Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Oocyte Vitrification के माध्यम से प्रजनन संरक्षण: नैदानिक और प्रयोगशाला परिप्रेक्ष्य

Published: September 16, 2021 doi: 10.3791/61963
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Clinica Valle Giulia, GeneraLife IVF

Summary

ओसाइट क्रायोप्रिजर्वेशन को कई अंतरराष्ट्रीय वैज्ञानिक समाजों द्वारा पोस्टप्बर्टल महिलाओं में प्रजनन संरक्षण के लिए सोने के मानक के रूप में मान्यता दी जाती है। उपयुक्त नैदानिक और प्रयोगशाला रणनीतियां प्रजनन संरक्षण उपचारों की अधिकतम प्रभावकारिता, दक्षता और सुरक्षा सुनिश्चित करती हैं।

Abstract

महिला प्रजनन क्षमता का संरक्षण एक बहुआयामी स्वास्थ्य देखभाल प्रणाली में महत्वपूर्ण है जो रोगियों के भविष्य के जीवन की गुणवत्ता का ख्याल रखता है । ऊसाइट क्रायोप्रिजर्वेशन को कई अंतरराष्ट्रीय वैज्ञानिक समाजों द्वारा पोस्टप्बर्टल महिलाओं में प्रजनन संरक्षण के लिए सोने के मानक के रूप में मान्यता दी जाती है, दोनों चिकित्सा और गैर-चिकित्सा संकेतों के लिए। मुख्य चिकित्सा संकेत ऑन्कोलॉजिक रोग, स्त्रीरोग रोग जैसे गंभीर एंडोमेट्रियोसिस, अंडाशय रिजर्व से समझौता करने वाली प्रणालीगत बीमारियां, और समय से पहले रजोनिवृत्ति से जुड़ी आनुवंशिक स्थितियां हैं। यह पत्र उद्देश्य और साक्ष्य आधारित परामर्श के लिए सिफारिशों को रेखांकित करके प्रजनन संरक्षण उपचार के पूरे नैदानिक और प्रयोगशाला कार्य का वर्णन करता है । इसके अलावा, यह प्रक्रिया की प्रभावशीलता पर केंद्रित है और अंडाशय रिजर्व का पूरी तरह से दोहन करने और कम से कम संभव समय में प्राप्त oocytes की संख्या को अधिकतम करने के लिए सबसे उपयुक्त रणनीतियों का वर्णन करता है। ओवेरियन रिजर्व का मूल्यांकन, एक आदर्श उत्तेजना प्रोटोकॉल की परिभाषा, साथ ही ओसाइट पुनर्प्राप्ति, निंदा, और विट्रीफिकेशन प्रक्रियाओं को उनकी प्रभावकारिता, दक्षता और सुरक्षा को अधिकतम करने के दृष्टिकोण के साथ विस्तृत किया गया है।

Introduction

मानव ओसाइट्स के लिए एक कुशल क्रायोप्रिजर्वेशन कार्यक्रम का विकास और कार्यान्वयन प्रजनन चिकित्सा में एक महत्वपूर्ण सफलता रही है। हाल के सबूतों के अनुसार, विट्रीफिकेशन सबसे प्रभावी रणनीति है जो मेटाफेज II (एमआईआई) ओसाइट्स को क्रायोप्रेरिज करने के लिए है, क्योंकि इसके परिणामस्वरूप रोगी की आबादी (बांझ रोगियों या ओसाइट डोनेशन प्रोग्राम)1,2,3से स्वतंत्र रूप से धीमी ठंड की तुलना में सांख्यिकीय रूप से उच्च जीवित रहने की दर होती है। ओसाइट विट्रीफिकेशन की उल्लेखनीय उपलब्धियों ने अमेरिकन सोसाइटी फॉर रिप्रोडक्टिव मेडिसिन (एएसआरएम) और सोसाइटी फॉर असिस्टेड रिप्रोडक्टिव टेक्नोलॉजी (SART) की अभ्यास समितियों का नेतृत्व किया ताकि इस तकनीक को पोस्टपॉबर्टल महिलाओं में वैकल्पिक प्रजनन संरक्षण के लिए सबसे प्रभावी माना जा सके, दोनों चिकित्सा और गैर-चिकित्सा संकेत4,5,6के लिए। प्रजनन संरक्षण के लिए चिकित्सा संकेतों में (i) कैंसर और ऑटोइम्यून रोग शामिलहैं जिन्हें रेडियोथेरेपी, साइटोटॉक्सिक कीमोथेरेपी और एंडोक्राइन थेरेपी जैसे उपचारों की आवश्यकता होती है (जिसका अंडाशय रिजर्व पर हानिकारक प्रभाव मातृ आयु के साथ-साथ उपचार के प्रकार और खुराक से जुड़ा हुआ है); (ii) बार-बार या कट्टरपंथी सर्जरी (जैसे एंडोमेट्रियोसिस) की आवश्यकता वाले अंडाशय रोग8; और (iii) आनुवंशिक स्थितियां (जैसे, एक्स-नाजुक) या समय से पहले अंडाशय की विफलता। इसके अलावा, प्रजनन संरक्षण उन सभी महिलाओं के लिए एक मूल्यवान विकल्प बन गया है जिन्होंने गैर-चिकित्सा कारणों (जिसे सामाजिक ठंड के रूप में भी जाना जाता है) के लिए अपने माता-पिता के उद्देश्य को पूरा नहीं किया है।

प्रजनन संरक्षण के लिए संकेत की परवाह किए बिना और प्रजनन संरक्षण पर प्रमुख अंतरराष्ट्रीय दिशा निर्देशों के अनुसार, सभी रोगियों को अपने oocytes vitrify के लिए तैयार उचित परामर्श प्राप्त करने के लिए सफलता की अपनी यथार्थवादी संभावना के बारे में सूचित किया जाना चाहिए, लागत, जोखिम, और प्रक्रिया की सीमाओं9,10,11,12,13। सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि यह स्पष्ट होना चाहिए कि एमआईआई ओसाइट्स की एक पलटन को विट्रीव करने से गर्भावस्था सुनिश्चित नहीं होती है, लेकिन यह यदि आवश्यक हो तो14,विट्रो निषेचन (आईवीएफ) उपचार में भविष्य के लिए सफलता का एक उच्च मौका प्रदान करता है। इस संबंध में, ओसाइट विट्रीफिकेशन के समय महिला की उम्र निश्चित रूप से सबसे महत्वपूर्ण सीमित कारक है15 उन्नत मातृ आयु (एएमए; >35 वर्ष) महिला बांझपन16का मुख्य कारण है। ओवेरियन रिजर्व में प्रगतिशील कमी के अलावा, एएमए मेटाबोलिज्म, एपिजेनेटिक विनियमन, सेल चक्र चौकियों और मेइटोटिक अलगाव17जैसे दोषपूर्ण शारीरिक मार्गों के कारण ओसाइट क्षमता की हानि से जुड़ा हुआ है। इसलिए, विट्रिफी के लिए अंडे की उचित संख्या मुख्य रूप से मातृ आयु पर निर्भर करती है। 36 साल से छोटी महिलाओं में, कम से कम 8-10 MII oocytes18 सफलता की संभावना को अधिकतम करने के लिए आवश्यक हैं। सामान्य तौर पर विट्रीफाइड ओसाइट्स की संख्या जितनी अधिक होगी, सफलता की संभावना उतनी ही अधिक होती है। इसलिए, अंडाशय रिजर्व मार्कर जैसे एंटी-मुलेरियन हार्मोन (एएमएच) के स्तर या एंट्रल कूप गिनती (एएफसी) के अनुसार अंडाशय उत्तेजना सिलाई कम से कम संभव समय में अंडाशय रिजर्व का पूरी तरह से फायदा उठाने के लिए महत्वपूर्ण है।

प्रजनन संरक्षण के लिए रोगियों को नामांकित करते समय पूरी प्रक्रिया की सुरक्षा अन्य महत्वपूर्ण मुद्दा है। चिकित्सकों को जोखिमों को कम करने और नियंत्रण-सुरक्षित दृष्टिकोणों का उपयोग करके (i) अंडाशय हाइपरस्टिमुलेशन सिंड्रोम (ओएचएस) को रोकने के लिए सर्वोत्तम रणनीतियों को नियोजित करना चाहिए जैसे कि गोंडोट्रोफिन-रिलीजिंग हार्मोन (जीएनआरएच) विरोधी प्रोटोकॉल के बाद जीएनआरएच एगोनिस्ट ट्रिगर19 और (ii) रिमोट, अभी तक संभव है, पेरिटोनियल रक्तस्राव के जोखिम, श्रोणि संरचनाओं (मूत्राशय, आंत्र, परिशिष्ट, नसों) या ओसाइट पुनः प्राप्ति के दौरान पेल्विक संक्रमण पर चोट। अंत में, (iii) उत्तेजना के लिए पारंपरिक आहार सुपराफिजियोलॉजिक सीरम एस्ट्रोडिओल से जुड़े होते हैं और इसलिए, स्तन कैंसर जैसे एस्ट्रोजन-संवेदनशील रोगों में अनुशंसित नहीं हैं। इन मामलों में 20,21 - 21के लिए सुगंधअवरोधकों (जैसे लेट्रोजोल या टैमोक्सिफेन) से जुड़े प्रोटोकॉल अधिक उपयुक्त हैं । प्रयोगशाला सेटिंग में, ओसाइट विट्रीफिकेशन के लिए सबसे व्यापक प्रोटोकॉल अभी भी कुवायामा और सहयोगियों द्वारा वर्णित एक है2,23,जिसमें एक स्टेपवाइज प्रक्रिया शामिल है जिसमें क्रायोप्रोटेक्टेंट (सीपीए) के क्रमिक जोड़ शामिल हैं। पहले चरण (संतुलन/निर्जलीकरण) में, ऊसाइट्स को सीपीए समाधान में उजागर किया गया है जिसमें 7.5% v/v एथिलीन ग्लाइकोल और 7.5% v/v डिमेथिल सल्फॉक्साइड (डीएमएसओ) शामिल हैं, जबकि दूसरे चरण में, ओसाइट्स को 15% v/v एथिलीन ग्लाइकोल और 15% v/v DMSO, प्लस ०.५ मोल/एल सुक्रोज के साथ विट्रीफिकेशन सॉल्यूशन में ले जाया जाता है । विट्रीफिकेशन के माध्यम में एक छोटी इनक्यूबेशन के बाद, ओसाइट्स को विशेष रूप से डिजाइन, खुले क्रायोडेविस में रखा जा सकता है और अंत में उपयोग तक संग्रहीत होने तक -196 डिग्री सेल्सियस पर तरल नाइट्रोजन में गिर जाता है।

यहां, एक प्रजनन संरक्षण उपचार के पूरे नैदानिक और प्रयोगशाला कार्य-अप (i) द्वारा उद्देश्य और साक्ष्य आधारित परामर्श के लिए सिफारिशों को रेखांकित करते हुए वर्णित किया गया है, (ii) प्रक्रिया की लागत प्रभावशीलता पर ध्यान केंद्रित करते हुए, और (iii) ओवेरियन रिजर्व का पूरी तरह से दोहन करने और कम से कम संभव समय में प्राप्त ओसाइट्स की संख्या को अधिकतम करने के लिए सबसे उपयुक्त रणनीतियों का वर्णन करता है। ओवेरियन रिजर्व का मूल्यांकन, एक आदर्श उत्तेजना प्रोटोकॉल की परिभाषा, साथ ही ओसाइट पुनर्प्राप्ति, निंदा, और विट्रीफिकेशन प्रक्रियाओं को उनकी प्रभावकारिता, दक्षता और सुरक्षा को अधिकतम करने के दृष्टिकोण के साथ विस्तृत किया जाएगा। चूंकि साहित्य में इस प्रोटोकॉल के अन्य प्रोटोकॉल या अनुकूलन मौजूद हैं, इसलिए इस पांडुलिपि के प्रतिनिधि परिणाम और चर्चा अनुभाग केवल इस प्रक्रिया पर लागू होते हैं।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. वर्क-अप और नैदानिक परामर्श

नोट: ऑन्कोलॉजिक कारणों से प्रजनन संरक्षण की आवश्यकता वाले रोगियों के मामले में, यह सुनिश्चित करें कि परामर्श के लिए कोई प्रतीक्षा सूची नहीं है, और नियुक्ति जितनी जल्दी हो सके प्रदान की जाती है।

  1. चिकित्सा इतिहास और पिछले दस्तावेज की जांच करें, और रोगी की सामान्य स्वास्थ्य स्थिति का आकलन करें।
  2. एक रिलेशनल डेटाबेस में सभी जानकारी (कैंसर रोगियों के मामले में अंडाशय उत्तेजना से गुजरना करने के लिए ऑन्कोलॉजिस्ट की मंजूरी सहित) रिकॉर्ड करें।
  3. प्रक्रिया की व्यवहार्यता के बारे में विशिष्ट परामर्श के साथ रोगी प्रदान करते हैं। प्रक्रिया के चरणों (अंडाशय उत्तेजना, ओसाइट पुनर्प्राप्ति, ओसाइट विट्रीफिकेशन) की व्याख्या करें, और उसे सफलता की यथार्थवादी संभावनाओं के बारे में सूचित करें (मुख्य रूप से मातृ आयु पर निर्भर और ओसाइट पुनर्प्राप्ति के समय एमआईआई ओसाइट्स की अपेक्षित संख्या), साथ ही प्रक्रिया की लागत और सीमाएं।
  4. अंडाशय रिजर्व (यानी एएफसी) के बारे में जानकारी प्राप्त करने और अंडा संग्रह के लिए अंडाशय की पहुंच का आकलन करने के लिए ट्रांसवेजिनल अल्ट्रासाउंड करें।
  5. ब्लड ग्रुप और रीसस फैक्टर, जमाव स्क्रीनिंग (ब्लड काउंट, प्रोथ्रोम्बन, थ्रोम्बोप्लस्टिन, फिब्रिनोजेन, प्रोटीन सी, प्रोटीन एस, एंटी थ्रोम्बिन III, होमोसिस्टीन), और संक्रामक रोगों (हेपेटाइटिस बी, हेपेटाइटिस सी, एचआईवी, वेनेरियल डिजीज रिसर्च लेबोरेटरी/ट्रेपोनेमा पल्लीडम हेमेग्लुटिनेशन एससे) का आकलन करने के लिए रक्त परीक्षण का अनुरोध करें ।
    नोट: गैर-जरूरी चिकित्सा कारणों के लिए प्रजनन संरक्षण कार्यक्रम तक पहुंचने वाले रोगियों के मामले में, अधिक व्यापक मूल्यांकन में बेसल कूप-उत्तेजक हार्मोन (एफएसएच), ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच), एस्ट्रडिओल, एएमएच, स्तन परीक्षा, पैपनिसोलाउ परीक्षण, जमाना की आनुवंशिक स्क्रीनिंग (लेडेन और प्रोथ्रोम्बिन के कारक वी), और टॉर्च स्क्रीनिंग (टॉक्सोप्लास्मस, रूबेला, साइकोटोमेक्स्टो शामिल हो सकते हैं)।
  6. कार्डियोलॉजिकल मूल्यांकन (इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम) का अनुरोध करें।
  7. मनोवैज्ञानिक परामर्श की सलाह दें।

2. प्रजनन संरक्षण के लिए नियंत्रित अंडाशय उत्तेजना प्रोटोकॉल

नोट: जब कैंसर के इलाज शुरू करने से पहले उपलब्ध समय सीमित है, तो यादृच्छिक-शुरू प्रोटोकॉल (यानी, मासिक धर्म चक्र के दौरान किसी भी समय अंडाशय उत्तेजना शुरू करना) को ओन्कोलॉजिक रोगियों में अंडाशय उत्तेजना के लिए सिफारिश की जाती है जो प्रजनन संरक्षण के लिए उम्मीदवार हैं। गैर-जरूरी चिकित्सा कारणों या सामाजिक कारणों के लिए एक प्रजनन संरक्षण कार्यक्रम में, प्रारंभिक कूप चरण में शुरू होने वाली पारंपरिक उत्तेजना बेहतर है, और मासिक धर्म चक्र के आधार पर अंडाशय उत्तेजना शुरू हो जाती है। नियंत्रित अंडाशय उत्तेजना (COS) दृष्टिकोण मानव प्रजनन और भ्रूणविज्ञान (ESHRE) दिशा निर्देशों24के हाल ही में यूरोपीय सोसायटी के अनुसार किया जाना चाहिए ।

  1. दर्जी COS रोगी की विशेषताओं और अंडाशय आरक्षित मार्कर, मुख्य रूप से मातृ आयु, FSH, AMH, और एएफसी के अनुसार ।
  2. 150-300 आईयू/डे (विरोधी प्रोटोकॉल) की एक निश्चित खुराक के साथ पुनर्संयोजन या मूत्र एफएसएच का उपयोग करके मासिक धर्म चक्र के दिन 5 पर COS शुरू करें।
    नोट: LH कमी या गरीब-उप-उप-उप-आबादी के साथ एक विशिष्ट रोगी आबादी में, अतिरिक्त एलएच 75/150 आईयू/दिन ओवेरियन प्रतिक्रिया, एलएच स्तर, और स्त्री रोग विशेषज्ञ के फैसले के अनुसार प्रशासित किया जा सकता है ।
  3. एस्ट्रोजन के प्रति संवेदनशील रोगियों में, उत्तेजना के दिन से 7 दिन तक ओसाइट पुनः प्राप्ति के बाद अरोमाटेज़ अवरोधकों (लेट्रोजोल) से जुड़े गोंडोट्रोपिन शामिल हैं।
  4. 4 दिनों के लिए गोंडोट्रोपिन की एक निश्चित खुराक प्रशासित करें।
  5. 5 दिन और फिर हर 2-3 दिनों में कूप विकास की निगरानी करें; अंततः, गोंडोट्रोपिन खुराक को समायोजित करें।
  6. एक बार कम से कम 3 रोम व्यास में 17-18 मिमी तक पहुंच जाते हैं, 0.5 एमएल की खुराक पर जीएनआरएच एगोनिस्ट के एक चमड़े के नीचे बोलस के साथ अंतिम ओसाइट परिपक्वता के लिए ट्रिगर का प्रशासन करते हैं।

3. ऊसाइट पुनर्प्राप्ति

  1. oocyte पुनः प्राप्ति के लिए तैयारी
    1. आवश्यक सामग्री के लिए, सामग्री की मेज कोसंदर्भित करें, और तैयार प्रयोगशाला जूते और संगठन, सर्जिकल फेसमास्क, बाल कवर, सर्जिकल दस्ताने, एक स्थायी गैर विषैले मार्कर, चिमटी, बाँझ छोटे धुंध, डिस्पोजेबल या पुन: प्रयोज्य वीक्षक, योनि सर्जरी उपकरण और सतह कीटाणुनाशक रखें। पुनर्जीवन उपकरण की उपलब्धता सुनिश्चित करें, उलटफेर के लिए संवेदनाहारी दवाएं, एनाफिलेक्टिक शॉक के इलाज के लिए तैयार एक किट, और ऑपरेटिंग रूम में ऑक्सीजन।
    2. सहायता प्राप्त प्रजनन प्रौद्योगिकियों (एआरटी)25में अल्ट्रासाउंड पर ESHRE कार्य समूह की सिफारिशों के अनुसार oocyte पुनर्प्राप्ति प्रक्रिया का प्रदर्शन करें ।
      1. स्नेशन या सामान्य संज्ञाहरण, और प्रोफिलैक्सिस के लिए एंटीबायोटिक दवाओं का प्रशासन करें।
        नोट: इस प्रोटोकॉल में, डीप सेडेशन को प्रोपोफोल (जिसकी खुराक रोगी के वजन के अनुसार समायोजित की जाती है) और फेन्टनाइल के 50-100 माइक्रोग्राम, 1000 मिलीग्राम पैरासिटामोल, और ऑक्सीजन के साथ मास्क वेंटिलेशन की सहायता से प्राप्त की गई थी।
      2. एक वैक्यूम पंप, एक संग्रह एक 17 जी एकल lumen सुई से जुड़े ट्यूब, और एक oocyte-संग्रह ट्यूब से बना एक आकांक्षा इकाई का उपयोग कर oocyte पुनः प्राप्त प्रदर्शन करते हैं । संग्रह के दौरान, ओसाइट्स को नुकसान के जोखिम से बचने के लिए ~ 120 एमएमएचजी के दबाव से अधिक न करें जैसे क्यूमुलस कोशिकाओं को अलग करना या जोना पेलुसिडा को भंग करना।
      3. संस्कृति मीडिया में 37 डिग्री सेल्सियस सुनिश्चित करने के लिए काम करने वाले सतह के तापमान को कैलिब्रेट करें। पूरी प्रक्रिया के दौरान, यहां तक कि क्षणिक तापमान के लिए oocyte जोखिम को कम करें जो उनकी विकास क्षमता को प्रभावित कर सकता है।
      4. ओसाइट पुनर्प्राप्ति के अंत में, डिस्चार्ज से पहले रोगी को 3-4 घंटे के लिए देखें।
  2. ऑपरेशन थियेटर
    1. ऑपरेटिंग रूम में प्रवेश करने से पहले, रोगी की पहचान करें और ओव्यूलेशन ट्रिगर के समय की पुष्टि करें।
    2. रोगी एक स्त्री रोग की स्थिति में ऑपरेटिंग टेबल पर लेट जाओ।
    3. बैक्टीरियल संदूषण को कम करने के लिए ओसाइट पुनर्प्राप्ति से पहले योनि/गर्भाशय ग्रीवा को साफ करें।
    4. अंडाशय की स्थिति और विभिन्न अंगों और रक्त वाहिकाओं के साथ शारीरिक संबंधों का आकलन करने के लिए एक प्रारंभिक ट्रांसवेजिनल अल्ट्रासाउंड करें।
    5. अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन के तहत, योनि की दीवार के माध्यम से और अंडाशय कूप में एक एकल-ल्यूमेन सुई डालें, योनि दीवार और अंडाशय के बीच स्थित अंगों या रक्त वाहिकाओं को घायल न करने का ख्याल रखते हुए।
    6. निकटतम कूप से आकांक्षा शुरू करें और सबसे डिस्टल लोगों पर आगे बढ़ें।
    7. 11-12 मिमी से बड़े व्यास के सभी रोम पंचर, पूरे कूप तरल पदार्थ है, जो तो एक बाँझ ट्यूब में जारी किया जाता है aspirate करने के लिए सुई के "घुमा आंदोलनों" प्रदर्शन ऑपरेटिंग कमरे के ब्लॉक हीटर में पहले से गरम ।
    8. पुनः प्राप्त करने के तुरंत बाद, रोगी की पहचान के विवरण के साथ ट्यूब को सील और लेबल करें।
    9. सुनिश्चित करें कि नर्स प्रयोगशाला में ट्यूब लाती है, जहां तुरंत क्यूमुलस-ओसाइट परिसरों (सीओसी) की उपस्थिति के लिए इसकी जांच की जाती है।
    10. भ्रूणविज्ञानियों को निर्देश दें कि वे प्राप्त सीओसी की कुल संख्या के बारे में चिकित्सक को सूचित करें ।
    11. एक बार प्रक्रिया पहले अंडाशय के लिए पूरा हो गया है, साफ माध्यम के साथ सुई फ्लश, और एक ही प्रक्रिया का उपयोग कर दूसरे अंडाशय के साथ आगे बढ़ना ।
    12. ऊसाइट पुनर्प्राप्ति के बाद, डगलस की थैली में अंडाशय या पैरामेट्रियम की रक्त वाहिकाओं और मुफ्त तरल पदार्थ से किसी भी रक्तस्राव का मूल्यांकन करें।
      नोट: नैदानिक स्तर पर गेमे और भ्रूण पता लगाने की प्रभावशीलता को स्वचालित और बेहतर बनाने के लिए, केंद्र26में एक इलेक्ट्रॉनिक साक्षी प्रणाली (ईडब्ल्यूएस) लागू की गई थी। फिर भी, इस प्रोटोकॉल में ईडब्ल्यूएस का उल्लेख नहीं है, ताकि किसी भी आईवीएफ प्रयोगशाला में प्रोटोकॉल की पुनरुत्पादनता सुनिश्चित की जा सके। फिर भी, विचार करें कि प्रक्रिया के सभी चरणों में गेमेट और भ्रूण पता लगाने की क्षमता सुनिश्चित करने के लिए एक दूसरे ऑपरेटर (यानी एक गवाह) की आवश्यकता होती है।

4. आईवीएफ प्रयोगशाला

  1. ओसाइट पुनर्प्राप्ति प्रक्रिया से पहले का दिन
    1. ट्यूब एकत्र करने के लिए ओसाइट तैयार करें (सामग्री की तालिकाको देखें)।
      1. प्रत्येक ओसाइट संग्रह ट्यूब (गोल नीचे, 5 मिलीएल) में आईवीएफ माध्यम के 1 एमएल (सामग्री की तालिकाको देखें) और भ्रूण संस्कृति के लिए खनिज तेल (सामग्री की तालिकाको देखें) के साथ कवर करें।
        नोट: ट्यूबों की संख्या को वापस लाए जाने की उम्मीद रोम की संख्या के अनुसार परिभाषित किया जाएगा । प्रत्येक ट्यूब में 4 कोक्स तक हो सकते हैं।
    2. टोपी (पहली तस्वीर) के साथ ट्यूबों को सील करें। माध्यम और तैयारी की तारीख के प्रकार के विवरण के साथ ट्यूबों लेबल। एक नियंत्रित वातावरण में 37 डिग्री सेल्सियस पर रात भर ट्यूबों को इनक्यूबेट करें (6% सीओ2,5% 02)।
  2. ऊसाइट पुनर्प्राप्ति के दिन
    1. 37 डिग्री सेल्सियस (बाँझ संस्कृति व्यंजन और पाश्चर पिपेट) पर प्लास्टिक की आपूर्ति को पूर्वामाल करें।
    2. रोगियों को अपनी पहचान (पूरा नाम और जन्म तिथि) और ओव्यूलेशन ट्रिगर के समय की पुष्टि करने के लिए कहें। प्रयोगशाला शीट पर एनोटेट करें कि पहचान (आईडी) प्रक्रिया पूरी हो गई है, और ओव्यूलेशन ट्रिगर के समय की पुष्टि की गई है।
    3. इनक्यूबेटर से ओसाइट संग्रह ट्यूब लें (प्रक्रिया शुरू होने से ठीक पहले), और तंग बंद सुनिश्चित करने के लिए टोपी को नीचे धकेलें। रोगी की जानकारी के साथ oocyte संग्रह ट्यूबों लेबल। ब्लॉक हीटर में ओसाइट कलेक्शन ट्यूब 37 डिग्री सेल्सियस रखें।
    4. प्रीवार्म बाँझ संस्कृति व्यंजनों में कूप तरल पदार्थ की जांच करें, और COCs की पहचान करें। एक बार एक या एक से अधिक COCs की पहचान कर रहे हैं, उन्हें दो बार मध्यम की दो बूंदों में कुल्ला कूप तरल पदार्थ और रक्त संदूषण को दूर करने के लिए ।
    5. कोक्स को ओसाइट संग्रह ट्यूबों में स्थानांतरित करें और ट्यूब पर सीओसी की संख्या को एनोटेट करें। मध्यम ट्यूबों की टोपियां ढीली करें, और 6% सीओ2,5%O2 के वातावरण में उन्हें 37 डिग्री सेल्सियस पर तुरंत इनक्यूबेट करें।
    6. वापस लाए गए ओसाइट्स की संख्या के अनुसार 7 से 9 चरणों को दोहराएं। प्रयोगशाला पत्रक अपडेट करें।
      नोट: सुनिश्चित करें कि एक गवाह की जांच करता है कि सभी ट्यूब वार्मिंग ब्लॉक (ऑपरेटिंग थियेटर में लोगों सहित) खाली हैं और प्रयोगशाला शीट पर प्रक्रिया के समापन के संकेत हैं।
    7. प्रक्रिया पूरी होने के बाद कार्य चरण को मिटा दें।

5. ऊसाइट डेनडेशन

  1. प्रीवार्म 4- (2-हाइड्रोक्सीथिल) - 1- पिपरेजिनीथानेसुल्फोनिक एसिड (एचईपीईएस) - बफर्ड मीडियम और हाइलुरोनिडेस (सामग्री की तालिका काउल्लेख) शुरू होने से पहले कम से कम 1 घंटे पर।
  2. एक 4-अच्छी तरह से आईवीएफ प्लेट तैयार करें (सामग्री की मेज काउल्लेख करें) 0.6 एमएल के साथ/
  3. रोगी की पहचान के विवरण के साथ oocyte denudation प्लेट लेबल।
  4. प्रक्रिया शुरू करने से तुरंत पहले, लगभग 20 आईयू/एमएल की अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए पहले कुएं में हाइलुरोनिडेस जोड़ें।
  5. क्यूमुलस कोशिकाओं को तितर-बितर करने के लिए एंजाइम युक्त पहले अच्छी तरह से सीओसी (6 तक) की एक सीमित संख्या रखें।
  6. क्यूमुलस और कोरोना कोशिकाओं को एंजाइमेटिक हटाने को बढ़ाने के लिए, 30 एस तक के लिए लगभग 250 माइक्रोन के आंतरिक व्यास के साथ एक पाश्चर पिपेट के माध्यम से बार-बार ओसाइट्स को पाइपिंग करके क्यूमुलस कोशिकाओं की स्ट्रिपिंग करें। प्रारंभिक कोशिका वियोजन के बाद, oocytes को दूसरे कुएं में स्थानांतरित करें जिसमें केवल हेप्स-बफर माध्यम होता है, जिसमें एंजाइम की न्यूनतम मात्रा को पूरा करने का ध्यान रखा जाता है।
  7. आंतरिक व्यास (170-145 माइक्रोन) कम होने के साथ डेनडिंग पिपेट का उपयोग करके कोरोना कोशिकाओं को हटाने के लिए आगे निंदा करें। केवल सख्ती से आवश्यक होने पर कम व्यास (135μm) का उपयोग करें।
  8. एंजाइम को धोने के लिए सावधानी से डेन्ड ओसाइट्स को धोएं।
  9. निंदा के बाद, उनकी अखंडता और परिपक्वता के चरण का आकलन करने के लिए एक उल्टे माइक्रोस्कोप के तहत ओसाइट्स की जांच करें। अपरिपक्व लोगों (अंकुरित वेसिकल और मेटाफेज-1) से अलग एमआईआई ओसाइट्स।
  10. एमआईआई ओसाइट्स को तुरंत क्रायोप्रिजर्वेशन करने के लिए विट्रीफिकेशन क्षेत्र में ले जाएं। प्रयोगशाला पत्रक अपडेट करें।

6. ऊसाइट विट्रीफिकेशन

नोट: ओसाइट रिट्रीवल के 38 घंटे के भीतर और डेन्डेशन के तुरंत बाद ओसाइट विट्रीफिकेशन करें। यहां वर्णित विट्रीफिकेशन प्रक्रिया को कमरे के तापमान (आरटी) पर और 170 माइक्रोन के आंतरिक व्यास के साथ एक स्ट्रिपर पिपेट का उपयोग करके पूरा किया जाना चाहिए ताकि हेरफेर के दौरान ओसाइट्स को नुकसान न पहुंचे।

  1. प्रक्रिया से लगभग 30 मिनट पहले, संतुलन समाधान (ईएस) और विट्रीफिकेशन समाधान (वीएस) को आरटी (25-27 डिग्री सेल्सियस) में लाएं।
  2. रोगी के नाम और आईडी, उपचार आईडी, ठंड की तारीख, ओसाइट्स की संख्या और क्रायोबारकोड के साथ क्रायोडेविस को ठीक से लेबल करें।
  3. ताजा तरल नाइट्रोजन के साथ शीर्ष तक एक डिस्पोजेबल कूलिंग रैक भरें, और नसबंदी प्रक्रिया शुरू करें।
  4. रोगी के नाम और आईडी के साथ विट्रीफिकेशन प्लेट (सामग्री की तालिका कोदेखें) लेबल करें। क्रायोडेविस की सही आईडी की जांच करने के लिए गवाह से पूछें।
  5. उपयोग से पहले अपनी सामग्री को मिलाने के लिए प्रत्येक शीशी को ध्यान से दो बार उलटा करें, और 6 मिमी पेट्री डिश के ढक्कन को हेपेट्स-बफर माध्यम (5% एचएसए के साथ) के 30 माइक्रोन की एक बूंद और ईएस के 30 μL की एक आसन्न बूंद के साथ तैयार करें।
    नोट: मध्यम वाष्पीकरण को सीमित करने के लिए उपयोग से ठीक पहले बूंदें रखें।
  6. 170 माइक्रोन व्यास स्ट्रिपर पिपेट का उपयोग करके, ओसाइट्स (9 तक) को पहली बूंद में मध्यम की सबसे छोटी संभव मात्रा के साथ रखें। स्ट्रिपर पिपेट का उपयोग करके, सीपीए(चित्रा1 ए) की एकाग्रता में क्रमिक वृद्धि प्राप्त करने के लिए ड्रॉप एन 1 और एन 2 के बीच माध्यम का एक पुल बनाएं।
  7. 3 मिनट के लिए पहली बूंद में oocytes इनक्यूबेट। ईएस (एन 3) के 30 माइक्रोन की तीसरी बूंद जोड़ें। 3 मिनट के बाद, oocytes को ईएस की दूसरी बूंद में स्थानांतरित करें, और बूंदों एन 3 और एन 2(चित्रा 1B) केबीच एक मध्यम पुल बनाएं। 3 मिनट के लिए ड्रॉप एन 3 में ओसाइट्स को इनक्यूबेट करें।
  8. इनक्यूबेशन के दौरान, प्रत्येक क्रायोडिवाइस के लिए ईएस की एक 30 माइक्रोन ड्रॉप जोड़ें जिसका उपयोग किया जाएगा (यदि 9 ओसाइट्स को क्रायोप्रेयरेवित किया जाना है, तो ईएस की प्रत्येक बूंद में 3 ओसाइट्स के साथ ईएस की 3 बूंदें रखें)। ओसाइट्स को शुद्ध ईएस समाधान में ले जाएं, और उन्हें 6-9 मिनट के लिए छोड़ दें (जब तक कि वे सिकुड़न के बाद अपने प्रारंभिक आकार को ठीक न करलें) (चित्रा 1C)।
  9. वीएस के 1 एमएल के साथ एक केंद्रीय अच्छी डिश (60 x 15 मिमी) तैयार करें। पहले 6 मिनट के अंत में, oocytes को स्थानांतरित करने के लिए वीएस समाधान में क्रायोप्रीयरेय किया जाएगा, जितना संभव हो उतना छोटा माध्यम जारी करना। 1 मिनट के लिए वीएस में oocytes छोड़ दें, और उन्हें नीचे से डिश के ऊपर तक ले जाकर ध्यान से धो लें ताकि ईएस की अतिरिक्त मात्रा को दूर किया जा सके।
  10. इनक्यूबेशन के मिनट के अंत से लगभग 10 एस, क्रायोडाइस को माइक्रोस्कोप के नीचे रखें, और काले निशान (यानी, क्रायोदेवी की नोक) पर ध्यान केंद्रित करें। वीएस(चित्रा 2 ए)की न्यूनतम राशि के साथ काले निशान के बगल में क्रायोडिवाइस पर ओसाइट्स रखें।
  11. स्ट्रिपर पिपेट को ओसाइट्स से दूर ले जाएं, और वीएस मीडियम(चित्रा 2B)की अतिरिक्तता को हटा दें ताकि ओसाइट्स मध्यम(चित्रा 2C)की पतली परत से ढके रहें।
  12. तरल नाइट्रोजन में क्रायोदेवी को जल्दी से डुबकी लगाते हैं, इसकी सतह से हवा के बुलबुले को हटाने के लिए तेजी से इसे हिलाते हैं। चिमटी के साथ क्रायोडिवाइस की सुरक्षात्मक टोपी पकड़ो, और इसे तरल नाइट्रोजन से भरें; फिर तरल नाइट्रोजन में प्रोपलीन स्ट्रिप्स रखते हुए इसमें क्रायोविवाइस डालें।
  13. रोगी की जानकारी के साथ पहले लेबल किए गए एक विस्सिओट्यूब में क्रायोडिवाइस को स्टोर करें। प्रयोगशाला पत्रक अपडेट करें।

7. Oocyte वार्मिंग

  1. प्रक्रिया से लगभग 30 मिनट पहले, विगलन समाधान (टीएस), कमजोर पड़ने समाधान (डीएस), और वाशिंग समाधान (डब्ल्यूएस) को आरटी (25-27 डिग्री सेल्सियस) तक गर्म करें। ध्यान से अपनी सामग्री मिश्रण करने के लिए दो बार प्रत्येक शीशी उलटा। एक केंद्रीय अच्छी तरह से पेट्री डिश में टीएस के 1 एमएल रखें, और प्रक्रिया शुरू करने से पहले कम से कम 1 घंटे के लिए इसे 37 डिग्री सेल्सियस पर गर्म करें।
  2. रोगी के नाम और आईडी और समाधान के प्रकार के साथ सभी प्लास्टिक की आपूर्ति लेबल। क्रायोदेवी पर रोगी की जानकारी की पुष्टि करने के लिए एक गवाह से पूछें।
  3. प्रत्येक क्रायोडिवाइस को गर्म करने के लिए, पहले कुएं में डीएस के 200 माइक्रोन के साथ 6-अच्छी तरह से प्लेट तैयार करें और दूसरे और तीसरे लोगों में डब्ल्यूएस की समान मात्रा (क्रमशः WS1 और WS2 नाम) । वाष्पीकरण को रोकने के लिए कुओं के बाहर के क्षेत्र में फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) या बाँझ पानी जोड़ें।
  4. टीएस डिश को इनक्यूबेटर से बाहर निकालकर माइक्रोस्कोप के नीचे रखें। माइक्रोस्कोप का फोकस पेट्री डिश के केंद्र में एडजस्ट करें।
  5. तरल नाइट्रोजन में प्रोपलीन स्ट्रिप्स रखते हुए, क्रायोविलिस की सुरक्षात्मक टोपी को ध्यान से मोड़ें और हटा दें। डिविटिफिकेशन के जोखिम से बचने और उलटी गिनती (1 मिनट) शुरू करने के लिए जितनी जल्दी हो सके तरल नाइट्रोजन से क्रायोदेवता को टीएस में स्थानांतरित करें।
  6. क्रायोडिवाइस (यानी, काले निशान) की नोक पर ध्यान केंद्रित करके ओसाइट्स को स्थानीयकृत करें। एक स्ट्रिपर पिपेट का उपयोग करके, क्रायोडिवाइस से ओसाइट्स जारी करें।
    नोट: क्रायोडिवाइस से ओसाइट्स को एस्पिरेट न करने की कोशिश करें; धीरे से उन पर कुछ मीडिया जारी जब तक वे टीएस में चलते हैं ।
  7. 170 माइक्रोन व्यास स्ट्रिपर पिपेट का उपयोग करके, ऊसाइट्स को थोड़ी मात्रा में टीएस (ढाल बनाने के लिए) के साथ डीएस में स्थानांतरित करें, और उन्हें 3 मिनट के लिए डीएस में छोड़ दें। इसके समान डब्ल्यूएस1 में ओसाइट्स ले जाएं, और उन्हें 5 मिनट के लिए छोड़ दें। अंत में, 1 मिनट के लिए oocytes WS2 को स्थानांतरित करें।
  8. ओसाइट्स को एक उपयुक्त प्रीक्विलिब्रेटेड आईवीएफ संस्कृति माध्यम में स्थानांतरित करें, और इंट्रासाइटोप्लाज्मिक शुक्राणु इंजेक्शन (आईसीएसआई) के साथ आगे बढ़ने से पहले उन्हें 1 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें। प्रयोगशाला पत्रक अपडेट करें।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

केंद्र में प्रजनन संरक्षण कार्यक्रम का अवलोकन

12 साल की अवधि (2008-2020) में, 285 महिलाओं को एकत्र किए गए परिपक्व अंडों की पूरी पलटन के विट्रीफिकेशन को आकर्षित करते हुए कम से कम एक ओसाइट पुनर्प्राप्ति से गुजरना पड़ा। इन महिलाओं (n = 250) के अधिकांश एक ही पुनः प्राप्ति से गुजरना पड़ा, और 35 कई पुनः प्राप्त किया. अंडा vitrification के लिए oocyte पुनर्प्राप्ति के दौर से गुजर के कारणों को 4 श्रेणियों में संक्षेप में प्रस्तुत कर रहे हैं: चिकित्सा (कैंसर के अलावा), कैंसर, गैर चिकित्सा, और दूसरों । अंडे के विट्रीफिकेशन के लिए एक ही ओसाइट रिट्रीवल से गुजर रही 250 महिलाओं में से 8% के पास कैंसर के अलावा अन्य चिकित्सा कारण थे (10 एंडोमेट्रियोसिस, 3 मायोमा, 4 ओवेरियन सिस्ट, 1 हाइड्रोसालपिंक्स), 16% कैंसर था (31 स्तन कैंसर, 3 अंडाशय कैंसर, 2 कोलोरेक्टल कैंसर, 2 हॉगकिन लिंफोमा, 1 वल्वर कैंसर ई 1 सर्वाइकल कैंसर), 53% गैर चिकित्सा कारण था, और 23% अन्य कारण थे (शुक्राणुओं की अनुपस्थिति, 10 ओएचएस के लिए जोखिम, 4 संक्रमण, और 1 बुखार)। यह वितरण अंडे के विट्रीफिकेशन के लिए कई ओसाइट रिट्रीवल्स से गुजर रहे रोगियों के बीच अलग था। विशेष रूप से, 9% में कैंसर के अलावा चिकित्सा कारण थे (1 एंडोमेट्रियोसिस, 2 कम अंडाशय रिजर्व), 6% को कैंसर (2 स्तन कैंसर), 80% के पास गैर-चिकित्सा कारण थे, और 3% के पास अन्य कारण थे (शुक्राणु की 1 अनुपस्थिति)। अंडे के विट्रीफिकेशन के लिए कई ओसाइट रिट्रीवल्स से गुजर रहे रोगियों में से कोई भी उन अंडों को गर्म नहीं करता है, जबकि एक अंडा विट्रीफिकेशन चक्र से गुजर रही 250 महिलाओं में से 78 उन ओसाइट्स(चित्रा 3)का उपयोग करने के लिए लौट आए।

तालिका 1 संबंधित कारणों के अनुसार संकुल एक oocyte vitrification चक्र के दौर से गुजर २५० महिलाओं के डेटा संक्षेप । अंडा vitrification के लिए एक चिकित्सा कारण के साथ रोगियों और कैंसर की वजह से प्रजनन संरक्षण के दौर से गुजर रोगियों छोटे थे (मतलब मातृ आयु < ३५ साल) और एक बेहतर अंडाशय रिजर्व (उच्च AFCs) गैर चिकित्सा या अंय कारणों के साथ रोगियों की तुलना में दिखाया । हालांकि, मतलब परिपक्वता दर (एमआईआई ओसाइट्स/सीओसी की संख्या प्राप्त) थोड़ा कम (72-73% बनाम 77-79%), ताकि औसत पर oocytes vitrified की संख्या 4 समूहों (9-10 oocytes) में समान था । महत्वपूर्ण बात, 40 ओन्कोलॉजिक रोगियों में से 9 (22.5%) एक यादृच्छिक शुरू अंडाशय उत्तेजना प्रोटोकॉल से गुजरना पड़ा क्योंकि उनके पास कीमो या रेडियोथेरेपी शुरू करने से पहले सीमित समय था। यह दिलचस्प है कि कैंसर (53%) के अलावा चिकित्सा कारणों के साथ रोगियों के लगभग आधे और अंडे vitrification (76%) के लिए अन्य कारणों के साथ रोगियों के बहुमत वास्तव में वार्मिंग के लिए लौट आए. इसके विपरीत, बहुत कम रोगियों को जो कैंसर के लिए प्रजनन संरक्षण (१७.५%) या गैर चिकित्सा कारणों (13%) आईवीएफ के लिए अपने vitrified oocytes का इस्तेमाल किया । इसके अलावा उल्लेखनीय समय vitrification और रोगियों को जो लौटे के बीच वार्मिंग के बीच बीता है: औसतन, कैंसर के अलावा अंय चिकित्सा कारणों के साथ रोगियों में २८३ दिन, अंय कारणों के साथ रोगियों में १३२ दिन, oncologic रोगियों में १२६४ दिन, और गैर चिकित्सा कारणों के साथ रोगियों में १५४७ दिन । इन सभी प्रासंगिक मतभेदों के बावजूद, जीवित रहने की दर समान थी (83-88%; औसतन, 8-11 oocytes गर्म थे, और 7-9 oocytes बच) 4 समूहों में रोगियों के बीच, जिससे प्रभावकारिता और oocyte vitrification और वार्मिंग प्रोटोकॉल की सुरक्षा की पुष्टि । इसके अलावा, जीवित रहने की दर vitrification और वार्मिंग ऑपरेटर के अनुभव(चित्रा 4A,बी)से स्वतंत्र है । तालिका 1 4 समूहों में निषेचन दरों को दर्शाता है, जो ~ 70% हैं, सिवाय ओसाइट विट्रीफिकेशन (~ 80%) के लिए गैर-चिकित्सा कारणों वाले रोगियों के लिए। हालांकि, ये आंकड़े एक छोटे से नमूना आकार और निषेचन परिणाम27पर शुक्राणु कारक के पूर्वाग्रह के कारण तुलनीय नहीं हैं ।

Figure 1
चित्रा 1:ओसाइट क्रायोप्रिजर्वेशन के लिए मध्यम बूंद विन्यास। धीरे-धीरे संतुलन बनाने के लिए, ओसाइट्स को पहले बीएस की एक(ए)बूंद में रखा जाता है और ईएस की एक बूंद(बी)के साथ मिलाया जाताहै। 3 मिनट के इनक्यूबेशन के बाद,(सी)ईएस समाधान की तीसरी बूंद मिश्रित होतीहै, और ओसाइट्स को 6-9 मिनट के लिए इनक्यूबेटेड किया जाता है। संक्षिप्त: HEPES = 4-(2-हाइड्रोक्सीथिल) -1-piperazineethanesulfonic एसिड; बीएस = हेपेस-बफर माध्यम; ES = संतुलन समाधान। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2:क्रायोप्रिजर्वेशन डिवाइस पर ओसाइट लोड हो रहा है। ओसाइट्स को वीएस की एक छोटी सी बूंद(ए)में क्रायोडिवाइस पर रखा जाता है। (ख)स्ट्रिपर पिपेट को ओसाइट्स से दूर स्थानांतरित कर दिया जाताहै, और(ग)वीएस की अतिरिक्तता को प्रत्येक ओसाइट के चारों ओर सिर्फ एक पतली परत छोड़ने के लिए फिर से एस्पिरेटेड किया जाता है । संक्षिप्त नाम: बनाम = vitrification समाधान। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3:रोम कीप्रजनन चिकित्सा के लिए जेनेरा केंद्र (वर्ष 2008-2020) में किए गए ओसाइट विट्रीफिकेशन चक्र। 12 साल की अवधि में, २५० रोगियों को oocyte vitrification के लिए एक ही oocyte पुनर्प्राप्ति से गुजरना पड़ा, जबकि ३५ कई oocyte पुनर्प्राप्ति चक्र से गुजरना पड़ा । ओसाइट विट्रीफिकेशन के अंतर्निहित कारणों को आंकड़े में दिखाया गया है। वार्मिंग (एन = 78) के लिए लौटने वाले रोगी केवल उन महिलाओं के समूह से संबंधित हैं जो एक एकल ओसाइट विट्रीफिकेशन चक्र से गुजरे हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4:गर्म oocytes की पलटन प्रति मतलब जीवित रहने की दर। (A)विट्रीफिकेशन और(बी)वार्मिंग ऑपरेटर्स का अनुभव । प्रत्येक रोगी केवल पहले वार्मिंग चक्र के लिए शामिल किया जाता है। मान-व्हिटनी यू-टेस्टका उपयोग करके सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण मतभेदों का आकलन किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5:शुरुआत और संतुलन प्रक्रिया के अंत में ऊसाइट आकृति विज्ञान। समतुल्यता प्रक्रिया के परिणाम को निर्धारित करने के लिए, प्रक्रिया शुरू करने से पहले(ए)ओसाइट आकृति विज्ञान को एनोटेट करना उपयोगी हो सकता है। (ख)क्रायोप्रोटेक्टिव सॉल्यूशन के पहले एक्सपोजर के बाद ओसाइट का तेज सिकुड़न देखा जाता है । समतुल्यता प्रक्रिया को पूर्ण माना जा सकता है जब(C)ओसाइट ने इसकी प्रारंभिक मात्रा को पुनर्प्राप्त कर दिया है। स्केल बार = 25 माइक्रोन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

ऊसाइट विट्रीफिकेशन का कारण कैंसर के अलावा अन्य चिकित्सा (n=19) कैंसर (n=40) गैर चिकित्सा (n=133) अन्य (n=58)
oocyte पुनः प्राप्ति में मातृ आयु, मतलब±SD 33.6±6.4 साल 34.6±5.9 वर्ष 37.0±3.4 साल 38.2±4.3 साल
बेसल एफएसएच, मतलब±एसडी 7.5±4.2 आईयू/एल 7.6±1.7 आईयू/एल 7.8±4.1 आईयू/एल 8.8±5.2 आईयू/एल
AMH, मतलब±एसडी 1.8±1.7 एनजी/एमएल 1.9±0.2 एनजी/एमएल 2.2±2.4 एनजी/एमएल 3.0±2.5 एनजी/एमएल
एएफसी, मतलब±एसडी 12.7±5.0 13.3±7.0 11.6±6.1 10.7±6.7
बीएमआई, मतलब±एसडी 20.1±1.5 21.8±1.6 20.2±3.1 22.9±3.6
उत्तेजना की अवधि, मतलब±एसडी 10.0±1.5 9.6±1.7 9.9±2.1 10.3±2.1
9/40, 22.5%
बेतरतीब शुरुआत
COCs, कुल, मतलब±एसडी 239 551 1493 592
12.6±5.3 13.8±9.1 11.2±7.1 10.2±8.5
MII oocytes, कुल, मतलब±SD 167 400 1161 462
8.8±3.3 10.0±7.2 8.7±5.7 8.0±6.7
परिपक्वता दर, मतलब±एसडी 72.4±13.6% 72.1±19.6% 79.5±17.5% 77.4±22.2%
वार्मिंग के लिए लौट रहे मरीज, कुल% मरीज जो विट्रीफिकेशन से गुजरे 10/19, 52.6% 7/40, 17.5% 17/133, 12.8% 44/58, 75.9%
vitrification और पहले वार्मिंग के बीच दिन, मतलब±SD 283±225 1264±764 1547±709 132±203
गरम एमआईआई oocytes, कुल मतलब ±SD 82 66 191 409
8.2±2.8 9.4±4.8 11.2±5.8 9.3±7.2
बच MII oocytes, कुल मतलब है±एसडी 73 55 160 345
7.3±3.3 7.9±4.0 9.4±4.8 7.8±6.9
जीवित रहने की दर, मतलब±एसडी 87.6±18.1% 83.2±1.7% 85.4% ±14.5% 84.7±21.9%
शुक्राणु कारक
एन, एन, % 5/10, 50% 4/7, 57% 13/17, 76% 13/44, 29%
एमएमएफ, एन, % 3/10, 30% 3/7, 43% 3/17, 18% 17/44, 39%
जई, एन, % 2/10, 20% - 1/17, 6% 11/44, 25%
एनओए, एन, % - - - 3/44, 7%
निषेचन दर, मतलब±एसडी 70.0±14.4% 70.0±17.0% 78.5±20.6% 71.0±24.3%

तालिका 1: ओसाइट विट्रीफिकेशन के एक चक्र से गुजर रहे रोगी। संक्षिप्त रूप: एफएसएच = कूप उत्तेजक हार्मोन; AMH = विरोधी Müllerian हार्मोन; बीएमआई = बॉडी मास इंडेक्स; सीओसी = क्यूमुलस ओसाइट परिसर; एमआईआई = मेटाफेज-II; एन = नॉर्मोजोस्परमिक; एमएमएफ = मध्यम पुरुष कारक (1-2 शुक्राणु दोष); जई = ओलिगोसथेनोटाटोजोजोस्पेरिक; एनओए = गैर-ऑब्सट्रक्टिव एजूस्पेरमिया (शुक्राणु वृषण शुक्राणु निष्कर्षण के माध्यम से एकत्र किए गए थे)।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

नैदानिक विचार

यद्यपि उभरती रणनीतियों, जैसे ओवेरियन ऊतक क्रायोप्रिजर्वेशन और इन विट्रो परिपक्वता, का पता लगाया गया है, क्योंकि COS के बाद ओसाइट विट्रीफिकेशन प्रजनन संरक्षण के लिए स्वर्ण मानक तकनीक है। इस परिदृश्य में, oocytes की संख्या प्राप्त की और क्रायोप्रीडेड को कम से कम संभव समय में अधिकतम किया जाना चाहिए क्योंकि अधिकांश कैंसर रोगियों को अपने कैंसर उपचार (एस) शुरू करने से पहले केवल एक अंडाशय चक्र से लाभ हो सकता है। इस प्रकार, एक उचित अंडाशय उत्तेजना प्रोटोकॉल पूरी तरह से अंडाशय रिजर्व का फायदा उठाने और भविष्य के जीवित जन्म28के संचयी अवसर को बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण है, जो ओसाइट पुनर्प्राप्ति में मातृ आयु पर दृढ़ता से निर्भर परिणाम है। इस संबंध में, प्रजनन संरक्षण के उद्देश्य के लिए ओसाइट विट्रीफिकेशन के लिए एक आदर्श आयु अभी29प्रस्तावित नहीं की गई है और 35 वर्ष18 या 37 वर्ष30,31के बीच सर्वसम्मति की आवश्यकता है । हालांकि, प्रजनन संरक्षण ३७ वर्ष से अधिक आयु की महिलाओं सहित सभी रोगियों के लिए सुलभ होना चाहिए, बशर्ते कि उन्हें उनकी उम्र के आधार पर सफलता दरों पर उचित परामर्श दिया जाए ।

दवाओं के प्रोटोकॉल और शुरुआती खुराक को स्त्री रोग विशेषज्ञ के निर्णय के अनुसार रेखांकित किया जाना चाहिए और सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि उपलब्ध समय32,33के आधार पर। प्रारंभिक कूप चरण में पारंपरिक उत्तेजना शुरू करने की सिफारिश की जाती है जब समय कोई मुद्दा नहीं होता है। तथापि, यदि आवश्यक हो, तो तत्काल कैंसर/चिकित्सा उपचार शुरू करनेमें देरी को कम करने के लिए यादृच्छिक-प्रारंभ दृष्टिकोण व्यवहार्य है। कूप विकास के लिए एक अत्यंत गतिशील प्रक्रिया के रूप में कूप भर्ती की कई तरंगों को एक ही अंडाशय चक्र भर में वर्णित किया गया है की सूचना दी गई है । यद्यपि इस घटना के पीछे जैविक तंत्र अभी भी अनावरण करने की आवश्यकता है, सक्षम ओसाइट्स को वापस लाया जा सकता है और मासिक धर्म चक्र के चरण से स्वतंत्र रूप से क्रायोप्रीड किया जा सकता है जिसमें COS36शुरू किया गया है।

इस केंद्र में, अंडाशय उत्तेजना आमतौर पर जीएनआरएच विरोधी प्रोटोकॉल और 150-300 आईयू/दिन के रिकॉम्बिनेंट-एफएसएच या मानव रजोनिवृत्ति गोंडोट्रोपिन का उपयोग करके किया जाता है। 35 वर्ष से अधिक उम्र के रोगियों की विशिष्ट आबादी में, एलएच की कमी के साथ, या मानक COS के बाद उप-अनुकूल प्रतिक्रिया दिखाते हुए, एलएच को इंसुलिन जैसे विकास कारक 116,37, 38के साथ एक सहक्रियाशील कार्रवाई के माध्यम से भर्ती और रोम के विकास को बढ़ाने के लिए COS के दौरान जोड़ा जा सकता है। इसके अलावा, जीएनआरएच विरोधी प्रोटोकॉल जिसके बाद जीएनआरएच एगोनिस्ट ट्रिगर का पालन किया गया है, को अंडाशय की प्रतिक्रिया को अधिकतम करने और ओएचएसएस39के लिए जोखिम को कम करने के लिए एक छोटा, सुरक्षित और अत्यधिक सुविधाजनक उत्तेजना प्रोटोकॉल बताया गया है। स्तन कैंसर जैसे एस्ट्रोजन-संवेदनशील रोगों वाले रोगियों में, लेट्रोजोल जैसे सुगंध अवरोधकों से जुड़े गोंडोडोपिन,20प्रशासित किए जाते हैं।

वास्तव में, हाल ही में एक समीक्षा से पता चला है कि लेट्रोजोल में पारंपरिक उत्तेजना के समान अंडाशय प्रतिक्रिया शामिल है जिसमें जन्मजात दोषों, द्रोह पुनरावृत्ति और मृत्यु दर40में वृद्धि के मामले में कोई जटिलता नहीं है। इसी तरह, एस्ट्रोजन के प्रति संवेदनशील ट्यूमर के मामले में कोस के दौरान टैमोक्सिफेन का उपयोग किया जा सकता है, जिसने लेट्रोजोल की तरह, ओसाइट क्षमता41,42पर कोई प्रभाव नहीं दिखाया। हालांकि, बड़े अध्ययनों में इसकी पुष्टि किए जाने की आवश्यकता है। इस केंद्र में, लेट्रोजोल को एस्ट्राडिओल-संवेदनशील ट्यूमर के मामले में ओसाइट पुनर्प्राप्ति के बाद 7 दिन तक उत्तेजना के दिन 1 से प्रशासित किया जाता है। OHSS के लिए जोखिम है, जो COS की सबसे महत्वपूर्ण जटिलता है कि आगे भी कैंसर रोधी उपचार में देरी होगी, विशेष रूप से उच्च AFCs के साथ युवा रोगियों में विचार किया जाना चाहिए । इन मामलों में, मानव कोरियोनिक गोंडोट्रोपिन (एचसीजी) के बजाय जीएनआरएच एगोनिस्ट के साथ ओव्यूलेशन को ट्रिगर करना फायदेमंद साबित हुआ है। अन्य मुद्दों है कि रोका जाना चाहिए (i) थ्रोम्बो-एम्बोलिज्म, जो COS के दौरान कम आणविक वजन हेपरिन के प्रशासन की आवश्यकता है, और (ii) COS४३के बाद एक कम अंडाशय प्रतिक्रिया । बाद के लिए क्षतिपूर्ति करने के लिए, एक ही अंडाशय चक्र में लगातार दो उत्तेजनाओं का प्रदर्शन किया जा सकता है । डुओस्टिम के नाम से जाना जाने वाला यह उपन्यास अपरंपरागत कॉस प्रोटोकॉल, कूप और ल्यूटील चरण उत्तेजनाओं और दो ओसाइट रिट्रीवल्स को थोड़ी समय सीमा (~ 15 दिनों) में आवश्यकता होती है और भविष्यमें 44,45,46में प्रजनन संरक्षण उद्देश्य के लिए जांच की जानी चाहिए।

महिलाओं में प्रजनन संरक्षण के लिए अन्य संभावित रणनीतियां हैं: (i) अंडाशय ऊतक क्रायोप्रिजर्वेशन, जो प्रीप्बर्टल महिलाओं के लिए उपलब्ध एकमात्र विकल्प है। यह संभावना प्रजनन और अंतःस्रावी गतिविधि को बहाल करने और कैंसर के इलाज शुरू करने में देरी से बचने के लिए वादा कर रही है क्योंकि कोई हार्मोनल उत्तेजना की आवश्यकता नहीं है। हालांकि, यह अभी भी प्रयोगात्मक है और बाद में प्रत्यारोपण के साथ लेप्रोस्कोपिक सर्जरी की आवश्यकता है, और आर्थोटोपिक कैंसर पुनर्संचरण के लिए जोखिम है । (ii) भ्रूण क्रायोप्रिजर्वेशन, जिसमें वार्मिंग के बाद उच्च जीवित रहने की दर शामिल है, लेकिन कैंसर के इलाज में देरी होती है और इसमें पुरुष साथी या दाता को शामिल होने की आवश्यकता होती है, जिससे एक महिला की भविष्य की प्रजनन स्वायत्तता४७को भी सीमित कर दी जाती है । इसके अलावा, यह कुछ देशों में कानूनी सीमाओं के अधीन हो सकता है । इन सीमाओं को ध्यान में रखते हुए, ओसाइट विट्रीफिकेशन को सबसे स्थापित और नैतिकता की दृष्टि से स्वीकार्य दृष्टिकोण माना जाता है। आदर्श रूप में, सभी प्रमुख अस्पतालों, जहां उनके प्रजनन आयु में कैंसर से प्रभावित महिलाओं का इलाज कर रहे हैं, प्रजनन संरक्षण के लिए कार्यक्रम प्रदान करना चाहिए, और पूरी प्रक्रिया इन रोगियों के लिए नि: शुल्क होना चाहिए इस कार्यक्रम के लिए समान पहुंच सुनिश्चित करने के लिए । फिर भी, ओसाइट क्रायोप्रिजर्वेशन पूरी तरह से केंद्रों में किया जाना चाहिए जिसमें पर्याप्त विशेषज्ञता के साथप्रक्रिया 48में ओसाइट क्षमता को प्रभावित नहीं किया जा सकता है।

विट्रीफिकेशन प्रोटोकॉल और समस्या निवारण में महत्वपूर्ण कदम

Vitrification एक छद्म दूसरा क्रम चरण संक्रमण (रासायनिक शब्दावली का IUPAC संग्रह) है कि बर्फ क्रिस्टल नाभिक और विकास, कोशिका की चोट का मुख्य कारक कारक को रोकने कोशिकाओं के अंदर एक गिलास की तरह ठोसता लाती है । उचित विट्रीफिकेशन प्राप्त करने के लिए, कम से कम दो सीपीए (आमतौर पर एथिलीन ग्लाइकोल और डीएमएसओ के रूप में रिस रहे एजेंटों और सुक्रोज को गैर-रिसटिंग एजेंट के रूप में) की आवश्यकता होती है, साथ ही एक अत्यंत उच्च शीतलन दर (>20,000 डिग्री सेल्सियस/न्यूनतम) के साथ या तो लोडिंग वॉल्यूम को कम करके या तरल नाइट्रोजन (खुले उपकरण) के नमूनों के सीधे संपर्क से हासिल किया जाता है। चूंकि ओसाइट्स शरीर की सबसे बड़ी कोशिकाएं हैं, इसलिए उनमें पानी की सबसे बड़ी मात्रा होती है। इसलिए, वे भ्रूण की तुलना में ठंड चोटों के प्रति अधिक संवेदनशील होते हैं। ओसाइट क्रायोप्रिजर्वेशन के दौरान, इंट्रासेलुलर ऑर्गेनेल्स (जैसे, साइटोस्केलेटन या मेयोटिक स्पिंडल), झिल्ली पारगम्यता में परिवर्तन, जोना पेलुसिडा सख्त, ओसाइट सक्रियण, जैव रासायनिक मार्गों में परिवर्तन, और संभवतः सेल मृत्यु49हो सकती है। इस कारण से, ओसाइट व्यवहार्यता और विकासात्मक क्षमता के सफल संरक्षण के लिए कई कारकों के बीच एक नाजुक संतुलन सुनिश्चित किया जाना चाहिए । vitrification के बाद जीवित रहने की दर में निरंतरता प्राप्त करने और बेंचमार्क स्तर तक पहुंचने के लिए, प्रक्रिया के सभी महत्वपूर्ण कदम कड़ाई से नियंत्रित किया जाना चाहिए ।

सीपीए, सेल ऑस्मोलिटी, और कूलिंग रेट

विट्रीफिकेशन की संभावना बढ़ाने के लिए, माध्यम (और इसलिए सीपीए एकाग्रता) की चिपचिपाहट को अधिकतम किया जाना चाहिए। हालांकि, सीपीए की विषाक्तता को हमेशा नियंत्रण में रखना चाहिए50. इस उद्देश्य के लिए, सीपीए और लोडिंग वॉल्यूम के सेल एक्सपोजर के समय को कम करना महत्वपूर्ण है, और हमेशा कमरे के तापमान (25-27 डिग्री सेल्सियस)51पर काम करते हैं। अन्य प्रोटोकॉल में सीपीए और क्रायोडेविस के विभिन्न संयोजन शामिल हैं और 37 डिग्री सेल्सियस पर किए जाते हैं; हालांकि, उन्हें यहां वर्णित नहीं किया गया है । इस प्रकार, इस पांडुलिपि के नोट्स, प्रतिनिधि परिणाम और चर्चा अनुभाग केवल यहां विस्तृत विट्रीफिकेशन प्रोटोकॉल पर लागू होते हैं।

क्रायोप्रिजर्वेशन के दौरान, ओसाइट्स को सेल डिहाइड्रेशन और साइटोप्लाज्मिक सिकुड़न को बढ़ावा देने के लिए बढ़ी हुई ओस्मोलाइट एकाग्रता के सीपीए समाधानों के संपर्क में आता है। वार्मिंग के दौरान, वे साइटोप्लाज्मिक मात्रा को बहाल करने के लिए कम ऑस्मोलिट एकाग्रता के साथ समाधान के संपर्क में आते हैं। विट्रीफिकेशन के दौरान, ओसाइट्स निर्जलित होते हैं, और कोशिका की मात्रा में गैरइरादतन उतार-चढ़ाव गंभीर ऑस्मोटिक शॉक का कारण बन सकते हैं, जिससे52वार्मिंग के बाद अस्तित्व और विकासात्मक क्षमता से समझौता हो सकता है। इष्टतम शीतलन दर ढूंढना कोशिका व्यवहार्यता के संरक्षण के लिए एक महत्वपूर्ण पहलू है क्योंकि यह ओस्मोलिटी53 और सेल विकास क्षमता54को प्रभावित करता है। उदाहरण के लिए, जब एक सेल इष्टतम दरों की तुलना में धीमी दरों को ठंडा करने के संपर्क में आता है, तो इसे बड़े पैमाने पर हाइपरटॉनिक स्थितियों के संपर्क में किया जा सकता है जिससे सेल की मौत हो जाती है।

इष्टतम शीतलन दर को प्राप्त करने के लिए, लोडिंग वॉल्यूम को कम किया जाना चाहिए, आरटी को नियंत्रित किया जाना चाहिए ताकि संतुलन प्रक्रिया की गति को प्रभावित न किया जा सके, और नमूनों को सीधे तरल नाइट्रोजन के संपर्क में होना चाहिए। प्रक्रिया की शुरुआत(चित्रा 5A)से पहले ओसाइट (विशेष रूप से, पेरिविटेललाइन अंतरिक्ष की चौड़ाई और जोना पेलुसिडा की मोटाई) की आकृति विज्ञान को एनोटेट करना है। सेल वॉल्यूम में कमी(चित्रा 5B)के शुरुआती चरण के बाद, ओसाइट को अपनी प्रारंभिक मात्रा(चित्रा 5C)ठीक होने की उम्मीद है। यद्यपि वायु वायुमंडल के नीचे ओसाइट हैंडलिंग के दौरान सही पीएच बनाए रखा जाता है क्योंकि विट्रीफिकेशन-वार्मिंग समाधानों को बफर करने वाले जविटेरियन के कारण, मध्यम ऑस्मोलिटी इसके बजाय विशेष रूप से तापमान53पर निर्भर है। इसलिए, किसी भी संभावित हानिकारक प्रभाव को कम करने के लिए पकवान तैयार करने की विधि महत्वपूर्ण है55.

वाष्पीकरण को रोकने और आईवीएफ मीडिया56में ऑमोलिटी में किसी भी तरह की वृद्धि से बचने के लिए तेल ओवरले निश्चित रूप से निर्णायक है । हालांकि, यह vitrification और वार्मिंग प्रक्रियाओं प्रदर्शन करते समय इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है । इसलिए, ऑपरेटरों के लिए कुछ सुझाव महत्वपूर्ण हैं: (i) बूंदों को जितनी जल्दी हो सके और उपयोग से तुरंत पहले तैयार करें; (ii) ऑस्मोलैरिटी में बदलाव को कम करने के लिए बूंदों की बड़ी मात्रा पर विचार करें (<30 माइक्रोन की सिफारिश नहीं की जाती है); (iii) जब पर्यावरणीय स्थितियों को मानकीकृत नहीं किया जा सकता है, तो 6-अच्छी प्लेट का उपयोग किया जा सकता है, और वाष्पीकरण को सीमित करने के लिए बाँझ पानी या पीबीएस को आसन्न जलाशय में जोड़ा जा सकता है; 4 मीडियम की शीशी के पहले खुलने की तारीख पर ध्यान दें क्योंकि अगर बार-बार बोतल खोली जाए तो ऑमोलिटी बदल सकती है।

Oocyte वार्मिंग और oocyte devitrification

जीवित रहने की दर में निरंतरता को प्रभावित करने वाला सबसे महत्वपूर्ण कदम निश्चित रूप से वार्मिंग प्रक्रिया57है । इस चरण के दौरान, सीपीए को धीरे-धीरे ओसाइट से हटा दिया जाता है और किसी भी संभावित साइटोटॉक्सिक प्रभाव को रोकने के लिए पतला किया जाता है। देवीकरण, अर्थात् एक विट्रीफाइड समाधान के वार्मिंग के दौरान या वाष्प में ऑडिट, परिवहन या भंडारण के दौरान गलती से बर्फ नाभिक या बर्फ क्रिस्टल का गठन, विट्रीफिकेशन58,59,60के मुख्य जोखिमों में से एक है। इसलिए, वार्मिंग के दौरान विचलन और चोट को रोकने के लिए, प्रक्रिया के पहले और अंतिम चरणों के बीच तापमान में अंतर को अधिकतम किया जाना चाहिए। जैसा कि सेकी और मजूर57 द्वारा विभिन्न दरों पर विट्रीफिकेशन और वार्मिंग के अधीन मुरीन ओसाइट्स में दिखाया गया है, जितनी तेजी से वार्मिंग होगी, उतना ही अधिक अस्तित्व होगा। टीएस की मात्रा और तापमान नियंत्रण के लिए मुख्य कारक हैं: टीएस को ठीक से 37 डिग्री सेल्सियस (प्रक्रिया से कम से कम 1 घंटे) तक गर्म किया जाना चाहिए, और तरल नाइट्रोजन रैक को इसकी क्षमता के किनारे से भरा जाना चाहिए और स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के जितना संभव हो उतना करीब रखा जाना चाहिए। ऑपरेटर को तरल नाइट्रोजन से आ र्ट्स में क्रायोप्रिजर्वेशन कैरियर स्थानांतरित करते समय जितनी जल्दी हो सके होना चाहिए। विट्रीफिकेशन की उच्च दक्षता के कारण, एक सार्वभौमिक वार्मिंग प्रोटोकॉल का उपयोग शामिल ठंड प्रोटोकॉल के बावजूद किया जा सकता है, जिससे सभी वार्मिंग चक्रों का प्रबंधन आसान हो जाता है, भले ही ओसाइट्स को एक अलग आईवीएफ केंद्र61से आयात किया जाता है।

खुले उपकरण और प्रदूषण का खतरा

खुली प्रणालियों के रोजगार और तरल नाइट्रोजन के लिए नमूनों के प्रत्यक्ष जोखिम अत्यंत उच्च ठंडा और वार्मिंग दरों कि इस प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता का समर्थन प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं । हालांकि vitrification एक प्रक्रिया है कि पार संदूषण के लिए कम जोखिम बन गया है, क्योंकि यह बहुत छोटी मात्रा में शामिल है और कई नमूना धोने के बाद किया जाता है कि किसी भी ख्यात वायरल लोड पतला, यह सभी एहतियाती उपायों को अपनाने के लिए अपनी सुरक्षा बढ़ाने के लिए आवश्यक है । वर्तमान साक्ष्यों के आधार पर, बंद प्रणालियां कम से कम ओसाइट विट्रीफिकेशन62, 63के लिए खुले सिस्टम के लिएप्रतिस्पर्धीविकल्प प्रदान नहीं करती हैं। तरल नाइट्रोजन के साथ सीधे संपर्क से जुड़े जोखिमों को कम करते हुए खुले विट्रीफिकेशन सिस्टम की प्रभावशीलता को बनाए रखने के लिए, बाद में पराबैंगनी विकिरण64,65द्वारा निष्फल किया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, वाष्प भंडारण टैंकों का उपयोग किया जा सकता है, जो पारंपरिक लोगों की तुलना में प्रदूषण का कम जोखिम पैदा करने के लिए जाने जाते हैं, लेकिन ऊसाइट व्यवहार्यता66, 67के संरक्षण में प्रभावी साबितहुएहैं।

ओसाइट विट्रीफिकेशन कार्यक्रमों के लिए प्रमुख प्रदर्शन संकेतकों की निरंतर निगरानी का महत्व

आईवीएफ प्रयोगशाला में, प्रमुख प्रदर्शन संकेतकों (केपीआई) की निगरानी और लगातार परिणामों में सुधार के लिए आवश्यक है68। सामान्य तौर पर, प्रक्रियाओं और प्रक्रियाओं की निगरानी के लिए केपीआई को परिभाषित करते समय, तीन मुख्य क्षेत्रों पर विचार किया जाना चाहिए: संरचना, प्रक्रिया और परिणाम। संरचनात्मक केपीआई भौतिक और मानव संसाधनों की विशेषताओं को रेखांकित करके आईवीएफ प्रयोगशाला की गुणवत्ता को मापते हैं। क्रायोप्रिजर्वेशन प्रोग्राम में सुविधा से संबंधित संरचनात्मक केपीआई का एक उदाहरण एक दिए गए समय अवधि में किए गए क्रायोप्रिजर्वेशन या क्रायोरूम के कुल वर्ग मीटर के सापेक्ष क्रायो-टैंक की संख्या की आवश्यकता वाली कला प्रक्रियाओं की कुल संख्या के सापेक्ष क्रायोटांक की संख्या हो सकती है। हालांकि, मानव संसाधन और विशेष रूप से, vitrification जैसी नाजुक प्रक्रिया से निपटने के दौरान ऑपरेटर कौशल अत्यंत महत्वपूर्ण हैं। वास्तव में, हालांकि बेहद प्रभावी, विट्रीफिकेशन तकनीक एक चुनौतीपूर्ण प्रक्रिया है जिसमें कई प्रक्रियात्मक चरणों को कड़े समय के साथ शामिल किया गया है जिसे कड़ाई से नियंत्रित किया जाना चाहिए: बहुत कम अवधि में काफी चिपचिपा माध्यम की एक बहुत छोटी मात्रा में प्रबंधित किया जाना चाहिए।

विशिष्ट शीतलन मापदंडों सेटिंग के साथ कोई फ्रीजिंग मशीन प्रक्रिया में शामिल नहीं है; इसलिए, प्रोटोकॉल विवरण और प्रशिक्षण का मानकीकरण आवश्यक है। मैनुअल प्रक्रिया में सख्त कौशल आवश्यकताएं हैं जिन्हें सुसंगत और अत्यधिक प्रजनन योग्य सेल सर्वाइवल रेट प्राप्त करने के लिए पूरा किया जाना चाहिए। विशिष्ट प्रशिक्षण प्रत्येक नौसिखिए ऑपरेटर को प्रदान किया जाना चाहिए ताकि वे प्रक्रिया के सभी महत्वपूर्ण बिंदुओं को नियंत्रित करने में कुशल हो सके, विशेष रूप से, सीपीए के लिए नमूनों का एक्सपोजर समय और कोशिकाओं की हैंडलिंग एक अत्यधिक चिपचिपा माध्यम में। हालांकि, Dessolle और सहलेखकों के अनुसार,६९ vitrification प्रक्रिया के लिए सीखने की अवस्था जूनियर भ्रूणविज्ञानियों के लिए भी इतना लंबा नहीं होना चाहिए क्योंकि प्रवीणता की उपलब्धि मुख्य रूप से हेरफेर चुनौतियों से सीमित है । एक बार विट्रीफिकेशन में विशेषज्ञता प्राप्त हो जाने के बाद, प्रत्येक व्यक्तिगत ऑपरेटर के प्रदर्शन को नियमित रूप से केपीआई के उपयोग के माध्यम से सत्यापित किया जाना चाहिए ताकि आम सहमति पत्र70द्वारा स्थापित योग्यता मूल्यों के रखरखाव का नियमित रूप से आकलन किया जा सके। इसके अलावा, ऑपरेटर विश्वास/क्षमता तुलनीय होनी चाहिए ताकि परिणामों को प्रभावित न किया जा सके ।

प्रक्रिया केपीआई उपाय आईवीएफ प्रयोगशाला कितनी अच्छी तरह काम करती है। Vitrification और वार्मिंग प्रोटोकॉल और प्रक्रियाओं को समय पर आयोजित किया जाना चाहिए, और संस्कृति की स्थिति में उतार-चढ़ाव न केवल oocyte विकास क्षमता के संरक्षण के लिए पर्याप्त ओस्मोलैरिटी और तापमान को बनाए रखने के लिए विशेष ध्यान देकर कम किया जाना चाहिए, लेकिन यह भी ऑपरेटर सुरक्षा की, जबकि तरल नाइट्रोजन से निपटने । प्रक्रिया के उदाहरण केपीआई प्रयोगशाला कर्मचारियों की चोटों का प्रतिशत है, जबकि प्रति वर्ष आईवीएफ प्रक्रियाओं की संख्या प्रति तरल नाइट्रोजन से निपटने, गेम्टे/भ्रूण का प्रतिशत vitrification/वार्मिंग प्रक्रियाओं के दौरान खो/क्षतिग्रस्त, और प्रति वर्ष प्रक्रियाओं की संख्या प्रति लेखा परीक्षा ।

अंत में, परिणाम केपीआई आईवीएफ प्रयोगशाला की प्रभावशीलता को मापते हैं और आम तौर पर आईसीएसआई के समय रूपात्मक रूप से अक्षुण्ण ओसाइट के अनुपात के रूप में परिभाषित ओसाइटे अस्तित्व को संदर्भित करते हैं (ओसाइट विट्रीफिकेशन के मामले में, योग्यता मूल्य >50% होना चाहिए और बेंचमार्क मूल्य 75%)70है। इसके अतिरिक्त, निषेचन की दरें (एक तुलनीय रोगी आबादी से केंद्र में गर्भाधान किए गए ताजा ओसाइट्स से <10% कम), भ्रूण विकास (ताजा ओसाइट्स का उपयोग करके एक तुलनीय रोगी आबादी के समान), और प्रत्यारोपण (केंद्र में ताजा भ्रूण की तुलनीय आबादी से <10-30% कम)70को विरिफाइड oocytes के लिए परिणाम के रूप में लागू होते हैं। हालांकि, नैदानिक परिणाम दोषपूर्ण नैदानिक प्रक्रियाओं71, 72की तुलना में युगल-विशिष्ट विशेषताओं के अधीन हैं।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

कोई नहीं

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Collection
Equipment
Hot plate IVF TECH
Lab Markers Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood IVF TECH Grade A air flow
Stereomicroscope Leica Leica M80
Thermometer
Test tube Warmer
Tri-gas incubator Panasonic MCO-5M-PE 02/CO2
Vacuum Pump Cook K-MAR-5200
Consumables
CSCM (Continuos single culture complete) medium Fujifilm Irvine Scientific 90165 IVF culture medium supplemented with HSA
Mineral Oil for embryo culture Fujifilm Irvine Scientific 9305
Ovum Aspiration Needle (Single lumen) Cook K-OSN-1730-B-60
Primaria Dish Corning 353803 Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish
Round- bottom tubes Falcon 352001 Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap
Round- bottom tubes Falcon 352003 Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap
Rubber Bulb Sigma Aldrich Z111589-12EA
Sterile glass Pasteur pipettes Hunter Scientific PPB150-100PL Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE
Denudation
Equipment
CO2 incubator Eppendorf Galaxy 14S
Flexipet adjustable handle set Cook G18674 Stripper  holder
Gilson Pipetman Gilson 66003 p20
k-System Incubator Coopersurgical G210Invicell
Lab Markers Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood IVF TECH Grade A air flow
Stereomicroscope Leica Leica M80
Consumables
Biopur epTIPS Rack Eppendorf 30075331 Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µl
Human Serum Albumin thermoFisher Scietific 9988
Hyaluronidase Fujifilm Irvine Scientific 90101 80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF
IVF culture dish (60 x 15mm) Corning 353802 Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish
IVF dish 4-well plate with sliding lid ThermoFisher Scietific 176740 Multidishes 4 wells (Nunc)
IVF One well dish Falcon 353653 Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF
Mineral Oil for embryo culture Fujifilm Irvine Scientific 9305
Modified HTF Medium Fujifilm Irvine Scientific 90126 HEPES-Buffered medium
Rubber Bulb Sigma Aldrich Z111589-12EA 1 mL for pasteur pipettes
Sterile glass Pasteur pipettes Hunter Scientific PPB150-100PL Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE
stripping pipette  tips (140 µm) Cook K-FPIP-1140-10BS-6 PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
stripping pipette tips (130 µm ) Cook K-FPIP-1130-10BS-7 PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
stripping pipette tips (170 µm) Cook K-FPIP-1170-10BS-5 PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
Vitrification
Equipment
Electronic Timer
Flexipet adjustable handle set Cook G18674 Stripper  holder
Gilson Pipetman Gilson F123601 p200
Lab Markers Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood IVF TECH Grade A air flow
Stainless Container for Cooling Rack Kitazato Liquid nitrogen container for vitrification
Stereomicroscope Leica Leica M80
Consumables
Biopur epTIPS Rack Eppendorf 30075331 Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL
Human Serum Albumin Fujifilm Irvine Scientific 9988
IVF culture dish (60 x 15 mm) Corning 353802 Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish
IVF dish 6-well Oosafe OOPW-SW02 OOSAFE 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER
Modified HTF Medium Fujifilm Irvine Scientific 90126 HEPES-Buffered medium
stripping pipette tips (170 µm) Cook K-FPIP-1170-10BS-5 PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
Vitrification Freeze kit Fujifilm Irvine Scientific 90133-so 2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)
Vitrifit Coopersurgical Origio 42782001A VitriFit  Box
Warming
Equipment
Electronic Timer
Flexipet adjustable handle set Cook G18674 Stripper  holder
Gilson Pipetman Gilson F123601 p200
k-System Incubator Coopersurgical G210Invicell
Lab Markers Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood IVF TECH Grade A air flow
Stainless Container for Cooling Rack Kitazato Liquid nitrogen container for vitrification
Stereomicroscope Leica Leica M80
Consumables
Biopur epTIPS Rack Eppendorf 30075331 Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL
CSCM (Continuos single culture complete) medium Fujifilm Irvine Scientific 90165 IVF culture medium supplemented with HSA
IVF culture dish (60 x 15 mm) Corning 353802 Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish
IVF dish 4-well plate with sliding lid ThermoFisher Scietific 176740 Multidishes 4 wells (Nunc)
IVF dish 6-well Oosafe OOPW-SW02 OOSAFE® 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER
Mineral Oil for embryo culture Fujifilm Irvine Scientific 9305
SAtripping pipette tips (300µm) Cook K-FPIP-1300-10BS-5 PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
Vitrification Thaw kit Fujifilm Irvine Scientific 90137-so 4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cobo, A., Diaz, C. Clinical application of oocyte vitrification: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Fertility and Sterility. 96 (2), 277-285 (2011).
  2. Rienzi, L., et al. Oocyte, embryo and blastocyst cryopreservation in ART: systematic review and meta-analysis comparing slow-freezing versus vitrification to produce evidence for the development of global guidance. Human Reproduction Update. 23 (2), 139-155 (2017).
  3. Nagy, Z. P., Anderson, R. E., Feinberg, E. C., Hayward, B., Mahony, M. C. The Human Oocyte Preservation Experience (HOPE) Registry: evaluation of cryopreservation techniques and oocyte source on outcomes. Reproductive Biology and Endocrinology. 15 (1), (2017).
  4. Practice Committees of American Society for Reproductive, M., & Society for Assisted Reproductive, T. Mature oocyte cryopreservation: a guideline. Fertility and Sterility. 99 (1), 37-43 (2013).
  5. Lee, S. J., et al. American Society of Clinical Oncology recommendations on fertility preservation in cancer patients. Journal of Clinical Oncology. 24 (18), 2917-2931 (2006).
  6. Nakayama, K., Ueno, N. T. American Society of Clinical Oncology recommendations on fertility preservation should be implemented regardless of disease status or previous treatments. Journal of Clinical Oncology. 24 (33), 5334-5335 (2006).
  7. Martinez, F. Update on fertility preservation from the Barcelona International Society for Fertility Preservation-ESHRE-ASRM 2015 expert meeting: indications, results and future perspectives. Human Reproduction. 32 (9), 1802-1811 (2017).
  8. Lantsberg, D., Fernando, S., Cohen, Y., Rombauts, L. The role of fertility preservation in women with endometriosis: a systematic review. Journal of Minimally Invasive Gynecology. 27 (2), 362-372 (2020).
  9. Anderson, R. A., et al. Cancer treatment and gonadal function: experimental and established strategies for fertility preservation in children and young adults. Lancet Diabetes & Endocrinology. 3 (7), 556-567 (2015).
  10. Lambertini, M., et al. Cancer and fertility preservation: international recommendations from an expert meeting. BMC Medicine. 14, 1 (2016).
  11. Kim, S. J., Kim, S. K., Lee, J. R., Suh, C. S., Kim, S. H. Oocyte cryopreservation for fertility preservation in women with ovarian endometriosis. Reproductive Biomedicine Online. 40 (6), 827-834 (2020).
  12. Loren, A. W., et al. Fertility preservation for patients with cancer: American Society of Clinical Oncology clinical practice guideline update. Journal of Clinical Oncology. 31 (19), 2500-2510 (2013).
  13. Peccatori, F. A., et al. Cancer, pregnancy and fertility: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology. 24, Suppl 6 160-170 (2013).
  14. Dondorp, W. J., De Wert, G. M. Fertility preservation for healthy women: ethical aspects. Human Reproduction. 24 (8), 1779-1785 (2009).
  15. Cil, A. P., Bang, H., Oktay, K. Age-specific probability of live birth with oocyte cryopreservation: an individual patient data meta-analysis. Fertilility and Steriityl. 100 (2), 492-499 (2013).
  16. Ubaldi, F. M., et al. Advanced maternal age in IVF: still a challenge? The present and the future of its treatment. Frontiers in Endocrinology. 10, 94 (2019).
  17. Cimadomo, D., et al. Impact of maternal age on oocyte and embryo competence. Frontiers in Endocrinology. 9, 327 (2018).
  18. Cobo, A., et al. Oocyte vitrification as an efficient option for elective fertility preservation. Fertility and Sterility. 105 (3), 755-764 (2016).
  19. Devroey, P., Polyzos, N. P., Blockeel, C. An OHSS-Free Clinic by segmentation of IVF treatment. Human Reproduction. 26 (10), 2593-2597 (2011).
  20. Sonigo, C., et al. Impact of letrozole supplementation during ovarian stimulation for fertility preservation in breast cancer patients. European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology X. 4, 100049 (2019).
  21. Marklund, A., et al. Efficacy and safety of controlled ovarian stimulation using GnRH antagonist protocols for emergency fertility preservation in young women with breast cancer-a prospective nationwide Swedish multicenter study. Human Reproduction. 35 (4), 929-938 (2020).
  22. Kuwayama, M. Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: the Cryotop method. Theriogenology. 67 (1), 73-80 (2007).
  23. Kuwayama, M., Vajta, G., Kato, O., Leibo, S. P. Highly efficient vitrification method for cryopreservation of human oocytes. Reproductive Biomedicine Online. 11 (3), 300-308 (2005).
  24. Bosch, E., et al. ESHRE guideline: ovarian stimulation for IVF/ICSI(dagger). Human Reproduction Open. 2020 (2), (2020).
  25. ESHRE Working Group on Ultrasound in ART. Recommendations for good practice in ultrasound: oocyte pick up(dagger). Human Reproduction Open. 2019 (4), 025 (2019).
  26. Rienzi, L., et al. Failure mode and effects analysis of witnessing protocols for ensuring traceability during IVF. Reproductive Biomedicine Online. 31 (4), 516-522 (2015).
  27. Mazzilli, R., et al. Effect of the male factor on the clinical outcome of intracytoplasmic sperm injection combined with preimplantation aneuploidy testing: observational longitudinal cohort study of 1,219 consecutive cycles. Fertility and Sterility. 108 (6), 961-972 (2017).
  28. Polyzos, N. P., et al. Cumulative live birth rates according to the number of oocytes retrieved after the first ovarian stimulation for in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection: a multicenter multinational analysis including approximately 15,000 women. Fertility and Steriityl. 110 (4), 661-670 (2018).
  29. Alteri, A., Pisaturo, V., Nogueira, D., D'Angelo, A. Elective egg freezing without medical indications. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 98 (5), 647-652 (2019).
  30. Mesen, T. B., Mersereau, J. E., Kane, J. B., Steiner, A. Z. Optimal timing for elective egg freezing. Fertility and Steriityl. 103 (6), 1551-1556 (2015).
  31. Doyle, J. O., et al. Successful elective and medically indicated oocyte vitrification and warming for autologous in vitro fertilization, with predicted birth probabilities for fertility preservation according to number of cryopreserved oocytes and age at retrieval. Fertility and Sterility. 105 (2), 459-466 (2016).
  32. Rienzi, L., et al. Significance of metaphase II human oocyte morphology on ICSI outcome. Fertility and Sterility. 90 (5), 1692-1700 (2008).
  33. Ubaldi, F. M., et al. Reduction of multiple pregnancies in the advanced maternal age population after implementation of an elective single embryo transfer policy coupled with enhanced embryo selection: pre- and post-intervention study. Human Reproduction. 30 (9), 2097-2106 (2015).
  34. Cakmak, H., Katz, A., Cedars, M. I., Rosen, M. P. Effective method for emergency fertility preservation: random-start controlled ovarian stimulation. Fertility and Sterility. 100 (6), 1673-1680 (2013).
  35. Moravek, M. B., et al. Long-term outcomes in cancer patients who did or did not pursue fertility preservation. Fertility and Sterility. 109 (2), 349-355 (2018).
  36. Vaiarelli, A., Venturella, R., Vizziello, D., Bulletti, F., Ubaldi, F. M. Dual ovarian stimulation and random start in assisted reproductive technologies: from ovarian biology to clinical application. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 29 (3), 153-159 (2017).
  37. Vaiarelli, A., Cimadomo, D., Ubaldi, N., Rienzi, L., Ubaldi, F. M. What is new in the management of poor ovarian response in IVF. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 30 (3), 155-162 (2018).
  38. Venturella, R., et al. State of the art and emerging drug therapies for female infertility. Gynecological Endocrinology. 35 (10), 835-841 (2019).
  39. Venturella, R., et al. A modern approach to the management of candidates for assisted reproductive technology procedures. Minerva Ginecologica. 70 (1), 69-83 (2018).
  40. Ferreiro, E., de Uralde, B. L., Abreu, R., Garcia-Velasco, J. A., Munoz, E. Aromatase inhibitors for ovarian stimulation in patients with breast cancer. Current Drug Targets. 21 (9), 910-921 (2020).
  41. Oktay, K., et al. Letrozole reduces estrogen and gonadotropin exposure in women with breast cancer undergoing ovarian stimulation before chemotherapy. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 91 (10), 3885-3890 (2006).
  42. Meirow, D., et al. Tamoxifen co-administration during controlled ovarian hyperstimulation for in vitro fertilization in breast cancer patients increases the safety of fertility-preservation treatment strategies. Fertility and Steriity. 102 (2), 488-495 (2014).
  43. Friedler, S., Koc, O., Gidoni, Y., Raziel, A., Ron-El, R. Ovarian response to stimulation for fertility preservation in women with malignant disease: a systematic review and meta-analysis. Fertility and Steriity. 97 (1), 125-133 (2012).
  44. Tsampras, N., Gould, D., Fitzgerald, C. T. Double ovarian stimulation (DuoStim) protocol for fertility preservation in female oncology patients. Human Fertility. 20 (4), 248-253 (2017).
  45. Vaiarelli, A., et al. Double stimulation in the same ovarian cycle (DuoStim) to maximize the number of oocytes retrieved from poor prognosis patients: a multicenter experience and SWOT analysis. Frontiers in Endocrinology. 9, 317 (2018).
  46. Cimadomo, D., et al. Luteal phase anovulatory follicles result in the production of competent oocytes: intra-patient paired case-control study comparing follicular versus luteal phase stimulations in the same ovarian cycle. Human Reproduction. 33 (8), 1442-1448 (2018).
  47. Rienzi, L., Ubaldi, F. M. Oocyte versus embryo cryopreservation for fertility preservation in cancer patients: guaranteeing a women's autonomy. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 32 (8), 1195-1196 (2015).
  48. Oktay, K., Harvey, B. E., Loren, A. W. Fertility preservation in patients with cancer: ASCO clinical practice guideline update summary. JCO Oncology Practice. 14 (6), 381-385 (2018).
  49. Iussig, B., et al. A brief history of oocyte cryopreservation: Arguments and facts. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 98 (5), 550-558 (2019).
  50. Best, B. P. Cryoprotectant toxicity: facts, issues, and questions. Rejuvenation Research. 18 (5), 422-436 (2015).
  51. Fuller, B., Paynter, S. Fundamentals of cryobiology in reproductive medicine. Reproductive Biomedicine Online. 9 (6), 680-691 (2004).
  52. Konc, J., Kanyo, K., Kriston, R., Somoskoi, B., Cseh, S. Cryopreservation of embryos and oocytes in human assisted reproduction. BioMed Research International. 2014, 307268 (2014).
  53. Erstad, B. L. Osmolality and osmolarity: narrowing the terminology gap. Pharmacotherapy. 23 (9), 1085-1086 (2003).
  54. Sunde, A., et al. Time to take human embryo culture seriously. Human Reproduction. 31 (10), 2174-2182 (2016).
  55. Swain, J. E., Cabrera, L., Xu, X., Smith, G. D. Microdrop preparation factors influence culture-media osmolality, which can impair mouse embryo preimplantation development. Reproductive Biomedicine Online. 24 (2), 142-147 (2012).
  56. Wale, P. L., Gardner, D. K. The effects of chemical and physical factors on mammalian embryo culture and their importance for the practice of assisted human reproduction. Human Reproduction Update. 22 (1), 2-22 (2016).
  57. Seki, S., Mazur, P. The dominance of warming rate over cooling rate in the survival of mouse oocytes subjected to a vitrification procedure. Cryobiology. 59 (1), 75-82 (2009).
  58. Karlsson, J. O. A theoretical model of intracellular devitrification. Cryobiology. 42 (3), 154-169 (2001).
  59. Jin, B., et al. Equilibrium vitrification of mouse embryos. Biololgy of Reproduction. 82 (2), 444-450 (2010).
  60. Mazur, P. Equilibrium, quasi-equilibrium, and nonequilibrium freezing of mammalian embryos. Cell Biophysics. 17 (1), 53-92 (1990).
  61. Parmegiani, L., et al. "Universal Warming" protocol for vitrified oocytes to streamline cell exchange for transnational donation programs: a multi-center study. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 37 (6), 1379-1385 (2020).
  62. Vajta, G., Rienzi, L., Ubaldi, F. M. Open versus closed systems for vitrification of human oocytes and embryos. Reproductive Biomedicine Online. 30 (4), 325-333 (2015).
  63. Cai, H., et al. Open versus closed vitrification system of human oocytes and embryos: a systematic review and meta-analysis of embryologic and clinical outcomes. Reproductive Biology & Endocrinology. 16 (1), 123 (2018).
  64. Parmegiani, L., et al. Sterilization of liquid nitrogen with ultraviolet irradiation for safe vitrification of human oocytes or embryos. Fertility and Sterility. 94 (4), 1525-1528 (2010).
  65. Parmegiani, L., et al. Efficiency of aseptic open vitrification and hermetical cryostorage of human oocytes. Reproductive Biomedicine Online. 23 (4), 505-512 (2011).
  66. Cobo, A., et al. Storage of human oocytes in the vapor phase of nitrogen. Fertility and Sterility. 94 (5), 1903-1907 (2010).
  67. Eum, J. H., et al. Long-term liquid nitrogen vapor storage of mouse embryos cryopreserved using vitrification or slow cooling. Fertility and Sterility. 91 (5), 1928-1932 (2009).
  68. Fabozzi, G., et al. Which key performance indicators are most effective in evaluating and managing an in vitro fertilization laboratory. Fertility and Sterility. 114 (1), 9-15 (2020).
  69. Dessolle, L., et al. Learning curve of vitrification assessed by cumulative summation test for learning curve (LC-CUSUM). Fertility and Sterility. 92 (3), 943-945 (2009).
  70. Alpha Scientists In Reproductive Medicine. The Alpha consensus meeting on cryopreservation key performance indicators and benchmarks: proceedings of an expert meeting. Reproductive Biomedicine Online. 25 (2), 146-167 (2012).
  71. Edgar, D. H., Gook, D. A. A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos. Human Reproduction Update. 18 (5), 536-554 (2012).
  72. Edgar, D. H., Archer, J., Bourne, H. The application and impact of cryopreservation of early cleavage stage embryos in assisted reproduction. Human Fertility. 8 (4), 225-230 (2005).

Tags

जीव विज्ञान अंक 175 प्रजनन संरक्षण अंडाशय उत्तेजना मेटाफेज II ओसाइट विट्रीफिकेशन वार्मिंग कुंजी प्रदर्शन संकेतक (केपीआई)
Oocyte Vitrification के माध्यम से प्रजनन संरक्षण: नैदानिक और प्रयोगशाला परिप्रेक्ष्य
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Maggiulli, R., Vaiarelli, A.,… More

Maggiulli, R., Vaiarelli, A., Cimadomo, D., Giancani, A., Tacconi, L., Fabozzi, G., Ubaldi, F. M., Rienzi, L. Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives. J. Vis. Exp. (175), e61963, doi:10.3791/61963 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter