निगरानी पीडी-1-अवरुद्ध एंटीबॉडी टी कोशिकाओं के लिए बाध्य परिधीय रक्त की एक बूंद से व्युत्पन्न
Summary
हमने पीडी-1 के बंधन का मूल्यांकन करने के लिए एक सरल प्रवाह साइटोमेट्री परख विकसित की- टी कोशिकाओं को एंटीबॉडी अवरुद्ध करना, कैंसर रोगियों से परिधीय रक्त की केवल एक बूंद की आवश्यकता होती है।
Abstract
पीडी-1-अवरुद्ध एंटीबॉडी सहित प्रतिरक्षा चेकपॉइंट अवरोधकों ने विभिन्न प्रकार के कैंसर में उपचार परिणामों में काफी सुधार किया है। इन इम्यूनोथेरपी की औषधीय प्रभावकारिता लंबे समय तक चलने वाली है, लगातार रक्त सांद्रता के कारण उनके इंजेक्शन के विच्छेदन से परे भी विस्तारित होती है। यहां हमने पीडी-1 की टी सेल बाध्यकारी स्थिति का मूल्यांकन करने के लिए एक सरल प्रवाह साइटोमेट्री परख विकसित की- एंटीबॉडी निवोलुमाब और पेम्ब्रोलिज़ुमाब को अवरुद्ध करना। ग्लूकोज टेस्ट की तरह, इस परख के लिए परिधीय रक्त की सिर्फ एक बूंद की आवश्यकता होती है। टी कोशिकाओं पर एंटीबॉडी बाध्यकारी कल्पना एंटीबॉडी रक्त सांद्रता को मापने की तुलना में अधिक विश्वसनीय है। इसके अलावा, यदि आवश्यक हो, तो हम संभावित रूप से पीडी-1-अवरुद्ध एंटीबॉडी से बंधे टी कोशिकाओं पर कई विशिष्ट प्रतिरक्षा से संबंधित मार्कर का विश्लेषण कर सकते हैं। इस प्रकार, यह पीडी-1 के औषधीय प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए एक सरल और न्यूनतम आक्रामक रणनीति है- कैंसर रोगियों में एंटीबॉडी को अवरुद्ध करना।
Introduction
पीडी-1- अवरुद्ध एंटीबॉडी विभिन्न प्रकार के कैंसर के उपचार के लिए मानक विकल्प बन गए हैं, जिनमें गैर-छोटे सेल फेफड़े का कैंसर (एनएससीएलसी)1,2,3,4शामिल है। वे कैंसर रोगियों के एक सबसेट में एक उल्लेखनीय चिकित्सीय प्रभाव दिखाते हैं जिन्होंने पारंपरिक साइटोटॉक्सिक कीमोथेरेपी का जवाब नहीं दिया है। हालांकि, प्रतिरक्षा चेकपॉइंट अवरोधक (आईसीआई), जिसमें पीडी-1-अवरुद्ध एंटीबॉडी शामिल हैं, प्रतिकूल घटनाओं का एक अनूठा और विशिष्ट स्पेक्ट्रम पैदा कर सकता है, जिसे प्रतिरक्षा से संबंधित प्रतिकूल घटनाओं (आईआरईई)5कहा जाता है। हालांकि आईआरईई लगभग सभी ऊतकों को प्रभावित कर सकता है, लेकिन वे आमतौर पर गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट, एंडोक्राइन ग्रंथियों, त्वचा और यकृत में देखे जाते हैं, और वे प्रूरिटस, दाने, मतली, दस्त और थायराइड विकारों6,7का कारण बन सकते हैं। सामान्य तौर पर, अधिकांश आईआरई आईसीआई की दीक्षा के बाद 1 से 2 महीने के भीतर दिखाई देते हैं। हालांकि, कुछ मामलों में, वे उपचार की शुरुआत के बाद या उपचार समाप्ति6,7 के बाद भी 1 साल से बाद में हो सकतेहैं। वे विभिन्न लक्षणों का कारण भी बनते हैं जो अन्य विकृतियों से भेदभाव करना मुश्किल हो सकता है। इस प्रकार, आईआरईई का तुरंत निदान करना और उनका उचित इलाज करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। आईआरईस सभी ऊतकों को प्रभावित कर सकता है, और उनकी शुरुआत प्रतिरक्षा कोशिकाओं को प्रसारित करने से दृढ़ता से प्रभावित होती है, विशेष रूप से पीडी-1-अवरुद्ध एंटीबॉडी से बंधे टी कोशिकाएं। इसलिए, एंटीबॉडी-लक्षित टी कोशिकाओं की निगरानी के लिए एक सीधी और न्यूनतम आक्रामक विधि नैदानिक सेटिंग्स में महत्वपूर्ण है।
यहां, हमने पीडी-1 के बंधन का आकलन करने के लिए एक सरल विधि विकसित की- कैंसर रोगियों से परिधीय पूरे रक्त की एक बूंद का उपयोग करटी कोशिकाओं को एंटीबॉडी अवरुद्ध करना, जिन्हें निवोलुमाब या पेम्ब्रोलिज़ुमाब प्राप्त हुआ था। इस दृष्टिकोण का उपयोग करके, हम निम्नलिखित में से प्रत्येक की निगरानी करने में सक्षम थे: 1) टी कोशिकाओं के लिए एंटीबॉडी बाध्यकारी की अवधि, 2) चिकित्सीय एंटीबॉडी द्वारा टी सेल पीडी-1 अणुओं की अधिभोग, और 3) टी कोशिकाओं की सक्रियता की स्थिति और प्रतिरक्षा विशेषताएं। यह विधि पहले से रिपोर्ट की गई तकनीक8का संशोधन है। आवश्यक रक्त की मात्रा लगभग ग्लूकोज परीक्षण के लिए आवश्यक है, और दृष्टिकोण को मोनोन्यूक्लियर सेल संवर्धन या पीडी-1-अवरुद्ध एंटीबॉडी के साथ सह-निर्माण की आवश्यकता नहीं होती है। हमने पुष्टि की है कि इस विधि को जमे हुए नमूनों का उपयोग करके भी किया जा सकता है, जिसमें परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाएं (पीबीएमसी) और प्लीरल एफफ्यूजन, पेरिकार्डियल एफफ्यूजन, ब्रोंकोल्वेलर लैवेज तरल पदार्थ और सेरेब्रोस्पाइनल तरल पदार्थ से कोशिकाएं शामिल हैं, यह सुझाव देते हुए कि यह रणनीति बहुकेंद्र अध्ययन के संदर्भ में उपयोगी हो सकती है। यह विधि आईआरईई के प्रारंभिक निदान को सुविधाजनक बना सकती है, और उनके लक्षणों को नियंत्रित करने और पीडी-1 अवरोधकों के बाद बाद के उपचार शुरू करने के लिए इष्टतम समय की पहचान करने के लिए उपयुक्त इम्यूनोसप्रेसिव उपचार निर्धारित करने में भी मदद कर सकती है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस लेख में, हम पीडी-1 का पता लगाने के लिए फ्लो साइटोमीटर का उपयोग करके एक विधि की रिपोर्ट करते हैं- परिधीय रक्त की एक बूंद से प्राप्त टी कोशिकाओं से बंधे एंटीबॉडी को अवरुद्ध करते हैं, जिसे हमने मूल रूप से न?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को जापान सोसायटी फॉर द प्रमोशन ऑफ साइंस ककेन्ही (JP17K16045) और जापान एजेंसी फॉर मेडिकल रिसर्च एंड डेवलपमेंट (JP18cm0106335 और 19cm0106310) से एसके को अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| 10X RBC Lysis Buffer (Multi-species) | Thermo Fisher Scientific | 00-4300-54 | 50 mL |
| APC/Cyanine7 anti-human CD4 Antibody | BioLegend | 300518 | Clone RPA-T4 |
| BD FACS Canto II Flow Cytometer | BD | ||
| Brilliant Violet 510 anti-human CD8a Antibody | BioLegend | 301048 | Clone RPA-T8 |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | nacalai tesque | 14249-95 | 500 mL |
| Falcon Round-Bottom Polystyrene Tubes | STEMCELL Technologies | 352058 | 5 mL |
| FcR Blocking Reagent, human | Miltenyi Biotec | 130-059-901 | 2 mL |
| FLOWJO | BD | ||
| Gibco Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | 12676029 | 500 mL |
| Mouse IgG1 monoclonal – Isotype control | abcam | ab81200 | |
| Mouse monoclonal Anti-Human IgG4 Fc | abcam | ab99825 | Clone HP6025 |
| Pacific Blue Mouse Anti-Human CD3 | BD | 558117 | Clone UCHT1 |
| PE-Cy7 Mouse anti-Human CD279 (PD-1) | BD | 561272 | Clone EH12.1 |
| PE-Cy7 Mouse IgG1 κ Isotype Control | BD | 557646 |
References
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