PD-1-bloke antikorların T hücrelerine bağlanmasını değerlendirmek için basit bir akış sitometrisi tsay geliştirdik ve kanser hastalarından sadece bir damla periferik kan almasını gerektiren bir çalışma sitometri sitometri sitometri sitometri sitometri sitometri sitometri geliştirdik.
PD-1-bloke antikorlar da dahil olmak üzere bağışıklık kontrol noktası inhibitörleri, kanser çeşitli tedavi sonuçları önemli ölçüde iyileşmiştir. Bu immünoterapilerin farmakolojik etkinliği uzun ömürlüdür, kalıcı kan konsantrasyonları nedeniyle enjeksiyonlarının kesilmesinin bile ötesine uzanır. Burada PD-1-bloke antikorlar nivolumab ve pembrolizumab T hücre bağlama durumunu değerlendirmek için basit bir akış sitometri tsay geliştirdi. Glikoz testi gibi, bu tahlil sadece bir damla periferik kan gerektirir. T hücrelerinde antikor bağlanmasını görselleştirmek antikor kan konsantrasyonlarını ölçmekten daha güvenilirdir. Buna ek olarak, gerekirse, PD-1-bloke edici antikorlara bağlı T hücrelerinde bağışıklıkla ilgili birçok ayırt edici belirteçleri analiz edebiliriz. Bu nedenle, bu kanser hastalarında PD-1-bloke antikorların farmakolojik etkisini analiz etmek için basit ve minimal invaziv bir stratejidir.
PD-1-bloke antikorlar kanser çeşitli tedavi için standart seçim haline gelmiştir, küçük hücreli dışı akciğer kanseri de dahil olmak üzere (NSCLC)1,2,3,4. Onlar konvansiyonel sitotoksik chemotherapies yanıt vermedi kanser hastalarının bir alt kümesinde dikkate değer bir terapötik etki göstermektedir. Ancak, pd-1-bloke antikorlar içeren bağışıklık kontrol noktası inhibitörleri (ICIs), advers olayların benzersiz ve farklı bir spektrum neden olabilir, immün ilişkili advers olaylar (irAEs) olarak adlandıran5. IrAEs hemen hemen tüm dokuları etkileyebilir rağmen, en sık gastrointestinal sistem gözlenen, endokrin bezleri, cilt, ve karaciğer, ve onlar kaşıntı neden olabilir, döküntü, mide bulantısı, ishal, ve tiroid bozuklukları6,7. Genel olarak, çoğu irAEs ICIs başlatılmasından sonra 1 ila 2 ay içinde görünür. Ancak, bazı durumlarda, onlar tedavinin başlamasından sonra 1 yıl daha sonra oluşabilir hatta tedavi kesilmesinden sonra6,7. Ayrıca diğer patolojilerden ayırt etmek zor olabilir çeşitli belirtilere neden olur. Bu nedenle, irAEs derhal teşhis etmek ve uygun şekilde tedavi etmek zor olabilir. irAE’ler tüm dokuları etkileyebilir ve bunların başlangıcı, özellikle PD-1-bloke edici antikorlara bağlı T hücreleri olmak üzere dolaşan bağışıklık hücrelerinden güçlü bir şekilde etkilenir. Bu nedenle, antikor hedefli T hücrelerini izlemek için basit ve minimal invaziv bir yöntem klinik ortamlarda önemlidir.
Burada, nivolumab veya pembrolizumab alan kanser hastalarından periferik tam kan damlası kullanarak PD-1-bloke antikorların T hücrelerine bağlanmasını değerlendirmek için basit bir yöntem geliştirdik. Bu yaklaşımı kullanarak, aşağıdakilerin her birini izleyebildik: 1) T hücrelerine bağlanma nın süresi, 2) T hücre PD-1 moleküllerinin terapötik antikorlar tarafından doluluğu ve 3) T hücrelerinin aktivasyon durumu ve immünolojik özellikleri. Bu yöntem, daha önce bildirilen teknik8bir değişikliktir. Gerekli kan miktarı bir glikoz testi için gerekli hemen hemen aynıdır, ve yaklaşım mononükleer hücre zenginleştirme veya PD-1-bloke antikorlar ile co-culturing gerektirmez. Bu yöntemin periferik kan mononükleer hücreleri (PBMCs) ve plevral efüzyon, perikardiyal efüzyon, bronkoalveoler lavaj sıvısı ve beyin omurilik sıvısı hücreleri de dahil olmak üzere dondurulmuş numuneler kullanılarak da uygulanabileceğini doğruladık ve bu stratejinin çok merkezli bir çalışma bağlamında yararlı olabileceğini öne sürdük. Bu yöntem irAE’lerin erken tanısını kolaylaştırabilir ve aynı zamanda semptomlarını kontrol etmek için uygun immünsupresif tedavilerin belirlenmesine ve PD-1 inhibitörlerinden sonra sonraki tedavilerin başlatılması için en uygun süreyi belirlemeye yardımcı olabilir.
Bu makalede, başlangıçta nivolumabtespitiiçin geliştirdiğimiz periferik kan damlasından elde edilen T hücrelerine bağlı PD-1-bloke edici antikorları tespit etmek için bir akış sitometresi kullanarak bir yöntem rapor ediyoruz. Bu teknik çok basit ve kolay bir şekilde gerçekleştirilebilmesine rağmen, doğru sonuçlar elde etmek için iki önemli noktaya dikkat edilmelidir. Bir PD-1 molekülleri tespit etmek için, nivolumab ve pembrolizumab ile rekabet uygun bir antikor kullanıl…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma, Japonya Bilim KAKENHI (JP17K16045) ve Japonya Tıbbi Araştırma ve Geliştirme Ajansı (JP18cm0106335 ve 19cm0106310) için Japonya Derneği’nden S.K.’ye verilen hibelerle desteklenmiştir.
10X RBC Lysis Buffer (Multi-species) | Thermo Fisher Scientific | 00-4300-54 | 50 mL |
APC/Cyanine7 anti-human CD4 Antibody | BioLegend | 300518 | Clone RPA-T4 |
BD FACS Canto II Flow Cytometer | BD | ||
Brilliant Violet 510 anti-human CD8a Antibody | BioLegend | 301048 | Clone RPA-T8 |
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | nacalai tesque | 14249-95 | 500 mL |
Falcon Round-Bottom Polystyrene Tubes | STEMCELL Technologies | 352058 | 5 mL |
FcR Blocking Reagent, human | Miltenyi Biotec | 130-059-901 | 2 mL |
FLOWJO | BD | ||
Gibco Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | 12676029 | 500 mL |
Mouse IgG1 monoclonal – Isotype control | abcam | ab81200 | |
Mouse monoclonal Anti-Human IgG4 Fc | abcam | ab99825 | Clone HP6025 |
Pacific Blue Mouse Anti-Human CD3 | BD | 558117 | Clone UCHT1 |
PE-Cy7 Mouse anti-Human CD279 (PD-1) | BD | 561272 | Clone EH12.1 |
PE-Cy7 Mouse IgG1 κ Isotype Control | BD | 557646 |