Summary
ここでは、ゼブラフィッシュ稚魚から光誘発網膜電図反応の測定を簡素化するプロトコルを提案する.新規円錐状のスポンジ チップ電極は、ビジュアル開発の研究は、ゼブラフィッシュ稚魚網膜電図 ERG を信頼性の高い結果と低コストで達成するために簡単に使用する助けることができます。
Abstract
ゼブラフィッシュ (動脈分布) の発達研究の脊椎動物モデルとして用い、視覚神経科学に特に適して。鳥類網膜電図 (ERG) は、視覚的なパフォーマンスの機能測定より高い脊椎動物種に確立されている理想的な非侵襲的な方法です。このアプローチは、ますますゼブラフィッシュ、発達初期の幼虫などの視機能を検査するため使用されています。日付に幼虫ゼブラフィッシュ ERG の最も一般的に使用される記録電極はガラス マイクロ ピペット電極は、限られた資源で研究所の挑戦を提示、その製造に特殊な機器が必要です。ここでは、円錐状のスポンジ チップ電極を用いたゼブラフィッシュ稚魚 ERG プロトコルを提案します。新規電極は製造してより経済的なガラス マイクロ ピペットより幼虫の目を損傷する可能性は低く、ハンドルに簡単です。以前に公開した ERG メソッドと同様現在のプロトコルはそれぞれ視細胞と双極細胞応答、a ・ b 波、外側の網膜機能を評価できます。プロトコルは、ユーティリティ、感度、および新規電極の信頼性を支えるゼブラフィッシュ幼虫の初期開発全体を通して視覚機能の改良を説明することが明らかに。簡易電極は、モデル生物の新しい ERG システムを確立または変更既存小動物 ERG 測定装置の試作ゼブラフィッシュ、ゼブラフィッシュを使用する視覚神経科学の研究者を助ける時に便利です。
Introduction
ゼブラフィッシュ (動脈分布) 視覚神経科学の研究など、広く使用されている遺伝的脊椎動物モデルとなっています。この種の人気の高まりは、遺伝子操作、非常に節約された脊椎動物の視覚システム (ニューロンの種類、解剖学的形態および組織、および基になる遺伝学)、高い多産の使いやすさなどの利点に起因することができます。飼育哺乳類モデル1と比較しての低コスト。非侵襲的な局所網膜電図 (ERG) は、人間の視覚機能を評価するために臨床的に使用されています長いと齧歯動物およびゼブラフィッシュ稚魚2,3を含む大小の種の範囲のビジョンを定量化する実験室の設定で,4,5します。 最も一般的分析 ERG コンポーネントは、a 波と b 波、それぞれ光を感じる視細胞と双極ニューロンから発信されました。ゼブラフィッシュ稚魚における網膜の異なる層は、3 日後受精 (dpf) によって確立された、シナプス ターミナル光受容体円錐形の形態の 4 dpf6、7の前に成熟しました。ゼブラフィッシュ稚魚の外側の網膜機能は 4 dpf、ERG がこの初期の時代以降から測定可能なことを意味する前にこのように行われます。短い実験サイクルとモデルの高スループット特性のため ERG に適用されている疾患モデルにおける機能的アセスメントのゼブラフィッシュ稚魚カラー ビジョンと網膜の開発を分析、ビジュアルの概日リズムを勉強してテスト薬8,9,10、11,12。
しかし、ゼブラフィッシュ稚魚の現在アプローチ ERG は採用が困難になることがありますいくつかの複雑さを持っています。公開されたゼブラフィッシュ稚魚 ERG プロトコルは一般的、記録電極3,4,5,として13、高品質マイクロ ピペットを必要とする導電性の液体で満たされたガラス ピペットを使用してください。ヒント3を。専門機器、マイクロ ピペットの引き手などマイクロフォージ、いくつかのケースでは、その製造に必要です。これは、限られた資源で研究所のための挑戦をすることができます、ゼブラフィッシュ稚魚視覚機能の測定に使用可能な小さな動物 ERG システムを適応させるときにも余分なコストに 。滑らかに、時でさえシャープ マイクロ ピペット チップは幼虫の眼の表面を損傷することが。さらに、電気生理学の商業マイクロ ピペット ホルダーは、固定の銀線で構成されます。これらのワイヤを固定になる増加維持管理費につながる新しいホルダーの購入を必要とする、繰り返し使用した後不動態処理されました。
ここでゼブラフィッシュ稚魚 ERG 測定の確立された小動物 ERG セットアップを適応させるために特に有用である円錐形のスポンジ チップ記録電極を用いた ERG 手法について述べる。電極が一般的なポリ酢酸ビニル (PVA) スポンジおよび他の専門にされた装置なし銀細線を使用して簡単になります。我々 のデータは、この新規電極は敏感であり 4 と 7 の dpf 間幼虫のゼブラフィッシュの網膜の神経回路の機能の開発を示すに十分な信頼性の高いことを見る。この経済的で実用的なスポンジ チップ電極は、エルグの新しいシステムを確立することやゼブラフィッシュ研究、小動物の既存のシステムを変更することは研究者に役に立つかもしれません。
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Protocol
網膜電図 (ERG) プロシージャがすべての動物の使用とケアのための実践規範のオーストラリア国立保健医療研究評議会の規定に従って行われた、動物倫理委員会で承認された、メルボルンの大学.
1. バッファー準備
- 金魚リンゲル液バッファー (1.25 M の NaCl、KCl 26 mM, 25 mm CaCl2、10 mM MgCl2, 100 mM グルコース、100 mM HEPES) x 10 の準備逆浸透 (RO) の水を使用しています。PH 7.8 にバッファーを調整し、0.22 μ m フィルターを使用してバッファーを滅菌します。ソリューション ストック3として 4 ° C で 10 x バッファーを格納します。
注:リンゲル液バッファー x 10 は、3 ヶ月以内に使用ください。 - 実験の日、逆浸透水を使って金魚リンゲル液バッファー x 10 を希釈して金魚リンゲル液バッファー x 1 を作る。
注:金魚リンゲル液バッファー × 1、ゼブラフィッシュ稚魚の配置に使用するスポンジをはじめ、PVA スポンジと記録電極の先端部には、スポンジを飽和状態に使用されます。
2. 電極作製
-
円錐状のスポンジの記録電極を準備します。
- 白金電極リード拡張子からオスをカットし、10 mm メス刃を使用して外側のポリテトラフルオロ エチレン絶縁被覆の端から削除します。電極リードのインナーワイヤーを損傷しないように注意してください。
- シルバーワイヤー (直径 0.3 mm) の 40 mm 長さにカットにしっかりと電極の鉛露出のインナー ワイヤと銀線をまとってによって接続これ。銀線公開 (図 1 a) ~ 15 mm 長さを残して、絶縁テープを使用して関節を包みます。
- 60 の 9 V DC 電源を使用して塩化物と露出の銀線を電気メッキ s 信号伝導を改善します。食塩で露出シルバー チップのもう一方の端をバッテリーのプラス端子に接続します。他の配線をバッテリーのマイナス端子に接続、生理食塩水2にワイヤのもう一方の端を浸します。
注:また、銀線を塩素漂白剤溶液 (有効成分 42 グラム/L のナトリウム次亜塩素酸) で 1 時間浸漬。 - カット 〜 20 mm × 20 mm スクエアの PVA スポンジはさみを使用して円錐形 (図 1 a) にします。1 x のバッファーを使用してスポンジを飽和させます。顕微鏡接眼レンズ上のスケール バーと、〜 40 μ m の直径の円錐形の頂点を形成するのにメスの刃を使用します。空気は、それが固体になるまで吸収紙ティッシュに円錐状のスポンジを乾燥させます。
注:PVA スポンジを大幅拡大が飽和状態、従ってスポンジは最初、円錐の頂点を形成する前に生理食塩水で飽和していることが重要です。 - Chloriding、空気乾燥後 5 分挿入吸収性組織に銀線円錐の底面を乾燥、ソリッド、円錐状の PVA スポンジに銀線。太陽光発電アイテム (図 1 b ・ C) を軽減するマスクのテープを使用して任意の余分な露出した金属を絶縁しなさい。
注:各実験的セッションの後に、銀線からスポンジを削除します。再利用のため、逆浸透膜水と空気の乾燥を使用してスポンジを洗ってください。最適な信号収集するように、銀線の単独使用をお勧めします。PVA スポンジが 5 回以上を再利用されませんする必要があります。 - 実験の日、スポンジを完全に飽和状態に少なくとも 15 分のバッファー x 1 に記録電極のスポンジ チップを浸します。
- スポンジ チップを取り付けることがなく、上記に説明したように、参照電極を準備します。
- 市販の接地電極を取得します。
3. ゼブラフィッシュ準備
- 暗適応一晩ゼブラフィッシュ幼虫 (> 8 h) 15 mL チューブにゼブラフィッシュを置くことによって録音の前に (< チューブあたり 20 幼虫) 暗いインキュベーターでアルミ箔に包まれました。十分な酸素供給を確保するため蓋を取り外します。
- レコーディングの日、幼虫を含む箔ラップ ファイティングファルコン管に蓋を締めなさいし、チューブが耐光性であることを確認します。エルグ ラボに幼虫を輸送します。
- 暗闇の中で薄暗い赤い照明光-発光ダイオード (LED; 17.4 cd.m-2、λmax 600 nm) からの支援を受けてペトリ皿に魚を注ぐ。光の露出を最小限に抑えるために耐光性のタオルを使用してシャーレをカバーします。
4. スポンジ プラットフォームの準備
- 35 mm のペトリ皿にぴったりと合うように乾燥の PVA スポンジの矩形をカットします。スポンジの厚さをペトリ皿の深さとほぼ同じにする必要があることを確認します。
- 参照電極の銀線に合わせてスポンジの一方の端を垂直方向に小さい切り傷を作る。
- 1 飽和するまで金魚リンゲル液バッファー x PVA スポンジを浸します。その後、きれいな 35 mm のペトリ皿にスポンジを置きます。軽い指押下に応じてスポンジからしみ出させるソリューションがないまでに余分な液体を吸収するのに紙タオルを使用します。
5. 動物や電極位置
- 0.02% tricaine 1 x 金魚リンゲル液バッファーで希釈を使用して幼虫を麻酔します。
- 3 mL Pasteur のピペットを使用して紙タオル (2〜 3 cm) の正方形の上に麻酔の幼虫を転送します。
- 鉗子を使用したしっとりスポンジ プラットフォームに幼虫を含むペーパー タオルを配置します。リンゲル液バッファーに浸した高級ブラシを使用して、幼虫の位置を調整します。幼虫の下にペーパー タオルの広場に近く液体から分離された 1 つ目に、上向きに直面していることを確認します。
- 保湿アイジェル幼虫の ERG 記録を通して潤いを保つために、ヘッドを除く、幼虫の体を艶をかけます。
- ファラデーケージ (図 1) 内に位置する Ganzfeld ボウル光刺激の前に小さな水加熱プラットフォームにスポンジのプラットフォームでシャーレを配置します。
注:スポンジと幼虫の体の温度の維持は、ERG 信号を安定を保証します。 - プラットフォーム スポンジ (図 1) でなされたカットに参照電極を挿入します。
- ファラデーケージの中に商業的に得られた接地電極を接続します。
- 記録電極の電極ホルダーを付ける、マイクロマニピュレーター (図 1) の脳定位固定装置のアームにホルダーを固定します。3 mL パスツール ピペットを使用して、リンゲル液再飽和のため電極のスポンジの先端に × 1 の一滴を滴下します。
- 電極の配置のための ERG プラットフォーム上ファラデーケージ内顕微鏡の位置。
注:杉本を維持しながら、照明は薄暗い赤色 LED 17.4 cd.m-2(λmax 600 nm) の幼虫の観察を許可してアクティブ電極の配置によって提供される必要があります。 - 顕微鏡下で幼虫の観察を許可するスポンジ プラットフォームの位置を調整します。吸収性組織を使用して、電極スポンジ チップから余分な液体を削除します。
- ゼブラフィッシュ稚魚の目 (図 1E) 中央角膜表面に優しく接するようにアクティブ電極を配置します。
- スポンジ プラットフォームに向けて Ganzfeld ボールを移動し、幼虫がボールによって覆われていることを確認します。
- 余分な電磁ノイズを低減するファラデーケージを閉じます。
6. 網膜電図の記録
-
ERG システムを特定のコンピューターのソフトウェアを使用して2以下推奨設定に基づく刺激をトリガーし、データを取得する (詳細については材料の表を参照してください)。
- 4 khz 以上 650 ms 取得ソフトウェアのウィンドウ (2,560 ポイント) を記録システムのサンプリング レートを設定します。
- 1,000 × システムのゲインを設定します。
- システム 1-300 Hz の帯域通過フィルターを設定します。
- ノッチ フィルターを使用して、60 Hz (またはローカル ユーティリティ周波数に応じて 50 Hz) を軽減するノイズ。
注:理想的な騒音レベルは ± 10 μ V 以上もないはずです。
-
以下の手順を使用して、データ コレクションを開始します。
- 単一のテスト-フラッシュ (0.06 ログ cd.s/m2) を使用すると、電極の位置を評価するのに目からテスト応答を測定します。
注:テストのフラッシュのこの強さは、b 波の振幅 4 dpf 幼虫で 25 μ V 以上になります。頑健な応答を測定できない場合は、電極の位置を変更して別フラッシュが電極に位置付けていることを確認するをテストします。 - 暗闇の中には、動物を許可する次のテストのフラッシュの録音の前に完全な暗闇の中で 3 分の適応。
- 現在は、明るい光の強度を調光器から点滅します。
- 全体平均信号は、信号のノイズのレベルに従って繰り返されます。
注:一般に、平均調光レベル (以下 3 の繰り返し) でより多くの信号と明るい光のレベル (通常 1 の繰り返し) より少ない。10 から 60 までの刺激間間隔を徐々 に長く s 最も明るい、最も暗いの光のレベルから。サンプル プロトコルを表 1に示します。 - 録音後 0.1 %tricaine を使用しての幼虫を殺す人道的。
- 単一のテスト-フラッシュ (0.06 ログ cd.s/m2) を使用すると、電極の位置を評価するのに目からテスト応答を測定します。
7. 分析
- 負の波、トラフにベースラインからの波の振幅と正 b 波のピークに負の波の谷から b 波の振幅を測定します。
- それぞれの波の谷と b 波のピークの刺激開始から a 波と b 波の暗黙的な時間を計測します。
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Representative Results
7 dpf に 4 から毎日取られる ERG 測定の代表的な結果を説明します。4 dpf ERG 応答を示す堅牢な a 波と b 波のコンポーネントがあり、それぞれ視細胞と双極細胞から生じる.テスト各歳、b 波の振幅増加光強度 (図 2;図 3)。特に、年齢と共に増加し調光が点滅するゼブラフィッシュ稚魚網膜の感度。A ・ b 波が明らかに信号が古い幼虫 (図 2) のこれらの強度で検出されたに対し-1.61 ログ 4 dpf で cd.s/m2より低い強度で認識可能でした。4 と 5 の dpf の間伸びと b 波応答 (P < 0.0001;図 2AB;図 3 b)。5 と 6 の dpf に比べ 7 dpf で 2.48 ログ cd.s/m2で信号が大きかった 5 と 7 の dpf の間ほとんど変化を示したが, 強度の低い b 波、(P < 0.0001;図 2;図 3 b)。A 波と b 波の暗黙的な回になった 5 dpf 後大幅に高速 (P < 0.0001;図 3-D)。全体的にみて、これらの結果は、4 に 7 dpf 間ゼブラフィッシュ網膜機能の成熟を示しています。興味深いことに、波の振幅は減少する 7 dpf (図 3 a) 5 から登場。網膜の外側におけるシナプスの成熟マスク a 波 b 波の発現が早くなる結果、双極細胞応答の待機時間を短縮可能性があります。A 波を研究したい方はブロック後 photoreceptoral 応答 (すなわち b 波コンポーネント) に薬物治療を使用できます。
図 1: ゼブラフィッシュGanzfeld エルグの円錐状のスポンジ チップ電極を設定します。(A) 円錐状のスポンジの先端と塩化銀電極は、スポンジ チップの電極を構築する前に乾燥します。(B ・ C)その後、塩素の銀線は完全な電極を形成するベースでスポンジ コーンに挿入されます。(D) スポンジ プラットフォームに典型的なゼブラフィッシュ稚魚 Ganzfeld ERG セットアップ リファレンス電極を挿入し、ゼブラフィッシュ幼虫 Ganzfeld ボウルで覆われています。(E) スポンジ チップ電極は、幼虫の眼の角膜中央にやさしく触れます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: ゼブラフィッシュ稚魚野生型の代表的な平均 ERG トレースします。(A) 4 で野生型ゼブラフィッシュの ERG 痕跡を平均 dpf (n = 8)、5 (B) dpf (n = 8)、6 (C) dpf (n = 7)、および (D) 7 dpf (n = 9)。反応は、白色 Led の点滅を使用して抽出されました。それぞれの年代で、トレース表示 (下上から) からレスポンスの点滅-2.75、-2.11、-1.61、-0.81、0.06、0.72、1.55、1.89、2.18、2.48 ログ cd.s/m2。スケールバー = 50 μ V.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: ERG a 波及び b 波振幅と 4 に 7 dpf ゼブラフィッシュの暗黙的な時間。(A) 平均 (平均 ± 標準誤差) をグループ a 波振幅フラッシュ強度増加は 4-7 dpf 幼虫の年齢とともに減少します。4-7 dpf 幼虫 (B) 平均 b 波振幅増加フラッシュの強さ;4 と 5 の dpf の間に振幅が増加しました。(C) 平均の波潜時および (D) 平均 b 波潜時は 5、6、7 の dpf 間速くなります。ベスト フィットのラインは、非線型回帰から派生します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
| 刺激光強度 (ログ cd.s.m-2) | 繰り返しの数 | 刺激間間隔 (秒) |
| -2.75 | 3 に 6 | 10 |
| (30 次のする前に s) | ||
| -2.11 | 3 に 6 | 10 |
| (30 次のする前に s) | ||
| -1.61 | 3 に 6 | 10 |
| (30 次のする前に s) | ||
| -0.81 | 3 に 6 | 10 |
| (60 次のする前に s) | ||
| 0.06 | 3 に 6 | 10 |
| (60 次のする前に s) | ||
| 0.72 | 1 に 3 | 60 |
| 1.55 | 1 に 3 | 60 |
| 1.89 | 1 に 3 | 60 |
| 2.18 | 1 に 3 | 60 |
| 2.48 | 1 に 3 | 60 |
表 1:エルグ録音の例プロトコル。刺激プレゼンテーション (下) 光の明るいレベルは、その暗順応を維持するために徐々 に長く刺激間間隔で明度 (上) と進行状況から始めます。各強度の平均信号の数は、信号のノイズのレベルによって異なります。
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Discussion
ERG など機能のリードアウトは、ゼブラフィッシュ稚魚8,9,12,14を研究に使用するツールのスイートでますます重要になっています。ゼブラフィッシュ稚魚の目のサイズが小さいためガラス マイクロ ピペットは、ほとんど公開されているプロトコル3,4,5,8,9の電極として適応されています。,12,13,14. ここで単純な円錐形のスポンジ チップ電極を用いたゼブラフィッシュ稚魚 ERG プロトコルについて述べる。新規電極は、任意の追加機器なし幼虫ゼブラフィッシュ網膜機能を測定する標準的な小動物 ERG システムを変更して使用できます。スポンジ チップの電極を作るための材料は、単に商業の PVA スポンジと 0.3 mm 銀線は、これを従来のアプローチよりも経済的です。別の利点は、ハードでシャープなマイクロ ピペット チップと対照をなして穏やかな電極スポンジ チップが幼虫の目を損傷する可能性が低くです。最後に、PVA スポンジは、録音データ全体の幼虫の目に水分を維持するのに役立ちます。
スポンジ チップ電極の成功のアプリケーションへの鍵は、スポンジの最大の彩度を確認することです。通常金魚リンゲル液バッファー x 1 に浸漬の 15 分以上かかります。スポンジの不完全な彩度は電極の高速乾燥により騒音レベルを増やすことができます。良い信号コレクション、各実験的セッション (一般に < 8 h) お勧めの新しい電極を作るします。繰り返し使用削減 ERG 信号、セッション間の比較を困難にする可能性があります。
スポンジのプラットフォームにゼブラフィッシュ稚魚を配置するとき、測定する目が周囲や魚の下にペーパー タオルと接触してないように注意が必要があります。そのような接触は、参照電極スポンジ プラットフォームに埋め込まれて、ERG を削減と電気回路をショートします。
漸進的な乾燥の発生もよく飽和電極スポンジ チップとするには、ERG 信号のノイズの増加として明らかになっています。この場合、一滴 1 mL の注射器と針 30 x ½"を使用して円錐の底面に 1 x 金魚リンゲル液を点滴します。追加するスポンジ チップへの解決策は、騒音レベルを減らさないと、目が周囲の流体と接触していないことを確認し、電極先端部が角膜頂点に中央揃えされていることを確認します。
ここで報告された代表的な結果での録音は律動様小波(OP) のサンプリングはできません 1-300 Hz の帯域の設定で作られた-を含む三次網膜神経細胞由来の b 波のウェーブレットアマクリン細胞、神経節細胞の15,16,17を実行します。高いローパス設定 (例えば、500 または 1,000 Hz) OP 記録に適していることがあります。
要約すると、円錐形のスポンジ チップ電極は信頼性の高い結果を提供する、既存の小動物 ERG システムによるゼブラフィッシュ稚魚 ERG 記録を簡素化するのに役立ちます。代表的な結果は、ERG の振幅が大きくなる 4 と 5 の dpf、さらに成熟 dpf けんしょう暗黙倍速く 5 と 7 の間と間をデモンストレーションします。経済的で実用的な円錐状のスポンジの先端電極と私たちの単純な ERG プロトコルは、ゼブラフィッシュ網膜機能を勉強して捜査を受けることができます。手法は、アダルト ゼブラフィッシュや小さな目と他の脊椎動物モデルを評価するために合わせることができます。
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Disclosures
著者はこの作品に関連する開示があります。
Acknowledgments
このプロジェクトのための資金によって提供された助成金からメルボルン神経科学研究所 (PTG、PRJ BVB と)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 µm filter | Millex GP | SLGP033RS | Filters the 10× goldfish ringer's buffer for sterilizatio |
| 1 mL syringe | Terumo | DVR-5175 | With a 30G × ½" needle to add drops of saline to the electrode sponge tip to prevent drying and increased noisein the ERG signals. |
| 30 G × ½" needle | Terumo | NN*3013R | For adding saline toteh sopnge tip electrode. |
| Bioamplifier | ADInstruments | ML135 | For amplifying ERG signals. |
| Bleach solution | King White | 9333441000973 | For an alternative method of sliver electrode chlorination. Active ingredient: 42 g/L sodium hypochlorite. |
| Circulation water bath | Lauda-Ko?nigshoffen | MGW Lauda | Used to make the water-heated platfrom. |
| Electrode lead | Grass Telefactor | F-E2-30 | Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier. |
| Faraday Cage | Photometric Solution International | For maintianing dark adaptation and enclosing the Ganzfeld setup to improve signal-to-noise ratio. | |
| Ganzfeld Bowl | Photometric Solution International | Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size. | |
| Luxeon LEDs | Phillips Light Co. | For light stimulation twenty 5W and one 1W LEDs. | |
| Micromanipulator | Harvard Apparatus | BS4 50-2625 | Holds the recording electrode during experiments. |
| Microsoft Office Excel | Microsoft | version 2010 | Spreadsheet software for data analysis. |
| Moisturizing eye gel | GenTeal Gel | 9319099315560 | Used to cover zebrafish larvae during recordings to avoiding dehydration. Active ingredient: 0.3 % Hypromellose and 0.22 % carbomer 980. |
| Pasteur pipette | Copan | 200C | Used to caredully transfer larval zebrafish. |
| Powerlab data acquisition system | ADInstruments | ML785 | Controls the LEDs to generate stimuli. |
| PVA sponge | MeiCheLe | R-1675 | For the placement of larval zebrafish and making the cone-shaped electrode ti |
| Saline solution | Aaxis Pacific | 13317002 | For electroplating silver wire electrode. |
| Scope Software | ADInstruments | version 3.7.6 | Simultaneously triggers the stimulus through the Powerlab system and collects data |
| Silver (fine round wire) | A&E metal | 0.3 mm | Used to make recording and reference ERG electrodes. |
| Stereo microscope | Leica | M80 | Used to shape and measure the cone-shaped sponge apex (with scale bar on eyepiece). Positioned in the Faraday cage for electrode placement. |
| Tricaine | Sigma-aldrich | E10521-50G | For anaethetizing larval zebrafish. |
| Water-heated platform | custom-made | For maintianing the temperature of the sponge platform and the larval body during ERG recordings |
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