Summary
يصف الأسلوب التهاب--حساسية نقص الأكسجين--الدماغية وإصابات الدماغ فرط الاكسده في النمس P17 لنمذجة التفاعل المعقد بين التهاب المطول وإصابات المخ المؤكسدة التي تعاني منها في عدد من الرضع الخدج الراحل.
Abstract
هناك حاجه مستمرة للنماذج ذات الصلة سريريا من العدوى في فتره ما قبل الولادة ونقص الأكسجين-نقص التروية (HI) التي لاختبار التدخلات العلاجية للرضع مع المضاعفات العصبية من قبل النضج. وتعد الشركات المرشحة المثالية لنمذجة الدماغ البشري قبل الأوان ، لأنها تولد العقول الحية وتطور الادمغه المهبلية بعد الولادة. عند الولادة ، ونمو الدماغ النمس يشبه الجنين 13 أسبوعا الإنسان ، مع يوم بعد الولادة (P) 17 مجموعات تعتبر مساويه للرضع في الحمل 32-36 أسبوعا. نحن وصف نموذج الاصابه في النمس P17 ، حيث يتبع أداره عديد السكاريد الثنائية نقص التروية الدماغية ، نقص الأكسجين ، و hyperoxia. يحاكي هذا التفاعل المعقد بين التهابات المطولة ، ونقص التروية ، ونقص الأكسجين ، والاكسده التي يعاني منها عدد من الولدان الذين يصابون بإصابات دماغيه. تعرض الماشية المصابة مجموعه من شده الاصابه الاجماليه ، مع التغيرات المورفولوجية في الدماغ بما في ذلك تضييق الجيروسكوبات القشرية المتعددة والكبريت المصاحب. كما تظهر الإصابات التي أصيب بها المصابون تباطؤ النمو المنعكس ، وسرعه إبطا وأكثر تنوعا في التنقل في المنصة اليه ، وانخفاض الاستكشاف في حقل مفتوح. يوفر هذا النموذج منصة لاختبار العلاجات المفترضة للرضع المصابين باعتلال الدماغ حديثي الولادة المرتبطة بالتهاب ومرحبا ، ودراسة أليات الاصابه التي تؤثر علي التنمية القشرية ، والتحقيق في المسارات التي توفر المرونة في غير متاثر الحيوانية.
Introduction
هناك حاجه مستمرة لنماذج الحيوانية الكبيرة التي تعكس الفيزيولوجيا المرضية من قبل النضج ونقص الأكسجين في فتره ما قبل الولادة-نقص التروية التي يمكن اختبار التدخلات العلاجية للرضع. في 2017 ، 9.93 ٪ من الرضع 382,726 ولدوا في الولايات المتحدة ولدوا الخدج ، و 84 ٪ من هؤلاء الرضع ولدوا بين 32 و 36 أسابيع من الحمل1. في الأطفال الخدج ، يكون التعرض للعدوى أو التهابات في الولادة أمرا شائعا ، حيث يمكن للتنشيط المناعي للأمهات بسبب مسببات الامراض الفيروسية أو البكتيرية ان يبدا المخاض قبل الأوان. بعد الولادة ، يتعرض الرضع الخدج لخطر الاصابه بالإنتان المبكر أو المتاخر2. وكثيرا ما يعاني الأطفال الخدج أيضا فترات من نقص الأكسجين ، وانخفاض ضغط الدم ، وفرط الأكسجين بسبب نظامهم القلبي الرئوي غير الناضج ، وارتفاع توتر الأوكسجين في الجو بالنسبة لأولئك الذين يعانون من الرحم ، والتعرض الضموري. بالاضافه إلى ذلك ، في الخدج ، الدفاعات المضادة للاكسده غير ناضجه3 والعوامل الموالية لابوتوتيك طبيعيا اوبريجولاتيد4. يؤدي الاكسده وموت الخلايا إلى تنشيط الجهاز المناعي والتهاب العصبي. ويعتقد ان هذه العوامل مجتمعه للمساهمة في النمو والضعف الفسيولوجي للدماغ, ويؤدي إلى أو تفاقم اعتلال الدماغ المرتبطة بالنتائج التنموية الفقيرة في الخدج5,6,7.
نظرا لأوجه التشابه المادية والتنموية ان الدماغ النمس سهم مع الدماغ البشري ، والنمس هو الأنواع الجذابة التي لنموذج أصابه الدماغ8،9،10،11،12. وكذلك المرشحون المثاليون لنمذجة الدماغ البشري قبل الأوان ، لأنهم يولدون العقول المصابة بالشيخوخة ويطورون الادمغه المهبلية ، والتي توفر نافذه لفضح الدماغ النامي إلى الإهانات التي تحاكي الأطفال الذين يولدون قبل الأوان. عند الولادة ، ونمو الدماغ النمس يشبه الجنين 13 أسبوعا الإنسان ، مع يوم بعد الولادة (P) 17 مجموعات تعتبر مساويه للرضع في 32-36 أسابيع من الحمل13.
وقد نشرت مجموعتنا مؤخرا نموذجا من الخدج للغاية (< 28 أسبوعا الحمل) أصابه في الدماغ النمس P10 من خلال الجمع بين الحساسية التهابيه مع القولونية الليبوكوليساكاريد (lps) مع التعرض اللاحق لنقص الأكسجين و فرط التاكسج 12. في البروتوكول التالي ، نقوم الآن بوصف نموذج الخداج المتاخر في النمس P17 ، حيث يتبع التحسس LPS بنقص التروية الدماغية الثنائية ، ونقص الأكسجين ، و hyperoxia. وهذا يؤدي إلى أصابه أكثر شده في مجموعه فرعيه من الكائنات ، وأكثر دقه نماذج التفاعل المعقد للالتهابات لفترات طويلة ، نقص التروية ، نقص الأكسجين ، والاكسده التي تعاني منها في عدد من الخدج الذين يصابون باصابه في الدماغ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد أجريت الإجراءات وفقا لدليل المعاهد القومية للصحة لرعاية واستخدام المختبرات الحيوانية وكجزء من البروتوكول المعتمد من قبل لجنه الرعاية والاستخدام المؤسسي للحيوانات في جامعه واشنطن.
1. الاعداد وأداره LPS
ملاحظه: راجع الشكل 1 للجدول الزمني للإجراءات.
- قبل البدء في الاجراء ، ختم ، تعقيم والاوتوكلاف جميع الاداات الجراحية والستائر الجراحية. اعداد الادويه قبل الجراحة في قوارير معقمه. احسب معدل التدفق المطلوب لاستبدال الهواء في غرفه نقص الأكسجين/hyperoxia مع الغاز التجريبي في 8 – 10 دقيقه.
- اعداد عديد السكاريد (lps من e. كولاي 055: B5) في محلول ملحي معقم لإنتاج تركيز 1 مغ/مل. أزاله P17 النمس مجموعات من الجعلل بهم. تزن وعدد لهم. العشوائية الحيوانية عن طريق القمامة والجنس للسيطرة أو الجرحى (أو العلاج) الجماعات.
- باستخدام حقنه الانسولين 300 μL, أداره 3 مغ/كغ من LPS داخل الصفاق إلى مجموعات في مجموعه الاصابه, وحجم مكافئ من المركبات الملحية المعقمة (3 μL/g) للسيطرة علي الماشية.
- وضع الماشية في غرفه داخل حمام مائي في 37 – 40 درجه مئوية من أجل الحفاظ علي درجه حرارة المستقيم المستهدف من 36-37 درجه مئوية في جميع انحاء العمليات الجراحية.
2-التخدير
- خلال العملية ، ومراقبه باستمرار درجه الحرارة ، ومعدل التنفس ، ومعدل ضربات القلب من الحيوانية.
- أداره البوبرينورفين (0.05 مغ/كغ) جلد 30 دقيقه قبل العملية الجراحية. الحث علي التخدير في خليط من 3 ٪ ايزوفلواني متوازنة مع 100 ٪ الأكسجين. أزاله الطقم من الغرفة التعريفي ووضعه ضعيف علي بطانية المياه الجراحية رايات تعيين إلى 37 درجه مئوية. انقل التخدير إلى مخروط الأنف وقلل مستوي الايزوفلواني إلى 2 – 3%.
3. التحضير الجراحي
- باستخدام مقص الحيوانية الصغيرة أزاله جميع الشعر في منطقه الرقبة بطني. حلق في نمط مستطيل مع الحرص علي تجنب خداع الجلد أو توليد طفح الحلاقة. أداره التخدير الموضعي إلى المنطقة الحليقة باستخدام داخل الادمه يدوكائين (4 مغ/كغ) وبوبيفاكايين (2.5 ملغم/كغ).
- اعداد الرقبة عن طريق التناوب تطبيق povidone-اليود و 70 ٪ الايثانول فرك مع مسحات القطن المعقمة. كرر فرك مثل ان povidone-اليود و 70 ٪ الايثانول كل تطبيق 3x في الأزياء بالتناوب.
- تاكيد عمق التخدير عن طريق عدم وجود منعكس اصبع القدم. الحفاظ علي مستوي ايزوفلواني عند الحد الأدنى المطلوب للمستوي الجراحي للتخدير. باستخدام عقيمه القابل للتصرف قطع الستائر التي تكشف المنطقة الرقبة ، ثني الحيوانية.
4. ربط الشريان السباتي الثنائي
- مع شفره مشرط #11 أحاديه الاستخدام ، قم باجراء شق منتصف الخط النصفي 1.5 سم في وسط الرقبة. باستخدام الاصبغه الدموية الدقيقة والملقط المنحني ، تشريح بصراحة وصولا إلى الشريان السباتي الأيسر. تشريح الشريان بعيدا عن حزمه الوعائية العصبية المرتبطة.
- باستخدام زوج من ملقط الناعمة المنحنية ، وتمرير يحلق طول 10 سم من خياطه الحرير 5-0 العقيمة تحت الشريان. اقطع الخيط إلى النصف Ligate الشريان عن طريق ربط بشكل أمن كلا أطوال خياطه ، وترك ما لا يقل عن 2 ملم بين عقده. الشريان السباتي الأيسر بين الغرز ، مع الحرص علي ترك العصب سليمه.
- كرر تشريح علي الجانب الأيمن. نربط الشريان السباتي الأيمن مع واحده معقمه 1/8 بوصه التعادل السري. اغلقي الجرح مع المشابك الجلدية الجراحية.
- السماح للحيوان للتعافي في حمام المياه التي تسيطر عليها درجه الحرارة لمده 30 دقيقه علي الأقل قبل نقص الأكسجين.
ملاحظه: إذا لم يتم عزل الشرايين بشكل كامل من بقية حزمه الاوعيه الدموية ، وزيادة معدل الوفاات يمكن ان ينظر اليه قبل أو خلال نقص الأكسجين في وقت لاحق.
5. نقص الأكسجين متتابعة ، Hyperoxia ، ونقص الأكسجين
- خلال نقص الأكسجين و hyperoxia ، وتغيير درجه حرارة حمام الماء حسب الضرورة للحفاظ علي درجه حرارة المستقيم اثناء نقص الأكسجين في 37 درجه مئوية في الحيوانية الحارس (ق).
- ضع الماشية في مجموعه الإصابات في غرفه محكمه الغلق داخل حمام مائي. مراقبه تركيز الأكسجين بشكل مستمر داخل الغرفة ، وكذلك درجه حرارة المستقيم في واحد علي الأقل الحارس الحيوانية. مسح الغرفة مع رطوبة 9 ٪ الأكسجين (91 ٪ النيتروجين) ثم الحفاظ علي معدل تدفق من 3 – 5 لتر/دقيقه ، اعتمادا علي حجم الغرفة. مره واحده وقد وصلت إلى تركيز الأكسجين في الغرفة 9 ٪ ، وتستمر لمده 30 دقيقه.
- بعد 30 دقيقه ، والتبديل إمدادات الغاز إلى 80 ٪ الأكسجين المرطب (20 ٪ النيتروجين) ، والسماح للغرفة للوصول إلى تركيز الهدف علي أساس معدل التدفق وحجم الغرفة. استمر لمده 30 دقيقه من hyperoxia. فتح الغرفة للسماح لها بسرعة أكبر الوصول إلى normoxia بواسطة تولد مع هواء الغرفة.
- ختم الغرفة ، ودافق مع 9 ٪ الأكسجين المرطب. مراقبه باستمرار جميع الكائنات بصريا ، مع العلم من الكائنات التي تعرض bradypnea. مره واحده وقد وصلت إلى تركيز الأكسجين في الغرفة 9 ٪ ، وتستمر لمده 30 دقيقه. إذا كان ينظر إلى الوفاات داخل الأكسجين (السكتة التنفسية) في اي من الكائنات قبل نهاية فتره 30 دقيقه ، وإنهاء نقص الأكسجين علي الفور.
6. عكس ربط الشريان السباتي الأيمن
- العودة الحيوانية إلى منطقه الجراحة ، والحث علي التخدير في خليط من 3 ٪ ايزوفلواني متوازنة مع 100 ٪ الأكسجين. انقل التخدير إلى مخروط الأنف وقلل مستوي الايزوفلواني إلى 2 – 3%. أزاله مقاطع الجرح الجراحية وأعاده اعداد منطقه الجرح مع povidone-اليود. تاكيد عمق التخدير عن طريق عدم وجود منعكس اصبع القدم. الحفاظ علي مستوي الايزوفلوان في النسبة المئوية الدنيا المطلوبة لطائره جراحيه من التخدير. باستخدام عقيمه القابل للتصرف قطع الستائر التي تكشف المنطقة الرقبة ، ثني الحيوانية.
- باستخدام ملقط منحني ، وتحديد وفك الشريط السري من الشريان السباتي الأيمن. اغلقي الجرح مع المشابك الجلدية الجراحية.
7. الانتعاش وأداره درجه الحرارة
- أعاده جميع مجموعات إلى جيلس بهم ل 60 دقيقه ، للتمريض والانتعاش. بعد 60 دقيقه ، وأعاده الجرحى الحيوانية إلى حمامات المياه في 37-40 درجه مئوية ل 6 ساعة ، وضبط درجه حرارة الماء حسب الحاجة من أجل الحفاظ علي درجه حرارة المستقيم في 36-37 درجه مئوية. مجموعات العودة إلى الجعلل بهم.
- أزاله المقاطع الجراحية 10 – 14 يوما بعد الجراحة (P27 – P31).
8. اختبار منعكس
- اجراء جميع الاختبارات المنعكسة يوميا من P21 – P28 ، وعلي الأقل 3x في الأسبوع من P28 – P42 ، في حين تبقي اعمي للتعرض (أو العلاج) المجموعة. قبل الاختبار المنعكس ، وضع مجموعات في غرفه مع المساعدة الحرارة (37 درجه مئوية حمام المياه ، وساده الحرارة ، الخ) لمده 1 ساعة. لكل اختبار ، واستكمال جميع المحاكمات لكل مجموعه قبل اختبار مجموعه المقبل.
- المحور الجغرافي السالب (25 درجه)
- وضع لوحه مسطحه (16 1/2 في. x 12 في.) ملفوفه في حامي السطح ماصه ضد كائن بحيث يشكل المجلس زاوية 25 درجه مع الجدول. وضع عده علي متن المعرض ومواجهه انحدار ، حوالي 75 ٪ من الطريق حتى المجلس.
- تاكد من ان جسم الطقم مستقيم وان كل الكفوف الاربعه سيطرت علي المجلس قبل إطلاقه. حالما يتم وضع مجموعه ، بدء تقييم الوقت.
- تسجيل الوقت عندما تدير عده لتدوير الجسم 90 درجه مئوية بالنسبة إلى موقفها البداية. تسجيل الوقت الذي تدور فيه عده الجسم 180 ° وياخذ خطوه كامله نحو الجزء العلوي من المجلس. اجراء 3 المحاكمات في المنحدر 25 درجه قبل الانتقال إلى الاختبار التالي.
- المحور الجغرافي السالب (45 درجه)
- قم باجراء 3 تجارب للاختبار الجغرافي السلبي الموصوف مسبقا مره أخرى ، وهذه المرة مع تعيين اللوحة إلى زاوية 45 درجه.
- النفور من الهاوية
- وضع منصة مبطن حول 1 قدم تحت الحافة للتقليل من الاصابه إلى مجموعات إذا كانت تقع.
- وضع مجموعه التي تواجهها ، ومتعامدة علي ، حافه مقعد المختبر. تاكد من ان جسم الطقم مستقيم ، مع تدفق الكفوف الاماميه مع الحافة. بدء تقييم الوقت من لحظه وضع الطقم. الحرص علي التفريق بين الحركة واعيه بعيدا عن الهاوية وغيرها من الحركات العفوية التي لا تنطوي علي المشي المنسق.
- تسجيل الوقت عندما يتحرك الطقم جسمه بعيدا عن الحافة (يعرف بأنه النسخ الاحتياطي ، وتحول جسمه ، أو تحريك أطرافه الاماميه بعيدا عن الحافة). سجل الوقت الذي تكمل فيه المجموعة خطوتها الاولي في الاتجاه المعاكس للحافه (التي تعرف بأنها اي اتجاه أو زاوية في الماضي بدوران 90 درجه من موقف بدايتها الذي يواجه الحافة).
- اجراء 3 تجارب النفور من الهاوية لكل مجموعه قبل الانتقال إلى الاختبار التالي.
- انعكاس اليمين
- وضع عده ضعيف علي مقاعد البدلاء ، وعقد بلطف في هذا الموقف قبل الإفراج عنها وفي وقت واحد بدء ساعة توقيت. تسجيل الوقت الذي الطقم يجلب نفسه للراحة مع جميع الكفوف الاربعه في وقت واحد شقه ضد مقاعد البدلاء في المواقف الحاملة للوزن. تسجيل الوقت عندما ياخذ الطقم خطوه كامله في اي اتجاه (يعرف بأنه موضع كل الكفوف الاربعه لتحقيق التقدم في اتجاه معين مع عدم الغزل أو سحب الجسم).
- اجراء 5 تجارب لاختبار منعكس اليمين لكل الحيوانية.
- بعد ان أكملت كل مجموعه المحاكمات المنعكسة الخمسة اليمينية ، أعد الفضلات إلى الجيل.
9. اختبار المنصة
- علي P42 ، وأزاله مجموعات من جيل. وضع مجموعات في أقفاص بلاستيكية حوالي 10 دقيقه قبل الاختبار ، حتى يتمكنوا من التاقلم مع البيئة. أطفئ الأنوار في غرفه الاختبار للتاكد من ان الاضاءه المحيطة لا تؤثر علي وظيفة المنصة.
- إنشاء تجربه جديده في البرامج ذات الصلة. ضبط الإعدادات التجريبية بحيث لا يتجاوز الحد الأقصى لمده التشغيل 10.00 s والحد الأدنى لمده التشغيل لا تقل عن 1.50 s. تعيين الحد الأقصى للتغير السرعة بحيث لا يتجاوز 60 ٪. تعيين شرط الحد ادني من ثلاثه أشواط متوافقة لكل الحيوانية.
- ضبط عرض الممشى نسبه إلى حجم الحيوانية بحيث تكون قادره علي الحركة بحريه دون لمس الجدران في حين تبقي ضيقه بما يكفي لتثبيط تحول. أضافه اعداد كشف جديد في علامة التبويب إعدادات الكشف عن التشكيلات الجانبية باستخدام الكشف التلقائي. استخدام نفس إعدادات الكشف لجميع الصغار والحيوانية في سن معينه.
- تنظيف الممشى تماما مع النسيج ورقه منخفضه الوبر و 70 ٪ الايثانول قبل وبعد كل الحيوانية. تنظيف الكفوف النمس بانتظام لتحسين دقه الكشف والتصنيف. بمجرد ان يتم اعداد الممشى والحيوانية ، والبدء في اكتساب المحاكمة.
- وقفه الاستحواذ لتنظيف المنصة إذا تراكمت اثار الاقدام علي الزجاج ، أو إذا كانت الكائنات تمر البول أو البراز. توقف عن الاستحواذ بمجرد ان يتعرف برنامج المنصة علي ثلاثه تشغيلات متوافقة استنادا إلى إعدادات التجربة المحددة مسبقا.
10. الاختبار الميداني المفتوح (P42)
- استخدام مربع الأكريليك غير المساميه (55 سم × 55 سم × 40 سم عاليه) رسمت ماتي الأبيض. ضع الكاميرا بحيث يتم توسيطها مباشره فوق المربع ويتم التقاط جميع الجدران الاربعه. تنظيف الساحة الاختبار مع 70 ٪ الايثانول قبل الاستخدام الأول وبين الحيوانية.
- في البرامج ذات الصلة ، حدد جديد من قالب وتطبيق قالب محدد مسبقا. متابعه اجراء الاعداد عن طريق تحديد نوع الموضوعبشكل تسلسلي: غير ذلك ؛ قالب الساحة: حقل مفتوح ، مربع ؛ قالب المنطقة: المركز ، الحدود ، الزوايا. الميزات التي يمكن تتبعها: نقطه الوسط.
- فتح الساحة إعدادات وانتزاع صوره الخلفية من مدخلات الكاميرا ، والتاكد من ان قمم الجدران الساحة مرئية. معايره ابعاد الساحة باستخدام أداه المقياس.
- ضبط مناطق الساحة المحددة مسبقا عن طريق تغيير حجم الخطوط العريضة لتناسب مناطق الجدار (NW ، NE ، SW ، SE) ومناطق الكلمة (اعلي اليسار ، الأعلى الأوسط ، الأعلى الأيمن ، الأوسط الأيسر ، الوسط ، اليمين الأوسط ، أسفل اليسار ، أسفل الوسط ، أسفل اليمين). التحقق من صحة الاعداد للتاكد من عدم تداخل المناطق.
- افتح نافذه الاستحواذ واضغط علي بدء الاستحواذ. وضع النمس في مركز الساحة الاختبار الموجهة في مثل هذه الطريقة التي هي متسقة لكل موضوع الاختبار. السماح لنمس للتحرك بحريه في جميع انحاء الساحة لمده 5 دقائق. في نهاية فتره الاختبار ، اضغط علي إيقاف الاستحواذ. كرر الاجراء مع النمس المقبل.
ملاحظه: وينبغي لجميع المجربين في الغرفة وضع أنفسهم لتكون غير قابله للملاحظة من قبل النمس وتبقي هادئه خلال فتره الاختبار.
11. التثبيت-perfusion
- علي P42 ، تخدير عميق مجموعات مع 5 ٪ ايزوفلواني. أداره جرعه زائده بنتوباربيتال (120-150 مغ/كغ i.p.). ضمان التخدير العميق بسبب عدم الاستجابة لقرصه اصبع القدم وفقدان الحركات التنفسية.
- نقل الحيوانية إلى غطاء الدخان. فتح الصدر والمشبك الاورطي التنازلي باستخدام الأرقاء الغرامة. اقطع الأذين الأيمن باستخدام مضخة ترويه ، حقنت البطين الأيسر مع 60 مل من المحلول الملحي المعقم بمعدل 30 مل/دقيقه. حقنت مع 60 مل من فورالين (10 ٪ الفورمالديهايد) بمعدل 30 مل/دقيقه.
- قطع راس الذبيحة ، وأزاله الدماغ من الجمجمة باستخدام مقص ، ملقط ، rongeurs ، وملعقة. التقط صورا عاليه الدقة للجوانب الظهرية والبطنية والجانبية لكل دماغ. بعد إصلاح الدماغ في الفورمالين علي الأقل 48 h.
12. السابق فيفو قياس الدماغ
- أزاله الدماغ من الفورمالين (الخطوة 11.3) ووضع علي منشفه ورقيه لامتصاص السوائل الزائدة.
- باستخدام الفرجار الكترونيه ، وقياس ارتفاع الدماغ عن طريق وضع نصائح من الفرجار في الجوانب الظهرية والبطنية للدماغ. قياس طول الدماغ عن طريق وضع نصائح من الفرجار في لمبة حاسة الشم والحدود الخلفية الأكثر من الفص القذالي. قياس عرض الدماغ عن طريق وضع نصائح من الفرجار في الأجزاء الجانبية الأكثر من الفصوص الصدغية. وزن المخ
- قياس الشق الطولي (الامامي والخلفي إلى sulcus الصليبية) ، sulcus الجانبية ، سوبراسيلفيان sulcus ، sulcus الاكليليه ، sulcus الكاذبة ، sulcus ansinate ، sulcus صليبي ، sulcus presylvian ، تلافيف الجانبي ، سوبراسيلفيان تلافيف ، قولون تلافيف ( الامامي والخلفي) ، الاكليليه تلافيف ، ectosylvian تلافيف (الامامي والخلفي) ، والمداري تلافيف. قياس كل التلم من بداية ونهاية الجزء الأكثر تميزا من التلم المقابلة. قياس جميع تلافيف من أوسع جانب من كل تلافيف المقابلة.
- قياس كميه المخيخ المكشوفة عن طريق وضع طرف واحد من الفرجار في النقطة الخلفية الأكثر من الشق الطولي ووضع الطرف الآخر من الفرجار في الجزء الخلفي الأكثر من المخيخ.
ملاحظه: النمس دماغ أطلس, بما ان يؤسس في علم الاحياء وامراض من نمسا14, كان استعملت ان يطور السابقة [فيفو] نمس دماغ قياسات.
13. تسجيل الإصابات الاجماليه
- باستخدام الصور الملتقطة في الخطوة 11.3 ، تطبيق معايير التهديف في الخطوات 13.2 – 13.4 لتقييم أصابه الدماغ الاجماليه (من 0 إلى 9 مقياس) مع الإبقاء علي العمي لمجموعات التعرض (أو العلاج).
- تقييم الشق الطولي. إذا كان يبدو طبيعيا ، تعيين درجه من 0. إذا تم توسيعه بشكل معتدل (تقريبا 2x العرض العادي) ، ولكن الزيادة في العرض غير مكتملة علي طول الشق ، وتعيين درجه من 1. إذا تم توسيعه باعتدال (تقريبا 2-3x العادي) ، تعيين درجه من 2. إذا تم توسيعه بشكل ملحوظ ، مع وجود فجوه واضحة > 3x العرض العادي علي طول معظم طول الشق ، وتطبيق درجه من 3.
- تقييم sulci الجانبية. إذا كانت تظهر التعريف العادي ، مع الفصل بين تلافيف الجانبي و سوبراسيلفيان تلافيف ، تعيين درجه من 0. إذا كان ينظر إلى التعريف المخفف الأحادي أو الثنائي المعتدل للكبريت ، خاصه في الجزء الصغير ، مع تضييق الحد الأدنى من الفصوص الجبهية والصدغية بالنسبة إلى الفصوص القذالي ، قم بتعيين درجه 1.
- إذا تم النظر إلى انخفاض معتدل تعريف التلم ، مع الاكتئاب من سوبراسيلفيان gyri ، تضييق الاكليليه والجيروسكوب ، وتضييق معتدل من الفصين الجبهي والصدغي نسبه إلى فصوص القذالي ، وتعيين درجه من 2. إذا كان ينظر إلى انحطاط الكيسي من جانب واحد ، مع الحد الأدنى من التغيير في نصف الكره الارضيه المعاكس ، وتعيين درجه من 3. إذا كان التعريف الضعيف لل التلم الجانبية موجودا ، مع الثنائية الكيسية أو انحطاط شديد من الفصوص القذالي والزمانيه ، وتعيين درجه من 4.
- تقييم الجزء المرئي من المخيخ. إذا كان يبدو طبيعيا ، مع (< 75 ٪ من vermis و < 66 ٪ من نصفي الكره المرئية ، وتعيين درجه من 0. إذا 75-90 ٪ من vermis و ≥ 66 ٪ من نصفي الكره التي تكون مرئية ، وتعيين درجه من 1. إذا كان معظم المخيخ مرئية ، وعرض كل من vermis و ≥ 66 ٪ من نصفي الكره الواحدة ، وتعيين درجه من 2.
14. تحليل البيانات
- بالنسبة لبيانات اختبار المنعكسات ، قم بتعيين حالات فشل بمعدل 61 s للسماح لها بالمقارنة مع النجاحات في نهاية الوقت (60 s) ، ولكن بترتيب اسوا في التحليل الإحصائي. حساب منطقه تحت المنحني لكل الحيوانية مع مرور الوقت في كل من الاختبارات منعكس.
- ضبط البيانات المنصة التي تنطوي علي حجم مخلب من الضغط من وزن الحيوانية.
- تحليل البيانات باستخدام الطرق الاحصائيه غير الحدودية ، واصفا البيانات باستخدام النطاق المتوسط والربع المشترك (IQR).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
من 34 (ن = 18 الذكور, ن = 16 إناث) الحيوانية من سته الصغار المعرضين للاهانه, ثمانيه الماشية (24%; n = 4 الذكور, ن = 4 الإناث) في المجموعة المصابة توفي خلال فتره نقص الأكسجين الثاني (ن = 5), خلال أداره درجه الحرارة (ن = 2) في المجموعة المصابة ، تسعه من 26 ناج (35%) إصابات إجماليه ظاهره. وأصيبت خمسه من الماشية (ن = 5 ذكور) بإصابات متوسطه ، وأصيبت أربعه من الماشية (ن = 2 ذكور ، ن = 2 إناث) بإصابات شديده ، عرفت بأنها عشرات الامراض الاجماليه من 2 إلى 5 ومن 6 إلى 9 علي التوالي (الشكل 2ا). التالي فان الماشية المعرضة للاهانه تبلغ 50 في المائة من خطر الوفاة أو أصابه جسيمه كبيره. مع زيادة الاصابه ، وينظر تضييق تلافيف في الفص الصدغي و/أو القذالي ، مع تقصير الكبريت المرتبطة بها ، وتوسيع الشق الطولي ، ومناطق واسعه من مناطق فقدان الانسجه الكيسية في الأكثر أصابه الحيوانية (الشكل 2ب). وفي الاحياء المصابة (ن = 26 ؛ ن = 14 ذكور ، ن = 12 انثي) ، ينظر إلى المخيخ بشكل أكبر بكثير (الشكل 3ا) ، فضلا عن تقصير الشق الطولي (الشكل 3د). وهناك أيضا تضييق كبير من الاكليليه والاماميه ectosylvian تلافيف (الشكل 3ب ، ه) ، فضلا عن تقصير من الجانبي و سوبراسيلفيان التلم (الشكل 3ج ، و). وكان متوسط وزن المخ (IQR) 8.1 غرام (7.9 – 9.7 غ ، ن = 6) في السيطرة علي الماشية ، و 7.0 غرام (6.5-7.7 غرام) في الماشية المصابة (ن = 26 ، p = 0.005). في السيطرة علي الماشية ، وكان متوسط (IQR) طول الدماغ 28.9 ملم (27.8-29.6 مم ، ن = 6) بالمقارنة مع 27.5 مم (25.5-61.2 مم ، ن = 26) في الماشية المصابة (ع = 0.007). وينظر إلى أنماط مماثله عبر الدماغ ، مع متوسط العرض والارتفاع 5-7 ٪ أصغر في الكائنات المصابة. تتاثر الهياكل التشريحية علي كل من الجانب الأيمن والأيسر بطريقه مماثله ، مع عدم وجود فرق بين نصفي الكره. انظر الشكل 1ب لتصوير المواقع التشريحية. خلال فتره الاختبار المنعكس (P21 – P39) ، تعرض الكائنات المصابة وقتا إبطا للتدوير في مهمة المحور الجغرافي السالبة (الشكل 4ا) ، والوقت إبطا للتدوير بعيدا عن الحافة في مهمة النفور من الهاوية (الشكل 4ب) ، والوقت الابطا إلى اليمين (الشكل 4ج). وفي المنصة ، يكون للحيوانات المصابة معدل سرعه مماثله للضوابط (الشكل 5ا) ، ولكنها تعرض درجه أكبر بكثير من التباين في السرعة خلال كل شوط (الشكل 5ب). المسافة المعدلة الوزن بين الكفوف الاماميه والكفوف هند (موقف الطباعة) هو أكبر بكثير في الكائنات المصابة (الشكل 5ج) ، مع ضغط اقل المبذولة لكل وحده مخلب المنطقة من خلال الكفوف الصدارة (الشكل 5د). وفي الميدان المفتوح ، تغطي الماشية المصابة مسافة اقل من المجموع (الشكل 6(ا)) ، وتتوقف بشكل أكثر تواترا (الشكل 6(ب)). انها تنفق المزيد من الوقت بشكل ملحوظ في وسط الميدان ، ووقت اقل في الزوايا (الشكل 6ج ، د). وترد خرائط الحرارة التمثيلية للسيطرة والحيوانية المصابة في الشكل 7ا ، ب.
الشكل 1: الجدول الزمني. في P17, تدار الحيوانية 3 مغ/كغ lps قبل ان تمر الثنائية الشريان السباتي ربط و 30 دقيقه لكل (لا بما في ذلك الوقت للغرفة لتتوازن) من نقص الأكسجين (9% الأوكسجين), فرط التاكسج (80% الأكسجين) ونقص الأكسجين (9%). ثم يتم عكس ربط الشريان السباتي الأيمن. تتعرض الكائنات الحيوانية إلى 6 ساعات من النوريميه للتاكد من انها لا تصبح بشكل عفوي في العش في الفترة التي تلي الاصابه. ثم يتم اجراء اختبار منعكس يوميا من P21 – P28 ، وثلاث مرات في الأسبوع من P28 – P42. في P42 ، يتم اختبار الحيوانية في المنصة وفتح المجال قبل التضحية. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: توزيع الإصابات التمثيلية وتصويرها. (ا) الاصابه الاجماليه سجل من 26 ناجا (ن = 14 ذكورا ، ن = 12 انثي) في المجموعة المصابة ، مقارنه بسته عناصر تحكم في القمامة. وأصيبت خمسه من الماشية (ن = 5 ذكور) بإصابات متوسطه ، وأصيبت أربعه من الماشية (ن = 2 ذكور ، ن = 2 إناث) بإصابات شديده ، عرفت بأنها عشرات الامراض الاجماليه من 2 إلى 5 ومن 6 إلى 9 علي التوالي. يظهر الرسم البياني المتوسط مع نطاق الأرباع. (ب) السيطرة علي الدماغ (اللوحة اليسرى ، النتيجة 0) ، مع العقول التي تصور زيادة الإصابات الاجماليه عشرات من 2 ، 5 ، و 8 من أصل مجموع النتيجة المحتملة من 9 ، من اليسار إلى اليمين. يظهر الدماغ التحكم الهياكل التشريحية عرضه بشكل خاص للاصابه. 1 = الشق الطولي ، 2 = sulcus الجانبية ، 3 = سوبراسيلفيان sulcus ، a = gyrus الاكليليه ، b = gyosylvian الامامي. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: قياسات الدماغ التمثيلية. بالمقارنة مع الضوابط (ن = 6) ، والحيوانية المصابة (ن = 26) عرض زيادة كبيره في التعرض للمخيخ (ا) ، تقصير الشق الطولي (D) ، تضييق الاكليليه (B) و Ectosylvian الامامي (E) gyri ، وتقصير الجانبي (C) و سوبراسيلفيان (F) sulci. تظهر الرسوم البيانية المتوسط مع نطاق الأرباع. * يدل p < 0.05 (ويلكوكسون مان-ويتني يو-اختبار). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: التنمية التمثيلية المنعكسة. بالمقارنة مع الضوابط (ن = 6) ، والحيوانية المصابة (ن = 26) عرض التنمية إبطا (منطقه تحت المنحني ، اوك) من المحور الجغرافي السلبي (A) ، والنفور من الهاوية (B) ، ومنعكس التصحيح (C). تظهر الرسوم البيانية المتوسط مع نطاق الأرباع. * يدل p < 0.05 (ويلكوكسون مان-ويتني يو-اختبار). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
الشكل 5: نتائج المنصة التمثيلية. بالمقارنة مع الضوابط (ن = 6) ، والحيوانية المصابة (ن = 26) المشي في وتيره مماثله متوسط (a) ، ولكن مع زيادة التقلب في السرعة اثناء المشي (ب). وتعرض الماشية المصابة أيضا متوسطا أطول لوضع الطباعة (C) ، مع تطبيق ضغط اقل لكل منطقه من الوحدات (D). تظهر الرسوم البيانية المتوسط مع نطاق الأرباع. * يدل p < 0.05 (ويلكوكسون مان-ويتني يو-اختبار). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6: سلوك الحقل المفتوح التمثيلي. بالمقارنة مع الضوابط (ن = 6) ، والحيوانية المصابة (ن = 26) تغطيه المسافة الاجماليه أصغر (a) ، فضلا عن وقف أكثر تواترا (ب). المصابين الحيوانية أيضا قضاء المزيد من الوقت في المركز (ج) مما كانت عليه في زوايا (د). تظهر الرسوم البيانية المتوسط مع نطاق الأرباع. * يدل p < 0.05 (ويلكوكسون مان-ويتني يو-اختبار). يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
الشكل 7: خرائط الحرارة المفتوحة التمثيلية. (ا) مراقبه الإناث ، (ب) الإناث المصابات. الماشية المصابة تغطي مسافة أصغر بكثير داخل الحقل المفتوح. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ونظرا لأوجه التشابه المادية والتنموية المشتركة بين الدماغ النمس والدماغ البشري ، فان النمس يستخدم بشكل متزايد لنمذجة إصابات الدماغ البالغة والتنموية. 8،9،10،11،12. ومع ذلك ، تشير البحوث حتى الآن إلى ان الدماغ النمس هو علي حد سواء مقاومه للاصابه الاوليه ، فضلا عن البلاستيك عاليه ، مع العجز السلوكية تتناقص مع مرور الوقت حتى في وضع الإصابات المرضية مرئية10،12. هنا ، ونحن وصف النموذج الأول من التهاب-حساسية نقص الأكسجين (HI) أصابه في الدماغ في النمس قبل الأوان المكافئ ، مما يؤدي إلى أصابه ثنائيه كبيره والعجز السلوكي المستمر في الناجيين. كما هو الأمر مع اي نموذج ما قبل السريرية ، لم يكن الهدف لأعاده إنتاج بدقه التعرضات التي واجهتها الخدج سريريا ، ولكن لتوفير التقاء العوامل الميكانيكية التي يعتقد انها متورطة في إصابات الدماغ المبكرة. وتشمل هذه التهابات, نقص الأكسجين, والاكسده7.
أحد الجوانب الهامه لأداره LPS في نماذج النمس لدينا هو جرعه عاليه واحده نظرا حول 4 ح قبل نقص الأكسجين. Lps التعرض في القوارض المكافئة علي المدى القريب يؤدي إلى دوران خلوية التهابيه ذروه حول 4 ح بعد التعرض ، والذي يتوافق مع حساسية الدماغ لنقص الأكسجين-نقص التروية ، وزيادة كبيره في أصابه الدماغ15،16،17. وهناك دوره زمنيه مماثله من الإفراج خلوية التهابيه (الذروة TNF-α و IL-6 الإفراج 2-4 ح بعد التعرض LPS) وينظر في معزولة النمس الدم المحيطيه الخلايا الاحاديه النواة18. علي افتراض وجود عمليه جراحيه واحده ، وأداره LPS 30-60 دقيقه قبل بدء الجراحة يسمح للوقت الكافي لأداء 12-15 الثنائية الشريان السباتي الاربطه وبدء التعرض الأول نقص الأكسجين 4 ح بعد أداره LPS. خلال تطوير نموذج, واستخدمت جرعه LPS من 5 مغ/كغ في البداية, كما هو موضح في نموذج الاصابه P10 لدينا12. ومع ذلك ، كانت هذه الجرعة LPS مرتبطة بمعدلات الوفاات الكبيرة داخل الأكسجين وذمه رئوية علي العنق. وخفضت كل من الوفاات وذمه رئوية عن طريق خفض جرعه LPS إلى 3 مغ/كغ.
واثناء التعرض لنقص الأكسجين ، يبدو ان هناك عددا من العوامل الحاسمة لضمان حدوث إصابات جسيمه كبيره مع الحيلولة أيضا دون ارتفاع معدلات الوفاات. ونظرا لكون المختبرات المخبرية التي يتم التغلب عليها ، هناك اختلاف متاصل في التسامح مع نقص الأكسجين عبر الصغار. في تجربتنا ، الصليب--رعاية الحيوانية أو الجمع بين الحيوانية من مختلف الصغار في نفس الغرفة نقص الأكسجين النتائج في الغالب في الوفاة المبكرة للحيوانات أكبر أو الحيوانية من القمامة الأكثر عرضه. إذا يموت المزيد من الكائنات المعرضة للخطر قبل الهدف 30 دقيقه التعرض لنقص الأكسجين والأكسجين توقف في وقت مبكر ، والحيوانية أصغر من الأقل عرضه للاصابه التعرض ناقص الأكسجين ، ومن غير المرجح ان تحمل أصابه كبيره. ونتيجة لذلك ، يجب ان تتعرض كل القمامة من الماشية لنقص الأكسجين داخل غرفه منفصلة الخاصة بهم. وأضيفت فتره نقص الأكسجين الثانية كجزء من عمليه تطوير نموذج تكراري سبق ان وصفناها ب12. وتسببت فتره نقص الأكسجين الواحدة اما في الموت أو البقاء علي قيد الحياة مع عدم وجود أصابه كبيره ، بغض الطول.
وبما ان القوارض قادرون علي تحمل فترات طويلة من نقص الأكسجين الحاد أو ربط الشريان السباتي الثنائي دون التعرض لإصابات دماغيه كبيره ، فان نظريتنا الحالية هي ان فتره فرط التاكسج تؤدي إلى ارتفاع الأيض وتوسع الاوعيه التي تسهل نقص ترويه الدماغ خلال فتره نقص الأكسجين الثانية. وللتقليل من التباين في النموذج ، استخدمنا عددا من الأواني التي كانت مرتبه مسبقا والمتوازنة حسب الجنس والتي وصلت إلى مرفقنا في P15. في كل القمامة ، خضعت 6 – 7 الحيوانية لعمليه جراحيه تليها نقص الأكسجين داخل غرفه واحده.
بعد نقص الأكسجين وعكس ربط الشريان السباتي الأيمن ، يجب ان تعاد الحيوانية إلى الجهان لفتره من الوقت لإطعام بسبب خطر الجفاف وانخفاض السكر في الماء من بروتوكول الاصابه لفترات طويلة. إذا شهدت معدلات الوفاات الكبيرة خلال فتره أداره درجه الحرارة ، قد تحتاج الحيوانية الإنعاش السائل اضافيه (المالحة تحت الجلد و/أو تغذيه اليد مع الصيغة والماء) قبل وضعها في حمامات المياه لمده 6 ساعات. ومع ذلك ، فان فتره أداره درجه الحرارة هي المحدد الحاسم للاصابه علي المدى الطويل ، حيث ان الماشية قد تواجه الحماية العصبية من انخفاض حرارة الجسم نسبيا في العش. هذا الخطر من انخفاض حرارة الجسم هو علي الأقل جزئيا بسبب انخفاض درجه مئوية من ظروف السكن المطلوبة لنمس (60-70 درجه فهرنهايت).
تم تطوير الاختبارات السلوكية الموصوفة إلى حد كبير داخل المختبر ، مع بعض الأساس في الاختبارات المنعكسة الموصوفة سابقا في النمس النامي19، مع المنصة والاختبارات الميدانية المفتوحة المقتبسة من القوارض البالغة لاستخدامها في الصغار. كما وصفت المجموعات الأخرى المجال المفتوح ، والمتاهة ، واختبار المشية في القوارض البالغين بعد أصابه الدماغ الرضية10، فضلا عن تاثير التهاب الرحم علي التفاعل الاجتماعي في البالغين20. علي الرغم من ان فتره الصيام الطويلة لا ينصح بها في القوارض بسبب وقت عبور الأمعاء القصيرة ، وضعها في حامله الحيوانية لمده 30-60 دقيقه قبل اي من الاختبارات مفيد من أجل السماح لهم بتمرير البول والبراز قبل الاختبارات. كما النمس هو بطبيعته الحيوانية فضولي ، فانه غالبا ما يتصرف بطريقه معاكسه لقوارض في هذه الاختبارات السلوكية. وهذا واضح بشكل خاص في المنصة ، حيث يمكن استخدام الأضواء والأصوات ، وخاصه تسجيلات النمس آخر ("dooking") ، لتحفيز النمس علي المشي إلى الامام.
البروتوكول الحالي لديه بعض القيود. كما تم تطويره بشكل متكرر باستخدام الأساليب المتقدمة سابقا في P10 النمس12, نحن لا نعرف حاليا المساهمات النسبية لل lps, نقص الأكسجين, hyperoxia, وضخ إلى الدرجة النهائية من الاصابه ينظر. ومع ذلك ، تجدر الاشاره إلى ان تطوير الطريقة الموصوفة هنا شملت استخدام نموذج فانوتشي الأصلي (ربط الشريان السباتي من جانب واحد تليها فتره واحده من نقص الأكسجين) في النمس21، والتي لم تسفر عن اي أصابه كبيره. ولذلك ، من المرجح ان تكون التفاعلات بين الأجزاء المتعددة من بروتوكول الاصابه ضرورية للاصابه المستمرة. وعلي الرغم من ذلك ، لا يزال هناك تباين واضح في الإصابات الجسيمة في الماشية الناجية ، وهو قيد محتمل آخر. علي الرغم من ان الماشية التي ليس لها أصابه جسيمه كبيره قد يكون لها أصابه يمكن اكتشافها باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي أو التشريح12، فان العمل المستقبلي علي النموذج سيتضمن تكرارات لمحاولة زيادة عدد الماشية التي تحمل أصابه كبيره ، علي سبيل المثال باستخدام ربط الشريان السباتي الثنائي الدائم. ولذلك فان الدراسات المستقبلية تقييم فعاليه انخفاض حرارة الجسم العلاجية و الاريثروبويتين في هذا النموذج, بما في ذلك الاستجابات العلاجية القائمة علي الجنس والتصوير الشعاعي السابق الجسم المغناطيسي12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
Acknowledgments
تم تمويل تطوير النموذج بيل وميليندا غيتس المؤسسة ، فضلا عن المعاهد القومية للصحة منحه 5R21NS093154-02 (NICHD).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 80% Oxygen | Praxair | ||
| 9% Oxygen | Praxair | ||
| Absorbent benchtop protector | Kimtech | 7546 | |
| Automated catwalk | Noldus | ||
| Betadine surgical scrub | |||
| Bupivacaine | Patterson Veterinary | 07-888-9382 | |
| Buprenorphine | |||
| Calipers | SRA Measurement Products | ME-CAL-FP-200 | 200 mm range, 0.01 mm resolution |
| Cotton Gauze Sponge | Fisher Scientific | 22028556 | |
| Curved fine hemostat | Roboz | RS-7101 | |
| Curved forceps | World Precision Instruments | 501215 | |
| Curved suture-tying hemostat | Roboz | RS-7111 | |
| Ethovision tracking software | Noldus | ||
| Eye Lubricant | Rugby | NDC 0536-1970-72 | |
| Ferrets (Mustela putorius furo) | Marshall Biosciences | Outbred (no specific strain) | |
| Formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | 10% (Phosphate Buffer/Certified) |
| Hair Clippers | Conair | GMT175N | |
| Insulin Syringes | BD | 329461 | 0.3 cc 3 mm 31 G |
| Isoflurane | Piramal | 66794-017-25 | |
| Lidocaine | Patterson Veterinary | 07-808-8202 | |
| LPS | List Biological | LPS Ultrapure #423 | |
| Oxygen sensor | BW Gas Alert | GAXT-X-DL-2 | |
| Pentobarbital | |||
| Plastic chamber | Tellfresh | 1960 | 10 L; 373 x 270 x 135 mm3 |
| Saline Solution, 0.9% | Hospira | RL-4492 | |
| Scalpel blade | Integra Miltex | 297 | |
| Scalpel handle | World Precision Instruments | 500236 | #3, 13 cm |
| Sterile suture | Fine Science Tools | 18020-50 | Braided Silk, 5/0 |
| Surgical clip applicator | Fine Science Tools | 12020-09 | |
| Surgical clip remover | Fine Science Tools | 12023-00 | |
| Surgical drapes | Medline Unidrape | VET3000 | |
| Surgical gloves | Ansell Perry Inc | 5785004 | |
| Surigical clips | Fine Science Tools | 12022-09 | |
| Thermometer (rectal) | YSI | Precision 4000A | |
| Thermometer (water) | Fisher Scientific | 14-648-26 | |
| Umbilical tape | Grafco | 3031 | Sterile |
| Water bath | Thermo Scientific | TSCOL19 | 19 L |
References
- Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. Births: Final Data for 2017. National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).
- Vanhaesebrouck, P., et al. The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm infants in Belgium. Pediatrics. 114 (3), 663-675 (2004).
- Raju, T. N., et al. Long-Term Healthcare Outcomes of Preterm Birth: An Executive Summary of a Conference Sponsored by the National Institutes of Health. Journal of Pediatrics. , (2016).
- Raju, T. N. K., Buist, A. S., Blaisdell, C. J., Moxey-Mims, M., Saigal, S. Adults born preterm: a review of general health and system-specific outcomes. Acta Paediatrica. 106 (9), 1409-1437 (2017).
- Bennet, L., et al. Chronic inflammation and impaired development of the preterm brain. Journal of Reproductive Immunology. 125, 45-55 (2018).
- Reich, B., Hoeber, D., Bendix, I., Felderhoff-Mueser, U. Hyperoxia and the Immature Brain. Developmental Neuroscience. 38 (5), 311-330 (2016).
- Galinsky, R., et al. Complex interactions between hypoxia-ischemia and inflammation in preterm brain injury. Developmental Medicine & Child Neurology. 60 (2), 126-133 (2018).
- Empie, K., Rangarajan, V., Juul, S. E. Is the ferret a suitable species for studying perinatal brain injury. International Journal of Developlemental Neuroscience. 45, 2-10 (2015).
- Snyder, J. M., et al. Ontogeny of white matter, toll-like receptor expression, and motor skills in the neonatal ferret. International Journal of Developlemental Neuroscience. , (2018).
- Schwerin, S. C., et al. Progression of histopathological and behavioral abnormalities following mild traumatic brain injury in the male ferret. Journal of Neuroscience Research. 96 (4), 556-572 (2018).
- Rafaels, K. A., et al. Brain injury risk from primary blast. Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 73 (4), 895-901 (2012).
- Wood, T., et al. A Ferret Model of Encephalopathy of Prematurity. Developlemental Neuroscience. , (2019).
- Barnette, A. R., et al. Characterization of Brain Development in the Ferret via Magnetic Resonance Imaging. Pediatric Research. 66 (1), 80-84 (2009).
- Kroenke, C. D., Mills, B. D., Olavarria, J. F., Neil, J. J. Biology and Diseases of the Ferret. , WIley. (2014).
- Eklind, S., et al. Bacterial endotoxin sensitizes the immature brain to hypoxic--ischaemic injury. European Journal of Neuroscience. 13 (6), 1101-1106 (2001).
- Falck, M., et al. Neonatal Systemic Inflammation Induces Inflammatory Reactions and Brain Apoptosis in a Pathogen-Specific Manner. Neonatology. 113 (3), 212-220 (2018).
- Osredkar, D., et al. Hypothermia Does Not Reverse Cellular Responses Caused by Lipopolysaccharide in Neonatal Hypoxic-Ischaemic Brain Injury. Developmental Neuroscience. 37 (4-5), 390-397 (2015).
- Nakata, M., Itou, T., Sakai, T. Quantitative analysis of inflammatory cytokines expression in peripheral blood mononuclear cells of the ferret (Mustela putorius furo) using real-time PCR. Veterinary Immunology and Immunopathology. 130 (1-2), 88-91 (2009).
- Christensson, M., Garwicz, M. Time course of postnatal motor development in ferrets: ontogenetic and comparative perspectives. Behavioral Brain Research. 158 (2), 231-242 (2005).
- Li, Y., Dugyala, S. R., Ptacek, T. S., Gilmore, J. H., Frohlich, F. Maternal Immune Activation Alters Adult Behavior, Gut Microbiome and Juvenile Brain Oscillations in Ferrets. eNeuro. 5 (5), (2018).
- Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Annals of Neurolology. 9 (2), 131-141 (1981).
