क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिसिप्रिशन अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (ChIP-seq) के साथ मिलकर एक विधि है जिसका उपयोग ट्रांसक्रिप्शन कारकों और जीनोमिक दृश्यों के बीच बातचीत स्थापित करने के लिए किया जाता है जो वे नियंत्रित करते हैं। यह प्रोटोकॉल एक उदाहरण के रूप में साल्मोनेला आंत्रिका सेरोवर टाइथिमुरियम बैक्टीरियल बायोफिल्म का उपयोग करते हुए बैक्टीरियल बायोफिल्म्स के साथ ChIP-seq प्रदर्शन करने के लिए तकनीकों को रेखांकित करता है।
अनुक्रमण (ChIP-seq) के बाद क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिसिप्रिफिकेशन एक तकनीक है जिसका उपयोग प्रतिलेखन कारकों, हिस्टोन संशोधनों और अन्य डीएनए से जुड़े प्रोटीन के नियामक लक्ष्यों की खोज के लिए किया जा सकता है। सीआईपी-सीक्यू डेटा का उपयोग विभिन्न पर्यावरणीय स्थितियों या सेल प्रकारों में प्रतिलेखन कारकों के अंतर बाध्यकारी खोजने के लिए भी किया जा सकता है। प्रारंभ में, सीआईपी को माइक्रोऐरे (सीएचपी-चिप) पर संकरण के माध्यम से किया गया था; हालांकि, ChIP-seq तकनीकी प्रगति के माध्यम से पसंदीदा तरीका बन गया है, अनुक्रमण के लिए वित्तीय बाधाओं को कम करने, और उच्च गुणवत्ता वाले डेटा उत्पादन की भारी मात्रा में । बैक्टीरियल बायोफिल्म्स के साथ सीआईपी-सीक्यू प्रदर्शन करने की तकनीक, लगातार और पुराने संक्रमण का एक प्रमुख स्रोत, इस प्रोटोकॉल में वर्णित है। सीआईपी-सीक्यू दो सेल प्रकारों में अंतर बाध्यकारी निर्धारित करने के लिए मास्टर बायोफिल्म नियामक, सीएसजीडी को लक्षित करते हुए साल्मोनेला आंत्रिका सेरोवर टाइफिमुरियम बायोफिल्म और प्लैंक्टोनिक कोशिकाओं पर किया जाता है। यहां, हम फसल के लिए बायोफिल्म की उचित मात्रा प्रदर्शित करते हैं, एक तख्ते के नियंत्रण नमूने को सामान्य बनाते हैं, क्रॉस-लिंकर एक्सेस के लिए बायोफिल्म को समरूप करते हैं, और उच्च गुणवत्ता वाले अनुक्रमण परिणाम प्राप्त करने के लिए नियमित सीआईपी-सीक्यू चरणों का प्रदर्शन करते हैं।
बैक्टीरियल बायोफिल्म्स, स्वयं-उत्पादित मैट्रिक्स में एम्बेडेड कोशिकाओं के संरचनात्मक समुचेय, डीविक्शन, एंटीबायोटिक दवाओं और मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के लिए प्रतिरोधी हैं1। जैसे, वे लगातार और पुराने संक्रमण का कारण बनते हैं और अस्तित्व और संचरण के समाधान के कारण शोधकर्ताओं को अनूठी चुनौतियां पेश करते हैं। साल्मोनेला आंत्रकारिसेवर टाइथिमुरियम (एस. टाइथिमुरियम) बायोफिल्म एग्रीगेट की फेनोआमतौर पर विषम आबादी स्थापित करने के लिए पाया गया है जो डीसिकाशन और एंटीबायोटिक दवाओं के प्रतिरोधी हैं, और प्लैंक्टोनिक कोशिकाएं जो पर्यावरण तनाव (28 डिग्री सेल्सियस, सीमित पोषक तत्वों)2के संपर्क में आने पर शुद्ध संस्कृति में उग्रता कारकों को व्यक्त करती हैं। ये दो सेल प्रकार मास्टर बायोफिल्म नियामक, सीएसजीडी3की द्विस्थिर अभिव्यक्ति के कारण उत्पन्न होते हैं। हमने परिकल्पना की है कि यह साल्मोनेलाके लिए एक शर्त हेजिंग रणनीति हो सकती है, जहां प्लैंक्टोनिक कोशिकाएं अल्पकालिक संचरण में भाग लेती हैं और बायोफिल्म कोशिकाएं पर्यावरण में दीर्घकालिक बनी रहती हैं जब तक कि एक नए मेजबान को संक्रमित करने का अवसर2,4उत्पन्न नहीं होता । सीजेआर ओपरन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करने वाले कई नियामक तत्व ों की विशेषता5है . हालांकि, एड्रा और सीएसजी ऑपरन6के अलावा सीएसजीडी के कुछ रेग्युलेटरी टारगेट ्स को जाना जाता है। सीएसजीडी नियामक नेटवर्क की पहचान करने से हमें साल्मोनेला जीवनचक्र और बायोफिल्म्स के संचरण में भूमिका को बेहतर ढंग से समझने में मदद मिलेगी।
क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिसिप्रिफिकेशन के बाद हाई-थ्रूपुट सीक्वेंसिंग (सीएचपी-सीक्यू) प्रोटीन-डीएनए इंटरैक्शन की जीनोम-वाइड पहचान के लिए वीवो तकनीक में एक शक्तिशाली है और प्रतिलेखन कारकों, हिस्टोन संशोधनों, या न्यूक्लियोसोम्स7से जुड़ी नियामक प्रक्रियाओं के बारे में जानकारी प्रदान करता है। नए अध्ययनों ने इस तकनीक का उपयोग विकास की स्थिति और कोशिका प्रकार8के बीच अंतर प्रोटीन बाध्यकारी का आकलन करने के लिए किया है । क्रोमेटिन इम्यूनोप्रिसिप्रिशन (सीआईपी) में, इंटरैटिंग प्रोटीन के साथ डीएनए के टुकड़े लक्ष्य प्रोटीन के एंटीबॉडी चयन के माध्यम से समृद्ध होते हैं। कोशिकाओं की कटाई की जाती है और डीएनए बाध्यकारी प्रोटीन फॉर्मलडिहाइड क्रॉस-लिंकर उपचार के माध्यम से वीवो में डीएनए से जुड़े होते हैं। कोशिकाओं को ले जाता है, कोशिका सामग्री जारी करते हैं, और क्रोमेटिन लगभग 200-600 बीपी टुकड़ों7में कतरनी है। लक्ष्य प्रोटीन के लिए बाध्य डीएनए टुकड़े एंटीबॉडी का उपयोग कर इम्यूनोप्रीप्रिमिटेड हैं, और 9 प्रोटीन पाचन के बाद डी-क्रॉसलिंकिंग द्वारा अलग होते हैं। ये डीएनए टुकड़े संकरण से मेल खाती प्रोटीन बाध्यकारी साइटों को माइक्रोरे (सीएचपी-चिप) से या जीनोम अनुक्रम10,11को गहरे अनुक्रमण और मानचित्रण द्वारा मेल खाते हैं । हालांकि ChIP-चिप प्रयोगों पर्याप्त नियामक डेटा उपज, वे महंगी जांच के उपयोग के कारण सीमित हैं, साथ ही संकरण और सरणी पूर्वाग्रह12। ChIP-seq में न्यूक्लियोटाइड रिज़ॉल्यूशन और कवरेज में वृद्धि, बेहतर सिग्नल-टू-शोर अनुपात, और सीआईपी-चिप7की तुलना में कम कलाकृतियों के साथ एक बड़ी गतिशील सीमा है।
सीएचपी का उपयोग साल्मोनेला सेरोवर टाइथिमुरियाम13,14, विब्रियो एल्गिनोलिटिकस15में कोरम-सेंसिंग अफानियमन, एस्चेरिचियामें आरपीओएस विनियमन में एसएफएच और ओएमपीआर नियमन का विश्लेषण करने के लिए किया गया है। कोलाई16,विरुलेंस रेगुलेटर ईएसपीआर रेगुलेशन इन माइकोबैक्टीरियम तपेदिक17, स्यूडोमोनास एरुजिनोसा18में अमर्ग्स रेगुलेशन के माध्यम से संभावित डिगुएनेलेट साइक्ल्स, साथ ही वीआरएसआर स्टेफिलोकोकस ऑरियस19में रेगुलेशन. बैक्टीरियल ChIP-seq प्रयोगों का वर्णन किया गया है कि तरल मीडिया में बढ़ती कोशिकाओं और एकल सेल के रूप में कटाई के साथ शुरू करते हैं । हालांकि, बायोफिल्म्स और इसी जीन विनियमन का विश्लेषण एक सफल सीआईपी-सीक्यू प्रोटोकॉल उत्पन्न करने के लिए चुनौतियों का एक नया सेट का प्रतिनिधित्व करता है। इस प्रोटोकॉल में, सीएचपी-सीक्यू का उपयोग सीएसजीडी, एस के अंतर नियामक लक्ष्यों को खोजने के लिए किया जाता है। बायोफिल्म और प्लैंक्टोनिक सेल प्रकारों में टाइथिमुरियाम मास्टर बायोफिल्म रेगुलेटर। यह प्रोटोकॉल ChIP-seq के लिए बायोफिल्म की उचित मात्रा, फ्लास्क संस्कृति से फसल बायोफिल्म, बायोफिल्म और एकल सेल नियंत्रण नमूनों को सामान्य बनाने, बायोफिल्म को समरूप करने और पूर्ण इम्यूनोप्रिसिप्रिमिटेशन के लिए उपयोग की जाने वाली तकनीकों का वर्णन करता है। यह बैक्टीरियल बायोफिल्म्स में नियामक लक्ष्यों का अध्ययन करने के लिए उपयोगी होगा और कई प्रजातियों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
यह प्रोटोकॉल मास्टर बायोफिल्म नियामक, सीएसजीडी के नियामक लक्ष्यों को खोजने के लिए, शुद्ध संस्कृति से साल्मोनेला आंत्रिका सेरोवर टाइफिमुरीम बायोफिल्म और प्लैंकटोनिक कोशिकाओं के साथ ChIP-seq प्रदर्शन करने के लिए एक तकनीक की रूपरेखा तैयार करता है। हम दो सेल प्रकारों में सीएसजीडी की द्वि-स्थिरता के कारण अंतर बाध्यकारी जानकारी की उम्मीद करते हैं, जिसमें बायोफिल्म एग्रीगेट में उच्च स्तर और प्लैंक्टोनिक कोशिकाओं में निम्न स्तर2,3है। हालांकि, इस तकनीक को अन्य बैक्टीरियल ट्रांसक्रिप्शन कारकों, सेल प्रकारों या विकास की स्थिति पर भी लागू किया जा सकता है। विशेष रूप से, बायोफिल्म कोशिकाओं के प्रति यूनिट वजन सीएफयू के लिए प्रयोगात्मक रूप से निर्धारित रूपांतरण कारक का उपयोग करके इस तकनीक को अन्य जीवाणु बायोफिल्मों के अनुकूल बनाया जा सकता है।
सीआईपी-सीक्यू अनुक्रमण के माध्यम से तकनीकी त्रुटि के प्रवर्धन के लिए प्रवण हो सकता है; हालांकि, क्रिटिकल स्टेप्स पर पुष्टि इस27को रोक सकता है . प्राथमिक एंटीबॉडी विशिष्टता केवल लक्ष्य प्रतिलेखन कारक और डीएनए यह इम्यूनोप्रिसिप्रिशन7के दौरान नियंत्रित करने के चयन के लिए महत्वपूर्ण है । इस प्रयोग में, सीएसजीडी को जीन के 3 ‘ अंत में प्लाज्मिड-एन्कोडेड 3xFLAG टैग से जुड़ा हुआ था, जो सीएसजीडी22के सी-टर्मिनस के अनुरूप था। सीसीडी के बिना पी3एक्सफ्लैग प्लाज्मिड का उपयोग “नियंत्रण”(एस” के रूप में किया गया था। टाइथिमुरियम 14028 ‧सीएसजीडी + पी3एक्सफ्लैग)। एनकोड दिशानिर्देश ब्याज के प्रोटीन के खिलाफ प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोब्लॉट करने की सलाह देते हैं, और सीएचपी उपभेदों और हटाने के लाइसेट्स21। यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि प्रतिलेखन कारक बाध्यकारी और डाउनस्ट्रीम अनुक्रमण परिणामों में परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए विकास की स्थिति प्रतिकृति में सुसंगत है। यदि कोई यह सुनिश्चित करने के लिए सावधान है कि इनोकुलम आकार और पूर्व-इनोकुलम विकास की स्थिति लगातार हो, तो फ्लास्क संस्कृति में बायोफिल्म वृद्धि लगातार4है। यह पुष्टि करना महत्वपूर्ण है कि सभी जैव फिल्म को समरूपता के बाद तोड़ दिया गया है, सभी कोशिकाओं के लिए अभिकर्ताओं, विशेष रूप से फॉर्मलडिहाइड क्रॉस-लिंकर की समान पहुंच सुनिश्चित करने के लिए।
कई संशोधनों शोधकर्ताओं को अन्य डीएनए बाध्यकारी प्रोटीन, सेल प्रकार, उपभेदों, विकास की स्थिति, या प्रयोगशाला उपकरण के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग करने के लिए सक्षम हो सकता है । यदि इसका उपयोग एस के अलावा बायोफिल्म बनाने वाली प्रजातियों के लिए किया जाता है। टाइपिमुरियूम, बायोफिल्म के प्रति यूनिट वजन के लिए कॉलोनी बनाने इकाइयों के रूपांतरण कारक को प्रयोगात्मक रूप से जैव फिल्म की विभिन्न मात्रा में कटाई, बायोफिल्म को अच्छी तरह से समरूप बनाकर, और एक मानक वक्र बनाने के लिए धारावाहिक कमजोर और प्लेट गिनती करने के द्वारा निर्धारित करने की आवश्यकता है, जो कम बायोफिल्म वजन2पर सटीक नहीं हो सकता है। सोनिकेटर ऊर्जा हस्तांतरण और सेल प्रकार प्रतिरोध अलग हो सकता है; इसलिए, एक सोनिकेशन परख को सोनिकेशन फटने की संख्या खोजने की सिफारिश की जाती है जो डाउनस्ट्रीम लाइब्रेरी तैयार करने औरअनुक्रमण 11के लिए आवश्यक खंड आकार सीमा का उत्पादन करेगा । माइक्रोकोकल न्यूक्लीज द्वारा क्रोमेटिन विखंडन सोनिकेशन का एक विकल्प है जो अधिभोग साइटों के उच्च संकल्प का उत्पादन करता है; हालांकि, इस विधि विखंडन पूर्वाग्रह7,28परिचय हो सकता है . डीएनए आकार सीमा डाउनस्ट्रीम पुस्तकालय तैयार करने किट और अनुक्रमण प्लेटफार्मों के आधार पर बदला जा सकता है । मिक्सर मिल के बदले समरूपता के अन्य तरीकों का उपयोग किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, एक ग्लास ऊतक समरूपता को प्रतिस्थापित किया जा सकता है, लेकिन यह बायोफिल्म को एयरोसोलाइज या अधूरा तोड़ सकता है। नियंत्रण के संदर्भ में, पूर्व इम्यूनोप्रिसिपिटेट डीएनए को अनुक्रमण प्रसंस्करण और विश्लेषण में सामान्यीकृत किया जा सकता है। प्रजातियों से मेल खाने वाले सामान्य एंटीबॉडी सीरम के साथ एक नकली-आईपी नियंत्रण को नियंत्रण के रूप में अच्छी तरह से13के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
शोधकर्ताओं को एक ChIP-seq प्रयोग पर विचार करते समय इस विधि की सीमाओं पर विचार करना चाहिए । अन्य बायोफिल्म प्रकारों के लिए इसे अनुकूलित करने के लिए महत्वपूर्ण संशोधनों की आवश्यकता हो सकती है। उदाहरण के लिए, साल्मोनेला टाइथिमुरीम के साथ पीबीएस में बायोफिल्म के तत्काल निलंबन से बायोफिल्म एग्रीगेट की औसत दर्जे की हानि होती है। बैक्टीरिया में प्रतिलेखन कारकों के नियामक लक्ष्यों को लक्षित करने वाले इम्यूनोप्रिसिपेटेशन के परिणामस्वरूप डीएनए की बहुत कम मात्रा हो सकती है, जो बाद के चरणों में शुद्धिकरण और पता लगाने के लिए एक चुनौती है । लाइब्रेरी डिटेक्शन9के दौरान बाल काटना और डाउनस्ट्रीम हेराफेरी के दौरान पूर्वाग्रह पेश किया जा सकता है । इसके अलावा, यह विधि प्रतिलेखन कारक बाध्यकारी के जवाब में वीवो अभिव्यक्ति के स्तर में प्रकट नहीं होती है। जिन शोधकर्ताओं को बायोइन्फॉर्मेटिक्स का कम अनुभव है, उन्हें विश्लेषण पाइपलाइन से चुनौती दी जा सकती है । यह विधि समय-गहन और महंगी हो सकती है; हालांकि, अनुक्रमण की लागत अक्सर एक माइक्रोसरण ी की तुलना में कम होती है और समय के साथ कम हो रही है क्योंकि तकनीकी सुधार किए जाते रहते हैं।
साहित्य में कुछ विधियां सीएचपी को बैक्टीरिया के साथ बताती हैं,और अधिकांश जीवाणु प्रयोग एक साधारण विकास स्थिति13,14,15,17,18से शुरू होते हैं। एकल कोशिकाओं के साथ सीआईपी नमूना तैयारकरना सीधा है और बायोफिल्म समुच्चय के साथ सीआईपी नमूना तैयारी की तुलना में कम चुनौतियां प्रस्तुत करता है। ChIP-seq के लिए, घातीय संवर्धन (SELEX), इलेक्ट्रोफोरेटिक गतिशीलता बदलाव परख (EMSA), ChIP-चिप, प्रमोटर हटाने और रिपोर्टर विश्लेषण द्वारा ligands के व्यवस्थित विकास सहित cis-नियामक सर्किटरी का अध्ययन करने के पिछले तरीकों को सीआईपी-एसईक्यू29द्वारा पूरित या प्रतिस्थापित किया गया है । सीआईपी-सीक्यू प्रौद्योगिकियों को आगे बढ़ाने और अनुक्रमण की उपलब्धता के कारण सीएचपी-चिप की जगह ले रहा है। डीप सीक्वेंसिंग शोधकर्ताओं को भारी मात्रा में डेटा प्रदान करता है जो सीआईपी-चिप11,30की तुलना में कम प्रारंभिक सामग्री के साथ कम बाध्यकारी आत्मीयता और उच्च आधार जोड़ी संकल्प वाली साइटों की पहचान कर सकते हैं। उच्च गुणवत्ता वाले संदर्भ जीनोम वाले जीवों से सीआईपी डेटा का विश्लेषण आम तौर पर तेज और विशिष्ट होता है। इसके अतिरिक्त, ChIP-seq सिलिको भविष्यवाणी बाध्यकारी साइटों है कि सभी सेल प्रकार, विकास चरण, या पर्यावरण की स्थिति31में कब्जा नहीं किया जा सकता है में खोज के लिए एक पूरी तरह से विधि है ।
भविष्य में, इस प्रोटोकॉल का उपयोग बैक्टीरियल रोगजनन, विशेष रूप से बायोफिल्म बनाने वाले जीवों की समझ को सुविधाजनक बनाने के लिए किया जा सकता है। इस तकनीक को व्यापक रूप से अपनाना और नए डेटासेट की उपलब्धता प्रोटीन के समूहों की पहचान करने के लिए डेटा एकीकरण का कारण बन सकती है जो बायोफिल्म बनाने वालेसूक्ष्मजीवों 32में सेलुलर प्रक्रियाओं को नियंत्रित करने के लिए सह-स्थानीयकरण करते हैं। इसके अलावा, सीआईपी-सीक्यू और आरएनए-सीक्यू डेटा को नियामक प्रणाली मॉडल33बनाने के लिए एकीकृत किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
इस शोध को प्राकृतिक विज्ञान और इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद (एनएसईआरसी) (एनएसईआरसी) (एनएसईआरसी) (#2017-05737) से एडब्ल्यू और जैव प्रौद्योगिकी में जारिसलोस्की चेयर के माध्यम से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। सांसद को साकटचेवान विश्वविद्यालय में संक्रामक रोगों, खाद्य सुरक्षा और सार्वजनिक नीति (ITraP) में एकीकृत प्रशिक्षण कार्यक्रम के माध्यम से एनएसईआरसी-सृजन छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया था।
लेखक दानी डेल को फिल्मांकन और संपादन के लिए धन्यवाद देना चाहेंगे ।
Agarose powder | FroggaBio | A87-500G | |
Balance (Explorer pro) | Ohaus | EP214 | |
Benchtop Centrifuge (8510R) | Eppendorf | 022627023 | |
Bioanalyzer 2100 | Agilent | G2939BA | |
BR dsDNA kit | ThermoFisher Scientific | Q32850 | |
ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads | Cell Signaling Technology | 9006 | |
cOmplete, EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail | Sigma-Aldrich | COEDTAF-RO ROCHE | |
Conical tube 15 mL | FroggaBio | TB15-500 | |
Conical tube 50 mL | FroggaBio | TB50-500 | |
DC Protein Assay Kit II | BioRad | 5000112 | |
Disposable Cuvette, 1.5 mL | Fisher Scientific | 14-955-127 | |
Electrophoresis equipment (mini-PROTEAN) | Bio-Rad | 1658000 | |
Floor centrifuge (Sorvall Evolution RC) | Thermo Scientific | 728211 | |
Fluorometer (Qubit 3.0) | Thermo Fisher Scientific | Q33216 | |
Formaldehyde | Sigma-Aldrich | 252549 | |
GelRed® Nucleic Acid Gel Stain 10 000x in water | Biotium | 41003 | |
High Sensitivity DNA kit | Agilent | 5067-4626 | |
Incubator (shaking) | VWR | 1570-ZZMFG | |
Incubator (Water bath shaking) | New Brunswick | G76D | |
LB media | VWR | 90000-808 | |
Magnetic stand (DynaMag) | Fisher Scientific | 12321D | |
Microcentrifuge (refrigerated) | Eppendorf | 5415R | |
Microcentrifuge Tubes, 1.5mL | Fisher Scientific | 05-408-129 | |
MiSeq Reagent Kit v3 (150 cycle) | Illumina | MS-102-3001 | |
Mixer mill | Retsch | MM400 | |
Nalgene 115 mL Filter Units, Sterile, 0.2 µm pore size | Thermo Scientific | 73520-980 | |
NEBNext Ultra DNA Library Prep Kit for Illumina | New England BioLabs | E7370S | |
NGS Cleanup and Size Select magnetic beads | Machery-Nagel | 744970.5 | |
Normal mouse serum | AbCam | ab188776 | |
Petri Dishes with Clear Lid (100 mm x 15 mm) | Fisher Scientific | FB0875712 | |
Pipette controller | FroggaBio | MP001 | |
Proteinase K | ThermoFisher Scientific | AM2542 | |
QIAquick PCR Purification Kit | Qiagen | 28104 | |
Rabbit Anti-FLAG Polyclonal Antibody | Sigma-Aldrich | F7425 | |
RNase A (10 mg/mL; DNase and protease-free) | ThermoFisher Scientific | EN0531 | |
Rotating wheel | Crystal Technologies & Industries | TR 01A | |
Safe-Lock Tubes (2.0 mL, colorless) | Eppendorf | 22363344 | |
Serological pipette 25 mL | FroggaBio | 94024 | |
Spectrophotometer | Montreal Biotech Inc. | Libra S22 | |
Stainless Steel Beads, 5 mm | Qiagen | 69989 | |
Tapered microtip 1/8" (3mm) Sonicator probe | Sonics & Materials, Inc. | 630-0418 | |
Tryptone media | VWR | 90000-286 | |
Ultrasonic Liquid Processor (Sonicator) | Sonics & Materials, Inc. | VC300 | |
Vacuum equipment (Vacufuge plus) | Eppendorf | 022820001 | |
Water bath 1 (Lab-line aquabath) | Thermo Scientific | 18000-1 | |
Water bath 2 (Precision) | Thermo Scientific | 51221044 |