نحن نصف طريقة معدلة تعتمد على أجار مصممة لقياس الآثار المضادة للفطريات للمنتجات المشتقة من النباتات. يمكن تقييم المساهمات المتقلبة وغير المتقلبة في النشاط المضاد للفطريات من خلال هذا البروتوكول. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن قياس الفعالية ضد الفطريات في المراحل التنموية الرئيسية في إعداد تجريبي واحد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
قياس النشاط المتطاير وغير المتطاير المضاد للفطريات لمنتجات التحكم الحيوي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ويستند البروتوكول الموصوف على تقنية نقل المكونات التي تسمح بتحديد دقيق لكميات الكائنات الحية الدقيقة ومراحل نموها. وينتشر عدد محدد من الجراثيم على لوحة أجار. يتم احتضان هذه الصفيحة لفترة محددة للسماح للفطريات بالوصول إلى مرحلة النمو المتوقعة ، باستثناء الجراثيم التي لا يلزم حضانتها. يتم سحب المقابس أجار التي تغطيها الجراثيم، الهيجا، أو الميسيليوم المقبل ونقلها على وسائل الإعلام أجار التي تحتوي على مركب مضاد للفطريات لاختبارها إما وضعها على مسافة من الفطريات أو في اتصال. هذه الطريقة قابلة للتطبيق لاختبار كل من المستخلصات السائلة والعينات الصلبة (المساحيق). وهي مناسبة بشكل خاص لتحديد المساهمات النسبية للعوامل المتطايرة وغير المتطايرة في الخلائط النشطة بيولوجيا وتحديد آثارها ، وتحديدا على الجراثيم والهيجا المبكرة والميسيليوم.
هذه الطريقة ذات صلة كبيرة لتوصيف النشاط المضاد للفطريات من منتجات المكافحة الحيوية ، ولا سيما المنتجات المشتقة من النباتات. في الواقع، لمعالجة النبات، يمكن استخدام النتائج لتوجيه اختيار طريقة التطبيق وتحديد عتبات الزناد.
المقدمة
يمكن أن تصل الخسائر العالمية من الفواكه والخضروات إلى 50٪ من الإنتاج1 وتنجم في الغالب عن تسوس الأغذية الناجم عن تلف الفطريات في الحقل أو أثناء تخزين ما بعد الحصاد2،3 ، علىالرغممن الاستخدام الواسع لمبيدات الفطريات الاصطناعية منذ منتصف القرن العشرين4. ويجري حاليا إعادة النظر في استخدام هذه المواد لأنها تمثل مخاطر بيئية وصحية خطيرة. كما تظهر العواقب الضارة لاستخدامها في جميع أنحاء النظم الإيكولوجية والأدلة على الآثار الصحية المحتملة قد تراكمت5،6، ويجري تطوير بدائل جديدة لاستراتيجيات وقائية قديمة لعلاج ما قبل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد إنوكلا
- قبل التجربة، وضع 5 ميكرولتر من تريتشوديرما spp. SBT10-2018 الجراثيم المخزنة في 4 درجة مئوية على البطاطا dextrose أجار المتوسطة (المساعد الشخصي الرقمي) واحتضان لمدة 4 أيام في 30 درجة مئوية مع التعرض للضوء العادية لتعزيز تشكيل كونيديا42 (الشكل 1، لوحة A).
ملاحظة: تريشوديرما SPP. تم عزل SBT10-2018 عن الخشب ويستخدم كنموذج في هذه الدراسة لنموه السريع وسهولة استعادة البوغ. يتم الحفاظ على هذه السلالة من قبل مختبرنا. - استرداد كونيديا (الشكل 1، لوحة A)
- وضع 3 مل من 0.05٪ توين-20 على الماسيليوم تريتشوديرما.
- استخدا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لتقييم قدرة الطريقة الكمية على التمييز بين طريقة عمل أنواع مختلفة من المركبات المضادة للفطريات ، قارنا فعالية ثلاثة عوامل مضادة للفطريات معروفة. Carbendazim هو مبيد فطري اصطناعي غير متطاير تم استخدامه على نطاق واسع للسيطرة على مجموعة واسعة من الأمراض الفطرية في النباتات39،40. وقد وصفت زيت الغدة الصعترية الأساسية إلى حد كبير لنشاطها المضاد للبكتيريا ومضاد للفطريات ويستخدم كعامل المواد الحافظة للأغذية الطبيعية41. وقد تم اختيار مسحوق.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
النهج المعروض هنا يسمح لتقييم الخصائص المضادة للفطريات من المنتجات المشتقة من النباتات المعالجة الحد الأدنى. في هذا البروتوكول ، يتم تحقيق توزيع متجانس للجراثيم على سطح أجار باستخدام حبات زجاجية عيار 2 مم. تتطلب هذه الخطوة مهارات التعامل مع توزيع الخرز بشكل صحيح والحصول على نتائج قابلة للاستنساخ ، مما يسمح في نهاية المطاف بالمقارنة بين الآثار المضادة للفطريات في مراحل مختلفة من نمو الفطريات. وجدنا أن حبات الزجاج 5 ملم أو الدوران المفرط في حين التجانس أثناء الانتشار يمكن أن يسبب قطر النمو المتغير. لذلك، نوصي التدريب على ت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
ونحن ممتنون جدا لفرانك ييتس على نصيحته الثمينة. تم دعم هذا العمل من قبل سوب للتكنولوجيا الحيوية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الأوتوكلاف-فاكوكسلاف 24B+ | Melag | ||
| Carbendazim | Sigma | 378674-100G | |
| الماء | |||
| أنابيب Eppendorf | Sarstedt | 72.706 | 1.5 مل |
| أنابيب الصقور | Sarstedt | 547254 | 50 مل |
| خمسة ملليمترات أنبوب الفولاذ المقاوم | للصدأ متجر | البيع بالتجزئة / | |
| مجفف الطعام | Sancusto | ستة صواني | |
| مسحوق | الثوممتجر | ||
| خرز زجاجي | CLOUP | 65020 |  2 مم |
| عد مقياس الدم | Jeulin | 713442 | / |
| حاضنة | Memmert | & nbsp ؛ UM400 | 30 درجة ؛ C |
| مطحنة سكين | بوش | TSM6A013B | |
| عداد الخلايا اليدوي | Labbox | HCNT-001-001 | / |
| قياس مسطرة | متجر | ||
| خزانات السلامة الميكروبيولوجية | أسرع | BHA36 ، النوع الثاني ، Cat 2 | |
| ماصة دقيقة | Mettler-Toledo | 17014407 | 100 - 1000 & micro ؛ L |
| ماصة دقيقة | Mettler-Toledo | 17014411 | 20 - 200 & micro; L |
| ماصة دقيقة | Mettler-Toledo | 17014412 | 2 - 20 & micro; L |
| طبق بتري | Sarstedt | 82-1194500 |  55 مم |
| طبق بتري | Sarstedt | 82-1473 ؛ |  90 مم |
| وحدات تحكم الماصة-EASY 60 | Labbox | EASY-P60-001 | / |
| Potato Dextrose Agar | Sigma | 70139-500G | |
| مقياس دقيق- RADWAG | Grosseron | B126698 | AS220. R2-ML 220 جم / 0.1 مجم ؛ |
| أشعل النار | Sarstedt | 86-1569001 | / |
| مجهر عكسي AE31E ثلاثي | Grosseron | M097917 | / |
| ماصة معقمة متدرجة | Sarstedt | 1254001 | 10 مل |
| زيت الغدة الصعترية العطري | صيدلية | أساسي 100٪ | |
| نصائح 1000 & micro ؛ L | Sarstedt | 70.762010 | |
| نصائح 20 & L | Sarstedt | 70.760012 | |
| نصائح 200 & L | Sarstedt | 70.760002 | |
| بيع بالتجزئة | لاختيار الأسنان | ||
| سلالة | سلالة مختبر LRPIA | ||
| Tween-20 & nbsp ؛ | سيجما | P1379-250ML | |
| Tween-80 | Sigma | P1754-1L | |
| ملاقط | Labbox | FORS-001-002 | / |
المراجع
- FAO. Global food losses and food waste - Extent, causes and prevention. FAO. , Rome. (2011).
- da Cruz Cabral, L., Fernández Pinto, V., Patriarca, A. Application of plant compounds to control fungal spoilage and mycotoxin production in foods. Intern....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
