العديد من العلاجات والطفرات الجينية تؤثر على توقيت النضج الجنسي والخصوبة. ويصف هذا البروتوكول طريقة غير الغازية لتقييم بداية البلوغ في الفئران والجرذان قبل إعداد دراسة خصوبة في الحيوانات الناضجة جنسياً.
تقييم الكفاءة الإنجابية أمر بالغ الأهمية لفهم تأثير المعاملة أو التلاعب بالجينات على محور الإنجابية، كما وصف المحور طائي جوندال الغدة النخامية. المحور الإنجابية هو integrator رئيسية المدخلات البيئية والداخلية تكييف الخصوبة إلى الظروف المواتية للاستنساخ. قبل الشروع في دراسة خصوبة في الفئران والجرذان، يتم تقييم النضج الجنسي لاستبعاد إمكانية أن تعمل الإنجابية ملاحظتها هي سبب تأخر أو تغيب بداية البلوغ. ويصف هذا البروتوكول نهجاً غير الغازية لتقييم بداية البلوغ في الذكور من خلال تحديد فصل بريبوتيال، وفي الإناث عن طريق فتح المهبل والسفاد الأول. بعد التأكد من إتمام البلوغ وبلوغ مرحلة النضج الجنسي، يمكن الشروع في دراسة خصوبة. يصف الإجراء شروط التربية المثلى للفئران والجرذان وكيفية إعداد دراسة خصوبة، وما المعايير لتقييم وتحديد ما إذا كان العلاج أو حذف الجينات تؤثر على الخصوبة.
المرحلة الانتقالية من خلال سن البلوغ مطلوب لبلوغ مرحلة النضج الجنسي والكفاءة التناسلية. الانتقال البلوغ والحفاظ على معدل الخصوبة في سن البلوغ ينظم المحور الإنجابية، كما وصف المحور طائي جوندال الغدة النخامية (الشكل 1). وينظم توقيت بداية البلوغ والحفاظ على خصوبة محكم العوامل الداخلية، فضلا عن البيئة زيادة فرص البقاء على قيد الحياة للأبناء والآباء والأمهات1،2. يوفر هذا البروتوكول نهجاً غير الغازية لتحديد بداية البلوغ في الفئران والجرذان للتأكد من النضج الجنسي قبل إعداد دراسة خصوبة لتقييم الكفاءة التناسلية.
دراسة خصوبة في الحيوانات الناضجة جنسياً ويمكن أن تبدأ بعد أن مرت الحيوانات إلى سن البلوغ. قبل بداية البلوغ، محور الإنجابية هادئة، والدافع الرئيسي للنضج الجنسي، تروج – الإفراج عن هرمون (GnRH)، يطلق على الغدة النخامية بكميات غير كافية الشروع في سن البلوغ (الشكل 1). بداية البلوغ هو عملية معقدة والتي ينتج عنها زيادة جنره الإفراج في نيافة الوسيط. جنره يشجع الهرمون (LH) والمسام تحفيز إفراز هرمون (FSH) من الغدة النخامية، هما هرمونات ضرورية نضج جوندال ووظيفتها الإنجابية (الشكل 1)3،،من45 .
الإهانات إلى المحور الإنجابية يؤدي إلى انخفاض الخصوبة ويمكن أيضا التقدم أو التأخر في بداية البلوغ. وتشمل الشروط المعروفة للتأثير في توقيت بداية البلوغ والكفاءة الإنجابية التعرض للمواد الكيميائية6،7،1،وزن الجسم ارتفع أو انخفض8تغييرات في الصماء 2،طول اليوم9 والطفرات الوراثية10،11،،من1213،،من1415.
بداية مرحلة النضج الجنسي هو خطوة حاسمة يتعين استكماله قبل إعداد مقايسة خصوبة. مزايا تحديد بداية البلوغ من خلال فصل بريبوتيال وفتح المهبل والسفاد الأول، هي الخصائص غير الغازية لهذه الإجراءات، كما أنها لا تتطلب جمع الدم أو التضحية بالحيوان16، 17.
بعد أن يتم تحديد بداية البلوغ، بشكل صحيح إعداد دراسة خصوبة سوف توفر معلومات هامة حول السلامة المحور الإنجابية، وعادة ما يكون له ميزة ثانية لتوليد الحيوانات التجريبية لإجراء مزيد من الدراسات (التنقيح) 18-إعداد دراسة الخصوبة الموصوفة في هذا البروتوكول يمكن الكشف عن العجز في الصغيرة والكبيرة على حد سواء في الكفاءة التناسلية في الذكور والإناث. مفتاح معلمات تقييم تشمل 1) الوقت للقمامة الأولى، 2) عدد ليتر ولدت في حجم 3) القمامة وإطار زمني معين. وأخيراً، ترد توصيات لنوع متابعة الدراسات التي يمكن إجراؤها لتحديد سبب ضعف الخصوبة.
وصف البروتوكول يشير إلى الفئران وبيانات تمثيلية تعكس العمل المنجز في الفئران المعدلة وراثيا. ومع ذلك، كافة البروتوكولات شملت تصلح أيضا في الفئران.
الرفاه العام للفئران أمر بالغ الأهمية ل تحليل خصوبة ناجحة21. عند القيام تحليل خصوبة، من المهم أن لا جسديا التحقق في الفئران كل يوم كهذا يمكن أن يسبب الإجهاد. كذلك تجنب التغييرات المتكررة القفص، أن هذه أيضا مرهقة. من الناحية المثالية سوف يتم التغييرات القفص لا يزيد عن 1-2 مرات في ?…
The authors have nothing to disclose.
أشكر المؤلف المساهمة في الأعمال الأولية التي هي الأساس لهذا المنشور. بفضل أيتور أغيري، جنفييف هاء ريان وايريكا ل. للحصول على تعليمات إعداد المخطوطة. وبفضل جيسيكا لي سورا والذقن أوستن للمساعدة التقنية مع المخطوطة. وأيد H.M.H. يونيس كينيدي شرايفر الوطني معهد صحة الطفل والتنمية البشرية من “معاهد الصحة الوطنية في” إطار جائزة رقم R00HD084759.
Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
Surface protector | Fisher | 1420637 | |
Light meter | VWR | 21800-014 | |
Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
Scale | VWR | 10205-004 | |
Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |