Summary
इस अध्ययन में, प्रयोगशाला माउस से जुड़े कैप्सूल का उपयोग करके हार्ड टिक के निम्फल और लार्वा चरणों के लिए एक भोजन प्रणाली विकसित की गई थी। खिला कैप्सूल लचीला सामग्री से बना है और कम से कम एक सप्ताह के लिए माउस से दृढ़ता से जुड़ा रहता है और टिक खिला की आरामदायक निगरानी की अनुमति देता है।
Abstract
टिक्स विकास के सभी चरणों (अंडे को छोड़कर) परजीवी अनिवार्य हैं और विभिन्न रोगजनकों के वैक्टर के रूप में पहचाने जाते हैं। टिक अनुसंधान में माउस मॉडल का उपयोग उनके जीव विज्ञान और टिक-होस्ट-रोगजनक इंटरैक्शन को समझने के लिए महत्वपूर्ण है। यहां हम प्रयोगशाला चूहों पर कठोर टिकों के अपरिपक्व चरणों को खिलाने के लिए एक गैर-श्रमसाध्य तकनीक प्रदर्शित करते हैं। विधि का लाभ इसकी सादगी, छोटी अवधि, और प्रयोग के विभिन्न समय बिंदुओं पर टिकों की निगरानी या संग्रह करने की क्षमता है। इसके अलावा, तकनीक एक ही माउस पर दो व्यक्तिगत कैप्सूल के लगाव की अनुमति देती है, जो विभिन्न प्रकार के प्रयोगों के लिए फायदेमंद है जहां एक ही जानवर को खिलाने के लिए टिकों के दो अलग-अलग समूहों की आवश्यकता होती है। गैर-परेशान और लचीला कैप्सूल आसानी से सुलभ सामग्री से बनाया जाता है और प्रायोगिक जानवरों की असुविधा को कम करता है। इसके अलावा, इच्छामृत्यु आवश्यक नहीं है, चूहों प्रयोग के बाद पूरी तरह से ठीक हो जाते हैं और फिर से उपयोग के लिए उपलब्ध हैं।
Introduction
टिक्स कई रोगजनकों के महत्वपूर्ण वैक्टर हैं और पशु और मानव स्वास्थ्य के लिए एक गंभीर जोखिम का प्रतिनिधित्व करते हैं1. उनके जीव विज्ञान, टिक-होस्ट-रोगजनक इंटरैक्शन, या प्रभावी नियंत्रण उपायों की स्थापना करते समय एक प्रभावी भोजन प्रणाली स्थापित करना महत्वपूर्ण है। वर्तमान में, कई कृत्रिम भोजन प्रणालियां, जो जीवित जानवरों के उपयोग से बचते हैं, टिक,2,,3,4 के लिए उपलब्ध हैं और जब भी प्रायोगिक स्थितियां अनुमति देती हैं तो इनका उपयोग किया जाना चाहिए। हालांकि, विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स में ये सिस्टम विशिष्ट शारीरिक सुविधाओं की उचित नकल करने में विफल रहते हैं और प्रासंगिक परिणाम प्राप्त करने के लिए जीवित जानवरों का उपयोग आवश्यक है।
प्रयोगशाला चूहों का उपयोग आमतौर पर कई जैविक प्रणालियों के अध्ययन के लिए किया जाता है और नियमित रूप से 5 , 6 ,,7,,85,9को खिलाने के लिए मेजबान के रूप में उपयोग किया,जाताहै। चूहों पर अपरिपक्व टिकों को खिलाने के दो सबसे आम तरीकों में मुफ्त उपद्रव और माउस से जुड़े कारावास कक्षों का उपयोग शामिल है। निःशुल्क संक्रमण मुख्य रूप से लार्वा चरणों के लिए उपयोग किए जाते हैं और एनगोर्गेड टिक एक ऐसे क्षेत्र में जा सकते हैं जहां उन्हें बरामद किया जा सकता है। कारावास कक्ष आमतौर पर एक्रेलिक या पॉलीप्रोपाइलीन टोपियां से बने होते हैं जो माउस की पीठ से चिपके होते हैं। पहली तकनीक टिक फीडिंग के लिए एक प्रभावी प्राकृतिक प्रणाली है लेकिन प्रयोग के दौरान बारीकी से निगरानी की अनुमति नहीं देती है क्योंकि व्यक्तिगत टिक मेजबान शरीर के विभिन्न हिस्सों में फैले होते हैं। इसके अतिरिक्त, रिकवरी क्षेत्र में छोड़ने वाली एनगोर्गेड,टिक मल और मूत्र10, 11,12,,1513,,14से दूषित हो सकती हैं जो टिक फिटनेस को गंभीर रूप से प्रभावित कर सकती हैं यायदि जानवर और वसूली क्षेत्र के बीच कोई अलगाव नहीं है तो उन्हें माउस द्वारा क्षतिग्रस्त या खाया जा सकता है।, चैंबर-आधारित प्रणालियां एक परिभाषित क्षेत्र में टिकों के कारावास की अनुमति देती हैं, हालांकि, ग्लूइंग प्रक्रिया श्रमसाध्य होती है और टोपियां अक्सर गोंद के कमजोर अनुयायी होती हैं और इस प्रकार वे अक्सर प्रयोग16, 17,,18,,,19केदौरानअलग हो जाती हैं। टोपियां भी कठोर, असहज, और त्वचा प्रतिक्रियाओं के लिए नेतृत्व कर रहे हैं, जो चूहों के फिर से उपयोग को रोकने और प्रयोग के बाद उनकी इच्छामृत्यु की आवश्यकता है ।
हमारे पिछले अध्ययन में, हमने प्रयोगशाला खरगोशों पर टिकों को खिलाने के लिए एथिलीन-विनाइल एसीटेट (ईवा) फोम से बनेकक्षोंका उपयोग करके एक प्रभावी प्रणाली सफलतापूर्वक विकसित की। इसके साथ ही, हमने इस प्रणाली को माउस मॉडल में अनुकूलित किया और ईवा-फोम से बने बंद कैप्सूल में अपरिपक्व हार्ड टिक चरणों को खिलाने के लिए एक सरल और स्वच्छ विधि का प्रस्ताव किया। विशेष रूप से, हमारी प्रणाली तेजी से सूखने (3 मिनट), गैर परेशान लेटेक्स गोंद के साथ वापस मुंडा चूहों से चिपके लोचदार ईवा-फोम कैप्सूल का उपयोग करता है। यह तकनीक प्रयोगात्मक माउस के लिए कैप्सूल के फर्म और लंबे समय तक चलने वाले लगाव की अनुमति देता है, साथ ही प्रयोग के पूरे पाठ्यक्रम के दौरान प्रभावी टिक उपद्रव/संग्रह। फ्लैट कैप्सूल लचीला सामग्री से बना है और रक्त संग्रह या अन्य उद्देश्यों के लिए माउस के हेरफेर में बाधा नहीं है। सिस्टम मुख्य रूप से नस्ल टिक चरणों के लिए उपयुक्त है, लेकिन मामूली संशोधन के साथ इसका उपयोग लार्वा को खिलाने के लिए भी किया जा सकता है। विधि एक ही अनुभवी व्यक्ति द्वारा पूरा किया जा सकता है और व्यापक प्रशिक्षण की आवश्यकता नहीं है।
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Protocol
कृपया ध्यान दें कि यह प्रोटोकॉल तभी लागू किया जा सकता है जब प्रयोगशाला में सभी कल्याणकारी और सुरक्षा उपायों को पूरा किया जाए । इस प्रोटोकॉल को पशु प्रयोगों के लिए नैतिकता समिति द्वारा टिक फीडिंग के लिए चूहों का उपयोग करने की अनुमति मिली, EnVA/UPEC, परमिट संख्या ई ९४ ०४६ ०८ । अंत बिंदु के लिए, जानवरों को 4 और 5 मिनट के दो चरणों में 9 मिनट के लिए सीओ2 के संपर्क में थे ।
1. कैप्सूल की तैयारी
- छड़ी 2 मिमी मोटी ईवा फोम और चिपकने वाला डबल चिपचिपा फोम एक साथ(चित्रा 1A)।
- एक 20 मिमी व्यास चमड़े के छेद पंच का उपयोग करना, चिपके हुए फोम टुकड़ों से एक सर्कल काट । फिर, 12 मिमी व्यास छेद पंच का उपयोग करके, डबल फोम सर्कल(चित्रा 1B)बनाने के लिए इंटीरियर में कटौती करें।
नोट: कैप्सूल की फ्रेम मोटाई मेजबान त्वचा के लिए ग्लूइंग प्रक्रिया के लिए पर्याप्त सतह की गारंटी के लिए आकार में 3 मिमी से अधिक होनी चाहिए (नीचे देखें)। - चिपकने वाले डबल चिपचिपा फोम(चित्रा 1C)से सुरक्षात्मक पेपर स्ट्रिप छीलें और 20 मिमी व्यास(चित्रा 1D)का एक पारदर्शी परिपत्र प्लास्टिक संलग्न करें।
नोट: यदि लार्वा खिला रहे हैं, तो चिपकने वाले फोम से सुरक्षात्मक पेपर स्ट्रिप को न हटाएं और सीधे प्रोटोकॉल में चरण 2 पर जाएं। माउस के लिए सुरक्षात्मक कागज पट्टी सहित डबल फोम रिंग गोंद। - पारदर्शी प्लास्टिक(चित्रा 1E)में एक ~ 1 सेमी भट्ठा बनाओ ।
- प्रयोग के दौरान अत्यधिक नमी वाष्पीकरण की अनुमति देने के लिए एक एंटोमोलॉजिकल पिन(चित्रा 1F)के साथ कम से कम 10 छोटे छेद बनाएं।
नोट: कैप्सूल(चित्रा 1G)की कुल ऊंचाई 4 मिमी (2 मिमी ईवा-फोम 2 मिमी चिपकने वाले फोम के साथ) है और इसका उपयोग सभी कठोर टिक प्रजातियों के नस्लों और लार्वा को खिलाने के लिए किया जा सकता है। कैप्सूल का आकार(चित्रा 1H)20 मिमी बाहरी व्यास माउस उपभेदों के अधिकांश के लिए उपयुक्त है, लेकिन यदि आवश्यक हो तो संशोधित किया जा सकता है।
2. टिक उपद्रव से पहले चूहों की तैयारी
नोट: इस अध्ययन में, 10-12 सप्ताह पुराने महिला प्रयोगात्मक चूहों (तनाव C57BL/6 और BALB/cByJ) खाद्य और पानी की पेशकश के साथ मानक पिंजरों में बनाए रखा गया विज्ञापन libitum (ग्रीन लाइन हवादार रैक-20 Pa) खाद्य, पर्यावरण और व्यावसायिक स्वास्थ्य & सुरक्षा (ANSES) के लिए फ्रांसीसी एजेंसी में Maisons-Alfort, फ्रांस में मान्यता प्राप्त पशु सुविधाओं । जानवरों को किसी भी असामान्य त्वचा प्रतिक्रियाओं, स्वास्थ्य समस्याओं या जटिलताओं के लिए अनुभवी तकनीशियनों द्वारा दैनिक दो बार निगरानी की गई थी।
- इंडक्शन चैंबर में आइसोफ्लुरेन के साथ माउस एनेस्थेटाइज करें। एक बार एनेस्थेटाइज्ड होने के बाद, माउस को हेराफेरी पैड पर रखें और निरंतर आइसोफ्लुन आपूर्ति(चित्रा 2 ए)के लिए नाक शंकु से जोड़ें। श्वास दर की निगरानी करें और आइसोफलुने के स्तर को कम करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि यह प्रति मिनट 80 साँस से कम है।
नोट: हेरफेर से पहले, यदि आवश्यक हो तो गोदना या रेडियो-फ्रीक्वेंसी पहचान चिप द्वारा व्यक्तिगत माउस को लेबल करें। काटने से कैप्सूल क्षति से बचने के लिए अलग-अलग चूहों को अलग-अलग पिंजरों में रखने की सिफारिश की जाती है। - कान(चित्रा 2 ए)के ठीक पीछे के क्षेत्र तक कंधे के ब्लेड के पीछे से माउस के पूर्वकाल भाग को शेव करें।
नोट: मुंडा क्षेत्र कैप्सूल सतह से अधिक होना चाहिए। - तैयार कैप्सूल की पूरी ईवा-फोम साइट पर गैर-परेशान लेटेक्स गोंद लागू करें और 1 मिनट(चित्रा 2B) केलिए प्रतीक्षा करें।
- कैप्सूल को माउस पर उंगली (ओं)(चित्रा 2 सी)के साथ मामूली 3 मिनट लगातार दबाव से वापस गोंद करें, विशेष रूप से कैप्सूल के बाईं और दाईं ओर। त्वचा के प्रति इसके लगाव की जांच करने के लिए कैप्सूल को थोड़ा उठाएं। यदि गैर-संलग्न क्षेत्र पाए जाते हैं, तो एक स्पैटुला का उपयोग करके अधिक गोंद लागू करें और 3 मिनट के लिए दबाएं।
3. टिक उपद्रव
- अप्सरा उपद्रव के लिए, कदम 1.4(चित्रा 2D)में किए गए कट के माध्यम से कैप्सूल में व्यक्तिगत नस्लों को पेश करें।
नोट: Ixodes टिक प्रजातियों के लिए प्रति एक कैप्सूल अधिकतम 20 नस्लों की सिफारिश की जाती है। - पारदर्शी प्लास्टिक को ठीक विच्छेदन संदंश(चित्रा 2डी)का उपयोग करके व्यक्तिगत नस्लों की आसान शुरूआत के लिए झुकने की अनुमति देने के लिए कैप्सूल को दो तरफ से थोड़ा निचोड़ें। कैप्सूल के अंदर कटौती के माध्यम से व्यक्तिगत नस्लों पुश। एक बार अंदर, 90 डिग्री में संदंश बारी और कैप्सूल के अंदर टिक जमा करने के लिए संदंश बाहर खींचो।
- लार्वा उपद्रव के लिए संलग्न कैप्सूल(चित्रा 2E)से कागज की पर्ची को हटा दें। सिरिंज, लार्वा युक्त(चित्रा 2F),सीधे कैप्सूल के अंदर रखें और सिरिंज प्लंजर को धक्का देकर टिक जमा करें। शेष लार्वा को हटाने के लिए धीरे-धीरे प्लंजर को त्वचा की ओर घुमाएं।
नोट: प्रयोग से पहले कपास के टुकड़े द्वारा प्लग किए गए कट एंड के साथ लार्वा को 1 एमएल सिरिंज में रखें। - एक बार लार्वा त्वचा पर जमा हो जाने के बाद, पारदर्शी प्लास्टिक(चित्रा 2G)को संलग्न करके कैप्सूल को बंद कर दें।
- कैप्सूल(चित्रा 2H)के चारों ओर सुरक्षात्मक प्लास्टिक बैंड लागू करें।
नोट: सुरक्षात्मक प्लास्टिक बैंड ने प्रयोग की पूरी अवधि(चित्रा 2I, J)के लिए कैप्सूल के स्थायित्व में काफी सुधार किया। एक व्यक्तिगत माउस(चित्रा 2K)में दो कैप्सूल संलग्न करना संभव है। इस मामले में, कैप्सूल के बीच न्यूनतम 3 मिमी जगह की आवश्यकता होती है और मुंडा क्षेत्र को उचित रूप से बढ़ाया जाना चाहिए। - पिंजरे में चूहों को वापस।
4. टिकों का संग्रह
- ऊपर चरण 2.1 में माउस को एनेस्थेटाइज करें।
- एक स्केलपेल के साथ प्लास्टिक के लिए एक क्रॉस आकार का कट(चित्रा 3A)बनाएं।
नोट: यह क्रॉस आकार का कट आवश्यक होने पर एंगोर्ड टिक या फीडिंग टिकों की टुकड़ी का आसान संग्रह सक्षम बनाता है। - यदि आवश्यक हो, तो पारदर्शी प्लास्टिक (20 मिमी व्यास, चित्रा 3B)के लिए चिपकने वाला प्लास्टिक पैच चिपकाकर कैप्सूल को फिर से बंद करें।
नोट: यदि कई समय बिंदुओं पर टिकों का संग्रह वांछित है, तो एक ही चिपचिपा प्लास्टिक पैच का उपयोग किया जा सकता है। यदि प्रोटोकॉल की आवश्यकता होती है, तो कोई भी माउस को इच्छामृत्यु दे सकता है, कैप्सूल को हटा सकता है, और टिकों(चित्र 3सी)को इकट्ठा/अलग कर सकता है।
5. चूहों की वसूली
- चूहों को एक अतिरिक्त सप्ताह के लिए पिंजरे में रखें।
- कैप्सूल को प्राकृतिक रूप से अलग होने दें।
नोट: इस मामले में, कैप्सूल गिरने में लगभग 8-9 दिन लगते हैं। जब कैप्सूल हटा दिया जाता है, तो चूहों की त्वचा पर असामान्य प्रतिक्रियाओं की जांच करना महत्वपूर्ण है। जलन के मामले में एक एमोलिएंट लोशन लागू होता है, हालांकि आम तौर पर किसी उपचार की आवश्यकता नहीं होती है। यदि नैतिक प्रोटोकॉल अनुमति देता है, तो बरामद चूहों(चित्रा 3 डी)को एक और टिक उपद्रव या विभिन्न प्रयोग (एस) के लिए पुन: इस्तेमाल किया जा सकता है।
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Representative Results
हम माउस की पीठ(चित्रा 2)पर लागू ईवा-फोम कैप्सूल में अपरिपक्व हार्ड टिक चरणों को खिलाने के लिए विस्तृत कदम-दर-कदम विधि का प्रस्ताव करते हैं। यह गैर-श्रमसाध्य प्रोटोकॉल विभिन्न प्रकार के प्रयोगों के लिए उपयुक्त है जब सटीक टिक निगरानी और संग्रह की आवश्यकता होती है। इस विधि के मुख्य फायदे इसकी सादगी, आसानी से सुलभ लागत प्रभावी सामग्री, और छोटी अवधि है। इसके अलावा, हम एक माउस व्यक्ति(चित्रा 2K)को दो कैप्सूल संलग्न करने में सफल रहे, जिससे हमें एक ही जानवर पर टिकों के दो अलग-अलग समूहों को खिलाने की अनुमति मिली। अत्यधिक प्रभावी, तेजी से सुखाने, और गैर परेशान लेटेक्स गोंद का उपयोग यह सुनिश्चित करता है कि कैप्सूल 3 मिनट के भीतर दृढ़ता से जुड़ा हुआ है। इसके अलावा , कैप्सूल कम से कम एक सप्ताह तक जुड़ा रहा,( चित्र2जे) जो अधिकांश अपरिपक्व कठोर टिक प्रजातियों 21 ,22, 23,,24के लिए पर्याप्त समय था ।2324 कैप्सूल लोच के कारण, रक्त संग्रह या अन्य उद्देश्यों के लिए माउस का आगे हेरफेर बहुत सुविधाजनक था। यह प्रक्रिया जानवरों को पुन: उपयोग करने और इच्छामृत्यु से बचने का अवसर देने वाले प्रयोगों(चित्रा 3 डी)के बाद चूहों की पूरी वसूली की भी अनुमति देती है। हमारे सिस्टम का सफलतापूर्वक उपयोग Ixodes रिसिनस नस्लों (चित्रा 4)को खिलाने के लिए किया गया है। C57BL/6 और BALB/cByJ माउस उपभेदों में क्रमशः एक मध्यम से उच्च engorgement सफलता दर प्राप्त की गई थी । दोनों ही मामलों में सभी नस्लों ने 4 - 5 दिनों के भीतर भोजन समाप्त कर दिया, जबकि बहुमत (~ 75%) चौथे दिन बंद गिरा ।
चित्रा 1: ईवा-फोम कैप्सूल तैयारी। (A)ईवा-फोम (काला) और चिपकने वाला डबल चिपचिपा फोम (सफेद) का लगाव । (ख)चमड़े के छेद घूंसे का उपयोग कर 20 मिमी व्यास बाहरी और 12 मिमी इनर सर्कल काटना । (ग)चिपकने वाले डबल चिपचिपा फोम से पेपर प्रोटेक्शन टेप को हटाना । (घ)कैप्सूल के लिए पारदर्शी प्लास्टिक की लगाव । (ई)पारदर्शी प्लास्टिक में स्लिट को स्केलपेल से काटना। (च)प्लास्टिक में एंटोमोलॉजिकल पिन का उपयोग करके छेद का निर्माण। (जी-एच) कैप्सूल और आयामों के विभिन्न भागों की योजनाबद्ध ड्राइंग। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: चूहों और टिक उपद्रव के लिए कैप्सूल चिपकाना। (क) शेविंग माउस का बैक पूर्वकाल हिस्सा।(ख)कैप्सूल के ईवा-फोम साइड में लेटेक्स गोंद का आवेदन। (ग)माउस के लिए कैप्सूल की लगाव। (घ)पारदर्शी प्लास्टिक में कटौती के माध्यम से कैप्सूल में अप्सरा रखना । (ई)लार्वा उपद्रव से पहले चिपकने वाले डबल चिपचिपा फोम से पेपर प्रोटेक्शन टेप छीलने। (एफ)एक कट सिरिंज का उपयोग कर कैप्सूल के अंदर लार्वा के इंजेक्शन । (जी)पारदर्शी प्लास्टिक के साथ कैप्सूल बंद करना। (ज)कैप्सूल के चारों ओर एक सुरक्षात्मक प्लास्टिक बैंड रखना। (I)संलग्न कैप्सूल के साथ माउस - 1सेंट डे। (जम्मू)संलग्न कैप्सूल के साथ माउस - 7दिन। (K)माउस दो कैप्सूल संलग्न के साथ। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3: टिक संग्रह और माउस वसूली। (ए)टिक कलेक्शन के लिए क्रॉस-शेप ओपनिंग काटना । (ख)चिपकने वाले प्लास्टिक पैच के साथ कैप्सूल को फिर से सील करना। (ग)एक इच्छामृत्यु माउस से कैप्सूल हटाने। तीर संलग्न टिकों को दिखाते हैं। (घ)कैप्सूल से गिरा के बाद बरामद माउस । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 4: चूहों पर भोजन करने वाले Ixodes रिसिनस नस्लों की एन्गोर्जमेंट सफलता और भोजन अवधि। (A)C57BL/6 और BALB/cByJ चूहों में engorged नस्लों का कुल प्रतिशत । (B)C57BL/6 और BALB/cByJ चूहों में अप्सरा engorgement की अवधि । पीड़ित नस्लों के लिए (एन) संख्या क्रमशः 15 व्यक्तिगत C57BL/6 और 5 व्यक्तिगत BALB/cByJ चूहों के लिए १३० और 25 हैं । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
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Discussion
प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम माउस त्वचा के लिए कैप्सूल की फर्म चिपकाना है। इसलिए, लेटेक्स गोंद को कैप्सूल की पूरी ईवा-फोम सतह पर समरूप रूप से लागू किया जाना चाहिए और 3 मिनट के लिए लगातार दबाव लागू किया जाना चाहिए, विशेष रूप से कैप्सूल के बाईं और दाईं ओर। हम अपने पीछे के पंजे का उपयोग करके माउस द्वारा इसे हटाने से बचने के लिए कैप्सूल को जितनी जल्दी हो सके आगे की ओर प्लेसमेंट की सलाह देते हैं। हमारे प्रयोगों में, केवल ईवा-फोम और लेटेक्स गोंद के माउस त्वचा के आसंजन को मान्य किया गया है और हम विभिन्न सामग्रियों का उपयोग करके समान परिणामों की उपलब्धि की गारंटी नहीं दे सकते हैं।
हमारे प्रयोगों के दौरान, पहले सात दिनों के भीतर त्वचा से कैप्सूल की टुकड़ी नहीं देखी गई थी। हम दृढ़ता से प्लास्टिक बैंड(चित्रा 2H)का उपयोग करके कैप्सूल की बाहरी सतह की रक्षा करने की सलाह देते हैं। यदि टिक फीडिंग के दौरान सुरक्षात्मक बैंड क्षतिग्रस्त हो जाता है, तो इसे एक नए के साथ प्रतिस्थापित किया जा सकता है। कैप्सूल के व्यास को विभिन्न माउस तनाव आकारों के लिए संशोधित किया जा सकता है। हम कम से कम दो बार दैनिक रूप से भोजन टिकों की निगरानी करने और उनके व्यस्करण से बचने के लिए टुकड़ी के तुरंत बाद engorged टिकों को इकट्ठा करने का सुझाव देते हैं।
पीड़ित टिकों की संख्या कैप्सूल व्यास के साथ-साथ मेजबान आकार से सीमित है। हमारे प्रयोगों में हमने एक माउस के लिए अधिकतम 20 नस्लों या आई रिसिनस के 100 लार्वा का उपयोग किया। बड़े आकार के लिए एम्बलियोम्मा या हायलोमा एसपी, आदि रक्त हानि से मेजबान को नुकसान से बचने के लिए पीड़ित टिकों की संख्या कम की जानी चाहिए19,26,27. इसलिए, यह तकनीक टिक पालन उपनिवेशों के रखरखाव के लिए उपयुक्त नहीं है, जहां बड़ी संख्या में टिकों को खिलाने की आवश्यकता होती है। इस उद्देश्य के लिए, खरगोश या भेड़ जैसे बड़े मेजबानों को समग्र पशु आवश्यकता को कम करने के लिए20,,27 की सिफारिश की जाती है।
हमारी तकनीक विभिन्न प्रकार के प्रयोगों के लिए उपयुक्त है जहां माउस मॉडल की आवश्यकता होती है, और आसान संग्रह और/या उनके जैविक मापदंडों की निगरानी के लिए संलग्न क्षेत्र में टिकों को रखना आवश्यक है । अन्य तकनीकों की तुलना में10,,11,,12,,13,14,,15,,,16,17,18, यहसरल प्रोटोकॉल प्रति माउस समग्र संज्ञाहरण समय (लगभग 5 मिनट) को बहुत कम कर देता है और तेजी से सूखने, गैर-परेशान लेटेक्स गोंद जानवर को नुकसान नहीं पहुंचाता है।,, अत्यधिक चिपकने वाला ईवा-फोम कैप्सूल टिक फीडिंग क्षेत्र की रक्षा करता है और मुक्त संक्रमण प्रणालियों10, 11, 12, 13, 15में रिपोर्ट किए गए11,12,खोए,15हुए,क्षतिग्रस्त या खाए गए टिकोंकेजोखिम को कम करता है। प्रस्तावित तकनीक का बड़ा लाभ फ्लैट आकार कैप्सूल और उसकी फर्म लंबे समय से त्वचा के लिए स्थाई लगाव माउस के साथ आसान हेरफेर की अनुमति यदि आवश्यक है । प्रयोग(चित्रा 3 डी)के बाद माउस होस्ट की पूरी वसूली की अनुमति देने वाले प्रयोगात्मक जानवरों को असुविधा को कम करने के लिए लोचदार और गैर-परेशान सामग्रियों के उपयोग पर विशेष ध्यान दिया गया है।
टिक-होस्ट-रोगजनक इंटरैक्शन, होस्ट प्रतिरक्षा प्रणालियों में हेरफेर, विभिन्न टिक नियंत्रण उपायों या टिक जीव विज्ञान का मूल्यांकन करते समय विभिन्न प्रयोगों के लिए विधि का उपयोग किए जाने की उम्मीद है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
हम एलेन बर्नियर फ्रेंच नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ एग्रीकल्चरल रिसर्च (INRAE) और ओकेन ले बिडेल (ANSES) की तकनीकी सहायता को स्वीकार करते हैं । इस अध्ययन को डीआईएम वन हेल्थ - रेजियन आइल-डी-फ्रांस (परियोजना का संक्षिप्त नाम: न्यूरोपाटिक)द्वारा समर्थित किया गया था। चूहों को ANSES द्वारा खरीदा गया था। डॉ जेफरी एल ब्लेयर पांडुलिपि के पहले संस्करण की समीक्षा के लिए स्वीकार किया है ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EVA-foam 2 mm thick, (low density) | Cosplay Shop | EVA-45kg (950/450/2 mm) | It can be ordered also via Amazon (ref. no. B07BLMJDXD) |
| Heat Shrink Tubing Electric Wire Wrap Sleeve 31mm/1.22 inches | Amazon | B0848S3S6T | Different diameters of Heat Shrink Tubing are available via Amazon. |
| Mice BALB/cByJ | Charles River | Strain code 627 | |
| Mice C57BL/6 | Charles River | Strain code 664 | |
| No-toxic Latex Glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | Also available also via Amazon (ref. no. B001RQCTUU) |
| Punch Tool Hand Art Tool | Amazon | B07QPWNGBF | Saled by amazon as Leather Working Tools 1-25mm Round Steel Leather Craft Cutter Working for Belt Strap |
| PVC Binding Covers Transparent | Amazon | B078BNLSNP | Any transparent PVC sheet of ticknes between 0.150 mm to 0.180 mm is suitable |
| Self Adhesive Pad Sponge Double Coated Foam Tape | Amazon | B07RHDZ35J | Saled by amazon as 2 Rolls Double Sided Foam Tape, Super Strong White Mounting Tape Foam |
| Transparent seal stickers (20 mm diameter circles) | Amazon | B01DAA6X66 |
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