Nós descrevemos um protocolo cirúrgico para induzir consistentemente aneurismas aórticos torácicos de descida robustos nos ratos. O procedimento envolve a toracotomia esquerda, a exposição da aorta torácica e a colocação de uma esponja embebida em elastase pancreática suína na parede aórtica.
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Artigo de método
Modelo cirúrgico murino de elastase tópica induzida por aneurisma de aorta torácica descendente
Neste artigo
Resumo
Resumo
De acordo com o centro de controle de doenças, os aneurismas aórticos (AAs) foram considerados uma das principais causas de morte em todas as raças e ambos os sexos de 1999-2016. Um aneurisma se forma como resultado de enfraquecimento progressivo e eventual dilatação da aorta, que pode romper ou rasgar uma vez que atinge um diâmetro crítico. Os aneurismas da aorta descendente no tórax, denominados aneurismas aórticos torácicos descendentes (dTAA), compõem uma grande proporção de casos de aneurisma nos Estados Unidos. A ruptura de dTAA não contida é quase universalmente letal, e a reparação eletiva tem uma alta taxa de morbidade e mortalidade. O objetivo do nosso modelo é estudar especificamente a dTAA, para elucidar a fisiopatologia da dTAA e procurar alvos moleculares para deter o crescimento ou reduzir o tamanho da dTAA. Por ter um modelo murino para estudar a patologia torácica precisamente, terapias direcionadas podem ser desenvolvidas para testar especificamente a dTAA. O método é baseado na colocação do elastase pancreatic suínos (PPE) diretamente na parede aórtica murino exterior após a exposição cirúrgica. Isso cria uma reação destrutiva e inflamatória, que enfraquece a parede aórtica e permite a formação de aneurisma ao longo de semanas a meses. Embora os modelos murinos possuam limitações, nosso modelo dTAA produz aneurismas robustos de tamanho previsível. Além disso, este modelo pode ser usado para testar alvos genéticos e farmacêuticos que podem prender o crescimento de dTAA ou impedir a ruptura. Em pacientes humanos, intervenções como essas poderiam ajudar a evitar a ruptura do aneurisma e a difícil intervenção cirúrgica.
Introdução
A finalidade deste método é estudar o desenvolvimento, a patofisiologia, e as mudanças estruturais na aorta torácica descendente murino durante a formação do aneurysm aórtico. Nosso modelo oferece um método reprodutível e consistente para induzir aneurismas aórticos torácicos (dtaa) nos ratos que permitem desse modo para o teste de vários inibidores genéticos e farmacológicos. Este trabalho pode ajudar a identificar drogas e terapias genéticas que podem ser traduzidas para uma estratégia de tratamento viável para humanos com doença de dTAA.
dTAAs forma quando a parede da aorta torácica torna-se enfraquecida e dilata ao longo do tempo até at....
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Protocolo
Os protocolos animais foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade de Virginia (n º 3634).
1. indução de anestesia e intubação
- Coloque um 8-10-week-old masculino C57BL/6 mouse em uma câmara fechada com fluxo contínuo de 5% isoflurano e mistura de oxigênio para 5 min, até que as respirações são visivelmente retardado.
Nota: diferentes cepas, gêneros e idades de camundongos podem ser usados dependendo do protocolo experimental. Camundongos fêmeas podem ser mais difíceis de intubar por causa do tamanho menor e, portanto, menor via aérea. - Intubar o rato como descrito por Vandivort....
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Resultados
A aplicação do nosso protocolo resulta em dTAA robusta em camundongos em comparação com os controles salinos. As TAAs desenvolvidas são de forma fusiforme e ocorrem apenas na porção tratada da aorta (Figura 1 e Figura 2)11. A Figura 2 mostra um exemplo de medição de micrometria de vídeo na colheita de tecidos. Usando a equação 1, a dilatação aórtica é de 130% neste exemplo.
O estud.......
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Discussão
A aorta torácica e abdominal é cellularmente e Embriologicamente distinta, que é relevante à doença Aneurysmal14,15,16. Portanto, é necessário um modelo animal específico para o estudo da TAA. Embora outros modelos de dTAA murino tenham sido publicados8, o nosso é o único modelo para criar dilatação aórtica torácica descendente que pode ser considerada verdadeiramente aneurismática (mais de 50% de dilataç.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelas doações de desenvolvimento de cientistas AHA 14SDG18730000 (M.S.), NIH K08 HL098560 (GA) e RO1 HL081629 (GRU). Este projeto foi apoiado pela Fundação de cirurgia torácica para pesquisa e educação (TSFRE) Research Grant (PI: G. Ailawadi). O conteúdo é unicamente da responsabilidade dos autores e não representa necessariamente os pontos de vista do NHLBI ou do TSFRE. Agradecemos Anthony Herring e Cindy Dodson por seu conhecimento e perícia técnica.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Angiocateter (22G) | Usado para pinças de tubo Dumont ET | ||
| ; Padrão #7 x2 | Roboz | RS-4982 | |
| Pinça de Tecido Graefe | Roboz | RS-5158 | |
| Pinça Harms x2 | Porta-agulha Intracardíaca Roboz | RS-5097 | |
| ; Extra Delicado; Mandíbulas de carboneto; Fonte | Roboz | RS-7800 | |
| Leica | 150-400 | ||
| Microscópio de Disscção M205A | Leica | CH 94-35 | |
| Tesoura de Íris, 11cm, Carboneto de Tungstênio | World Precision Instruments | 500216-G | |
| Placa | Use com o Conjunto de Retrator de Mouse | ||
| Conjunto de Retrator de Mouse | Kent | SURGI-5001 | Precisa de 2 fixadores curtos e 1 alto |
| Ventilador de Mouse MiniVent Tipo 845, 115 V, Fonte de Alimentação com Conector US | Aparelho Harvard | 73-0043 | Ventilador MiniVent para Camundongos (Modelo 845), Animal Único, Controlado |
| por Volume Sigma Aldrich | Elastase de pâncreas suíno | E0258-50MG | Pode ser comprado em garrafas de vários tamanhos |
| Recipiente Pequeno Kit Cauterizador | Fine Science Tools | 18000-00 Recomenda-se | o uso de pilhas AA recarregáveis |
| Tesoura de Mola, 10.5cm | World Precision Instruments | 14127 | |
| Cotonetes Estériis (Esponjas) | Sugi | 31603 | Pode ser cortado no tamanho |
| Plataforma Cirúrgica Surgi Suite | Kent | Anexe à prancheta | |
| Tech IV Isoflurano Vap | Jorgensen Laboratórios | J0561A | Vaporizador de anestesia |
Referências
- Coady, M. A., et al. What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).
- Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A.
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Reimpressões e permissões
