Summary
هنا، نقدم بروتوكول تلطيخ مرنة لتحديد الألياف المرنة في أنسجة سرطان المعدة pT3N0M0 على أقسام رسمية ثابتة، البارافين جزءا لا يتجزأ. في وقت لاحق، ونحن نصف طريقة لتحديد ما إذا كانت الخلايا السرطانية تغزو وراء لامينا مرنة.
Abstract
اللامينا المرنة، التي تقع عادة في طبقة شبه mesothelial، المتاخمة للخلايا الوسطى العبية، هو amphiphilic على الهيماتوإكسلين وeosin (H & E) تلطيخ ولكن يمكن تصورها من خلال تلطيخ مرنة. واحدة من الفوائد الهامة للتلطيخ المرن هو أنه يجعل من السهل تحديد ما إذا كانت الخلايا السرطانية قد غزت وراء لامينا مرنة. وهذا يساعد في دراسة مدى الغزو السطحي البريكوني، وبالتالي التمييز بين مراحل pT3 و pT4 في سرطان الجهاز الهضمي. في هذه الدراسة، نقدم بروتوكول لتحديد الألياف المرنة في أقسام الأنسجة السرطانية المعدية المثبتة رسميا، البارافين جزءا لا يتجزأ من pT3N0M0. نحن إعداد أقسام البارافين 5-μm ثابتة على الشرائح، ومن ثم يتم إزالة جميع الشرائح وإعادة ترطيبها أثناء إجراء تلطيخ. في وقت لاحق، يتم أكسدة جميع الأقسام من قبل برمنغنات البوتاسيوم، مبيض بحمض الأكساليك، ملطخة بتلطيخ مرن، وملطخة من قبل فان غيسون. وأخيرا، فإننا ندرس تأثير تلطيخ؛ لامينا مرنة ملطخة الأزرق والأسود وألياف الكولاجين ملطخة الأحمر، في حين أن الخلايا السرطانية ملطخة في ظلال متفاوتة من الأصفر. كما أننا نصف بالتفصيل الأساليب المستخدمة لتحديد العلاقة الموضعية بين الخلايا السرطانية واللامينا المرنة. هذه الطريقة بسيطة، منخفضة التكلفة، وقابلة للتطبيق على نطاق واسع في تحديد غزو سطح البريكوني في سرطان الجهاز الهضمي بسبب انتقائيته المعلقة للألياف المرنة والنتائج الحقيقية.
Introduction
وفقا للورم، عقدة، وورم (TNM) نظام تنظيم السرطان، وتشخيص سرطان المعدة في المرحلة المرضية pT4 هو أسوأ بكثير من ذلك في pT3 (UICC 8/ AJCC)1. مع سرطان المعدة ، عادة ما يعتمد تصنيف الورم الأولي (pT) على عمق غزو الورم2. يتم تعريف سرطان المعدة pT3 المرحلة المرضية على أنه سرطان يغزو من خلال بروبريا العضلات في الأنسجة تحت الجلد، في حين يتم تعريف سرطان المعدة pT4 كسرطان اختراق إلى سطح البريطونالحشوي. وجود الغازية السطحية البريكونية هو المفتاح للتمييزبين المرحلتين 2. ومع ذلك، لأن طبقة الخلايا الوسطى العبية هي رقيقة جدا، يمكن أن تتلف خلال الجراحة، والعلاج بعد الجراحة، وتثبيت3. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تؤدي التغيرات الالتهابية المرتبطة بالورم والتليف إلى تلف التشريح الطبيعي للحيط، مما يجعل من الصعب جداً الحكم بدقة على غزو سطح البريطون باستخدام H&E تلطيخفقط 4. طرق التشخيص المساعدة الحالية مثل علم الخلايا والكيمياء المناعية هي ذات قيمة تشخيصية محدودة5،6 لأنها إيجابية كاذبة أو لديها فعالية منخفضة من حيث التكلفة.
الغشاء المصلي يشمل البريتوم، الجنبة، والتاميرة، ويتكون من الميسوثيوم، غشاء الطابق السفلي، وطبقة شبهميثيرية 7. إحدى السمات النسيجية الشائعة للغشاء المصلي هي وجود لامينا مرنة في الطبقة شبه الوسطى، بجوار الخلايا الوسطى8،9. لامينا مرنة لديها قدرة قوية مضادة للضرر ويمكن أن تكون بمثابة علامة التكهن البديل إذا تم تدمير الخلايا الوسطى من قبل التهاب شديد ذات الصلة بالورم أو التليف3. لامينا مرنة تتألف أساسا من الإيلاستين وميكروفيبريل10، والتي يمكن تصورها عن طريق تلطيخ مرنة. السبب الرئيسي وراء استخدام تلطيخ مرنة هو أن الإيلاستين يشكل رابطة الهيدروجين مع مجموعة الفينول من ريسورسينول في محلول الإيلاستين، مما تسبب في الألياف المرنة لتكون ملطخة الأزرق والأسود. بعد فان غيسون (VG) تلطيخ المتناقضة، ألياف الكولاجين يمكن أن تكون ملطخة الأحمروألياف العضلات وخلايا الدم الحمراء يمكن أن تكون ملطخة الأصفر 8،11،12،13.
الطبعة الثامنة من تنظيم TNM من سرطان الرئة يعرف الغزو الجنبي الحشوي (T2) بأنه غزو الورم وراء لامينا مرنة أو غزو على سطح الجنبة الحشوية2. وقد أظهرت الدراسات على سرطان القولون والمستقيم أن غزو لامينا مرنة في سرطان القولون والمستقيم pT3 قد يكون السبب في ضعف التنبؤات. كما ثبت أن معدل البقاء على قيد الحياة الشامل لسرطان القولون والمستقيم لمدة 5 سنوات والعام يشبه pT4a13و14و15. استنادا إلى دراساتنا السابقة على تلطيخ مرنة، وقد وجد غزو لامينا مرنة أن يكون لها تأثير سلبي كبير على التكهن بسرطان المعدة pT3 وينبغي أن تعامل بنفس الطريقة التي pT4a سرطان المعدة12. وبالتالي، فإن هذه الطريقة البسيطة والفعالة من حيث التكلفة يمكن أن تساعد في القضاء على عدم اليقين في النتائج التي تم الحصول عليها من خلال تلطيخ H&E، وغيرها من القيود الشائعة المرتبطة بطرق التشخيص المساعدة الأخرى، بما في ذلك علم الخلايا والكيمياء المناعية، من بين الاخرين. يمكن استخدام هذه الطريقة بكفاءة لتشخيص غزوات سطح البريكوني لسرطان الجهاز الهضمي، وخاصة في بعض الحالات الغامضة. انها مريحة منذ H & E وصمة عار وغيرها من البقع عادة ما تجعل من الصعب تحديد مثل هذه الغزوات. كما تضمن هذه الطريقة موثوقية النتائج لأنها انتقائية للغاية، لا سيما للألياف المرنة. هنا، نقوم بإجراء تلطيخ مرن لتحديد ما إذا كانت الخلايا السرطانية قد غزت لامينا مرنة في سرطان المعدة pT3N0M012.
يتم استخدام هذه الطريقة لتحديد الألياف المرنة في الأنسجة على المواد الرسمية الثابتة، والبارافين جزءا لا يتجزأ، ويمكن استخدامها للأقسام المجمدة كذلك. هنا، نختار أقسام جزءا لا يتجزأ من البارافين للحصول على أفضل صيانة للمورفولوجيا الخلوية والأنسجة. جميع الخطوات في هذا البروتوكول تجري في درجة حرارة الغرفة. يتم استخدام مجموعة تلطيخ التجارية التي تشمل محلول برمنغنات البوتاسيوم، حل حمض الأكساليك، محلول الإيلاستين، ومحلول فان غيسون في الدراسة المقدمة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
بين عامي 1994 و 2005، تم اختيار عينات المرضى من قبل اثنين من أخصائيي أمراض الجهاز الهضمي من ذوي الخبرة في مستشفى السرطان التابعة لمدرسة شيانغيا للطب، جامعة الجنوب الوسطى، من المرضى الذين عانوا من استئصال المعدة، مع التشخيص المرضي بعد الجراحة لسرطان المعدة في مرحلة pT3N0M0 (وفقا للمرحلة TNM السابع). وقد وافقت لجنة استعراض الأخلاقيات على هذه الدراسة.
1 - تقسيم الأقسام
- ضع كتلة البارافين في حامل ثابت للميكروتومي الزلاجة، والتي يمكن أن تتحرك إلى الوراء وإلى الأمام عبر النصل. ضبط الزاوية المثلى بين كتلة وسكين microtome.
ملاحظة: الزاوية المثلى لا تعتمد فقط على هندسة النصل ولكن أيضا على سرعة القطع وتقنية. - تقليم كتلة البارافين حسب الضرورة وقطعها إلى 5-ميكرومتر سميكة المقاطع العرضية.
- ضع أقسام البارافين 5-ميكرومتر في حمام مائي عند حوالي 40 - 45 درجة مئوية وحمّله، بعد ذلك، من الماء على الشريحة الزجاجية، قسم واحد لكل شريحة.
- اضغط على القسم المثبت بعناية ضد منشفة ورقية لإزالة أي المياه المتبقية وفقاعات الهواء المحتملة.
- السماح للأقسام لتجفيف الهواء لمدة 30 دقيقة ثم خبز لهم في فرن في 45 - 50 درجة مئوية لمدة 2 ساعة.
2. إزالة البارافين والإماهة من جميع الشرائح
- تزج الشرائح في الزيلين في جرة كوبلين لمدة 10 دقائق.
- أخرج الشرائح من جرة الزيلين الأولى واغمرها في الزيلين في جرة أخرى لمدة 10 دقائق.
- الآن، تزج الشرائح في الإيثانول 100٪ في جرة كوبلين لمدة 5 دقائق.
- تزج الشرائح في الإيثانول 100٪ في جرة كوبلين أخرى، وأيضا لمدة 5 دقائق.
- تزج الشرائح في الإيثانول 95٪ في جرة كوبلين لمدة 2 دقيقة.
- تزج الشرائح في الإيثانول 70٪ في جرة كوبلين لمدة 2 دقيقة.
ملاحظة: تأكد من أن الشرائح مغمورة تماماً في الحلول أثناء تنفيذ الخطوات المذكورة أعلاه. - شطف الشرائح لفترة وجيزة مع الماء المقطر في جرة جديدة.
3. تلطيخ
- قبل الشروع في تلطيخ، مسح أي حلول زائدة حول الأنسجة على الشريحة مع ورقة الأنسجة.
- ضع الشرائح في غرفة الحرارة وظروف رطوبة الغرفة لتجنب تجفيف الأنسجة على الشريحة طوال عملية تلطيخ كامل.
- أكسدة الشرائح مع بضع قطرات من برمنغنات البوتاسيوم لمدة 5 دقائق.
- شطف الشرائح المؤكسدة بالماء المقطر في جرة كوبلين مع 2 - 3 التغييرات. مراقبة اللون الأزرق للأنسجة.
- الآن، تبييض هذه الشرائح عن طريق إضافة بضع قطرات من حمض الأكساليك لمدة 5 دقائق.
- شطف الشرائح عن طريق غمر لهم في جرة كوبلين مليئة بالماء المقطر. أداء شطف 2X - 3X.
- الآن، غسل هذه الشرائح لفترة وجيزة في الكحول 95٪، ومن ثم تزج الشرائح في محلول الإيلاستين (5 غرام / لتر) لمدة 8 - 24 ساعة.
ملاحظة: حل الإيلاستين متقلبة، ووقته تلطيخ طويل نسبيا، لذلك فمن الأفضل لتزج الشرائح مع تلطيخ مرنة في حاوية مختومة، مثل زجاجة شفافة مع غطاء الختم. تعتمد سعة الحاوية وحجم حل الإيلاستين على عدد الشرائح المنغمسة، طالما أنها تمكن من الغمر الكامل لجميع الشرائح. - تزج هذه الشرائح مباشرة في الإيثانول 95٪ لمدة 1 - 2 دقيقة للتمييز بين كل قسم الأنسجة بشكل جيد.
ملاحظة: التمايز يشير إلى التغيير في تهمة قسم الأنسجة، الذي يزيل تلطيخ الزائدة التي تمتصها الأنسجة ويجعل الألوان أكثر وضوحا. بعد تلطيخ محلول الإيلاستين، لا ينبغي غسل العينات بالماء المقطر لتجنب أي صعوبة في التمايز. تحقق مجهريًا، حسب الضرورة، للحصول على الألياف المرنة الزرقاء والسوداء والخلفية الرمادية. فمن الأفضل أن تنقص قليلا من الأنسجة منذ وصمة عار فان غيسون اللاحقة يمكن أيضا استخراج إلى حد ما وصمة عار مرنة. - شطف هذه الشرائح تماما بالماء المقطر بعد التمايز.
- مضاد وصمة عار الشرائح في حل فان غيسون لمدة دقيقة واحدة.
ملاحظة: حجم حل فان غيسون يجب أن يكون كافيا لتكون قادرة على تزج قسم الأنسجة على كل شريحة تماما. - إسقاط بسرعة 95٪ الإيثانول على هذه الشرائح لبضع ثوان للتمييز بين كل قسم الأنسجة بشكل جيد.
ملاحظة: لا تشطف الشرائح بأي ماء بعد تلطيخ فان غيسون، لأن ذلك يمكن أن يضعف أو حتى ينزع لون مضاد التلطيخ في فان غيسون.
4. الجفاف والتركيب
- تزج الشرائح في الكحول 95٪ لمدة 5 دقائق للسماح لهم بالجفاف بسرعة.
- الاستمرار في تجفيف هذه الشرائح من قبل 2 التغييرات من الكحول 100٪، في كل مرة غمر الشرائح لمدة 5 دقائق.
- تزج الشرائح في 2 التغييرات من الزيلين، في كل مرة لمدة 3 دقائق.
- إضافة قطرة واحدة من المتوسط تصاعد الراتنج إلى الشريحة ووضع غطاء على الجزء العلوي.
5. المراقبة المجهرية للشرائح
- العثور على الاتجاه المصلي ومراقبة نتائج تلطيخ مرنة: الألياف المرنة (lamina) ملطخة الأزرق والأسود، وألياف الكولاجين هي الأحمر الملون، وألياف العضلات هي الأصفر الملون.
- ابحث عن الخلايا السرطانية في الشريحة بأكملها: الخلايا السرطانية ملطخة باللون الأصفر12.
- تحديد العلاقة الموضعية بين الخلايا السرطانية واللامينا المرنة.
ملاحظة: سيكون هناك حالتين هنا. طالما أن هناك خلية ورم واحدة التي غزت وراء لامينا مرنة في الشريحة بأكملها، ثم يمكن اعتبار هذه الحالة كغزو لامينا مرنة. من ناحية أخرى، فقط عندما لا يكون هناك خلية الورم التي غزت وراء لامينا مرنة في الشريحة بأكملها، يمكن اعتبار هذه الحالة كما لامينا مرنة عدم الغزو.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تلطيخ مرن ناجح يكشف بوضوح لامينا مرنة والخلايا السرطانية في سرطان المعدة pT3. الشكل 1 - حقل الطاقة المنخفضة، فحص مجهري بعد تلطيخ محلول الإيلاستين، قبل وصمة عار فان غيسون وفقا للبروتوكول المذكور - يظهر لامينا مرنة قريبة من الخلايا المصلية المصلية وملطخة الأزرق والأسود في شكل خيوط، ولا تزال هناك مسافة معينة بين الخلايا السرطانية ولامينا مرنة. الشكل 2 هو تلطيخ مرن نموذجي مع وصمة عار فان غيسون، حيث لامينا مرنة ملطخة الأزرق والأسود، ألياف الكولاجين هي حمراء ملطخة، وألياف العضلات والخلايا السرطانية هي الأصفر الملون. يمكن اعتبار غزو لامينا المرن الخلايا السرطانية اختراق لامينا مرنة (الشكل2B)،في حين يمكن اعتبار مرونة لامينا غير الغزو الخلايا السرطانية التي هي قريبة من لامينا مرنة، ولكن ليس الغازية (الشكل2 A). في حالة تلطيخ مرنة يكشف عن بنية متكررة، مما يشير إلى أن هناك أكثر من طبقة واحدة من لامينا مرنة، إذا كان غزو الورم لا يغزو وراء لامينا مرونة خارجية (المشار إليها بالسهام)، وينبغي تشخيص العينة على أنها مرنة لامينا غير الغزو(الشكل 2C).
الشكل 1 الصورة المجهرية للتلطيخ المرن قبل تلطيخ فان غيسون. يتم وضع علامة لامينا مرنة من قبل الأسهم، "T" يمثل الخلايا السرطانية، "S" يمثل اتجاه الغشاء المصلي. لامينا مرنة يمكن تصورها بوضوح عن طريق تلطيخ مرنة. تشير الأسهم إلى لامينا مرنة. شريط مقياس هو 200 درجة مئوية.
الشكل 2 النتيجة التمثيلية للتلطيخ المرن مع وصمة عار فان غيسون. يتم وضع علامة لامينا مرنة من قبل الأسهم، "T" يمثل الخلايا السرطانية، "S" يمثل اتجاه الغشاء المصلي. (أ) تنمو الخلايا السرطانية بالقرب من اللامينا المرنة دون غزو أبعد من ذلك. (ب) الخلايا السرطانية تغزو ما وراء لامينا مرنة. (C) تظهر الخلايا السرطانية الغزو في محيط لامينا مرنة ولكن لا تخترق ما وراء لامينا مرونة خارجية. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
توفر هذه الطريقة المقترحة هنا نهجاً دقيقاً لتحديد لامينا مطاطية تحت الجلد. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتقييم ما إذا كانت الخلايا السرطانية قد غزت لامينا مرنة في سرطان المعدة pT3N0M012. لامينا مرنة هو المحمر في H & E-الملون المقاطع، والتي لا يمكن تمييزها بسهولة من ألياف الكولاجين، وغيرها من أساليب التشخيص المساعدة القائمة، مثل علم الخلايا والكيمياء المناعية، كما بذلت قيمة تشخيصية محدودة. العثور على الخلايا السرطانية في السائل الري الصفاق لا يشير بالضرورة إلى وجود غزو مصلي للورم الأولي ، والذي قد يكون بسبب ورم العقدة الليمفاوية أو غيرها من الانبثاث البعيد5. كما من المرجح أن يتم تدمير الخلايا الوسطى من قبل التهاب ليفي، قد يكون تشخيص الكيمياء المناعية غير ممكن، وعبء العمل كبير نسبيا6. ومع ذلك، تلطيخ مرنة كأسلوب كلاسيكي، تلطيخ خاص يمكن أن تجعل لامينا مرنة مرئية بوضوح11،12،13. بعد التشغيل القياسي، وفقا لهذا البروتوكول، لامينا مرنة يمكن أن تكون ملطخة الأزرق والأسود، ألياف الكولاجين يمكن أن تكون ملطخة الأحمر، وألياف العضلات وخلايا الدم الحمراء يمكن أن تكون صفراء ملطخة، مما يجعل من الأسهل لعلماء الأمراض لتقييم توزيع الخلايا السرطانية واللامينا المرنة. قد يكون تلطيخ مرنة أيضا بعض القيود في معايير التشخيص. على سبيل المثال ، في بعض الحالات ، فإن بنية اللامينا المرنة ليست واضحة بسبب التهاب ليفي واضح متعلق بالورم. قد يكون لدى المراقبين المختلفين اختلافات في فهم المعايير التشخيصية وتطبيقها العملي في حالة واحدة، على الرغم من أن بعض علماء الأمراض لا يزالون يعتقدون أنه إذا غزا نسيج الورم ما وراء جانب واحد من اللامينا المرنة المتبقية، يمكن أن يكون تشخيص غزو لامينا مرنة17. ومع ذلك، مع استمرار تعميم تطبيق تلطيخ مرنة وتوحيد توافق الآراء التشخيص من علماء الأمراض، وسوف يضعف هذا القيد في المستقبل.
وتشمل الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول السيطرة السليمة على عملية التمييز واختيار عينات الأنسجة القياسية. بعد تلطيخ محلول الإيلاستين، لا ينبغي غسل الشرائح بالماء المقطر، ولكن الشرائح المتمايزة تحتاج إلى وضعها مباشرة في 95٪ الإيثانول لمدة 1 - 2 دقيقة لتجنب صعوبة في التمايز. بعد تلطيخ فان غيسون، ينبغي تجنب ملامسة الشرائح بالماء. بدلا من ذلك، شرائح متباينة تحتاج بسرعة إلى غسلها في الإيثانول 95٪ لبضع ثوان. وإلا، فإن لون وصمة عار فان غيسون سوف تضعف أو حتى تُحتمى. أما بالنسبة لاختيار عينة الأنسجة، فإن الجزء الأكثر أهمية هو المنطقة التي يغير فيها الشمع الاتجاه، وخاصة منطقةالزاوية الحادة، بدلا من المنطقة التي تغطيها الأنسجة اللطية المسطحة 4. تم رسم جميع الحالات في هذه الدراسة وفقا لهذه الطريقة، وكان عمق اختيار عينة الأنسجة في عمق ممكن من أجل تقييم العلاقة بين الورم وserosa. وبالإضافة إلى ذلك، فإن جميع الخطوات في هذا البروتوكول تجري في درجة حرارة الغرفة. منذ حل elastin من السهل أن تتطاير والوقت تلطيخ طويل نسبيا، فمن الأفضل لتزج الشرائح في حل تلطيخ مرنة في حاوية مختومة. أما بالنسبة للمراقبة المجهرية، فإن نتيجة تلطيخ مرنة دقيقة وموثوق بها. غير أنه في بعض الحالات الخاصة، ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار بعض المعايير التشخيصية المعقولة، على النحو الذي اقترحه Grin et al. 16.في الحالات التي يؤدي فيها التهاب ليفي متعلق بالورم إلى عدم استقرار واضح في بنية لامينا مرنة، عندما يغزو نسيج الورم وراء اللامينا المرنة المتبقية على جانب واحد، يمكن تشخيصه على أنه غزو لامينا مرن. في حالة سرطان الغدة الدرقية المخاطية ، فقط إذا كان المكون المخاطي الخلوي يغزو ما وراء اللامينا المرنة يمكن تشخيصه على أنه غزو لامينا مرن. إذا كان تلطيخ مرنة يظهر هيكل لامينا مرنة متكررة، يمكن تشخيص العينة كما غزو لامينا مرنة فقط عندما يكون غزو الورم وراء لامينا مرونة أبعد. إذا كانت الحالة المذكورة أعلاه تحدث في قسم واحد أو أكثر، يمكن تشخيص الحالة على أنها غزو لامينا مرنة16.
يوضح هذا البروتوكول تقنية مباشرة للتعرف بصريا لامينا مرنة في سرطان المعدة. هذه التقنية قابلة للتكيف على نطاق واسع ويمكن توسيعها للحكم على الغزو المصلي للتنبؤات التكهنية الأخرى، مثل سرطان المريء أو المبيض17. ويمكن أيضا أن تستخدم لتحديد الدم وغزو الأوعية اللمفاوية في سرطان القولون والمستقيم وكذلك في أنواع السرطان الأخرى، وخاصة في بعض الحالات الصعبة، لسبب أن لامينا مرنة موجودة أيضا في الأوعية والبطانة اللمفاوية. أيضا، تلطيخ مرنة رخيصة ويمكن اعتمادها بسهولة من قبل علماء الأمراض في مواقع مختلفة18. وعلاوة على ذلك، لا تقتصر هذه التقنية على أنسجة الورم، ولكن يمكن أيضا أن تستخدم لتشخيص الأمراض الجلدية والأوعية الدموية، مثل الذئبة الديسكوية الحمامية، الثعلبة، وآفة الشريان السباتي19،20. مع تطور تكنولوجيا تلطيخ مرنة وتراكم الدراسات من الأورام مع أحجام عينة كبيرة، ونحن نتوقع أن تلطيخ مرنة يمكن أن تكون مقبولة من قبل نظام التدريج AJCC في الحكم على الغزو المصلي لسرطان المعدة وسرطان القولون والمستقيم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
ويشكر المؤلفون الدعم المقدم جزئياً من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية (NO.81401902 وNO.81501992) ومؤسسة هونان للعلوم الطبيعية (NO.2017SK2134, NO.2018JJ2238). المخطوطة من تأليف غوانغ لي. يتم تنفيذ التجربة بأكملها من قبل قوانغ لي وهايان يانغ. ويشكر أصحاب البلاغ مساعدة أخصائيي الأمراض والزملاء الذين يتابعون بيانات المرضى.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
References
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , Springer. New York, NY. (2017).
- Kojima, M., et al. Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features. Frontiers in Oncology. 2, 179 (2012).
- Ludeman, L., Shepherd, N. A. Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance. Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation. Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).
- Liang, W. Y. Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers. American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).
- Carter, D., True, L., Otis, C. N. Serosal membranes. Histology for Pathologists. 3rd ed. Mills, S. E. , Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia, PA. 547-562 (2007).
- Knudsen, P. J.
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer. Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).
- Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin--a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa. Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).
- Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology. Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).
- Lei, G., et al. Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer. Human Pathology. 65, 79-84 (2017).
- Hernández-Morera, P., Travieso-González, C. M., Castaño-González, I., Mompeó-Corredera, B., Ortega-Santana, F. Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert's resorcin-fuchsin. Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).
- Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship. American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).
- Nakanishi, Y., et al. Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain. ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).
- Grin, A., et al. Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer. Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).
- Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours. Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).
- Kojima, M., et al. Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum. Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).
- Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia. Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).
- Vos, A., et al. Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery. Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).
