Summary
Burada, pT3N0M0 gastrik kanser dokularındaki elastik liflerin formalin-fixed, parafin-Embedded bölümlerinde tespit edilmesi için elastik boyama Protokolü sunuyoruz. Daha sonra, tümör hücrelerinin elastik lamina ötesinde işgal olup olmadığını belirlemek için bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Genellikle alt-mezotelyal tabakada bulunan elastik lamina, periton mezotelyal hücrelerin bitişiğinde, hematoksinli ve eozin (H & E) boyama üzerinde amphiphilik ama elastik boyama ile görselleştirilebilir. Elastik boyama önemli yararlarından biri, tümör hücrelerinin elastik lamina ötesinde işgal olup olmadığını belirlemek için kolaylaştırır olmasıdır. Bu, periton yüzey istilasının kapsamını inceleyerek, gastrointestinal kanserde PT3 ve PT4 aşamalarını ayırt etmenize yardımcı olur. Bu çalışmada, formalin-sabit, parafin-gömülü pT3N0M0 gastrik kanser dokusu bölümlerinde elastik lifleri tanımlamak için bir protokol sunuyoruz. Slaytlar üzerinde sabit 5-μm parafin bölümler hazırlamak ve sonra tüm slaytlar deparaffinated ve boyama işlemi sırasında rehydrated. Daha sonra, tüm bölümler potasyum permanganat tarafından oksitlenir, oksisik asit tarafından ağartılmış, elastik boyama ile lekelenmiş, ve Van Gieson 's tarafından karşı. Son olarak, biz boyama etkisini incelemek; Elastik lamina lekelenmiş mavi-siyah ve kollajen lifleri kırmızı lekeli, kanser hücreleri sarı tonları değişen lekelenmiş iken. Ayrıca, kanser hücreleri ve elastik lamina arasındaki pozisyonel ilişkiyi belirlemek için kullanılan yöntemleri ayrıntılı olarak tarif ediyoruz. Bu yöntem basit, düşük maliyetli ve yaygın elastik lifler ve otantik sonuçlar için olağanüstü seçicilik nedeniyle gastrointestinal kanserde periton yüzey invazyonu tanımlanması için geçerlidir.
Introduction
Tümör, düğüm ve metastaz (TNM) kanseri evreleme sistemine göre, patolojik aşamada pT4 gastrik kanserinin prognoz, pT3 (8th UıCC/AJCC)1' de önemli ölçüde daha kötüdür. Mide kanseri ile, primer tümör sınıflandırılması (pT) genellikle tümör istilası derinliğine bağlıdır2. Patolojik aşama PT3 gastrik kanser muskularis propria aracılığıyla subserozal dokulara işgal kanser olarak tanımlanır, PT4 mide kanseri visserat peritonumun yüzeyine penetran kanser olarak tanımlanır ise. Periton yüzey invaziv varlığı iki aşama ayırt etmek için anahtar2. Ancak, periton mezotelyal hücre tabakası çok ince olduğu için, ameliyat sırasında hasar görmüş olabilir, postoperatif tedavi, ve fikşasyon3. Dahası, tümör ile ilgili inflamatuar değişiklikler ve fibrozis, periton yüzey istilasını sadece H & E boyama4' ü kullanarak doğru şekilde yargılamak çok zordur. Sitoloji ve immünhistokimya gibi mevcut yardımcı tanı yöntemleri, yanlış pozitif oldukları veya düşük maliyetli olması nedeniyle sınırlı teşhis değeri5,6 ' dir.
Serozal membran peritonum, plevra ve perikardium içerir ve mezothelium, bir Bodrum membran ve bir alt-Mesothelial katman7oluşur. Serozal membranın bir yaygın histolojik özelliği, mezotelyal hücrelerin bitişik alt-mezotelyal katmanda bir elastik lamina varlığı,8,9. Elastik lamina güçlü bir anti-zarar yeteneği vardır ve mezotelyal hücreler ciddi tümör ile ilgili inflamasyon veya fibrozis tarafından tahrip ise alternatif bir prognostik Marker olarak hizmet verebilir3. Elastik lamina özellikle elastin ve microfibril10, elastik boyama ile görselleştirilebilir oluşur. Elastinin elastin çözeltisi içinde rezorsinol fenolik grubu ile bir hidrojen bağı oluşturur elastik boyama kullanımı arkasındaki asıl nedeni, elastik liflerin mavi-siyah lekelenmesine neden. Van Gieson (VG) kontrast boyama sonra, kollajen lifleri kırmızı ve kas lifleri ve kırmızı kan hücreleri lekelenmiş olabilir sarı8,11,12,13leke olabilir.
Akciğer kanserinin TNM evreleme sekizinci baskısı viseral plevra invazyonu tanımlar (T2) elastik lamina ötesinde bir tümör istilası veya visseral plevra yüzeyinde bir işgali2. Kolorektal kanserle ilgili çalışmalar, pT3 kolorektal kanserinde elastik lamina istilasının kötü prognozların nedeni olabilir olduğunu göstermiştir. Kolorektal kanserin 5 yıllık hastalıksız ve genel hayatta kalma oranı da pT4a gibi olduğu kanıtlanmıştır. Elastik boya ile ilgili önceki çalışmalarımız temelinde, Elastic lamina istilası, pT3 gastrik kanserinin prognoz üzerinde önemli bir olumsuz etkiye sahip olduğu bulunmuştur ve pT4a mide kanseri12ile aynı şekilde tedavi edilmelidir. Bu nedenle, bu basit ve uygun maliyetli Yöntem, H & E boyama ile elde edilen sonuçlarda belirsizlikleri ortadan kaldırmasına ve sitoloji ve immünhistokimya da dahil olmak üzere diğer yardımcı tanı yöntemleriyle ilişkili diğer ortak sınırlamalara yardımcı olabilir, Diğer. Bu yöntem, özellikle bazı belirsiz durumlarda, gastrointestinal kanser periton yüzey istilaları teşhis etmek için verimli bir şekilde kullanılabilir. H & E leke ve diğer lekeleri genellikle zor bu tür istilaları tanımlamak için yapmak beri uygundur. Bu yöntem, özellikle elastik liflerin çok seçici olduğundan, sonuçların güvenilirliğini de sağlar. Burada, biz tümör hücrelerinin pT3N0M0 mide kanseri12elastik lamina işgal olup olmadığını belirlemek için elastik boyama yapmak.
Bu yöntem, formalin-sabit, parafin-gömülü bölümlerde dokularda elastik lifler tanımlamak için kullanılır ve dondurulmuş bölümler için de kullanılabilir. Burada, hücresel ve doku morfolojisi için en iyi bakım için parafin-gömülü bölümler seçiyoruz. Bu protokoldeki tüm adımlar oda sıcaklığında gerçekleşir. Sunulan çalışmada potasyum permanganat çözeltisi, okalik asit çözeltisi, elastin çözeltisi ve Van Gieson çözeltisi içeren ticari boyama kiti kullanılmaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1994 ve 2005 yılları arasında, hasta numuneleri, Orta Güney Üniversitesi, Xiangya Tıp Fakültesi bağlı Kanser Hastanesi 'nde iki deneyimli gastrointestinal patolog tarafından, mide neoplazmlarından gastrektomi yapan hastalarından seçildi. pT3N0M0 aşamasında mide kanserinin postoperatif patolojik tanısı (yedinci TNM evreleme göre). Bu çalışma etik İnceleme Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. bölümleme
- Parafin bloğunu, bıçak üzerinde geriye ve ileri hareket ettirebilir, kızak mikrotomunun sabit bir tutucusuna yerleştirin. Blok ve mikrotome bıçağı arasındaki optimum açısı ayarlayın.
Not: optimum açı sadece Blade 'in geometrisine değil, aynı zamanda kesme hızı ve tekniğine bağlıdır. - Parafin bloğunu gerektiği gibi kırpın ve 5-μm kalınlığında çapraz bölümlere kesin.
- Parafin 5-μm bölümlerini yaklaşık 40-45 °C ' de bir su banyosuna yerleştirin ve daha sonra su üzerinden cam kaydırağa, slayt başına bir bölüme takın.
- Herhangi bir kalıntı su ve potansiyel hava kabarcıkları kaldırmak için bir kağıt havlu karşı dikkatle monte bölüme basın.
- Bölümler 30 dakika boyunca hava kurumasına izin verin ve 45-50 °C ' de 2 saat fırın içinde fırında pişirin.
2. tüm slaytların deparaffinization ve rehidrasyon
- 10 dakika boyunca bir Coplin kavanozunda Ksilin içinde slaytlar batırın.
- İlk ksilen kavanozdan slaytlar dışarı alın ve 10 dakika için başka bir kavanoz içinde ksilen onları batırın.
- Şimdi, 5 dakika boyunca bir Coplin kavanozunda% 100 etanol içinde slaytlar batırın.
- Başka bir Coplin kavanozunda 100% etanol içinde slaytlar, 5 dakika da bırakın.
- 2 dakika boyunca bir Coplin kavanozunda% 95 etanol içinde slaytlar batırın.
- 2 dakika boyunca bir Coplin kavanozunda% 70 etanol içinde slaytlar batırın.
Not: Yukarıdaki adımları gerçekleştirirken slaytların çözümlere tamamen batırılmış olduğundan emin olun. - Yeni bir kavanozda damıtılmış su ile slaytları kısaca durulayın.
3. boyama
- Boyama için devam etmeden önce, bir doku kağıdı ile slayt üzerinde doku etrafında herhangi bir aşırı çözümleri silin.
- Tüm boyama işlemi boyunca slayt üzerinde doku kurutmak önlemek için slaytlar iç sıcaklık ve oda nem koşulları yerleştirin.
- 5 dakika boyunca birkaç damla potasyum permanganat içeren slaytları okside et. potasyum permanganat hacminin her slaytta doku bölümünü kapsayacak kadar yeterli olduğundan emin olun.
- 2-3 değişiklikleri ile bir Coplin kavanozunda damıtılmış su ile oksitlenmiş slaytlar durulayın. Doku mavi renk gözlemlemek.
- Şimdi, 5 dk için oksisik asit birkaç damla ekleyerek bu slaytlar çamaşır suyu. oksisik asit hacminin tamamen her slayt üzerinde doku bölümü kapsayacak kadar yeterli olduğundan emin olun.
- Damıtılmış su ile dolu Coplin kavanozu içine daldırarak slaytları durulayın. Durulama 2x-3x gerçekleştirin.
- Şimdi, bu slaytları% 95 alkolle kısaca yıkayın ve sonra slaytları 8-24 h için bir elastin çözeltisi (5 g/L) içine daldırın.
Not: elastin çözeltisi uçucu ve onun boyama süresi nispeten uzun, bu nedenle bir mühürleme kapağı ile şeffaf cam şişe gibi kapalı bir kap içinde elastik boyama ile slaytlar batırmak için en iyisidir. Konteynerin kapasitesi ve elastin çözeltisi hacmi, tüm slaytların tam daldırma sağlar sürece, batırılmış slaytlar sayısına bağlıdır. - Her doku bölümünü iyi ayırt etmek için 1-2 dakika boyunca% 95 etanol içinde doğrudan bu slaytlar batırın.
Not: farklılaşma doku bölümü, doku tarafından absorbe aşırı boyama kaldırır ve renkleri daha net kılan şarj değişikliği anlamına gelir. Elastin çözeltisi lekeleme işleminden sonra numunelerin farklılaşma zorluklarının önlenmemesi için damıtılmış su ile yıkanmaması gerekir. Mikroskopik olarak, gerektiğinde, mavi-siyah elastik lifler boyama ve gri arka plan için kontrol edin. Daha sonra Van Gieson 's karşıt da biraz elastik leke ayıklamak olabilir bu yana biraz doku ayırt etmek daha iyidir. - Farklılaşma sonrasında bu slaytları distile suyla tamamen durulayın.
- Van Gieson 'ın çözeltisi içinde 1 dakika boyunca slaytlar karşı.
Not: Van Gieson çözümün hacmi tamamen her slayt üzerinde doku bölümü batırmak edebilmek için yeterli olması gerekir. - Hızla her doku bölümü iyi ayırt etmek için birkaç saniye için bu dilimleri üzerine% 95 etanol bırakın.
Not: Van Gieson 'ın karşı boyaması sonrasında slaytları herhangi bir su ile durulaymayın, bu da Van Gieson 'ın karşı lekeleme rengini zayıflatabilir ya da yumuşayabilirsiniz.
4. dehidrasyon ve montaj
- 5 dakika boyunca% 95 alkole kaydırmaları hızlı bir şekilde susuz bırakmalarına izin verin.
- % 100 alkol, her zaman 5 dk için slaytlar çeker 2 değişiklikler bu dilimleri susuz devam edin.
- 3 dakika her zaman, 2 Ksilin değişiklikleri içine slaytlar batırın.
- Slayt için bir damla reçine montaj orta ekleyin ve üst lamel magazini yerleştirin.
5. slaytlar mikroskobik gözlem
- Serozal yönünü bulmak ve elastik boyama sonuçlarını gözlemlemek: elastik lifler (lamina) mavi-siyah lekeli, kollajen lifleri kırmızı lekelenmiş ve kas lifleri sarı lekeli vardır.
- Tüm slayda kanser hücrelerini arayın: kanser hücreleri lekeli sarı12.
- Kanser hücreleri ve elastik lamina arasındaki konumsal ilişkiyi belirleyin.
Not: burada iki durum olacak. Tüm slayt içinde elastik lamina ötesinde işgal etti bir tümör hücresi olduğu sürece, o zaman bu durumda elastik lamina istilası olarak kabul edilebilir. Öte yandan, sadece tüm slayt içinde elastik lamina ötesinde işgal etti hiçbir tümör hücresi olduğunda, bu durumda elastik lamina non-invazyonu olarak kabul edilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Başarılı bir elastik boyama, pT3 mide kanserinde elastik lamina ve kanser hücrelerini açıkça ortaya çıkarır. Şekil 1 -düşük güç alanı, elastin solüsyonu sonrasında mikroskopik olarak kontrol edilen, Van Gieson 'ın karşı yana olduğu protokole göre, belirtilen protokol uyarınca-elastik lamina serozal mezotelyal hücrelere yakın olduğunu gösterir ve mavi-siyah lekelenmiş formasyon, ve hala tümör hücreleri ve elastik lamina arasında belirli bir mesafe vardır. Şekil 2 , lastikli lamina 'nın mavi-siyah renkte lekelendiği, kollajen liflerinin kırmızı lekeli, kas lifleri ve kanser hücreleri lekelenmiş sarı olan Van Gieson 'ın karşı lekeli tipik bir elastik boyama. Elastik lamina invazyonu elastik lamina nüfuz kanser hücreleri olarak kabul edilebilir (Şekil 2B), elastik lamina non-invazyonu elastik lamina yakın kanser hücreleri olarak kabul edilebilir ise, ama işgal değil (Şekil 2 A). Eğer tümör istilası en dıştaki elastik lamina (okları ile gösterilir) ötesinde işgal değilse elastik boyama, elastik lamina birden fazla tabaka olduğunu göstermektedir tekrarlayan bir yapı ortaya koyduğunda, örnek elastik olarak teşhis edilmelidir lamina olmayan invazyonu (Şekil 2C).
Şekil 1 : Van Gieson 'ın karşı boyadan önce elastik boyama mikroskopik görüntüsü. Elastik lamina oklarla işaretlenir, "T" tümör hücrelerini temsil eder, "S" serozal membranın yönünü temsil eder. Elastik lamina, elastik boyama ile açıkça görselleştirilebilir. Oklar elastik lamina gösterir. Ölçek çubuğu 200 μm. Bu rakam daha büyük bir sürümünü görüntülemek Için lütfen buraya tıklayın .
Şekil 2 : Van Gieson 'ın karşı lekesi ile elastik lekelenme sonucu. Elastik lamina oklarla işaretlenir, "T" tümör hücrelerini temsil eder, "S" serozal membranın yönünü temsil eder. (A) tümör hücreleri onun ötesinde işgal olmadan elastik lamina yakınında büyür. (B) tümör hücreleri elastik lamina ötesinde istila. (C) tümör hücreleri elastik lamina civarında işgali sergilemek ama en dıştaki elastik lamina ötesinde nüfuz yok. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada önerilen bu yöntem, subserozal elastik lamina tanımlamak için doğru bir yaklaşım sağlar. Yöntem tümör hücrelerinin pT3N0M0 mide kanseri12elastik lamina işgal olup olmadığını değerlendirmek için kullanılabilir. Elastik lamina H & E-lekelenmiş bölümlerde kırmızımsı olup, kollajen liflerinden kolayca ayırt edilemedi, ve sitoloji ve immünhistokimya gibi mevcut diğer yardımcı tanı yöntemleri de sınırlı tanı değerini uygular. Periton sulama sıvısında tümör hücrelerinin bulunması, primer tümörün serozal istilasının varlığını göstermez, bu da lenf nodu metastazı veya diğer uzak metastaz5' e bağlı olabilir. Mezotelyal hücrelerin fibröz inflamasyon ile imha edilmesi muhtemeldir gibi, bir immünhistokimya tanısı mümkün olmayabilir, ve iş yükü nispeten büyük6. Ancak, klasik, özel boyama yöntemi olarak elastik boyama elastik lamina açıkça görünür11,12,13yapabilirsiniz. Standart çalışma sonrası, bu protokole göre, elastik lamina mavi-siyah lekelenmiş olabilir, kollajen lifleri kırmızı lekelenmiş olabilir, ve kas lifleri ve kırmızı kan hücreleri lekelenmiş olabilir, hangi daha kolay patologlar dağılımı değerlendirmek için yapar tümör hücreleri ve elastik lamina. Elastik boyama da tanılama ölçütlerinde bazı sınırlamalar olabilir. Örneğin, bazı durumlarda, elastik lamina yapısı belirgin tümör ile ilgili fibröz iltihap nedeniyle açık değildir. Farklı gözlemciler, bir durumda tanı kriterlerinin anlayış ve pratik uygulamasında farklılıklar gösterebilir, ancak bazı patologlar hala tümör dokusunun kalan elastik lamina 'nın bir tarafına inmesine rağmen, Elastik lamina invazyonu17olarak teşhis edildi. Yine de, elastik boyama uygulamasının sürekli olarak yaygınlaştırılması ve patologların tanı uzlaşma standardizasyonu ile, bu sınırlama gelecekte zayıflamış olacaktır.
Bu protokoldeki kritik adımlar, farklılaşan sürecin ve standart doku numune seçiminin uygun kontrolünü içerir. Elastin çözeltisi boyadıktan sonra, slaytlar distile su ile yıkanmamalıdır, ancak farklılaşma güçlüğü önlemek için 1-2 dakika boyunca% 95 etanol içinde doğrudan yerleştirilmesi gerekir. Van Gieson 'ın karşı boyama işleminden sonra, kaydırakların su ile teması kaçınılmalıdır; Bunun yerine, farklılaşmış dilimleri hızla birkaç saniye için% 95 etanol içinde yıkanması gerekir. Aksi takdirde, Van Gieson 'ın karşı lekesinin rengi zayıflamış ya da ellenmiş olacaktır. Doku numunesi seçimine gelince, en önemli kısmı periton yönünü değiştiren alandır, özellikle akut açı alanı, düz mezotelyal doku4ile kaplı alan yerine. Bu çalışmada tüm vakalar bu yönteme göre çizilmiş ve doku numunesinin seçilmesi derinliği, tümör ile serosa arasındaki ilişkiyi değerlendirmek için mümkün olduğunca derine inmiştir. Buna ek olarak, bu protokoldeki tüm adımlar oda sıcaklığında gerçekleşir. Elastin çözeltisi flakondaki kolay olduğundan ve boyama süresi nispeten uzun olduğu için, mühürlü bir kabın içinde elastik boyama çözeltisi içinde slaytlar batırmak için en iyisidir. Mikroskobik gözlem gelince, elastik boyama sonucu doğru ve güvenilir. Ancak, bazı özel durumlarda, bazı makul tanı kriterleri dikkate alınması gereken, grin et al tarafından önerilen gibi. 16. tümör ile ilgili fibröz inflamasyonun, elastik lamina yapısının bariz bir istikrarsızlığına neden olduğu durumlarda, tümör dokusu bir tarafta kalan elastik lamina 'nın ötesinde işgal edildiğinde, elastik lamina invazyonu olarak teşhis edilebilir. Mukinöz adenokarsinoma durumunda, sadece hücresel mukoza bileşeni elastik lamina ötesinde istila ederse, elastik lamina invazyonu olarak teşhis edilebilir. Elastik boyama tekrarlayan elastik lamina yapısını gösteriyorsa, örnek sadece tümör istilası en dıştaki elastik lamina ötesinde olduğunda elastik lamina invazyonu olarak teşhis edilebilir. Yukarıdaki koşul bir veya daha fazla bölümde oluşursa, kasa elastik lamina invazyonu16olarak teşhis edilebilir.
Bu protokol, gastrik kanserinde elastik Lamerin görsel olarak belirlenmesi için basit bir teknik göstermektedir. Bu teknik yaygın olarak uyarlanabilir ve özofagus veya yumurtalı kanser17gibi diğer prognostik tahminler için Serozal invazyonu yargılamak için genişletilebilir. Ayrıca kolorektal kanser yanı sıra diğer kanserlerde kan ve lenfatik damar istilası tanımlamak için kullanılabilir, özellikle bazı zor durumlarda, elastik lamina da damar ve lenfatik endotelyum var nedeni. Ayrıca, elastik boyama ucuz ve kolayca farklı sitelerde patologlar tarafından benimsenebilir18. Ayrıca, bu teknik tümör dokularıyla sınırlı değildir, ancak aynı zamanda, Diskoid Lupus Eritematozus, alopesi ve karotis arter lezyonu gibi dermatolojik ve vasküler hastalıkların tanısı için de kullanılabilir19,20. Elastik boyama teknolojisinin gelişimi ve büyük Numune boyutları ile tümörlerin birikmesi çalışmaları ile, biz elastik boyama Gastrik kanseri ve Kolorektal kanserin serozal istilası yargılamak AJCC evreleme sistemi tarafından kabul edilebilir bekliyoruz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Yazarlar Ulusal Doğal Bilim Vakfı (NO. 81401902 ve NO. 81501992) ve Hunan doğal Bilim Vakfı (NO. 2017SK2134, NO. 2018JJ2238) kısmen destek teşekkür ederiz. El yazması Guang Lei tarafından yazılmıştır. Tüm deney Guang Lei ve Haiyan Yang tarafından gerçekleştirilir. Yazarlar, patologlar ve hastaların verilerini takip eden arkadaşlarının yardımını teşekkür eder.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Used for staining of elastic fibers, collagen fibers and myofibers |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Used for mounting |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
References
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , Springer. New York, NY. (2017).
- Kojima, M., et al. Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features. Frontiers in Oncology. 2, 179 (2012).
- Ludeman, L., Shepherd, N. A. Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance. Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation. Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).
- Liang, W. Y. Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers. American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).
- Carter, D., True, L., Otis, C. N. Serosal membranes. Histology for Pathologists. 3rd ed. Mills, S. E. , Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia, PA. 547-562 (2007).
- Knudsen, P. J. The peritoneal elastic lamina. Journal of Anatomy. 177, 41-46 (1991).
- Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer. Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).
- Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin--a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa. Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).
- Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology. Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).
- Lei, G., et al. Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer. Human Pathology. 65, 79-84 (2017).
- Hernández-Morera, P., Travieso-González, C. M., Castaño-González, I., Mompeó-Corredera, B., Ortega-Santana, F. Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert's resorcin-fuchsin. Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).
- Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship. American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).
- Nakanishi, Y., et al. Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain. ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).
- Grin, A., et al. Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer. Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).
- Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours. Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).
- Kojima, M., et al. Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum. Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).
- Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia. Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).
- Vos, A., et al. Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery. Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).
