行され、したがって、エアロゾルの吸入の危険性は最小限。洗浄バッファーを除去した後-私は、チューブからその他の有害な試薬がないプロトコルで使用します。
20133,6,12,13,14,15,16 EBOV 発生時より培ってきた多くの急速なポイント ・ オブ ・ ケア分子テストとデバイス.ただし、これらのテストの多くはまだ伝染性材料、BSL 3 バイオ セーフティ キャビネットの最小値、実験装置、電気や暖房のブロック、遠心分離機、ピペットなどでアップ ストリーム処理が必要です。バイオ セーフティ キャビネットの使用は、複雑にし、迅速な診断を延ばします。簡体字の NA 抽出法と組み合わせてウイルス不活化管に血の直接のコレクションで記述されているベッドサイド ウイルス不活化実験施設、電気、バイオ セーフティ キャビネットの必要があります。さらに、簡易 NA 抽出法は、患者の横にあるを実行し、バッテリー駆動のポータブル等温デバイスのランプ反応と組み合わせることができます、ので安全なベッドサイド分子診断は 40 分以内で取得できます。
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Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Acknowledgments
その技術支援と臨床サンプルの処理のスザンヌは軽やかに駆けるラスムッセンと Solvej Kolbjørn ジェンセンに感謝しますこのプロジェクトは、革新的な医学イニシアティブ 2 共同事業助成契約 N ° 115843 下から資金を受けている EbolaMoDRAD コンソーシアムの一部です。この共同事業は、欧州連合のホライゾン 2020年研究とイノベーション プログラムおよび舵からサポートを受け取ります。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vacutainer K2 EDTA tubes (4 mL) | Becton Dickinson | 368861 | |
| Plus Blood Collection | Becton Dickinson | 362725 | |
| 23G x 1 needle | Becton Dickinson | 300800 | |
| LUER LOK syringe (3 mL) | Becton Dickinson | 309658 | |
| Butterfly needle with small-bore extension tubing | Jørgen Kruuse A/S | 121714 | |
| 1% Virkon | Nomeco A/S | 849265 | |
| MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I - Lysis/Binding Buffer - Refill | Roche Diagnostics A/S | 03246752001 | |
| MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit | Roche Diagnostics A/S | 3038505001 | |
| Nunc™ Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes (1,8 mL) | Thermo Fisher Scientific | 375418 | |
| Nunc™ Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes (3,6 mL) | Thermo Fisher Scientific | 379189 | |
| Nunc™ Biobanking and Cell Culture Cryogenic Tubes (4,5 mL) | Thermo Fisher Scientific | 379146 | |
| DynaMag™-5 Magnet | Thermo Fisher Scientific | 12303D | |
| Transfer pipette (3.5 mL) | Sarstedt | 86.1171.010 | |
| Thermo Scientific™ Samco™ Fine Tip Transfer Pipettes (1.5 mL) | Thermo Fisher Scientific | 231 | |
| Thermo Scientific™ Nunc™ 50 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes | Thermo Fisher Scientific | 339652 |
References
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