טיפולים רבים, מוטציות גנטיות להשפיע על התזמון של בגרות מינית ופוריות. פרוטוקול זה מתאר שיטה לא פולשנית כדי להעריך את התפתחות המתבגר ב עכברים וחולדות לפני הגדרת מחקר פוריות בחיות בגרו.
הערכה של יכולת הרבייה היא קריטית להבנת ההשפעה של הטיפול או מניפולציה גנטית על ציר הרבייה, גם כינה את הציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-האשכים. הציר הרבייה היא אינטגרטור מפתח של קלט סביבתי ופנימיים בהתאמת לפוריות תנאים נוחים עבור רבייה. לפני היציאה על מחקר פוריות עכברים וחולדות, בגרות מינית מוערך לשלול את האפשרות כי הפנוטיפים הרבייה שנצפה נגרמות על ידי עיכוב או נעדר תחילת המתבגר. פרוטוקול זה מתאר בגישה פולשנית כדי להעריך את התפתחות המתבגר אצל זכרים באמצעות הקביעה של ההפרדה preputial, אצל נקבות דרך פתח הנרתיק, ייחום ראשון. לאחר האישור של סיום ההתבגרות, ההישג של בגרות מינית, יכול להיות יזם מחקר פוריות. ההליך מתאר את תנאי גידול אופטימליים עבור עכברים, חולדות, כיצד להגדיר מחקר פוריות אילו פרמטרים כדי להעריך ולקבוע אם הטיפול או מחיקה ג’ין יש השפעה על פוריות.
המעבר לבגרות נדרש להשיג בגרות מינית וכשירותם הרבייה. המעבר המתבגר ותחזוקה של פוריות בבגרות מוסדר על ידי הציר הרבייה, גם כינה את הציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-האשכים (איור 1). העיתוי של תחילת המתבגר ותחזוקה של פוריות מוסדר בחוזקה על ידי גורמים פנימיים, כמו גם הסביבה כדי להגדיל את סיכויי ההישרדות של הצאצאים וההורים1,2. פרוטוקול זה מספקת גישה פולשנית לקבוע המתבגר התחלתה של עכברים וחולדות לאשר בגרות מינית לפני הגדרת מחקר פוריות כדי להעריך את יכולת הרבייה.
מחקר פוריות מבוצעת בבעלי חיים בגרו, ניתן לאתחל לאחר החיות עברו גיל ההתבגרות. לפני תחילת המתבגר, הציר הרבייה היא השבתה הדרגתית, הנהג מפתח של התבגרות מינית, גונדוטרופין – releasing הורמון (GnRH), הוא שוחרר לתוך בלוטת יותרת המוח בכמויות לא מספיקות כדי ליזום גיל ההתבגרות (איור 1). תחילת המתבגר היא תהליך מורכב שתוצאתו שחרור מוגבר GnRH קדושתו החציוני. GnRH מעודד הורמון מחלמן (LH) ואת זקיק מגרה הפרשת הורמון (FSH) של בלוטת יותרת המוח, שני הורמונים חיוניים עבור ההבשלה האשכים ותפקוד הרבייה (איור 1)3,4,5 .
עלבונות לציר הרבייה לגרום הפריון, ויכול גם מראש או עיכוב התפתחות המתבגר. תנאים ידוע להשפיע על התזמון של תחילת המתבגר וכשירותם הרבייה כוללים את החשיפה משבשי כימיקלים6,7, הגוף עלה/ירד במשקל1,8, שינויים היום אורך2,9 , מוטציות גנטיות10,11,12,13,14,15.
תחילת הבגרות המינית היא צעד קריטי זה צריך להסתיים לפני הגדרת וזמינותו של פוריות. היתרונות של קביעת תחילת המתבגר דרך ההפרדה preputial, פתח הנרתיק, ייחום ראשון, הם המאפיינים לא פולשנית של נהלים אלה, כפי שהם אינם מצריכים איסוף דם או הקרבת בעלי חיים16, 17.
לאחר תחילת המתבגר נקבע, הגדרת כראוי מחקר פוריות יספק מידע חשוב אודות השלמות של הציר הרבייה, בדרך כלל יש היתרון השני של יצירת חיות ניסוי ללימודי (עידון) 18. הגדרת המחקר פוריות שמתואר פרוטוקול זה יכול לזהות חסרונות קטנים וגם גדולים ביכולת הרבייה של זכרים ונקבות. מפתח הערכה שפרמטרים 1) זמן ההמלטה הראשונה, 2) מספר המלטות המופקים גודל מסגרת הזמן וחול 3) נתון. לבסוף, המלצות עבור הסוג של מעקב מחקרים אשר יכול להתבצע כדי לזהות את הגורם ליקוי פוריות הינם כלולים.
הפרוטוקול המתואר מתייחס עכברים ומשקפים הנתונים נציג העבודה העכברים הטרנסגניים. עם זאת, כל הפרוטוקולים כלולים תקפות באותה מידה בחולדות.
רווחתם הכללית של העכברים הוא קריטי עבור assay פוריות מוצלחת21. בעת ביצוע וזמינותו של פוריות, חשוב לבדוק לא פיזית העכברים כל יום כמו זה יכול לגרום ללחץ. דרך נוספת להימנע שינויים תכופים בכלוב, כמו אלה גם מלחיץ. אידיאלי שינויים כלוב ייעשה יותר מ 1 – 2 פעמים בשבוע. לאור החשיפה במהלך שלב כ…
The authors have nothing to disclose.
אני מודה המחברים לתרום העבודה ההתחלתית אשר הוא הבסיס של פרסום זה. תודה Aitor אגירה, ג’נביב א, ריאן ואריקה Schoeller ל’ לעזרה בהכנת כתב היד. תודה לי סורה ג’סיקה, אוסטין הסנטר לקבלת סיוע טכני עם כתב היד. H.M.H. נתמכה על ידי יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי הילד לבריאות & פיתוח אנושי של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R00HD084759.
Sterile Cotton Balls | Fisher | 22456885 | |
Surface protector | Fisher | 1420637 | |
Light meter | VWR | 21800-014 | |
Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
Microscope Slides | Genesee Scientific | 29-101 | |
Optimouse rack with cages | AnimalCare systems | C89100 | |
Water Bottle Basket | AnimalCare systems | C61011 | |
Filtered Cage Tops | AnimalCare systems | C78210 | |
Optimice Standard Feeder | AnimalCare systems | C40100SG | |
Cage Card Holder | AnimalCare systems | C43251 | |
Cage Cards | AnimalCare systems | M52010 | |
Bottle Assambley | AnimalCare systems | C79122P | |
Bed R'Nest Nesting | The Andersons | BRN4WSR | |
1/8" Corn Cob bedding | The Andersons | 8B | |
Standard mouse chow | Teklad | 7904 (7004) | |
Scale | VWR | 10205-004 | |
Polypropylene Beaker | Fisher | 14-955-111F |