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Behavior

चूहों में जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम टाइप-1 के लिए क्रोनिक पोस्ट-इस्केमिया दर्द मॉडल

Published: January 21, 2020 doi: 10.3791/60562
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 2, 1, 1, 1
1Department of Neurobiology and Acupuncture Research, The Third Clinical Medical College, Zhejiang Chinese Medical University, Key Laboratory of Acupuncture and Neurology of Zhejiang Province, 2Academy of Chinese Medical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University
* These authors contributed equally

Summary

यहां प्रदान किया गया एक प्रोटोकॉल है जो पुरानी पोस्ट-इस्केमिया दर्द (सीपीआईपी) के एक पशु मॉडल को स्थापित करने के लिए कदमों का विवरण देता है। यह एक अच्छी तरह से मान्यता प्राप्त मॉडल मानव जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम प्रकार-1 नकल उतार रहा है। यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलताओं का आगे मूल्यांकन किया जाता है, साथ ही सीपीआईपी चूहा मॉडल में मनाए गए कैप्सैसिन-प्रेरित नोनिफेस्टिव व्यवहार भी हैं।

Abstract

जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम टाइप-1 (सीआरपी-1) एक न्यूरोलॉजिकल बीमारी है जो रोगियों के बीच गंभीर दर्द का कारण बनती है और एक अनसुलझी चिकित्सा स्थिति बनी हुई है। हालांकि, सीआरपी-1 के अंतर्निहित तंत्र का अभी तक पता नहीं चला है । यह ज्ञात है कि इस्केमिया/रिपरफ्यूजन उन प्रमुख कारकों में से एक है जो सीआरपी-1 का कारण बनता है । लंबे समय तक इस्केमिया और हिंद अंग के रिपरफ्यूजन के माध्यम से, चूहा क्रोनिक पोस्ट-इस्केमिया दर्द (सीपीआईपी) मॉडल सीआरपी-1 की नकल करने के लिए स्थापित किया गया है। सीआरपी-1 के तंत्र का अध्ययन करने के लिए सीपीआईपी मॉडल एक सुमान्यता प्राप्त पशु मॉडल बन गया है। यह प्रोटोकॉल एनेस्थीसिया सहित सीपीआईपी के चूहे के मॉडल की स्थापना में शामिल विस्तृत प्रक्रियाओं का वर्णन करता है, जिसके बाद हिंद अंग के इस्केमिया/रिपरफ्यूजन का पालन किया जाता है । चूहे सीपीआईपी मॉडल की विशेषताओं का मूल्यांकन हिंद अंग की यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलता ओं को मापने के साथ-साथ तीव्र कैप्सैसिन इंजेक्शन के लिए एनओसीयुक्त प्रतिक्रियाओं को मापने के द्वारा किया जाता है। चूहा सीपीआईपी मॉडल स्थापना के बाद प्रारंभिक चरण में हिंद अंग एडीमा और हाइपरमिया सहित कई सीआरपी-आई-जैसी अभिव्यक्तियों को प्रदर्शित करता है, लगातार थर्मल और यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता, और तीव्र कैप्सैसिन इंजेक्शन के लिए एनओसीकी प्रतिक्रियाओं में वृद्धि करता है। ये विशेषताएं इसे सीआरपी-1 में शामिल तंत्रों की आगे की जांच के लिए एक उपयुक्त पशु मॉडल प्रदान करती हैं ।

Introduction

जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम (सीआरपी) फ्रैक्चर, आघात, सर्जरी, इस्केमिया या तंत्रिका चोट1,2,3के परिणामस्वरूप जटिल और पुराने दर्द के लक्षणों को रिप्रेजेंट करता है। सीआरपी को 2 उपश्रेणियों में वर्गीकृत किया गया है: सीआरपी टाइप-1 और टाइप-II (सीआरपीएस-1 और सीआरपी-II)4। महामारी विज्ञान के अध्ययनों से पता चला है कि सीआरपी की व्यापकता लगभग 1:20005थी । सीआरपी-I, जो कोई स्पष्ट तंत्रिका क्षति से पता चलता है, पुराने दर्द में परिणाम कर सकते है और नाटकीय रूप से रोगियों के जीवन की गुणवत्ता को प्रभावित करता है । वर्तमान उपलब्ध उपचार अपर्याप्त चिकित्सीय प्रभाव दिखाते हैं। इसलिए, सीआरपी-1 अभी भी एक महत्वपूर्ण और चुनौतीपूर्ण नैदानिक समस्या बनी हुई है जिसका समाधान किए जाने की आवश्यकता है ।

सीआरपी-I की नकल करने वाले प्रीक्लीनिकल पशु मॉडल की स्थापना सीआरपी-1 अंतर्निहित तंत्र ों की खोज के लिए महत्वपूर्ण है। इस समस्या को हल करने के लिए, कोडरे एट अल ने सीआरपीएस-आई6को संक्षिप्त करने के लिए हिंद अंग पर लंबे समय तक इस्केमिया और रिपरफ्यूजन लागू करके एक चूहा मॉडल तैयार किया। यह ज्ञात है कि इस्केमिया/रिपेरेफ्यूजन इंजरी सीआरपीएस-17के प्रमुख कारणों में से एक है । चूहा सीपीआईपी मॉडल कई सीआरपी-आई-जैसे लक्षणों को प्रदर्शित करता है, जिसमें मॉडल स्थापना के बाद प्रारंभिक चरण में हिंद अंग एडीमा और हाइपरीमिया शामिल हैं, लगातार थर्मल और यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता6के साथ पीछा किया जाता है। इस मॉडल से सहायता के साथ, यह प्रस्ताव किया गया है कि केंद्रीय दर्द संवेदीकरण, परिधीय TRPA1 चैनल सक्रियण और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के उत्पादन, आदि CRPS-I8,9,10में योगदान करते हैं । हमने हाल ही में सीपीआईपी चूहा मॉडल की सफलतापूर्वक स्थापना की और पृष्ठीय जड़ गंगलिया (डीआरजी) के आरएनए-अनुक्रमण का प्रदर्शन किया जो प्रभावित हिंद पंजा11को अंतरवत करता है। हमने कुछ संभावित तंत्रों की खोज की जो संभवतः सीआरपी-111के दर्द अतिसंवेदनशीलताओं में मध्यस्थता करने में शामिल हैं। हमने सीआरपीएस-112की यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलताके लिए एक महत्वपूर्ण योगदानकर्ता के रूप में डीआरजी न्यूरॉन्स में क्षणिक रिसेप्टर संभावित वेनिलाइड 1 (TRPV1) चैनल की पहचान की।

इस अध्ययन में हमने सीपीआईपी के चूहे के मॉडल की स्थापना में शामिल विस्तृत प्रक्रियाओं का वर्णन किया । हमने यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलताओं को मापने के साथ-साथ तीव्र कैप्सैसिन चुनौती के प्रति इसकी जवाबदेही को मापकर चूहा सीपीआईपी मॉडल का मूल्यांकन किया। हमारा प्रस्ताव है कि चूहा सीपीआईपी मॉडल सीआरपी-1 में शामिल तंत्रों की आगे की जांच के लिए एक विश्वसनीय पशु मॉडल हो सकता है ।

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Protocol

पशु प्रोटोकॉल को झेजियांग चीनी मेडिकल यूनिवर्सिटी एनिमल एथिक्स कमेटी ने मंजूरी दी थी ।

1. पशु

  1. शंघाई लेबोरेटरी एनिमल सेंटर से नर स्प्राग-डाबले (एसडी) चूहों (280-320 ग्राम, 8-10 सप्ताह की उम्र) प्राप्त करें। झेजियांग चीनी चिकित्सा विश्वविद्यालय प्रयोगशाला पशु केंद्र में जानवरों को घर । ध्यान दें कि प्रजनन की स्थिति में 12 घंटे/2h प्रकाश/अंधेरे चक्र शामिल होने चाहिए और तापमान को 24 डिग्री सेल्सियस पर स्थिर रखना चाहिए । पानी और खाद्य विज्ञापन लिमिटमप्रदान करें । ध्यान रहे कि इस अध्ययन में कुल 48 चूहों का इस्तेमाल किया जाता है। एक नोट, इस मॉडल में, हम पूरी प्रक्रिया के दौरान दर्द प्रतिक्रिया का पालन करने की जरूरत है । यदि दर्द की दवा लागू की जाती है, तो हम सफलतापूर्वक दर्द मॉडल स्थापित नहीं कर सकते। प्रयोगों के बाद चूहों की बलि दी जाती है।

2. सीपीआईपी मॉडल स्थापना

  1. सोडियम फेनोबार्बिटल (50 मिलीग्राम/किलोग्राम, इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन [i.p.]) के साथ सभी चूहों (शाम और सीपीआईपी मॉडल समूहों सहित) को एनेस्थेटिज़ करें। यदि आवश्यक हो तो 20 मिलीग्राम/किलो/एच फेनोबार्बिटल [i.p.] तक संज्ञाहरण बनाए रखें । संदंश का उपयोग करके अपने हिंद पंजा या पूंछ टिप को पिन करके प्रत्येक जानवर की सजगता की जांच करें। सुनिश्चित करें कि चूहों मॉडल स्थापना से पहले उत्तरदायी नहीं हैं। प्रक्रिया के दौरान सूखापन से बचने के लिए आंखों पर पशु चिकित्सक मरहम रखें। निम्नलिखित प्रक्रिया के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा एक गर्म पैड पर एनेस्थेटाइज्ड चूहों रखें।
  2. हिंद पंजा के इस्केमिया और रिपरफ्यूजन
    1. चूहे को एनेस्थेटाइज्ड करने के बाद ग्लाइसेरोल के साथ दाएं हिंद पंजा और टखने को चिकनाई करें।
    2. एक 1.5 mL Eppendorf ट्यूब के बड़े पक्ष में एक 7/32 "(5.5 मिमी) आंतरिक व्यास के साथ एक Nitrile 70 ड्यूरोमीटर ओ-रिंग स्लाइड (स्नैप-कैप के साथ उपयोग से पहले काट दिया)। ध्यान से नीचे तक पहुंचने तक खोखले Eppendorf ट्यूब में हिंद पंजा डालें।
    3. धीरे-धीरे ओ-रिंग को टखन के जोड़ के पास ट्यूब से दाएं हिंद अंग तक स्लाइड करें और 3 घंटे के लिए जगह दें चूहों के एक नकली समूह में एक ही उपचार लागू करें, सिवाय इसके कि एक टूटी हुई ओ-रिंग, जो काट दी जाती है और इस्केमिया को प्रेरित नहीं करना चाहिए, टखने के चारों ओर रखा जाना चाहिए।
    4. इस्केमिया स्टेप के बाद ओ-रिंग 3 एच काट लें। ध्यान से चूहे को तब तक देखें जब तक कि यह स्टर्नल रीक्यूबेंसी बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना ठीक न हो। ध्यान दें कि संज्ञाहरण प्राप्त चूहा अन्य चूहों की कंपनी को वापस नहीं रखा जाना चाहिए जब तक कि यह पूरी तरह से बरामद नहीं हो जाता।

3. नोसिफेन्सिव व्यवहार परीक्षण

  1. चूहे को एक पारदर्शी प्लेग्लास कक्ष में रखें जो जाल के फर्श पर बैठा है। किसी भी व्यवहार परीक्षण से पहले 0.5 घंटे के लिए चूहे की आदत डालें।
  2. मैकेनिकल एलोडिनिया
    1. परीक्षण के लिए वॉन फ्रे फिलामेंट्स (0.4, 0.6, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 15.0 और 26.0 ग्राम फिलामेंट्स) का उपयोग करें। मध्य फिलामेंट (4.0 ग्राम) से परीक्षण शुरू करें। खड़ी हिंद पंजा के मध्य बागान सतह पर फिलामेंट्स लागू करें। 5 एस तक के लिए फिलामेंट को मोड़ने के लिए उपयुक्त बल लागू करें। उत्तेजनाओं के जवाब में हिंद पंजा का अचानक पीछे हटना एक निकोटिएंसिव व्यवहार माना जाता है। दिन -3, -2, -1, और 13 दिन तक हर दूसरे दिन यांत्रिक एलोडियानिया परीक्षण का संचालन करें।
    2. दहलीज का परीक्षण करने के लिए अप-डाउन परीक्षण विधि लागू करें। 50% पंजा निकासी सीमा (पीडब्ल्यूटी)13,14,15की गणना के लिए डिक्सन विधि लागू करें।
  3. थर्मल हाइपरलजेसिया
    1. थर्मल हाइपरएल्जेसिया की जांच करने के लिए हार्ग्रीव्स विधि का उपयोग करें। सीधे पंजा वापसी विलंबता (PWL) को मापने के लिए एक बल्ब (50 डब्ल्यू) से हिंद पंजा के लिए उत्सर्जित प्रकाश बीम का लक्ष्य है। हीटिंग से अत्यधिक चोट से बचने के लिए कट-ऑफ दहलीज के रूप में 20 एस सेट करें।
    2. प्रत्येक हिंद पंजा के लिए 5 मिन अंतराल में प्रत्येक परीक्षण 3x दोहराएं। प्रत्येक चूहे16के पीडब्ल्यूएल के रूप में इन तीन परीक्षणों का औसत लें । 13 दिन तक -3, -2, -1, और हर दूसरे दिन थर्मल हाइपरएल्जेसिया परीक्षण का संचालन करें।
  4. कैप्सैसिन-प्रेरित तीव्र निशान्तिनशील व्यवहार
    1. डिमेथिल सल्फासऑक्साइड (डीएमएसओ) का उपयोग करके कैप्सैसिन स्टॉक सॉल्यूशन (200 एमएम) तैयार करें और हिंद पंजा इंजेक्शन के लिए बाँझ फास्फेट-बफर्ड लवण (पीबीएस) में 1:1000 तक और पतला करें। पीबीएस में अंतिम डीएमएसओ एकाग्रता 0.1% है (वाहन में केवल पीबीएस में 0.1% डीएमएसओ शामिल है)। 1 मिलीग्राम सिरिंज से जुड़ी 30 जी सुई का उपयोग करके 50 माइक्रोन की मात्रा में कैप्सैसिन या वाहन को 50 माइक्रोन लांघ में इंजेक्ट करें।
    2. इंजेक्शन के ठीक बाद 10 मिन के लिए वीडियो कैमरे का उपयोग करके और उसके बाद17,18,19वर्णित के रूप में निकोनिफेस्टो व्यवहार (यानी, चाटना, काटना या इंजेक्शन पंजा का फ़्लिचिंग) रिकॉर्ड करें।
  5. हिंद पंजा एडिमा मूल्यांकन: पंजा व्यास में वृद्धि को मापने के द्वारा हिंद पंजा एडीमा का मूल्यांकन करें। डिजिटल कैलिपर के साथ उपाय करें और विभिन्न समय बिंदुओं पर देखे गए बेसल मूल्य और परीक्षण मूल्य के बीच अंतर की गणना करें। मॉडल स्थापना के बाद 15 मिन, 24 घंटे, 48 एच और 72 घंटे में पंजा मोटाई में परिवर्तन का आकलन करें।

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Representative Results

टखने पर ओ-रिंग रखने के बाद, इप्सिलेटरल हिंद पंजा त्वचा ने साइनोसिस दिखाया, ऊतक हाइपोक्सिया(चित्रा 1ए)का संकेत। ओ-रिंग काटने के बाद, इप्सिलेटरल हिंद पंजा रक्त से भरने लगा और मजबूत सूजन दिखाई, जिसने हाइपरमिया(चित्रा 1ए)का तीव्र संकेत दिया। पंजा सूजन धीरे-धीरे कम हो गई और इस्कीमिक/रिपरफ्यूजन प्रक्रिया (सिदक पोस्ट-हॉक टेस्ट, फिगर 1बीके साथ दो तरह से ANOVA) के बाद सामान्य 48 एच में लौट आई। ये सभी संकेत पिछले अध्ययनों6,12के अनुरूप हैं .

फिर, मैकेनिकल एलोडिनिया एक वॉन Frey बाल परीक्षण का उपयोग कर मापा गया था । सीपीआईपी समूह के ipsilateral हिंद पंजा नकली समूह की तुलना में मॉडल स्थापना के बाद 1 दिन स्पष्ट यांत्रिक allodynia का प्रदर्शन किया । ipsilateral हिंद पंजा के यांत्रिक allodynia अवलोकन समय सीमा के 13 दिनों तक कायम (सिदक के बाद तदर्थ परीक्षण, चित्रा 1सीके साथ दो तरह से ANOVA) । सीपीआईपी समूह के कॉन्ट्रालेटरल हिंद पंजा ने भी 13 दिनों तक चलने वाले इप्सिलेटरल हिंद पंजा के समान यांत्रिक हाइपरएल्जेसिया प्रदर्शित किया (सिदक पोस्ट-हॉक टेस्ट के साथ दो तरह से ANOVA, चित्रा 1डी)।

इसके बाद हार्ग्रीव्स टेस्ट का इस्तेमाल करथर्मल हाइपरएल्जेसिया मापा गया । सीपीआईपी चूहों के द्विपक्षीय हिंद पंजे ने नकली समूह चूहों (सिदक पोस्ट हॉक टेस्ट, चित्रा 1ई, एफ)की तुलना में थर्मल हाइपरअल्जेसिया का संकेत हानिकारक थर्मल उत्तेजनाओं के जवाब में काफी कम निकासी विलंबता का प्रदर्शन किया। यह अवलोकन पिछलेअध्ययनों केअनुरूप है 11,12. ipsilateral हिंद पंजा के थर्मल हाइपरलजेसिया अवलोकन समय सीमा के अंत तक कायम है, जबकि कॉन्ट्रालेटरल हिंद पंजा के थर्मल हाइपरलजेसिया 7 दिनों तक चला (सिदक पोस्ट-हॉक टेस्ट के साथ दो तरह से ANOVA, चित्रा 1ई, एफ)। उपरोक्त परिणाम बताते हैं कि सीपीआईपी चूहों को मजबूत और लगातार यांत्रिक और थर्मल अतिसंवेदनशीलता विकसित होती है, जो पिछली टिप्पणियों11,12के अनुरूप होती है।

सीआरपी रोगियों ने प्रभावित क्षेत्रों में कैप्सैसिन-प्रेरित दर्द के लिए एक स्पष्ट वृद्धि की प्रतिक्रिया का प्रदर्शनकिया । इसके बाद इस बात की जांच की गई कि क्या सीपीआईपी चूहा मॉडल इस घटना को फिर से दोहरा सकता है । सीपीआईपी चूहों में नोनिफेस्टिव व्यवहार इप्सीलेटरल हिंद पंजा में इंट्राप्लांटर कैप्सैसिन (एक TRPV1 agonist) इंजेक्शन के जवाब में मनाया गया था। सबसे पहले, चूहों की निशाचर प्रतिक्रियाओं जब एक वाहन इंजेक्शन था परीक्षण किया गया । नकली समूह वाहन इंजेक्शन के लिए एक मामूली nocifensive प्रतिक्रिया दिखाई है, जबकि CPIP समूह नकली समूह की तुलना में एक काफी अधिक प्रतिक्रिया दिखाई (एक तरह से Sidak के बाद तदर्थ परीक्षण, चित्रा 2के साथ ANOVA) । इसके अलावा, कैप्सैसिन इंजेक्शन के परिणामस्वरूप नकली समूह(चित्रा 2)में मजबूत एनओसीकीप्रतिक्रिया हुई। इससे भी महत्वपूर्ण बात, सीपीआईपी चूहों ने नकली समूह(चित्रा 2)की तुलना में कैप्सैसिन इंजेक्शन के लिए काफी अधिक प्रतिक्रियाएं दिखाईं। इन आंकड़ों से पता चलता है कि सीपीआईपी चूहों ने सीआरपी-1 के साथ मानव रोगियों की नकल करने वाली घटना कैप्सैसिन के लिए बढ़ी हुई एनओसीप्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन किया।

Figure 1
चित्रा 1: सीपीआईपी चूहा मॉडल ने द्विपक्षीय हिंद अंगों में थर्मल और यांत्रिक दर्द अतिसंवेदनशीलता दिखाई। (A)विभिन्न समय बिंदुओं के दौरान ली गई विशिष्ट छवियां (इस्केमिया के दौरान, रिपरफ्यूजन के बाद 10 सीन, और 7 दिन बाद)। (ख)सीपीआईपी और नकली दोनों समूहों के Ipsilateral हिंद पंजा मोटाई माप । (सी,डी)50% पंजा वापस लेने की सीमा (50% पीडब्ल्यूटी, यांत्रिक हाइपरएल्जेसिया का सूचकांक) आईपीएसआइलेटरल (सी) और चूहों के कॉन्ट्रालेटरल (डी) हिंद पंजे। (ई, एफ) पंजा निकासी विलंबता (पीडब्ल्यूएल, थर्मल हाइपरएल्जेसिया का सूचकांक) इप्सिलेटरल (ई) और चूहों के कॉन्ट्रालेटरल (एफ) हिंद पंजे (एन = 8 चूहों प्रति समूह, **पी एंड एलटी; 0.01)। परिणाम मतलब ± एसईएम (दो तरह से ANOVA सिटक पोस्ट-हॉक परीक्षण के बाद) के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: सीपीआईपी चूहों ने इप्सीलेटरल हिंद पंजे में इंट्राप्लांटर कैप्सैसिन इंजेक्शन के जवाब में नकली चूहों की तुलना में अधिक एनओसीवाले व्यवहार का प्रदर्शन किया। चूहों ने चाट, काटने या घिनौने समय को वाहन के बाद 10 मिन से अधिक (पीबीएस, इंट्राप्लांटर में 0.1% डीएमएसओ) या कैप्सैसिन (50 माइक्रोन वॉल्यूम में 10 एनमोल, इंट्राप्लांटर) इंजेक्शन (एन = 8 चूहों प्रति समूह, **पी एंड एलटी; 0.01) की गणना की गई थी। परिणाम मतलब ± एसईएम (एक तरह से ANOVA सिटक पोस्ट-हॉक परीक्षण के बाद) के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

यह प्रोटोकॉल चूहों के हिंद अंगों के लिए इस्केमिया/रिपरफ्यूजन लागू करके चूहा सीपीआईपी मॉडल स्थापित करने के विस्तृत तरीकों का वर्णन करता है । इसमें कैप्सैसिन इंजेक्शन के जवाब में हिंद अंग उपस्थिति, एडीमा, यांत्रिक/थर्मल अतिसंवेदनशीलता, और तीव्र निशाचर व्यवहार का मूल्यांकन शामिल है ।

अंग इस्केमिया/रिपरफ्यूजन मानव रोगियों में सीआरपीएस-1 में योगदान देने वाला एक आम कारक है। यह प्रोटोकॉल बताता है कि चूहा सीपीआईपी मॉडल को कैसे स्थापित किया जाए, जो मानव सीआरपी-I6को फिर से तैयार करने के लिए आमतौर पर उपयोग किया जाने वाला पशु मॉडल है। इस्केमिया को चूहे के हिंद अंग में एक तंग ओ-रिंग के साथ प्रेरित किया गया था जो संज्ञाहरण के तहत 3 घंटे के लिए टखने पर लागू होता था। ओ-रिंग को हटा दिया गया था, और रिपरफ्यूजन हुआ। मॉडल स्थापना के बाद, सीपीआईपी मॉडल चूहा हिंद अंग में प्रारंभिक हाइपरमिया और एडीमा विकसित हुआ। मॉडल भी लगातार यांत्रिक/थर्मल अतिसंवेदनशीलता सहित न्यूरोपैथिक दर्द व्यवहार, प्रदर्शित करता है । ये लक्षण सभी मानव सीआरपी-I 21की विशिष्ट विशेषताओं की नकल करते हैं।

सीआरपी रोगियों को प्रभावित अंगों में कैप्सैसिन प्रेरित दर्द के लिए स्पष्ट वृद्धि प्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन20। हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है कि क्या CPIP मॉडल जानवरों इसी तरह की प्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन रहता है । इस प्रकार, इस अध्ययन में, सीपीआईपी चूहों के नोनिफेस्टिव व्यवहार की जांच इप्सीलेटरल हिंद पंजा में इंट्राप्लांटर कैप्सैसिन इंजेक्शन के जवाब में की गई थी। यह पाया गया कि सीपीआईपी मॉडल चूहों ने नकली चूहों की तुलना में कैप्सैसिन इंजेक्शन के लिए काफी अधिक एनओसी प्रतिक्रियाएं दिखाईं। हमारी जानकारी के लिए, सीपीआईपी मॉडल चूहों में इस घटना की यह पहली रिपोर्ट है।

पिछले अध्ययन में, TRPV1 चैनल अभिव्यक्ति को ipsilateral हिंद पंजा ऊतकों और डीआरजी न्यूरॉन्स में अपरेठ दिखाया गया था जो हिंद पंजा12को अंतरवत करता था। इसके अलावा, यह पाया गया है कि सीपीआईपी मॉडल चूहों में स्पाइनल ग्लिल कोशिकाएं सक्रिय होती हैं, जिसके परिणामस्वरूप केंद्रीय दर्द संवेदीकरण और दर्द धारणा और संचरण9,12की सुविधा होती है। इसलिए, परिधीय और केंद्रीय दर्द संवेदीकरण दोनों सीपीआईपी मॉडल चूहों में कैप्सैसिन इंजेक्शन के जवाब में बढ़ी हुई एनओसीिफेन्सिव व्यवहार में शामिल हो सकते हैं। भविष्य के अध्ययनों का परीक्षण करने के लिए आवश्यक है कि क्या कैप्सैसिन इंजेक्शन के परिणामस्वरूप सीपीआईपी मॉडल चूहों के कॉन्ट्रालेटरल हिंद पंजे में बढ़ी हुई प्रतिक्रियाएं भी होती हैं। यहां किए गए परीक्षणों में हमने सीपीआईपी मॉडल चूहों में ऑटोटॉमी का पालन नहीं किया। यह उन चूहों के विपरीत है जो सियाटिक सेक्शनिंग से गुजरते हैं, जो आमतौर पर पुराने दर्द अतिसंवेदनशीलता22,23के अलावा ऑटोटॉमी विकसित करते हैं। इसके अलावा, सीआरपी-1 रोगियों या सीपीआईपी मोड जानवरों में कोई रेफर दर्द प्रतिक्रिया नहीं दी गई है।

मॉडल में महत्वपूर्ण चरणों में से एक प्रक्रिया के दौरान संज्ञाहरण बनाए रखना है। इस अध्ययन में एनेस्थीसिया की शुरुआत सोडियम फेनोबार्बिटल (50 मिलीग्राम/किलो) के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन से की गई थी। इस खुराक का उपयोग अक्सर चूहे संज्ञाहरण से जुड़े कई अध्ययनों में किया जाता है, जिसमें सीपीआईपी चूहा मॉडल प्रतिष्ठान9,12,24के साथ अध्ययन शामिल हैं। इसके अलावा, संज्ञाहरण 20 मिलीग्राम/किलो/घंटा (i.p.) सोडियम फेनोबार्बिटल के माध्यम से बनाए रखा जाना चाहिए जब आवश्यक प्रक्रिया12,24के सफल कार्यान्वयन की गारंटी के लिए आवश्यक है ।

कोडरे एट अल द्वारा स्थापित प्रारंभिक सीपीआईपी मॉडल में, ओ-रिंग वास्तव में 3 सेमी3 सिरिंज (आधे में कटौती) के बाहर से फिसली हुई थी जब हिंद पंजा को सिरिंज के बैरल में रखा गया था जहां तक संभवहो 25। यहां, हमारे अध्ययन में, हमने इस विधि में मामूली संशोधन किए। हमने सिरिंज के बजाय 1.5 एमएल एपपेनडोर्फ ट्यूब (स्नैप-कैप के साथ पहले से काट दिया) का उपयोग किया, क्योंकि यह सामग्री चूहे के पिछले पंजा के व्यास के साथ अधिक सुलभ और फिट थी। ओ-रिंग को मॉडल स्थापना के लिए अनुमति देने के लिए चोटों के बिना इस संशोधित विधि में चूहों के टखने के हिस्से पर आसानी से रखा जा सकता है।

वर्तमान में, सीपीआईपी चूहा मॉडल विशेष रूप से पिछले अध्ययनों के आधार पर नर चूहों में स्थापित किया गया था, जिसमें हमारे वर्तमान अध्ययन25शामिल हैं। हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि महामारी विज्ञान विश्लेषण26,27के अनुसार पुरुष रोगियों की तुलना में सीआरपीएस-I की घटनाएं महिला ओं में अधिक होती हैं। यह उन निष्कर्षों से और भी समर्थित है कि जब सीपीआईपी की स्थापना28को हुई थी तो मादा जानवरों ने पुरुष जानवरों की तुलना में अधिक दर्द प्रतिक्रियाओं का प्रदर्शन किया था । इसलिए भविष्य में नर और मादा दोनों जानवरों में सीपीआईपी मॉडल स्थापित करना जरूरी होगा। यह इस मॉडल के ट्रांसलेशनल महत्व का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण होगा।

निष्कर्ष में, यहां वर्णित एक चूहा सीपीआईपी मॉडल स्थापित करने के तरीके हैं। यह सीपीआईपी चूहा मॉडल मानव सीआरपी-I के कई नैदानिक पात्रों को फिर से तैयार करता है, और इसके गुण सीआरपीएस-1 का अध्ययन करने के लिए इसे एक उपयुक्त पशु मॉडल प्रदान कर सकते हैं।

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Disclosures

लेखक इस कार्य में हितों के टकराव की घोषणा नहीं करते हैं ।

Acknowledgments

इस परियोजना को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (८१८७३३६५ और ८१६०३६७६), प्रतिष्ठित युवा विद्वानों के लिए झेजियांग प्रांतीय प्राकृतिक विज्ञान कोष (LR17H270001) और झेजियांग चीनी चिकित्सा विश्वविद्यालय से अनुसंधान कोष द्वारा प्रायोजित किया गया था ( Q2019J01, 2018ZY37, 2018ZY19)।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 ml Eppendorf tube Eppendorf 22431021
DMSO Sigma-Aldrich D1435
Capsaicin APEXBIO A3278
Digital caliper Meinaite NA
O-ring O-Rings West Nitrile 70 Durometer 7/32 in.
internal diameter
Plantar Test Apparatus UGO Basile, Italy 37370
von Frey filaments UGO Basile, Italy NC12775

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References

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व्यवहार अंक 155 दर्द जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम प्रकार-1 एलोडिनिया हाइपरएल्जेसिया क्षणिक रिसेप्टर संभावित vanilloid 1 पुरानी पोस्ट-इस्केमिया दर्द
चूहों में जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम टाइप-1 के लिए क्रोनिक पोस्ट-इस्केमिया दर्द मॉडल
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Hu, Q., Zheng, X., Chen, R., Liu, B., Tai, Y., Shao, X., Fang, J., Liu, B. Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats. J. Vis. Exp. (155), e60562, doi:10.3791/60562 (2020).

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