Le présent protocole décrit une méthode simple et efficace pour prélever du sang dans la veine sous-clavière chez le rat. Il permet un prélèvement rapide, rapide et facilement identifiable sans anesthésie et permet d’obtenir du sang de haute qualité grâce à des prélèvements répétitifs d’échantillons.
Les rats sont largement utilisés dans les études pharmacocinétiques (PK) et toxicocinétiques (TK) qui doivent recueillir une certaine quantité de sang à des moments précis pour détecter l’exposition aux médicaments. La méthode d’échantillonnage du sang de rat détermine la qualité du plasma et affecte davantage la précision des résultats des tests. La méthode de prélèvement sanguin dans les veines sous-clavières décrite dans ce protocole prélève des échantillons de sang à plusieurs reprises dans l’état conscient des animaux pour répondre aux besoins des tests pharmacocinétique et TK. Les compétences de manipulation de contention et la procédure appropriée d’incision de l’aiguille assurent le taux de réussite de la collecte de sang. Il est facile à utiliser tout en assurant la qualité du plasma et en même temps en veillant au bien-être animal. Cependant, cette méthode nécessite une opération habile, et une mauvaise méthode peut causer la faiblesse, la douleur, la boiterie et même la mortalité des animaux. La méthode actuelle a été utilisée dans l’installation d’essai pour une étude de toxicité orale de 4 semaines chez des rats Sprague Dawley (SD) avec TK. La quantité maximale de sang prélevée dans les 24 heures ne dépassait pas 20 % du sang total de l’animal. Le poids corporel des animaux était supérieur à 200 g pour les mâles et les femelles. Les données ont montré que le poids corporel des animaux augmentait régulièrement chaque semaine et que l’observation clinique était normale après un prélèvement répétitif d’échantillons.
Selon les lignes directrices1 de la Conférence internationale sur l’harmonisation des exigences techniques pour l’enregistrement des produits pharmaceutiques à usage humain (ICH) et les lignes directrices2 de la National Medical Products Administration (NMPA), le nombre de points temporels de prélèvement sanguin des rats dans l’étude toxicocinétique (TK) doit répondre aux exigences de l’évaluation dynamique de l’exposition aux médicaments. Le volume sanguin total approximatif d’un rat est de 55 à 70 mL/kg de poids corporel3. Les points de temps de collecte sont généralement intensifs dans les 30 minutes suivant l’administration et diminuent par la suite, et plus de dix échantillons de sang doivent être prélevés dans les 48 heures dans les tests de routine4. Par exemple, des échantillons de sang sont prélevés à 12 moments (0 min, 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 45 min, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 8 h et 12 h) dans l’étude des savoirs traditionnels sur les drogues administrées par voie orale. Les chercheurs doivent prélever à plusieurs reprises de 200 à 250 μL de sang chez le rat afin d’obtenir du plasma de haute qualité pour le test TK5.
Les sites de collecte de sang chez les rats comprennent les vaisseaux sanguins de la queue, la veine du plexus rétro-orbitaire, la veine sous-maxillaire, le cœur, l’aorte abdominale6, etc. Parmi eux, la collecte de sang dans la veine caudale des rats est une méthode fréquemment utilisée, qui nécessite des opérateurs expérimentés et qualifiés 7,8. Recueillir du sang dans la veine rétro-orbitaire du plexus est moins compliqué; Cependant, cette méthode n’est pas recommandée car elle peut endommager la vue des rats9, et le sang du cœur et de l’aorte abdominale ne convient que pour le prélèvement sanguin final10. Une autre méthode de prélèvement de sang dans la veine sous-maxillaire chez un rat conscient s’est avérée entraîner plus de complications et a révélé une qualité d’échantillon de sang insuffisante11. Par conséquent, les chercheurs peuvent anesthésier l’animal pour réduire la difficulté d’échantillonnage. Pourtant, l’anesthésie augmente également le coût de l’expérience, et plus sérieusement, elle affectera l’état métabolique des rats12. Le présent protocole utilise une méthode rapide et simple de prélèvement de sang dans les veines sous-clavières de rats sans anesthésie, permettant un positionnement précis et une collecte de sang alternée bilatérale pour obtenir des échantillons de haute qualité en temps opportun et de manière répétée.
Il y a certains avantages à recueillir du sang dans les veines sous-clavières. (1) Comme le site de prélèvement sanguin est facilement dissocié et que le plexus veineux n’est pas régulier en raison des différentes postures des rats, la méthode décrite peut facilement localiser la position du plexus veineux tout en maintenant les postures stables et confortables des rats. (2) L’opération est facile et favorable au développement rapide des compétences des techniciens et moins de douleur pour les animaux. (3…
The authors have nothing to disclose.
Cette recherche a été financée par le Guangdong Provincial Key Laboratory of Drug Non-clinical Evaluation and Research (No.2018B030323024) et le Key Program « New Drug Creation » du Guangdong Key Research and Development Plan (No.2019B020202001), Guangzhou Fundamental and Application Foundation Research Project (No.202002030249 et No.202002030156).
1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm) | Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China) | 20210629 | |
75% alcohol | Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China) | 210717 | |
Animal source | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. | grade: SPF | laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847 |
Cotton swab | Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China) | 20210301 | Need to be sterilized. |
Electric shaver | Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China) | CP-6800 | |
EP tube, 1.5 mL | Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China) | ||
Heparin sodium (2 mL:12500 IU) | Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China) | 51200702 | Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60°C for use. |
Labtip (volume range 5-200 μL) | Thermo Fisher Scientific Oy | 94300120 | |
Low speed refrigerated centrifuge | Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China) | L535R | |
Pipette gun (20-200 μL) | BRAND | 12N92305 | |
Rats (SD) | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China) | ||
Sharp tool container | Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China) | ||
Eye drop | This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided. |