Summary
Hier presenteren we een protocol van elastische kleuring om elastische vezels te identificeren in pT3N0M0 maagkanker weefsels op formalin-vaste, paraffine-ingesloten secties. Vervolgens beschrijven we een methode om te bepalen of tumorcellen buiten de elastische lamina vallen.
Abstract
De elastische lamina, die zich meestal in de submesotheliale laag bevindt, grenzend aan de peritoneum mesotheliale cellen, is amfifiele op hematoxyline en eosine (H & E) kleuring, maar kan worden gevisualiseerd door middel van elastische kleuring. Een van de belangrijke voordelen van elastische kleuring is dat het gemakkelijk is om te bepalen of tumorcellen buiten de elastische lamina zijn binnengevallen. Dit helpt bij het onderzoeken van de omvang van de peritoneale oppervlakte invasie, waardoor de pT3-en pT4 stadia in gastro-intestinale kanker worden onderscheiden. In deze studie presenteren we een protocol voor het identificeren van elastische vezels in de formalin-Fixed, paraffine-ingesloten pT3N0M0 maagkanker weefsel secties. We bereiden 5-μm paraffine profielen op die op dia's zijn bevestigd en vervolgens worden alle dia's gedeparaffineerd en opnieuw gehydrateerd tijdens de kleurings procedure. Vervolgens worden alle secties geoxideerd door kaliumpermanganaat, gebleekt door oxaalzuur, gekleurd door elastische kleuring, en tegengekleurd door van Gieson's. Tot slot onderzoeken we het effect van vlekken; elastische lamina is gekleurd blauw-zwart en collageenvezels zijn rood gekleurd, terwijl de kankercellen gekleurd zijn in verschillende tinten geel. We beschrijven ook in detail de methoden die worden gebruikt voor het bepalen van de positionele relatie tussen kankercellen en elastische lamina. Deze methode is eenvoudig, laag-kosten, en wijd toepasbaar in de identificatie van peritoneale oppervlakte invasie in gastro-intestinale kanker vanwege zijn uitstekende selectiviteit voor elastische vezels en authentieke resultaten.
Introduction
Volgens de tumor, node, en metastasen (TNM) kanker staging-systeem, de prognose van maagkanker op pathologisch stadium pT4 is significant slechter dan dat bij pT3 (8e UICC/AJCC)1. Bij maagkanker is de classificatie van de primaire tumor (pT) meestal afhankelijk van de diepte van de tumorinvasie2. Pathologische fase pT3 maagkanker wordt gedefinieerd als kanker binnendringt door de Muscularis propria in subserosale weefsels, overwegende dat pT4 maagkanker wordt gedefinieerd als kanker penetreren aan het oppervlak van de viscerale peritoneum. De aanwezigheid van de peritoneale oppervlakte invasiviteit is de sleutel tot het onderscheiden van de twee stadia2. Echter, omdat de peritoneale mesotheel cellaag is erg dun, het kan worden beschadigd tijdens de operatie, postoperatieve behandeling, en fixatie3. Bovendien kunnen tumor-gerelateerde inflammatoire veranderingen en fibrose de normale anatomie van het peritoneum beschadigen, waardoor het zeer moeilijk is om de peritoneale oppervlakte invasie nauwkeurig te beoordelen met alleen H & E kleuring4. Huidige aanvullende diagnosemethoden zoals cytologie en immunohistochemie zijn van beperkte diagnostische waarde5,6 omdat ze vals-positief zijn of een lage kosteneffectiviteit hebben.
Het serosale membraan omvat het peritoneum, pleura en pericardium, en bestaat uit het mesothelium, een kelder membraan en een sub-mesotheliale laag7. Een veelvoorkomend histologisch kenmerk van het serosale membraan is de aanwezigheid van een elastische lamina in de submesotheliale laag, grenzend aan de mesotheliale cellen8,9. Elastische lamina heeft een sterk anti-schadelijk vermogen en kan dienen als een alternatieve prognostische marker als de mesotheliale cellen worden vernietigd door ernstige tumor-gerelateerde ontsteking of fibrose3. Elastische lamina bestaat voornamelijk uit elastine en microfibril10, die kunnen worden gevisualiseerd door elastische kleuring. De belangrijkste reden achter het gebruik van de elastische kleuring is dat de elastine een waterstof binding vormt met de fenolische groep resorcinol in de elastineoplossing, waardoor elastische vezels blauw-zwart worden gekleurd. Na van gieson (VG) contrasterende kleuring, kunnen collageenvezels rood worden gekleurd en spiervezels en rode bloedcellen kunnen geel worden gekleurd8,11,12,13.
De achtste editie van de TNM fasering van longkanker definieert viscerale pleurale invasie (T2) als een tumorinvasie voorbij de elastische lamina of een invasie aan het oppervlak van de viscerale borstvlies2. Studies over colorectale kanker hebben aangetoond dat de elastische lamina-invasie in pT3 colorectale kanker de oorzaak kan zijn van slechte prognoses. De 5-jarige ziektevrije en totale overlevings snelheid van colorectale kanker is ook bewezen als pT4a13,14,15. Op basis van onze eerdere studies over elastische kleuring is gebleken dat de invasie van elastische lamina een significante negatieve invloed heeft op de prognose van pT3 maagkanker en op dezelfde manier moet worden behandeld als pT4a maagkanker12. Vandaar dat deze eenvoudige en kosteneffectieve methode kan helpen bij het elimineren van onzekerheid in de resultaten verkregen door H & E kleuring, en andere gemeenschappelijke beperkingen in verband met andere hulp diagnosemethoden, waaronder cytologie en immunohistochemie, onder Anderen. Deze methode kan efficiënt worden gebruikt voor het diagnosticeren van peritoneale oppervlakte invasies van gastro-intestinale kanker, vooral in sommige dubbelzinnige gevallen. Het is handig omdat H & E vlek en andere vlekken meestal het moeilijk maken om dergelijke invasies te identificeren. Deze methode zorgt ook voor een betrouwbaarheid van de resultaten, omdat het zeer selectief, met name voor elastische vezels. Hier voeren we elastische kleuring uit om te bepalen of tumorcellen de elastische lamina hebben binnengevallen in pT3N0M0 maagkanker12.
Deze methode wordt gebruikt voor het identificeren van elastische vezels in weefsels op formaline-vaste, paraffine-ingesloten secties, en kan ook worden gebruikt voor bevroren secties. Hier kiezen we voor paraffine-embedded secties voor het beste onderhoud van cellulaire en weefsel morfologie. Alle stappen in dit protocol vinden plaats op kamertemperatuur. Een commerciële kleurings Kit met een kaliumpermanganaatoplossing, een oxaalzuur oplossing, een elastine-oplossing en een van Gieson-oplossing wordt gebruikt in de gepresenteerde studie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tussen 1994 en 2005 werden Patiëntenmonsters geselecteerd door twee ervaren gastro-intestinale pathologen in het gelieerde kanker ziekenhuis van Xiangya school of Medicine, Central South University, van patiënten die een Gastrectomie van maag Neoplasmata hebben ondergaan, met een postoperatieve pathologische diagnose van maagkanker op het pT3N0M0 stadium (volgens de zevende TNM-fasering). Deze studie werd goedgekeurd door de ethische beoordelingscommissie.
1. snijden
- Plaats het paraffine blok in een vaste houder van de slede microtome, die naar achteren en naar voren over het blad kan bewegen. Stel de optimale hoek tussen het blok en het microtoom mes in.
Opmerking: de optimale hoek is niet alleen afhankelijk van de geometrie van het mes, maar ook van de snijsnelheid en-techniek. - Trim het paraffine blok indien nodig en snijd het in 5 μm dikke dwarsdoorsneden.
- Plaats de paraffine 5-μm-delen in een waterbad van ongeveer 40-45 °C en monteer het vervolgens vanaf het water op de glazen glijbaan, één stuk per glijbaan.
- Druk de gemonteerde sectie voorzichtig tegen een papieren handdoek in om eventueel restwater en mogelijke luchtbellen te verwijderen.
- Laat secties 30 minuten in de lucht drogen en bak ze vervolgens in een oven bij 45-50 °C gedurende 2 uur.
2. deparaffinisatie en rehydratatie van alle glaasjes
- Dompel de glaasjes in xyleen in een Coplin potje gedurende 10 min.
- Neem de glaasjes uit de eerste xyleen jar en dompel ze gedurende 10 min in xyleen in een andere pot.
- Dompel de lantaarnplaten nu 5 min in 100% ethanol in een Coplin potje.
- Dompel de dia's onder in 100% ethanol in een andere Coplin jar, ook voor 5 min.
- Dompel de glaasjes in 95% ethanol in een Coplin potje gedurende 2 min.
- Dompel de glaasjes in 70% ethanol in een Coplin potje gedurende 2 min.
Opmerking: Zorg ervoor dat de dia's volledig zijn ondergedompeld in de oplossingen tijdens het uitvoeren van de bovenstaande stappen. - Spoel de dia's kort af met gedistilleerd water in een nieuwe pot.
3. vlekken
- Voordat u doorgaat met vlekken, veegt u eventuele overtollige oplossingen rond het weefsel op de glijbaan af met een tissuepapier.
- Plaats de glaasjes inkamer temperatuur en kamer vochtigheid om uitdroging van het weefsel op de glijbaan gedurende het gehele kleuringsproces te voorkomen.
- Oxideren de dia's met een paar druppels kaliumpermanganaat gedurende 5 min. Zorg ervoor dat het volume van kaliumpermanganaat voldoende is om de weefsel sectie op elke dia te bedekken.
- Spoel de geoxideerde glijbanen af met gedistilleerd water in een Coplin potje met 2-3 veranderingen. Let op de blauwe kleur van het weefsel.
- Nu, Bleach deze dia's door het toevoegen van een paar druppels oxaalzuur voor 5 min. Zorg ervoor dat het volume van oxaalzuur voldoende is om de weefsel sectie op elke dia volledig te bedekken.
- Spoel de dia's af door ze onder te dompelen in de Coplin jar gevuld met gedistilleerd water. Voer de spoel 2x-3x uit.
- Was deze dia's nu kort in 95% alcohol en dompel de dia's vervolgens onder in een elastine-oplossing (5 g/L) voor 8-24 uur.
Opmerking: de Elastin-oplossing is vluchtig en de kleurings tijd is relatief lang, dus het is het beste om de dia's onder te dompelen met elastische kleuring in een verzegelde container, zoals een transparante glazen fles met een afsluit kapje. De capaciteit van de container en het volume van de elastine-oplossing is afhankelijk van het aantal ondergedompeld glijbanen, zolang het de volledige onderdompeling van alle dia's mogelijk maakt. - Dompel deze dia's direct onder in 95% ethanol voor 1-2 min om elke weefsel sectie goed te differentiëren.
Opmerking: differentiatie verwijst naar de verandering in de lading van de weefsel sectie, die de overtollige kleuring geabsorbeerd door het weefsel verwijdert en de kleuren duidelijker maakt. Na de kleuring van de elastine-oplossing mogen monsters niet met gedestilleerd water worden gewassen om differentiatie problemen te voorkomen. Controleer microscopisch, indien nodig, voor blauw-zwarte elastische vezels kleuring en grijze achtergrond. Het is beter om enigszins te onderdifferentiëren het weefsel, omdat de daaropvolgende van Gieson van contra vlek kan ook enigszins uitpakken de elastische vlek. - Spoel deze glaasjes volledig af met gedistilleerd water na differentiatie.
- De glaasjes in de oplossing van een van Gieson 1 min tegen vlekken.
Opmerking: het volume van de van Gieson-oplossing moet voldoende zijn om de weefsel sectie op elke dia volledig te kunnen onderdompelen. - Snel druppel 95% ethanol op deze plakjes voor een paar seconden om elke weefsel sectie goed te differentiëren.
Let op: Spoel de glaasjes niet met water na de tegen kleuring van het van Gieson, want dat kan de kleur van de tegen kleuring van het van Gieson verzwakken of zelfs eldelen.
4. dehydratie en montage
- Dompel de dia's in 95% alcohol gedurende 5 minuten om ze snel te laten onthydra teren.
- Doorgaan met het uitdrogen van deze segmenten door 2 wijzigingen van 100% alcohol, elke keer onderdompelen van de dia's voor 5 min.
- Dompel de dia's onder in 2 veranderingen van xyleen, telkens gedurende 3 minuten.
- Voeg één druppel harsachtige bevestigings medium aan de glijbaan toe en plaats de Afdeklijst bovenaan.
5. microscopische waarneming van de glaasjes
- Zoek de serosale richting en observeer de resultaten van elastische kleuring: elastische vezels (lamina) zijn gekleurd blauw-zwart, collageenvezels zijn rood gekleurd, en spiervezels zijn geel gekleurd.
- Zoek naar de kankercellen in de hele dia: kankercellen zijn gekleurd geel12.
- Bepaal de positionele relatie tussen de kankercellen en de elastische lamina.
Opmerking: er zullen twee situaties zijn. Zolang er één tumor cel is die voorbij de elastische lamina in de hele glijbaan is binnengevallen, kan deze zaak worden beschouwd als een elastische lamina-invasie. Aan de andere kant, alleen als er geen tumor cel is die voorbij de elastische lamina in de hele glijbaan is binnengevallen, kan deze zaak worden beschouwd als elastische lamina non-invasie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Een succesvolle elastische kleuring onthult duidelijk elastische lamina en kankercellen in pT3 maagkanker. Figuur 1 -laag-vermogen, microscopisch gecontroleerd na elastine oplossing kleuring, voorafgaand aan van gieson's contra vlek volgens het protocol vermeld-toont de elastische lamina dicht bij de serosale mesotheliale cellen en is blauw-zwart gekleurd in de vorm van filamenten, en er is nog een zekere afstand tussen de tumorcellen en de elastische lamina. Figuur 2 is een typische elastische kleuring met de contra vlek van van gieson, waarbij elastische lamina blauw-zwart gekleurd is, collageenvezels rood gekleurd zijn en spiervezels en kankercellen geel gekleurd zijn. Elastische lamina invasie kan worden beschouwd als kankercellen penetreren de elastische lamina (Figuur 2B), terwijl elastische lamina non-invasie kan worden beschouwd als kankercellen die dicht bij de elastische lamina, maar niet binnenvallen (Figuur 2 A). In het geval dat de elastische kleuring een repetitieve structuur onthult, wat suggereert dat er meer dan één laag elastische lamina is, als de tumorinvasie niet verder gaat dan de buitenste elastische lamina (aangegeven door pijlen), moet het monster worden gediagnosticeerd als elastisch lamina non-invasie (Figuur 2C).
Figuur 1 : Het microscopische beeld van elastische kleuring vóór de tegen kleuring van van Gieson. De elastische lamina wordt gekenmerkt door pijlen, "T" staat voor tumorcellen, "S" vertegenwoordigt de richting van het serosale membraan. De elastische lamina kan duidelijk worden gevisualiseerd door elastische kleuring. De pijlen geven elastische lamina aan. De schaalbalk is 200 μm. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Figuur 2 : Het representatieve resultaat van elastische kleuring met de contra vlek van van Gieson. De elastische lamina wordt gekenmerkt door pijlen, "T" staat voor tumorcellen, "S" vertegenwoordigt de richting van het serosale membraan. (A) tumor cellen groeien in de buurt van de elastische lamina zonder binnenvallen. (B) tumor cellen vallen buiten de elastische lamina. (C) tumor cellen vertonen invasie in de nabijheid van elastische lamina, maar dringen niet verder dan de buitenste elastische lamina. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Deze methode die hier wordt voorgesteld, biedt een nauwkeurige benadering voor het identificeren van de subserosale elastische lamina. De methode kan worden gebruikt om te evalueren of tumorcellen de elastische lamina hebben binnengevallen in pT3N0M0 maagkanker12. Elastische lamina is roodachtig in H & E-gekleurd secties, die niet gemakkelijk kunnen worden onderscheiden van collageenvezels, en andere bestaande hulp diagnosemethoden, zoals cytologie en immunohistochemie, hebben ook een beperkte diagnostische waarde uitgeoefend. De bevinding van tumorcellen in de peritoneale irrigatie vloeistof duidt niet noodzakelijkerwijs op de aanwezigheid van een serosale invasie van de primaire tumor, die kan te wijten zijn aan de lymfeklier metastasen of andere verre metastasen5. Omdat de mesotheliale cellen waarschijnlijk worden vernietigd door vezelremmende ontsteking, kan een immunohistochemie diagnose niet haalbaar zijn en is de werklast relatief groot6. Elastische kleuring als een klassieke, speciale kleurings methode kan de elastische lamina echter duidelijk zichtbaar maken11,12,13. Na standaardwerking, volgens dit protocol, de elastische lamina kan worden gekleurd blauw-zwart, collageenvezels kunnen rood worden gekleurd, en spiervezels en rode bloedcellen kunnen geel worden gekleurd, wat het gemakkelijker maakt voor pathologen om de verdeling van tumorcellen en elastische lamina. Elastische kleuring kan ook een aantal beperkingen in de diagnostische criteria. Bijvoorbeeld, in sommige gevallen, de structuur van elastische lamina is niet duidelijk als gevolg van duidelijke tumor-gerelateerde vezel ontsteking. Verschillende waarnemers kunnen verschillen in het begrip en de praktische toepassing van de diagnostische criteria in één geval, hoewel sommige pathologen nog steeds geloven dat als het tumorweefsel buiten de ene kant van de resterende elastische lamina valt, het kan worden gediagnosticeerd als een elastische lamina invasie17. Niettemin, met de voortdurende popularisering van de toepassing van elastische kleuring en de standaardisatie van de diagnose consensus van pathologen, deze beperking zal worden verzwakt in de toekomst.
Kritische stappen in dit protocol zijn onder meer de juiste controle van het differentiërende proces en standaardselectie van weefselmonsters. Na elastine oplossing vlekken, moeten dia's niet worden gewassen door gedistilleerd water, maar gedifferentieerde dia's moeten direct worden geplaatst in 95% ethanol voor 1-2 minuten om te voorkomen dat de moeilijkheid in differentiatie. Na de tegen kleuring van van Gieson dient contact van de glijbanen met water te worden vermeden; in plaats daarvan moeten de gedifferentieerde plakjes snel worden gewassen in 95% ethanol voor een paar seconden. Anders zal de kleur van de van Gieson-contra vlek worden verzwakt of zelfs worden toegeschreven. Wat betreft het weefsel specimen selectie, het belangrijkste deel is het gebied waar het peritoneum van richting verandert, met name de acute hoek gebied, in plaats van het gebied bedekt met platte mesotheliale weefsel4. Alle gevallen in deze studie werden getekend volgens deze methode en de diepte van het selecteren van het weefsel preparaat was zo diep mogelijk om de relatie tussen de tumor en de serosa te beoordelen. Bovendien vinden alle stappen in dit protocol plaats op kamertemperatuur. Omdat de elastine-oplossing gemakkelijk te volatiliseren is en de kleurings tijd relatief lang is, is het het beste om de dia's in een elastische kleur oplossing in een verzegelde container onder te dompelen. Wat de microscopische observatie betreft, is het resultaat van elastische kleuring nauwkeurig en betrouwbaar. In sommige bijzondere gevallen moet echter rekening worden gehouden met een aantal redelijke diagnostische criteria, zoals die door Grin et al zijn voorgesteld. 16. in gevallen waar tumor-gerelateerde vezel ontsteking resulteert in een duidelijke instabiliteit van de elastische lamina structuur, wanneer het tumorweefsel binnenvalt buiten de resterende elastische lamina aan de ene kant, het kan worden gediagnosticeerd als elastische lamina invasie. In het geval van mucineus adenocarcinoom, alleen als de cellulaire slijm component binnenvalt buiten de elastische lamina kan het worden gediagnosticeerd als elastische lamina invasie. Als elastische kleuring een repetitieve elastische lamina-structuur vertoont, kan het monster alleen worden gediagnosticeerd als een elastische lamina-invasie wanneer de tumorinvasie buiten de buitenste elastische lamina ligt. Als de bovenstaande voorwaarde in een of meer secties optreedt, kan de zaak worden gediagnosticeerd als elastische lamina invasie16.
Dit protocol toont een eenvoudige techniek voor het visueel identificeren van de elastische lamina bij maagkanker. Deze techniek is breed aanpasbaar en kan worden uitgebreid om de serosale invasie te beoordelen voor andere prognostische voorspellingen, zoals oesofageale of ovariële kanker17. Het kan ook worden gebruikt om de invasie van bloed en lymfevaten in colorectale kanker en in andere kankers te identificeren, vooral in sommige moeilijke gevallen, om de reden dat er ook elastische lamina in het vat en het lymfatische endotheel voorkomt. Ook is elastische kleuring goedkoop en kan het gemakkelijk worden geadopteerd door pathologen op verschillende locaties18. Bovendien, deze techniek is niet beperkt tot tumorweefsels, maar kan ook worden gebruikt voor de diagnose van dermatologische en vasculaire ziekten, zoals discoïde lupus erythematosus, alopecia, en carotis slagader laesie19,20. Met de ontwikkeling van de elastische kleurings technologie en het accumuleren van studies van tumoren met grote steekproefgroottes, verwachten we dat elastische kleuring kan worden geaccepteerd door het AJCC-faserings systeem bij het beoordelen van de serosale invasie van maagkanker en colorectale kanker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
De auteurs bedanken de steun gedeeltelijk van de National Natural Science Foundation (NO. 81401902 en NO. 81501992) en de Hunan Natural Science Foundation (NO. 2017SK2134, NO. 2018JJ2238). Het manuscript is geschreven door Guang lei. Het hele experiment wordt uitgevoerd door Guang lei en Haiyan Yang. De auteurs bedanken de hulp van pathologen en van Fellows die de gegevens van patiënten opvolgen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
References
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , Springer. New York, NY. (2017).
- Kojima, M., et al. Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features. Frontiers in Oncology. 2, 179 (2012).
- Ludeman, L., Shepherd, N. A. Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance. Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation. Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).
- Liang, W. Y. Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers. American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).
- Carter, D., True, L., Otis, C. N. Serosal membranes. Histology for Pathologists. 3rd ed. Mills, S. E. , Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia, PA. 547-562 (2007).
- Knudsen, P. J. The peritoneal elastic lamina. Journal of Anatomy. 177, 41-46 (1991).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer. Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).
- Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin--a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa. Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).
- Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology. Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).
- Lei, G., et al. Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer. Human Pathology. 65, 79-84 (2017).
- Hernández-Morera, P., Travieso-González, C. M., Castaño-González, I., Mompeó-Corredera, B., Ortega-Santana, F. Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert's resorcin-fuchsin. Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).
- Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship. American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).
- Nakanishi, Y., et al. Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain. ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).
- Grin, A., et al. Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer. Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).
- Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours. Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).
- Kojima, M., et al. Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum. Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).
- Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia. Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).
- Vos, A., et al. Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery. Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).
