Summary
Ein grundlegender Aspekt bei der Beurteilung des Wohlergehens von Tieren in Gefangenschaft ist die Frage, ob die Tiere haben, was sie wollen. Hier stellen wir ein Protokoll zur Bestimmung der Haltungspräferenz im Zebrafisch (Danio rerio) in Bezug auf das Vorhandensein/Fehlen von Umweltanreicherung und Zugang zum Fließen von Wasser vor.
Abstract
Die Techniken zur Bewertung des Tierschutzes versuchen, die spezifischen Bedürfnisse und Wünsche des betreffenden Tieres zu berücksichtigen. Die Bereitstellung von Anreicherung (das Hinzufügen von physischen Objekten oder Konspezifen in der Wohnumgebung) ist oft eine Möglichkeit, gefangenen Tieren die Möglichkeit zu geben, zu wählen, mit wem oder was sie interagieren und wie sie ihre Zeit verbringen. Ein grundlegender Bestandteil der aquatischen Umwelt, der in Gefangenschaft oft übersehen wird, ist jedoch die Fähigkeit des Tieres, sich für körperliche Bewegung zu entscheiden. Für viele Tiere, einschließlich Fische, ist Bewegung ein wichtiger Aspekt ihrer Lebensgeschichte, und ist dafür bekannt, viele gesundheitliche Vorteile zu haben, einschließlich positiver Veränderungen im Gehirn und Verhalten. Hier stellen wir eine Methode zur Bewertung der Habitatpräferenzen bei in Gefangenschaft gehaltenen Tieren vor. Das Protokoll könnte leicht angepasst werden, um eine Vielzahl von Umweltfaktoren (z. B. Kies versus Sand als Substrat, Kunststoffpflanzen versus lebende Pflanzen, geringer Durchfluss im Vergleich zu hohem Wasserfluss) in verschiedenen aquatischen Arten oder für die Verwendung mit terrestrischen Arten zu betrachten. Die statistische Bewertung der Präferenz erfolgt anhand des Jakobspräferenzindex, der die Lebensräume von -1 (Vermeidung) bis +1 (am meisten bevorzugt) einordnet. Mit diesen Informationen kann ermittelt werden, was das Tier aus Sicht des Tierschutzes, einschließlich ihres bevorzugten Standorts, will.
Introduction
Die Vorschriften, wie Labortiere in Gefangenschaft untergebracht werden sollen, sind explizit und klar definiert. Die Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC) International betreut und verwaltet alle Organisationen und Institutionen, die mit Forschungstieren arbeiten, und verfügt über spezifische Richtlinien für artgerechte Haltung und Unterbringung. Zum Beispiel, Die AAALAC Guidance on the Housing and Care of Zebrafish, Danio Rerio1 "stark fördert" die Verwendung von Anreicherung (die Zugabe von physischen Objekten oder Konspezifischen in der Wohnumgebung) bei der Unterbringung von Zebrafischen in Gefangenschaft. Weiter heißt es in dem Ratgeber: "Die Bereitstellung künstlicher Pflanzen oder Strukturen, die den Lebensraum der Zebrafische imitieren, ermöglicht den Tieren eine Wahlmöglichkeit in ihrer Umwelt."
Beweise deuten darauf hin, dass Anreicherung das Wachstum neuer Neuronen (Neurogenese) in Bereichen des Gehirns an der Verarbeitung räumlicher Informationen stimulieren kann2, und es wird angenommen, dass diese neuronalen Veränderungen mit verbesserten Lernfähigkeit verbunden sind3. Die Auswirkungen der Anreicherung auf Neurogenese und Lernen wurden in verschiedenen Taxa, einschließlich Fisch4,5, Vögel6, Reptilien7und Säugetiere8 . Obwohl diese Arten von Studien wichtig sind, um die Auswirkungen der Anreicherung auf das Gehirn und das Verhalten zu verstehen, berücksichtigen sie nicht die besonderen Entscheidungen oder Vorlieben von Tieren für eine bestimmte Umgebung gegenüber einer anderen.
Eine grundlegende Frage bei der Beurteilung des Wohlergehens von tieren in Gefangenschaft ist, ob die Tiere haben, was sie wollen9. Eine Möglichkeit, dieser Frage nachzugehen, die greifbare Beweise liefert, besteht darin, den Tieren Entscheidungen zu geben, die es uns ermöglichen, ihre subjektiven Vorlieben zu verstehen. So wurde beispielsweise in zwei Studien untersucht, ob Zebrafische den Zugang zu einer angereicherten oder einer einfachen Umgebung bevorzugen, wobei beide Studien auf eine Präferenz für Gebiete hinweisen, die eine Anreicherung enthalten10,11. Es wurde jedoch auch vorgeschlagen, dass Zebrafische der Umweltanreicherung gleichgültig erscheinen12, so dass die Antwort auf die Frage offensichtlich nicht eindeutig ist. Eine weitere Anwendung von Präferenztests im Zusammenhang mit dem Tierschutz erstreckt sich auf den Versuch zu verstehen, wie verschiedene Aspekte einer angereicherten Umwelt bei den Entscheidungen eines einzelnen Tieres eine Rolle spielen. Allein bei Fischen haben verschiedene Arten der Anreicherung unterschiedliche Auswirkungen auf das Gehirn und das Verhalten, und diese Beziehung wird durch individuelle Unterschiede in den Persönlichkeitsmerkmalen noch komplizierter13. Darüber hinaus könnten Präferenztests für vergleichende Studien zur Umweltanreicherung nützlich sein. Sogar über verschiedene Fischarten hinweg hat sich gezeigt, dass die Anreicherung einen Einfluss auf viele verschiedene Arten von Verhalten hat, einschließlich Aggression14, Kühnheit15, Fortbewegung16und Risikoverhalten17.
Jacobs Präferenzindex ist ein statistischer Test, der häufig zur Quantifizierung von Wohnungspräferenzen verwendet wird18. Der Jakobs Präferenzindex weist jedem einzelnen Lebensraum einen Wert zu, basierend auf der Anzahl der Tiere, die in jedem Lebensraumtyp zu unterschiedlichen Zeitpunkten vorhanden sind, wobei die Präferenz von -1 (Vermeidung) bis +1 (am meisten bevorzugt) reicht. Hier beschreiben wir eine Methode zur Verwendung von Jacobs Präferenzindex, um Die Haltungspräferenzen bei Fischen zu untersuchen, und verwenden das Beispiel der Bewertung von zwei wichtigen Merkmalen der aquatischen Umwelt: 1) das Vorhandensein oder Fehlen von Anreicherung; und 2) den Wasserfluss19. Das Protokoll könnte jedoch leicht angepasst werden, um eine Vielzahl von Umweltfaktoren (z. B. Kies versus Sand als Substrat, Kunststoffpflanzen versus lebende Pflanzen, niedriger und hoher Wasserdurchfluss) über verschiedene Arten und Landschaften (z. B. Aquarien und Terrester) zu untersuchen.
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Protocol
Die aktuelle Studie hat Die Zulassung und erfüllt alle Anforderungen der Tierpflege- und Gebrauchsprotokolle der Pennsylvania State University; IACUC-Nr. 46466.
1. Einrichtung des Präferenzgeräts
- Erhalten Sie die Genehmigung des Tierschutzausschusses (oder einer gleichwertigen Organisation) des Instituts für alle Versuchs- und Haltungsverfahren, an denen lebende Tiere beteiligt sind, bevor Sie mit dem Experiment beginnen.
- Verwenden Sie einen experimentellen Tank aus undurchsichtigem weißem Kunststoff. Die Wände zwischen den Zonen sind aus grauem Acryl gefertigt, das mit Silizium-Dichtmittel fixiert ist.
HINWEIS: Die Größe des Versuchsbeckens hängt von der Größe der interessierten Arten und der Anzahl der verwendeten Personen ab (z. B. wird für 8 erwachsene Zebrafische ein Tank von 76 cm L x 76 cm B x 30 cm H empfohlen). - Teilen Sie den Versuchsbehälter in vier Zonen auf, die je nach den zu prüfenden spezifischen Lebensraumparametern variieren. Beispiele für verschiedene Arten der zu untersuchenden Anreicherung sind sandiges vs. felsiges Substrat, künstliche Pflanzen vs. Schutzräume oder Wasserfluss vs. Vorhandensein künstlicher Pflanzen (Abbildung 1).
- Wenn Sie den Wasserfluss als Parameter von Interesse verwenden, verwenden Sie kleine Pumpen, um Wasserstrahlen zu liefern (siehe Tabelle der Materialien). Stellen Sie die Pumpen auf eine gewählte Geschwindigkeit ein, sodass sie einen konstanten und gerichteten Wasserfluss gewährleisten. Wählen Sie die gewünschte Geschwindigkeit basierend auf der Ökologie und Lebensgeschichte der Arten (z.B. 14 cm/s für Zebrafische).
- In der Mitte des experimentellen Tanks, haben eine zentrale Arena, wo Lebensmittel geliefert werden (Abbildung 1). Der Zugang zur zentralen Arena von jeder Zone ist durch eine kleine Öffnung in den Trennwänden. Die Öffnung ist groß genug, damit sich die Interessensarten ungehindert zwischen den Zonen bewegen können, aber klein genug, um visuelle Hinweise zu reduzieren, die die Fische aus anderen Zonen erleben könnten.
- Legen Sie einen Biofilter und eine Heizung in jede Ecke des Tanks, aber außerhalb des Versuchsbereichs, um den Wasserfluss nicht zu stören und eine konstante Wassertemperatur über alle Zonen hinweg zu gewährleisten.
- Richten Sie zusätzliche Versuchstanks ein, wie es der Weltraum vorschreibt. Drehen Sie die verschiedenen Zonen in jedem Versuchsbehälter, um sequenzielle Verzerrungen zu begrenzen. Stellen Sie sicher, dass alle Replikationstanks einheitliche Bedingungen aufweisen (gleiche Lichtverhältnisse, Wassertemperatur usw.)
- Platzieren Sie Kameras (siehe Materialtabelle)auf Stativen direkt über jedem Versuchsbehälter, damit alle Zonen sichtbar sind. Vermeiden Sie Weitwinkellinsen und stellen Sie sicher, dass die Speicherkarten genügend Platz für die Aufnahme haben.
- Stellen Sie die Raumbeleuchtung schrittweise (z.B. 1/2 h) 12 L: 12 D-Zyklus ein, um Sonnenaufgang und Sonnenuntergang zu simulieren. Halten Sie die Wassertemperatur bei 25 °C bei 1 °C.
2. Erfassung, Akklimatisierung und Verfahren
- Halten Sie Fische in heimischen Tanks auf, wenn sie nicht getestet werden. Alle Testfische aus ihren heimischen Tanks und platzen in der Mittelarena des Versuchstanks (Tag 1). Minimieren Sie die Aufnahmezeiten, um Stress zu reduzieren (z. B. weniger als 30 s).
HINWEIS: Ein alternatives Verfahren für die Übertragung von Fischen aus ihrem Heimattank in den Versuchstank, die Stress minimieren kann, ist der Transport der Fische in einem Becher mit Tankwasser. - Halten Sie die Anzahl und das Geschlecht der Fische in jedem Versuchsbecken konstant über Replizierungstanks und wählen Sie basierend auf der Artengröße und Ökologie.
- An den Tagen 1–4 verbringen Fische Zeit damit, sich zu akklimatisieren und die verschiedenen Zonen zu erkunden. Sammeln Sie an diesen Tagen keine Daten.
ANMERKUNG: Erweitern oder reduzieren Sie die Anzahl der Tage für die Akklimatisierung in Abhängigkeit vom jeweiligen experimentellen Protokoll. Die Eingewöhnungszeit sollte jedoch ausreichen, um die Auswirkungen der Handhabung zu minimieren und die Fische an die Fütterung im Gerät zu gewöhnen. - Überwachen Sie während der Akklimatisierungsphase die Wasserqualität genau, indem Sie regelmäßige Wasserqualitätstests (z. B. pH-, Nitrat- oder Nitritwerte) durchführen und das Wasser ersetzen, wenn Probleme festgestellt werden (siehe Materialtabelle).
- Füttern Sie die Fischflockenfutter (siehe Tabelle der Materialien) in der zentralen Arena mit einem schwimmenden Nahrungsring (siehe Tabelle der Materialien) an der Wand der zentralen Arena an der Wasseroberfläche befestigt. Ein Lebensmittelring sorgt dafür, dass Lebensmittelpartikel in der zentralen Arena bleiben und keine Verzerrung für Zonen aufgrund von Nahrungsdriften darstellen.
- Geben Sie dem Fisch .5 h ad libitum zu füttern, bevor Sie die übrig gebliebenen Lebensmittel aus dem Versuchsbecken mit einem Tauchnetz entfernen. Füttern Sie die Fische einmal am Morgen und einmal am Nachmittag.
- Bewerten Sie das Verhalten an den Tagen 5–7. Schalten Sie die Kameras ein und zeichnen Sie das Fischverhalten für 2 stunden nach jedem geplanten Morgen- und Nachmittagsfutter auf. Am 8. Tag alle Fische mit einem Tauchnetz aus den Versuchsbecken entfernen und wieder in ihre heimischen Tanks legen.
- Je nachdem, wie viel Sumpfwasser zur Verfügung steht, ersetzen Sie mindestens ein 1/3 des Wassers im Versuchstank durch frisches Sumpfwasser, um die Auswirkungen von Stresshormonen auf Fische in folgenden Wiederholungen zu reduzieren.
- Richten Sie die Versuchstanks gemäß dem Zonenrotationszeitplan für diese Woche ein. Das Drehen der Zonen verringert die Wahrscheinlichkeit einer Verhaltensverzerrung, die durch die Platzierung einer beliebigen Zone relativ zueinander auftritt. Dann beginnen Sie den Testprozess wieder mit einer neuen Charge Fisch.
3. Messungen und Datenanalyse
- Laden Sie die Videos am Ende jedes Aufnahmetages auf einen Computer herunter. Dadurch wird sichergestellt, dass vor jedem Gebrauch Platz auf der Speicherkarte vorhanden ist.
- Verwenden Sie Videosoftware (siehe Tabelle der Materialien), um die Zoneneinstellungen zu quantifizieren. Zählen Sie manuell die Anzahl der Fische in jeder Zone in 5 minuten Intervallen in jedem 2-Stunden-Aufzeichnungszeitraum (die zentrale Arena in diese Zählungen einzubeziehen). Definieren Sie das Geschlecht der Fische während der Analyse, wenn eine Differenzierung zwischen Männchen und Weibchen aus dem Videomaterial möglich ist.
- Um die Habitatpräferenz zu analysieren, berechnen Sie die durchschnittliche Anzahl der Fische pro Zone für jeden Replizierungstank (d. h. alle Daten über die 3 Tage durchschnittlich). Um eine Präferenzbewertung für die Strukturverwendung zu erhalten, berechnen Sie Densonderindex15
J = (rx x - p)/[(rx + p) – 2*rx*p]
wobei x die Zone des Interesses ist, r x das Verhältnis von Fisch in Zone x zur Gesamtzahl der Fische in allen Zonen und p der verfügbare Anteil aller Zonen im Versuchsbecken. Der Index liegt zwischen +1 für maximale Präferenz und 1 € für maximale Vermeidung. - Um festzustellen, ob sich die Geschwindigkeit, mit der Fische während eines Beobachtungszeitraums zwischen den Zonen wechseln, ändert, berechnen Sie die Schaltrate rsrin der ersten und letzten 5 min jedesBeobachtungszeitraums, wobei rsr die Häufigkeit ist, mit der ein Fisch aus der zentralen Arena in jede Zone eindringt, dividiert durch die Gesamtzahl der Fische.
- Betrachten Sie einen Fisch, der in eine Zone eingedrungen ist, wenn der ganze Körper des Fisches durch die Öffnung kreuzt, die die Zonen trennt. Berechnen Sie eine Anfangs- und eine endende mittlere Schaltrate für jeden Replikationstank. Führen Sie alle Verhaltensbeobachtungen durch denselben Experimentator durch, um jede Voreingenommenheit der Experimentierbeobachtung zu reduzieren.
- Führen Sie mit Hilfe statistischer Software (siehe Tabelle der Materialien) relevante statistische Analysen durch. Vorgeschlagene Analysen umfassen eine einseitige ANOVA mit Präferenzindex als abhängige Variable und Zone als Prädiktorvariable und einen gekoppelten t-Test auf der Anfangs- und Endwert-Wechselrate für jeden Tank.
- Wenden Sie Tukeys Multiple-Vergleich-Post-hoc-Test an, um Zonenvergleiche weiter zu untersuchen, bei denen jede Zone miteinander verglichen wird. Komplexere statistische Analysen umfassen gemischte Modelle, die Zeiteffekte, Arenaeffekte, Geschlechtseffekte oder sogar individuelle Verhaltensunterschiede bewerten.
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Representative Results
Wir nutzten den Präferenztest, um Die Wohnpräferenzen bei Zebrafischen zu untersuchen, die zwischen unterschiedlicher Anreicherung einschließlich 1) Kunststoffpflanzen und sandigem Substrat wählen; und 2) Wasserdurchfluss. Diese wurden in vier Zonen unterteilt: (i) Nur angereichert; ii) Nur Fluss; iii) Angereichert und fließend; iv) Ebene; und eine zentrale Arena, wo Essen geliefert wurde19. Zebrafische zeigten die höchste Präferenz für die Enriched and Flow Zone, die sich deutlich von allen anderen Zonen unterscheidet (Nur angereichert, nur fließend, ebene reine und zentrale Arena; p < 0,01). Fische mieden sowohl die Zone Flow Only als auch Plain und verbrachten mehr Zeit in der Central Arena19 (Abbildung 2A). Darüber hinaus bewegten sich Zebrafische zu Beginn des Beobachtungszeitraums häufiger zwischen verschiedenen Lebensraumzonen als am Ende(Abbildung 2B).
Abbildung 1: Beispiele für verschiedene Versuchsmuster, um auf Habitatpräferenzen zu testen. (A) Aufbau eines Versuchsbehälters, um die Präferenz eines sandigen gegenüber einem felsigen Substrat zu testen. (B) Einrichtung eines Versuchsbehälters zur Prüfung der Präferenz der Anreicherung (Kunststoffpflanzen) gegenüber einem Unterstand. (C) Einrichtung eines Versuchsbehälters zur Prüfung der Präferenz der Anreicherung (Kunststoffpflanzen) gegenüber einem Wasserfluss. In allen Figurentafeln waren die vier Eckfächer für die Fische nicht zugänglich und enthielten nur Heizungen und Filter. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 2: Repräsentative Daten, die die Ergebnisse eines Habitatpräferenztests an Zebrafischen zeigen. (A) Jacobs' Präferenzindex für jede Zone: (i) Nur angereichert; (ii) Angereichert und Fließen; (iii) Nur Durchfluss; (iv) Ebene; und eine neutrale Central Arena. Positive und negative Werte weisen auf Präferenz bzw. Vermeidung hin. Die Felder geben den 25 x 75. Perzentilbereich an und enthalten die Medianlinie; Balken stellen den 10. und 90. Perzentilwert dar; offene Punkte stellen Punkte außerhalb dieser Werte dar. a = signifikanter Unterschied zu allen Zonen (p < 0,05); b = deutlich anders als Angereichert und Flow, Nur angereichert und die Zentrale Arena (p < 0,05); und (B) Box-Plots, die die Schaltrate am Anfang und am Ende des Beobachtungszeitraums anzeigen (Felder zeigen den 25 x 75. Perzentilbereich an und enthalten die Medianlinie; Balken stellen den 10. und 90. Perzentilwert dar). Abbildung 2A wurde von DePasquale et al.19geändert. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
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Discussion
Hier präsentieren wir ein experimentelles Design, das es uns ermöglicht, die Präferenzen von Fischen für verschiedene Arten von Lebensräumen zu untersuchen. Einige wichtige Schritte, die bei Präferenztests wichtig sind, sind: 1) Gewährleistung, dass einheitliche Bedingungen über verschiedene Repliken hinweg aufrechterhalten werden (z. B. externe Geräusche oder Bewegungen, Experimentatoren, Wasserchemie, Lichtpegel); 2) sicherstellung, dass die Zonen zwischen Wiederholungen gedreht werden und eine erhebliche Menge Wasser zwischen den Tests durch frisches Sumpfwasser ersetzt wird, um Verzerrungen zu verringern; (3) Gewährleistung eines angemessenen Stichprobenumfangs, um signifikante Ergebnisse sowohl hinsichtlich der Anzahl der Personen in jeder Gruppe als auch hinsichtlich der Anzahl der Replikationstanks zu ermitteln; und 4) wenn Versuche aufgezeichnet werden, optimieren und sicherstellen, dass eine ordnungsgemäße Videoaufzeichnung und Dateiübertragung.
Zu den Änderungen am aktuellen Protokoll gehört die Exposition von Fischen gegenüber einer Vielzahl anderer Lebensraumtypen, z. B. verschiedene anreicherungselemente, verschiedene Substrate oder sogar unterschiedliche Durchflussraten. Darüber hinaus kann es möglich sein, Tierverfolgungssoftware zu verwenden, um weiter zu verstehen, wie die Fische den Raum in jeder Zone nutzen (z. B. verbringen die Fische Zeit damit, gegen den Fluss von Wasser in den Strömungszonen zu schwimmen, oder vermeiden sie diesen Teil des Lebensraums insgesamt). Allerdings müssen die Wände des Versuchstanks möglicherweise geändert werden, um diese Art von Tracking-Software unterzubringen. Schließlich könnte der hier beschriebene Präferenztest an jede Fischart oder möglicherweise an jeden Wasserorganismus angepasst werden, den der Experimentator untersuchen möchte.
Eine Einschränkung des aktuellen Protokolls besteht darin, dass Präferenztests durch die Ressourcen, die den Tieren präsentiert werden, eingeschränkt werden. Daher kann das Tier nicht eine bevorzugte Wahl wählen, aber die am wenigsten unangenehme von denen präsentiert20. Es kann jedoch sein, dass es für das Wohlergehen besser ist, überhaupt eine Wahl zu haben, als nur begrenzte Möglichkeiten zu haben (d. h. nur Zugang zum bevorzugten Lebensraum). Es wurde auch vorgeschlagen, dass Zebrafische leichte Hintergründe aversive23finden, so dass eine alternative Tankfarbe (z.B. schwarz) besser geeignet sein kann. Darüber hinaus beschränken sich die Präferenztests häufig auf Beobachtungen, die in einem kleinen Zeitfenster gemacht werden, bei denen das betreffende Tier möglicherweise unmittelbar tätig wird und nicht auf künftige Bedürfnisse21,22. Darüber hinaus sind Geschlecht, Gruppengröße und sozialer Kontext Faktoren, die die Gruppendynamik und damit potenziell Habitatpräferenzen bei Fischen beeinflussen, daher ist es wichtig, zu versuchen, diese Faktoren über die Wiederholungen hinweg konsistent zu halten.
Mit unseren repräsentativen Ergebnissen haben wir gezeigt, dass Zebrafische bevorzugt sowohl Enriched als auch Flow und Enriched Only Zonen wählen und Flusszonen und Plain Zones meiden. Insgesamt wurde die Enriched- und Flow-Zone allen anderen Zonen vorgezogen. Eine Bevorzugung für angereicherte Umgebungen, insbesondere die Enriched and Flow Zone, kann das Ergebnis eines erhöhten Bedarfs an sensorischer Stimulation (Exploration) sein oder es könnte die Notwendigkeit sein, Orte zum Verstecken zu finden (verringerte Konkurrenz durch Konspezifen). Interessanterweise gab es eine leichte Präferenz für die Central Arena gegenüber den Flow Only und Plain Zonen, was darauf hindeutet, dass das Potenzial der Gelieferten Lebensmittel ein höherer Motivationsfaktor als Schwimmen war. Was die Bewegung zwischen den Zonen betrifft, so gab es zu Beginn des Beobachtungszeitraums mehr Umschaltungen zwischen den Zonen als am Ende. Die Zunahme der Bewegung zu Beginn des Beobachtungszeitraums kann dem Zeitpunkt der Fütterung entsprechen (Fische wurden eine halbe Stunde vor Beginn der Aufzeichnung gefüttert), daher könnten sie motivierter gewesen sein, sich zu bewegen und nach zusätzlichem Futter zu suchen. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass das in der aktuellen Studie beschriebene Protokoll ein wirksames Instrument zur Untersuchung von Lebensraumpräferenzen bei Fischen ist.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde von einem Research Collaboration Fellowship und dem Huck Institute an der Pennsylvania State University sowie USDA AES 4558 unterstützt. Die Forschung entsprach allen Anforderungen der Tierpflege- und Gebrauchsprotokolle der Pennsylvania State University; IACUC-Nr. 46466.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Artificial Aquarium Plants | Smarlin | B07PDZQ5M5 | |
| Artificial Seaweed Water Plants for Aquarium | MyLifeUNIT | PT16L212 | |
| Experimental tanks | United State Plastic Corporation | 6106 | |
| Floating food ring | SunGrow | B07M6VWH9V | |
| Flow meter | YSI | BA1100 | |
| Jager Aquarium Thermostat Heater | Ehiem | 3619090 | |
| Master Water Quality Test Kit | API | 34 | |
| SPSS Statistics for Macintosh | IBM | Version 25.0 | |
| Submersible Pump, SL- | Songlong | SL-381 | |
| TetraMin Tropical Flakes | Tetra | 16106 | |
| Triple Flow Corner Biofilter | Lee's | 13405 | |
| Video camera | Coleman | TrekHD CVW16HD | |
| Windows Media Player (video software) | Microsoft | Windows Media Player 12 |
References
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