Summary
مكون تكملة C1q هو جزيء الموالية للالتهابات أعرب بشدة في الأنسجة microenvironment التي يمكن أن تتفاعل مع مصفوفة خارج الخلية. هنا، ونحن نوصف طريقة لاختبار كيف C1Q ملزمة لحمض الهيالورونيكس يؤثر التصاق الخلية.
Abstract
وقد ثبت بشكل متزايد أن البيئة الدقيقة الورم يلعب دورا نشطا في نمو الورم والانبثاث. من خلال مسارات مختلفة، يمكن للخلايا السرطانية تجنيد الخلايا الجذعية والمناعية والبطانية بكفاءة عن طريق إفراز العوامل المحفزة، والكيماويات والسيتوكينات. بدوره، يمكن لهذه الخلايا تغيير خصائص الإشارات للبيئة الدقيقة عن طريق الإفراج عن إشارات تعزيز النمو، المستقلبات ومكونات المصفوفة خارج الخلية للحفاظ على الانتشار العالي والكفاءة النقيلية. في هذا السياق، نحدد أن مكون تكملة C1q، الذي يعبر عنه محلياً مجموعة من الأورام الخبيثة البشرية، عند التفاعل مع حمض الهيالورونيكس المصفوفة خارج الخلية، يؤثر بشدة على سلوك الخلايا الأولية المعزولة عن الورم البشري العينات. هنا، ونحن نوصف طريقة لاختبار كيف C1q ملزمة حمض الهيالورونيكس (HA) يؤثر على التصاق الخلايا السرطانية، الكامنة وراء حقيقة أن الخصائص البيولوجية للمكونات الرئيسية للمصفوفة خارج الخلية (في هذه الحالة HA) يمكن أن تشكل ها بإشارات نشطة بيولوجيا نحو الورم التقدم.
Introduction
تؤثر البيئة الصغرية للورم (TME) على تطور السرطان وتطوره لأنه يمكن أن يوفر مكانة متساهلة لبقاء الخلايا ونموها وغزوها. قد يكون تحديد اللاعبين الرئيسيين الجدد في TME مفيدًا لاكتشاف أدوات جزيئية جديدة للعلاج المستهدف. TME يتضمن شبكة معقدة وديناميكية من الخلايا غير الخبيثة، مثل الخلايا البطانية، الخلايا الليفية وخلايا الجهاز المناعي، جزءا لا يتجزأ من مكونات المصفوفة خارج الخلية المحيطة (ECM) بما في ذلك الكولاجين، laminins، فيبرونيكتينس، البروتيوغليكانوهيون وهيالورونان. كل من الخلايا الورم ية وغير الورم توليف وإفراز مكونات ECM جنبا إلى جنب مع السيتوكينات, chemokines, عوامل النمو والالتهابات ومصفوفة إعادة عرض الإنزيمات التي تغير عموما الخصائص الفيزيائية, الكيميائية والإشارة من TME. ومن بين هذه المكونات، ظهر حمض الهيالورونيكس (HA) لممارسة دور حاسم في علم الأحياء الورم. على الرغم من تركيبتها الكيميائية البسيطة، يمكن ها، جنبا إلى جنب مع جزيئاتها ملزمة HA (hyaladherins)، تعديل الأوعية، واستجابة الجهاز المناعي وإعادة عرض ECM في حجم والتركيز طريقة تعتمد1.
كما أن نظام التكملة (جيم) هو أيضاً جزء من النظام المحلي للإدارة التكميلية، الذي حظي مؤخراً باهتمام متزايد. ويشمل نظام C مجموعة من البروتينات القابلة للذوبان والأغشية المرتبطة المشاركة في خط الدفاع الأول ضد الخلايا غير الذاتية والعناصر المضيفة غير المرغوب فيها ومسببات الأمراض. وظيفيا، وC يربط الأسلحة ذات تأثيرين من النظم الفطرية والتكيفية لتعزيز إما القتل المباشر للخلايا أو تصاعد استجابة التهابية2. يمكن تفعيل C قمع نمو الورم، عن طريق تدمير الخلايا السرطانية أو تثبيط نموها، ولكن أصبح من الواضح بشكل متزايد أنه يمكن أن تمتلك نشاط تعزيز الورم من خلال الحفاظ على التهاب مزمن، وتعزيز إنشاء وسط كبت المناعة، مما يحفز توليد الأوعية، وتفعيل مسارات الإشارات المتعلقة بالسرطان3. في هذا السياق، C1q، وقد ظهرت أول جزيء الاعتراف من المسار الكلاسيكي للنظام C لممارسة وظائف هامة في microenvironment الورم بشكل مستقل عن C تفعيل4. وقد تبين أن C1q يتم التعبير عنها محليا من قبل مجموعة من الأورام الخبيثة البشرية، حيث يمكن أن تفضل التصاق الخلايا السرطانية والهجرة والانتشار بالإضافة إلى تكوين الأوعية والانبثاث5. ومن المثير للاهتمام C1q يتفاعل مع أحد المكونات الرئيسية لـ ECM مثل HA.
لقد طورنا تقنية لعزل الخلايا السرطانية الأولية عن كتلة الورم. وعلاوة على ذلك، أنشأنا المصفوفة، والتي يمكن أن تحفز الورم microenvironment، وخاصة التفاعل بين C1q وارتفاع حمض الهيالورونيكس الجزيئي. C1q ملزمة إلى HA كان قادرا على الحث على التصاق الخلايا السرطانية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم جمع عينات الأنسجة من المرضى بعد موافقة مستنيرة بعد موافقة المجلس المؤسسي للمستشفى الجامعي في تريستا، إيطاليا.
1. عزل ة ية الخلية والثقافة (اليوم 1)
- عزل خلايا ورم الظهارة المتوسطة البشرية من العينات الصلبة MPM. فرم ناعما الأنسجة مع قطع للحصول على شظايا من حوالي 2-3 مم2 في الحجم واحتضان في 5 مل من حل الهضم تتألف من حل الملح المتوازنة هانكس (HBSS) تستكمل مع 0.5 m Ca2 +/ ملغ2 +، 0.5٪ تريبسين و 50 ميكروغرام / مل DNase I، بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية.
- عزل ةية الخلية والثقافة (اليوم الثاني)
- بعد الحضانة بين عشية وضحاها، ضع الأنسجة المهمدة لمدة 30 دقيقة في حاضنة 37 درجة مئوية مع اهتزاز لطيف.
- استبدل محلول الهضم عند التمركز (250 x ز) مع 3 ملغ / مل كولاجينز نوع 1 إذاحل في 5 مل من متوسط 199 مع HBSS واحتضان مزيد لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية مع اهتزاز لطيف.
- منع رد الفعل الأنزيمي عن طريق إضافة 10٪ من حرارة الجنين المعطلة عنقله مصل الأبقار (FBS). إعادة تعليق الخلايا بعناية فائقة مع أنبوب 5 مل لضمان أن يتم تحرير معظم الخلايا من الأنسجة. ثم قم بتصفية تعليق الخلية من خلال فلتر المسام 100 ميكرومتر.
- البذور الخلايا في 12.5 سم2 قارورة والثقافة لهم في 37 درجة مئوية مع الخلايا البطانية البشرية المتوسطة خالية من المصل (HESF)، مع FBS 10٪ وتستكمل مع EGF (10 نانوغرام / مل)، FGF الأساسية (20 نانوغرام / مل)، و 1٪ البنسلين- ستربتوميسين.
ملاحظة: يستعاض عن هاوب الوسط الطازج كل يومين أو ثلاثة أيام.
2. ها طلاء (اليوم 1)
- إعادة تعليق الوزن الجزيئي العالي HA (1.5 kDa) في الماء المقطر المزدوج بتركيز 1 ملغ / مل6.
- حل مخزون HA المخفف إلى 50 ميكروغرام / مل في الكربونات / بيكربونات العازلة (0.1 متر، ودرجة الحموضة 9.6) مع الأنابيب لطيف.
- معطف لوحة 96 جيدا مع 100 ميكرولتر من حل مخزون ها المخفف في بئر جيدا بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية.
ملاحظة: كان حمض الهيالورونيكس هدية طيبة من البروفيسور إيفان دوناتي،قسم علوم الحياة، جامعة تريست7 .
3. C1q طلاء (اليوم 2)
- بعد الحضانة بين عشية وضحاها، فراغ يستنشق الآبار المعالجة وغسل لوحة 96 جيدا مع 100 لتر من PBS دولبيكو (dPBS) في البئر.
- السماح لC1q (25 ميكروغرام/مل أو تركيزات مختلفة لتجارب استجابة الجرعة) أو BSA (كتحكم سلبي) لربط البلاستيك المعطل-HA عن طريق احتضان هذه البروتينات في تركيز 25 ميكروغرام / مل في 100 ميكروغرام / لتر من dPBS + 0.5٪ BSA و 0.7 mCa2 +/ ملغ 2 + ملغ . ثم تحضن بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية.
- فراغ يستنشق الآبار وغسل لوحة 96 جيدا مع 100 ميكرولتر / جيدا من dPBS.
4. وضع العلامات الخلية مع سريع دي
- إعادة تعليق 1 x 105 خلايا الورم في 500 ميكرولتر من dPBS تحتوي على 10 ميكروغرام / مل من الصبغة الفلورسنت داي سريع. احتضان لمدة 15 دقيقة في 37 درجة مئوية في 5٪ V /v CO2 حاضنة لوضع العلامات، والاختلاط يدويا بعد 5 دقائق فترات.
- لإزالة فائض سريع ديي، إضافة 10 مل من dPBS، ماصة بلطف صعودا وهبوطا، والطرد المركزي في 250 x ز لمدة 7 دقائق.
5. التصاق الخلية على المصفوفات HA/ C1q (اليوم 1)
- فراغ يستنشق الآبار المغلفة مع المصفوفات المختلفة (كانت مغلفة الآبار في الخطوة 3.2).
- توزيع 100 μL من تعليق الخلية المسمى إلى الآبار المغلفة واحتضان لوحة لمدة 35 دقيقة في 37 درجة مئوية في 5٪ v/v CO2 حاضنة.
- إزالة الخلايا غير الملتصقة عن طريق اسبة supernatant. غسل مرة واحدة مع dPBS تحتوي على 0.5٪ BSA، 0.7 m Ca2+ و 0.7 m Mg2+.
- لالخلايا المعتنقة بإضافة 200 μL/well من 10 m Tris-HCl, pH 7.4 + 0.1% v/v SDS وقراءة لوحة 96-well على الفور مع قارئ الفلورسنت (544 نانومتر, انبعاث 590 نانومتر) باستخدام منحنى المعايرة التي تم إنشاؤها من خلال الليسيس من عدد متزايد من المسمى الخلايا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
HA هو السكاريد عالي الوزن المشحون ة سلبيا، والذي يتكون من تكرار (β، 1-4) - حمض الغلوكورونيك -(β، 1-3) -N-أسيتيل-D-الجلوكوزامين d d d ddisaccharide الوحدات (الشكل1B)7. اختبر البروز من الالتصاق ال [ه] على ال [96-ولّ] لوحة [أس ولّ] الفعالية من [إيمّلّج] ه كان معزّزة من [بيتينّلتد] [ه] ([بيو-ه]). وقد أعيد تعليق تركيزات مختلفة من بيو - ها، تتراوح بين 10 ميكروغرام/مل و1 ملغم/مليلتر، في 100 مليكربونة/بيكربونات-حاجز درجة الحموضة 9.6 وتحنى بين عشية وضحاها عند 4 درجة مئوية.
بعد الاستحمام واسعة النطاق، تم الكشف عن بيو-HA ملزمة إلى 96 الآبار لوحة باستخدام الستربتفيدين مترافق مع الفوسفاتيز القلوية، في حين تم تحديد كمية وجود الستربتفيدين باستخدام pNPP (1 ملغ / مل) كركيزة. تم إجراء القراءة على طول الموجة من 405 نانومتر باستخدام قارئ ELISA. وكان بيو-HA قادرة على ربط لوحة 96 جيدا بطريقة استجابة الجرعة (البيانات غير مبينة)؛ تم اختيار 50 ميكروغرام/مل كهضبة تشبع وبالتالي استخدمت في اختباراتنا.
أظهرت بياناتنا السابقة أن C1q قادرة على ربط مجموعة واسعة من الليجانالمستهدفة المترجمة في ECM 8. هذا الربط قوي بشكل خاص مع HA9. وكانت آبار لوحة ميكروتميتر مغلفة ب50 ميكروغرام/مل HMW-HA واحتضانها بتركيز متزايد من C1q. وقد تصورت C1q ملزمة عند احتضان مع المضادة لC1q الأجسام المضادة متعددة النسيلة. C1q قادرة على ربط عالية الوزن الجزيئي HA بطريقة تعتمد على الجرعة (الشكل1A)، لتصل إلى الحد الأقصى لمستوى الربط في تركيز 50 ميكروغرام / مل. بعد أن ثبت أن C1q يمكن أن تربط HA، قمنا بالتحقيق في تأثير هذا التفاعل في تعديل خصائص إشارة من ECM وآثارها في تطوير الورم. ولهذا الغرض، وضعنا بروتوكولاً للخلايا السرطانية المعزولة من العينات الثنائية البصرية التي تم الحصول عليها من المرضى المتضررين. تم عزل الخلايا السرطانية الأولية من خزعة الأنسجة، كما هو ملخص في الشكل 2. تم تقييم قدرة الخلايا السرطانية على التفاعل مع C1q عن طريق إجراء تقييم التصاق الخلايا باستخدام مجموعات مصفوفة مختلفة، كما هو موضح في الشكل 3. كانت الخلايا السرطانية ملطخة بمسبار الفلورسنت FAST DiI وبذرت على HA، HA ملزمة C1q أو إلى BSA (تستخدم كتحكم سلبي)، لمدة 35 دقيقة. إذا تمت مقارنتها بHA، كان الطلاء مع HA-ملزمة-C1q قادرة على زيادة كمية الالتصاق الخلايا الأولية ولكن غير قادر على تحفيز التصاق خطوط الخلايا الورم التي اختبرناها، كما هو مبين في الرسم البياني ممثل في الشكل 3.
الشكل 1 . تفاعل C1q مع حمض الهيالورونيكس. (أ) ربط C1q على HMW HA بطريقة تعتمد على الجرعة. يتم التعبير عن البيانات كمتوسط ثلاث تجارب مستقلة في ثلاث تجارب ±S.E.M. ( B) تمثيل تخطيطي لجزيء C1q والمنطقة الكروية سلسلة واحدة المؤتلف. يتم تجميع C1q من ثلاث سلاسل ببتيد(A، B،C): كل منها يحتوي على تسلسل يشبه الكولاجين N-محطة وC-Terminal gC1q رئيس كروي. (ج) التركيبة الكيميائية لحمض الهيالورونيكس، وهي سلسلة من حمض الغلوكورونيك وN-أسيتيل غلوكوكوزامين. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2 . مخطط موجز لعزل ةية الخلايا السرطانية ومورفولوجيا. تم عزل الخلايا السرطانية من عينات خزعة الجنبي. تم زرع الخلايا في قارورة 12.5 سم2 ومثقفة في مصل الخلايا البطانية البشرية المتوسط الحر + 10% FBS. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3 . تأثير C1q على التصاق الخلايا السرطانية. تم زرع خلايا الورم (MES) أو خط خلايا ورم الظهارة المتوسطة الأساسي (MSTO-211H) إلى آبار الميكروتتر قبل المغلفة بحمض الهيالورونيكس (HA)، HA ملزمة C1q أو ألبومين المصل البقري (BSA). في الجزء العلوي من هذا الشكل، تم عرض الجانب المورفولوجي لخط خلية أساسي تمثيلي واحد مرتبط بـ HA، وHA مرتبط بـ C1q أو BSA. تم الحصول على الصور عن طريق المجهر على النقيض من المرحلة، والتكبير الأصلي: 200x. FAST DiI وصفت خلايا ورم الظهارة المتوسطة الأولية أو خط خلية ورم الظهارة المتوسطة (MSTO-211H) سمح للتمسك آبار الميكروتتر قبل المغلفة مع HA، HA ملزمة C1q أو إلى BSA. يتم التعبير عن البيانات كمتوسط من ثلاث تجارب مستقلة أجريت في triplicates ± S.E.M. * p < 0.01 مقابل HA. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نحن تصف طريقة سهلة للتحقيق في كيفية تكملة مكون C1q، والتفاعل مع حمض الهيالورونيكس، قادرة على تعديل سلوك الخلايا الأولية المعزولة من أنسجة الورم البشري. كل من HA و C1q موجودة بوفرة في الأنسجة microenvironment سواء في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية، والمشاركة في العديد من العمليات البيولوجية الخلية. على سبيل المثال، وقد ثبت C1q أن تكون موجودة في البيئة الدقيقة من المشيمة حيث أنها تفضل غزو تروفيوبلاست خارج من نبالة الأم أثناء المشيمة8. كما يتم إيداع C1q في الجلد شفاء الجروح حيث أنه يعزز عملية الأوعية الدموية اللازمة لتجديد الأنسجة وإصلاح10. وأخيرا، تم تحديد C1q في العديد من أنسجة الورم المختلفة4. الوزن الجزيئي العالي HA هو حاجز طبيعي لتولد الأوعية والانتشار وأظهرت الأدلة الأخيرة أن C1q، إلى جانب دورها الكلاسيكي في تنشيط تكملة، قادرة على العمل كجزيء ECM، مما يحبذ هجرة الخلايا.
يتألّف الجدة من هذا عمل في الاستنتاج أنّ الالتصاق [ك1ق] إلى [ه] بقوّة تعديل التفاعل الخلايا ورم مع [ه]. لإعداد هذا الأسلوب تم النظر في العديد من نقاط التفتيش. أولا وقبل كل شيء، ونحن نضمن أن كمية كافية من HA كان لا بد من البلاستيك من الثقافة والآبار ELISA باستخدام HA biotinylated. وأكد تلطيخ الألسيان الأزرق من الآبار هذه النتائج (لم تظهر البيانات). وقد تم إجراء الحضانة بين عشية وضحاها في العازلة بيكربونات، ورقم الحموضة 9.6، وهذا الإجراء ضمان التشبع الكامل للآبار من قبل HA (البيانات غير مبينة).
الخطوة الثانية هي ربط C1q إلى HA. تم تنفيذ الربط C1q إلى HA في درجة الألف الفسجية (7.4) وفي وجود Ca2+. لهذا السبب، استخدمنا مخزن اعلى من العازل DPBS-BSA مع الأيونات ثنائية التكافؤ. في البداية قمنا بإجراء تجربة استجابة الجرعة من أجل تحديد واختيار الكمية المثلى من C1q التي يمكن العثور عليها تعلق على HA. على الرغم من أننا في منحنى الجرعة والاستجابة لم نصل إلى الهضبة بالضبط، استخدمنا تركيز 25 ميكروغرام /مل لتكون أقرب إلى التركيز الفسيولوجي للC1q الحرة، معتبرا أن كمية C1q الموجودة عادة في المصل هو 75-150 ميكروغرام / مل. وقد تم حساب أن المصل C1q خالية من C1r و C1s حوالي 10٪-20٪ من C1 مجمع11. ومن المعروف C1q لقدرته على ربط polyanions، وقد تم تعريفه على أنه جزيء الاعتراف نمط تهمة وHA هو البوليمر الخطي المشحونة سلبا من وحدات مكررة من (β، 1-4) - D-حمض الجلوكورونك-(β،1-3)-N-أسيتيل-D-الجلوكوزامين12، 13. ولهذا السبب، قمنا بالتحقيق في هذا التفاعل القوي غير التكافؤ. وأشارت ملاحظاتنا إلى أن الخلايا السرطانية تشعر بالفرق بين HA وHA المنضمإلى C1q. يبدو أن الخلايا أكثر انتشار التدريجي إذا مقارنة مع التمسك الخلية HA وحدها. لاحظنا أن هذا التأثير لا يتم التوسط به من قبل C1q القابلة للذوبان، مما يشير إلى أن هذا التعديل في التصاق الخلية يعتمد على تفاعل C1q مع HA، وربما يرجع ذلك إلى تغيير التطابقي للجزيء التكميلي نتيجة للربط.
نريد أن نؤكد على أهمية استخدام الخلايا الأولية كنماذج في المختبر من سلوك الورم للتجارب التصاق، لأننا نلاحظ فرقا قويا في القدرة التصاق بين الخلايا الأولية مقارنة مع عدة خطوط الخلايا، كما هو مبين في الشكل 3 نموذج بديل ومثير جدا للاهتمام لتقييم الخصائص البيولوجية للHA هو استخدام نماذج 3D من السقالات هيدروجيل HA. ويمكن استخدام هذه السقالة مع دمج الجزيئات البيولوجية لتقييم الإشارات النشطة بيولوجيا وعدة تطبيقات في الطب التجديدي14. النموذج الذي نقترحه في هذه الدراسة هو وسيلة أسهل وأسرع وأرخص لتقييم الاستجابات الخلوية لمجموعة من المحفزات، ويمكن اعتباره خطوة أولى لفهم الآليات الجزيئية المشاركة في هذا النوع من التفاعل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ويعلن المؤلفون أن البحث أجري في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن تفسيرها على أنها تضارب محتمل في المصالح.
Acknowledgments
نشكر إيفان دوناتي على توفيرها لـ HA وليوناردو أماديو وغابرييلا زيتو (قسم أمراض النساء في المركز الدولي للدراسات الجنائية في المركز الدولي للدراسات الجنائية في مدينة "بيرلو غاروفولو"، في تريستا، إيطاليا) وأندريا رومانو (وحدة العمليات السريرية لعلم التشريح وعلم الأنسجة المرضية، مستشفى كاتينارا، تريست، إيطاليا ) لجمع عينة الأنسجة. كما نشكر نيكولو موروسيني على المساعدة في إعداد الفيديو وأليكس كوبولا، الصوت. وقد دعم هذا العمل منح من معهد صحة الأم والطفل، ومؤسسة "بيرلو غاروفولو"، ومؤسسة ترييستي، إيطاليا (RC20/16)، ومؤسسة كاسا دي ريسابروميو تريستا إلى ر. بولا.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 µm pore filter | BD Falcon | 352360 | |
| Amphotericin B solution (fungizone) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
| basic FGF | Immunological Sciences | GRF-15595 | |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
| Collagenase type I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
| DNase I | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
| EGF | Immunological Sciences | GRF-10544 | |
| FAST DiI | Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Fetal bovine serum | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectin | Roche | 11051407001 | |
| Flask for cell culture | Corning | 430639 | Sterile, vented |
| Gentamicin solution | Sigma-Aldrich | G1397-10ML | |
| Hank’s Balanced Salt Solution (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone |
| High molecular weight hyaluronic acid | Kind gift by Prof. Ivan Donati | ||
| Human endothelial serum free medium | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Supplemented with EGF (5 ng/mL), basic FGF (10 ng/mL), and 1% penicillin–streptomycin (Sigma-Aldrich) |
| Magnesium Chloride | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Medium 199 with Hank’s salt | Sigma-Aldrich | M7653 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P0781 | |
| Time-lapse microscopy | Nikon | Imaging System BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T4674 |
References
- Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function. Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).
- Lorusso, G., Ruegg, C. The tumor microenvironment and its contribution to tumor evolution toward metastasis. Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1091-1103 (2008).
- Ricklin, D., Hajishengallis, G., Yang, K., Lambris, J. D. Complement: a key system for immune surveillance and homeostasis. Nature Immunology. 11 (9), 785-797 (2010).
- Bulla, R., et al. C1q acts in the tumour microenvironment as a cancer-promoting factor independently of complement activation. Nature Communications. 7, 10346 (2016).
- Winslow, S., Leandersson, K., Edsjo, A., Larsson, C. Prognostic stromal gene signatures in breast cancer. Breast Cancer Research. 17, 23 (2015).
- Collins, M. N., Birkinshaw, C. Hyaluronic acid solutions: A processing method for efficient chemical modification. Journal of Applied Polymer Science. 130 (1), 145-152 (2013).
- Itano, N. Simple primary structure, complex turnover regulation and multiple roles of hyaluronan. Journal of Biochemistry. 144 (2), 131-137 (2008).
- Agostinis, C., et al. An alternative role of C1q in cell migration and tissue remodeling: contribution to trophoblast invasion and placental development. Journal of Immunology. 185 (7), 4420-4429 (2010).
- Agostinis, C., et al. Complement Protein C1q Binds to Hyaluronic Acid in the Malignant Pleural Mesothelioma Microenvironment and Promotes Tumor Growth. Frontiers in Immunology. 8, 1559 (2017).
- Bossi, F., et al. C1q as a unique player in angiogenesis with therapeutic implication in wound healing. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (11), 4209-4214 (2014).
- Hosszu, K. K., et al. Cell surface expression and function of the macromolecular c1 complex on the surface of human monocytes. Frontiers in Immunology. 3, 38 (2012).
- Laurent, T. C., Fraser, J. R. Hyaluronan. Journal of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 6 (7), 2397-2404 (1992).
- Gaboriaud, C., et al. The crystal structure of the globular head of complement protein C1q provides a basis for its versatile recognition properties. Journal of Biological Chemistry. 278 (47), 46974-46982 (2003).
- Lam, J., Truong, N. F., Segura, T. Design of cell-matrix interactions in hyaluronic acid hydrogel scaffolds. Acta Biomaterialia. 10 (4), 1571-1580 (2014).
