Summary
Bu protokol, apolipoprotein E (ApoE) eksikliği olan farelerde anjiyotensin II salınımı ile abdominal aort anevrizmasını indüklemek için ozmotik bir pompanın ve tekrarlanan ilaç tedavisi için juguler ven kateterli bir vasküler erişim portunun ardışık implantasyonunu tanımlar. Anevrizma gelişiminin 3D ultrason ile izlenmesi, dorsal implantlara rağmen etkili bir şekilde gerçekleştirilir.
Abstract
Abdominal aort anevrizmasının (AAA) klinik yönetiminde farmasötik tedavi seçenekleri bulunmadığından, hastalık patogenezinin anlaşılmasını ilerletmek ve potansiyel terapötik hedefleri belirlemek için hayvan modelleri, özellikle fare modelleri uygulanmaktadır. Bu modellerde AAA büyümesini engellemek için yeni ilaç adaylarının test edilmesi, genellikle deneyin süresi boyunca tekrarlanan ilaç uygulamasını gerektirir. Burada, AAA indüksiyonu, uzun süreli tedaviyi kolaylaştırmak için intravenöz kateter yerleştirilmesi ve 3D ultrason ile seri AAA monitörizasyonu için derlenmiş bir protokol açıklanmaktadır. Anevrizmalar, apolipoprotein E (ApoE) eksikliği olan farelerde, deri altından farenin arkasına implante edilen ozmotik mini pompalardan 28 gün boyunca anjiyotensin II salınımı ile indüklenir. Daha sonra, eksternal juguler ven kateterizasyonu için cerrahi prosedür, günlük intravenöz ilaç tedavisine veya bir subkutan vasküler erişim düğmesi aracılığıyla tekrarlanan kan örneklemesine izin vermek için gerçekleştirilir. İki dorsal implanta rağmen, AAA gelişiminin izlenmesi, deneysel örneklerde gösterildiği gibi, aort çapının ve hacminin genişlemesi ve anevrizma morfolojisi hakkında kapsamlı bilgi veren sıralı yarı otomatik 3D ultrason analizi ile kolayca kolaylaştırılmıştır.
Introduction
Abdominal aort anevrizması (AAA), aort duvarındaki enflamatuar ve doku-yıkıcı süreçlere bağlı olarak bir damarın patolojik dilatasyonudur ve sonuçta rüptür ve hasta ölümüne yol açabilir. Cerrahi AAA onarımında önemli başarılara rağmen, anevrizma genişlemesinin ilerlemesini engellemek ve potansiyel olarak rüptür riskini azaltmak için konservatif bir ilaç tedavisi bugüne kadar eksiktir. Hastalığın tetikleyicilerini ve aracılarını aydınlatmak ve tedaviye yeni yaklaşımları test etmek için hayvan modelleri geliştirilmiştir. AAA'nın fare modelleri yaygın olarak uygulanır ve insan dokusundan farklı gözlemleri kapsar. Pathomechanistic farklılıkları nedeniyle, moleküllerin / yolakların özel işlevini veya potansiyel terapötik ilaçların etkinliğini araştırmak için genellikle birden fazla model uygulanır 1,2. AAA indüksiyonunun en sık kullanılan modelleri arasında, akut bir hakaretten aort duvarına kadar anevrizma oluşumuna dayanan modellere kıyasla daha kronik benzeri patogeneze sahip olan apolipoprotein E eksikliği (ApoE KO) farelerde anjiyotensin-II (Ang-II) uygulaması 3,5'tir. Bu nedenle, Ang-II modeli hastalığın ilerlemesini izlemek için özellikle uygun görünmektedir ve son zamanlarda metabolik ve enflamatuar yanıtlar açısından insan AAA hastalığına yakından benzediği gösterilmiştir6. Özellikle, Ang-II modelinde sadece AAA gelişimi değil, aynı zamanda torasik anevrizma oluşumu ve intramural trombüs oluşumu ile aort diseksiyonu da bulunmaktadır.
Hastalığın başlamasını önlemek yerine, halihazırda yerleşmiş AAA'nın ilerlemesini hedeflemeyi amaçlayan tedaviler, tedavi gerektiren önceden var olan bir durumla başvuran hastalar olarak daha yüksek translasyonel değere sahip olabilir 7,8. Karşılaştırılabilir bir deneysel tasarım için, hastalık gelişiminin bir eşiğini tanımlamak ve potansiyel olarak fareleri tedavi gruplarına sınıflandırmak için AAA indüksiyonundan önce ve sonra aort boyutunun izlenmesi gerekir.
İlaç uygulama şekli, ilgili maddenin alımına ve stabilitesine bağlıdır. İntraperitoneal (i.p.) enjeksiyonlar en sık uygulama kolaylığı, anestezi gerektirmemesi ve enjeksiyon hacmi kısıtlamalarının olmaması nedeniyle kullanılır9. Bununla birlikte, uygulama yolunu seçerken farmakokinetiği göz önünde bulundurulmalıdır, çünkü i.p. uygulanan maddeler öncelikle hepatik portal dolaşım yoluyla emilir ve dolaşıma ulaşmadan önce karaciğer metabolizmasına uğrayabilir, bu da ilk geçiş etkisine bağlı olarak değişen plazma konsantrasyonlarına neden olabilir10. İntravenöz (i.v.) enjeksiyon, maddelerin en yüksek biyoyararlanımını sağlar ve tekrarlayan i.v. erişiminin zorluğu, günlük uygulama için kateterlerin ve vasküler erişim portlarının kullanılmasıyla atlatılabilir11,12,13. AAA ayarı ile ilgili olarak, dolaşımdaki ilaç dağılımı, tanımlanmış konsantrasyonlarda doğrudan anevrizma maruziyetini kolaylaştırır.
Burada, Ang-II fare modelinde AAA'yı bir ozmotik pompanın deri altı implantasyonu yoluyla indüklemek, harici juguler ven içine yerleştirilen bir katetere bağlı bir vasküler erişim portu aracılığıyla günlük i.v. ilaç tedavisi ve iki dorsal implantın varlığına rağmen 3D ultrason14 ile anevrizma boyutunun izlenmesi için bir iş akışını açıklıyoruz.
Protocol
Hayvan deneyleri, yerel etik kurul ve Avusturya Bilim Bakanlığı (BMWFW-66.009/0355-WF/V/3b/2016) tarafından, bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunmasına ilişkin 2010/63/EU sayılı Avrupa Direktifi ve 2012 Avusturya Hayvan Deneyi Yasası'na uygun olarak onaylanmıştır. İnsancıl sonlanım noktaları şu şekilde belirlendi: % ≥15 vücut ağırlığı kaybı, yiyecek ve / veya su alımından kaçınma, aktivitenin azalması (hipokinezi) veya diskinezi veya ağrı / semptom yönetimine rağmen uzun süreli titreme, kaşınma, nefes darlığı veya kambur duruş. Gerekirse, bir hayvan derin anestezi altında, yani aşırı dozda ketamin (yaklaşık 100 mg / kg) ve ksilazin (yaklaşık 5 mg / kg) kokteyli veya servikal çıkık ile ötenazi yapılır. Cerrahi prosedürler için, aseptik teknik ve steril / temiz eldivenler kullanılır.
1. Pompa implantasyonu
- Anestezi
- ApoE eksikliği olan fareleri (B6.129P2-Apoetm1Unc / J) normal bir diyette tutun ve tercihen insan hastalığında erkek baskınlığını temsil etmek için deneylere 12-14 haftalık erkek hayvanları dahil edin3.
- Ameliyattan 1 gün önce (d-1, OP öncesi), ozmotik pompaları üreticinin protokolünü izleyerek fare ağırlığına göre istenen anjiyotensin II konsantrasyonu ile hazırlayın ve doldurun ve pompaları gece15 37 ° C'de tuzlu su içinde inkübe edin.
Örnek: 25 g'lık bir fare için, 28 gün boyunca 1000 ng/kg/dak dağıtım hızına ve 0,25 μL/h pompa hızına sahip ozmotik pompalar (bkz. Malzeme Tablosu) kullanarak, 1,8 mg Ang-II'yi 300 μL salin içinde çözün (1500 ng/s Ang-II vermek için 6000 ng/μL konsantrasyonu). Çözeltiyi künt doldurma iğnesiyle pompaya yükleyin ve ardından pompayı kapatmak için akış moderatörünü takın. - Fareyi anestezi odasına bilinçsiz olanakadar 2 L/dak O2 ile karıştırılmış %3-%4 izoflurana yerleştirin. Fareyi yüzüstü pozisyonda ısıtılmış bir masaya (37 ° C) hareket ettirin ve izofluran anestezisini burun konisi aracılığıyla% 1.8 -% 2'de tutun.
- Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz kayganlaştırıcısı uygulayın.
- Fareye deri altından 10 μL/g farede salin içinde% 2.5 buprenorfin enjekte edin ve anestezi derinliğini bir ayak parmağı sıkışmasıyla doğrulayın.
- Farenin sol üst tarafındaki küçük bir alanı omuz bıçağının üzerinde tıraş edin. Tıraş edilen bölgenin dezenfeksiyonu için% 10 (w / v) povidon-iyot çözeltisi uygulayın.
- Pompa yerleştirme (5-7 dk, mikroskopsuz yapılır)
- Farenin ayak parmağı sıkışmasıyla tamamen uyuşturulduğunu kontrol edin ve orta omurga ile sol skapuler çizgi arasında bir neşter ile üst sırtın derisinde 1 cm'lik enine bir kesi yapın.
- Cildi forseps ile tutun ve sol arka bacağa doğru iterek deri altı bir cep yapmak için künt, kavisli makas kullanın. Makası açın, açılan makası kesimden çekin ve cebi genişletmek için tekrarlayın.
- Pompayı, akış moderatörü kuyruğa doğru olacak şekilde cebe yavaşça yerleştirin (Ang-II salınımının insizyon bölgesi tarafından potansiyel girişimini en aza indirmek için).
NOT: Cep sadece pompa yerleştirilmesi için değil, aynı zamanda cildin pompanın etrafında sıkı olmaması için yeterince geniş olmalı ve optimum yara iyileşmesi için pompa ile kesi yeri arasında en az 5 mm olmalıdır. - Yarayı 4-0 emilebilir kesilmiş dikişlerle kapatın.
- Fareye, deri altından 10 μL/g farede salin içinde %10 glikoz enjekte edin.
- Kapalı yaraya povidon-iyot yara spreyi uygulayın ve farenin bir ısıtma lambası altında bilinci geri kazanmasına izin verin, ardından ameliyattan sonraki 3 gün boyunca 200 mL içme suyunda 7.5 mg piritramid (uzun süreli ağrı yönetimi için) ve% 5 glikoz ile kafese geri koyun.
- Fareleri ağrı veya sıkıntı belirtileri için günde birkaç kez kontrol edin.
NOT: Aort rüptürleri %20-%40 oranında ve ağırlıklı olarak ameliyattan sonraki ilk 3-10 gün içinde meydana geldiğinden, uzun süreli şiddetli ağrı veya sıkıntı riskinin sık sık hayvan izlemesi ile en aza indirilmesi gerekir. Yaklaşan rüptür için ana endikasyonlar şunları içerir: gruptan ayrılma, kambur duruş, hareketliliğin azalması (arka ekstremite felci ölçüsünde) ve kullanım sırasında azalmış veya yanıt vermeme.
2. Juguler ven kateterizasyonu
NOT: Bu cerrahi prosedür 8x-10x büyütmeli bir mikroskop gerektirir.
- Vasküler erişim sistemini kullanarak ( bakınız Malzeme Tablosu), 3Fr tarafını istenen uzunlukta (silikon ankrajdan ~ 5-7 mm önce) keserek ve kateteri vasküler erişim sisteminin (VAS) 22 G metal konektörü üzerinde en az 3 mm örtüşme ile iterek kateteri hazırlayın. Bağlantı noktasını korumak için alüminyum kapağı düğmenin üzerine yerleştirin.
- 1-1,5 cm uzunluğunda 6-0 ipek ligatürler hazırlayın.
- Fareyi anestezi odasına bilinçsiz olanakadar 2 L/dak O2 ile karıştırılmış %3-%4 izoflurana yerleştirin.
- Fareyi sırtüstü pozisyonda ısıtılmış bir masaya (37 ° C) hareket ettirin ve izofluran anestezisini burun konisinden %1,8-%2 oranında tutun.
- Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz kayganlaştırıcısı uygulayın.
- Fareye, deri altından 10 μL/g fareye tuzlu su içinde% 2,5 büprenorfin enjekte edin.
- Kürkü ventral taraftaki boynun sağ tarafından ve üst sırtın sağ tarafındaki tıraş edin (sol tarafta implante edilmiş ozmotik pompa olacaktır).
- Tıraş edilen bölgenin dezenfeksiyonu için povidon-iyot çözeltisini uygulayın.
- Farenin ayak parmağını sıkıştırarak tamamen uyuşturulduğunu kontrol edin.
- Juguler ven hazırlığı (5-10 dk, mikroskop altında gerçekleştirilir)
- Boynun sağ tarafında, sağ klavikula üzerinde 0,5 cm'lik transversal supraklaviküler cilt kesisi yapın.
- Bağ dokusunu ve yağını ayırmak için künt mikrocerrahi cımbız kullanın ve dış juguler veni açığa çıkarın. Yağdaki küçük kan damarlarını parçalamaktan kaçının.
- Göğüs kaslarına yakın, damarın en az 5 mm'sini izole edin.
- Bükülmüş mikro cımbız kullanarak ven altındaki dokuyu künt diseke eder ve 6-0 ligatürlerin 2-3'ünden geçirir.
NOT: İlgilenilen alanda herhangi bir yan dal tespit edilirse, ya yan dala kaudal olacak şekilde ligatür yerleştirilmeli ya da yan dal izole edilerek ve 6-0 ligatür ile bağlanarak kalıcı olarak bağlanmalıdır. - Ligatürlere tutun ve siteye bir damla salin ekleyin.
- Düğme implantasyonu (5-7 dk, mikroskopsuz yapılır)
- Fareyi ters çevirin ve eğilimli konuma getirin; Anestezi derinliğini bir ayak parmağı tutamağı ile doğrulayın ve traş edilen bölgeyi dezenfekte etmek için povidon-iyot çözeltisini uygulayın.
- Orta omurga ve sağ skapuler çizgiler arasında bir neşter ile üst sırtta 1 cm'lik bir sagital kesi yapın.
- Künt diseksiyon ile kesi bölgesinin etrafındaki VAS boyutundan sadece biraz daha büyük dairesel bir cep yapmak için künt kavisli makas kullanın.
- Künt kavisli makası kullanarak sağ omzun üzerinden boyundaki ventral kesiye doğru kraniyal olarak tünel açmak için makası hafifçe açın, ardından açılan makası dışarı çekin ve hareketi daha fazla itilirken tekrarlayın.
NOT: Bu adım için fare sol tarafından açılabilir. - Tünel ventral insizyona ulaştığında, ventralden dorsal insizyona cerrahi kelepçelerden geçin.
- Kateterin 3Fr ucunu kelepçeye takın ve kateteri tünelden çekin, böylece ventral boyun insizyonunun dışında kalır ve VAS dorsal insizyonda yerinde olur.
- VAS'ın cerrahi keçe diskini deri altından arkadaki insizyona yerleştirin.
- Kateteri açın ve kalsiyum ve magnezyum (PBS-/-) içermeyen salin veya fosfat tamponlu salin ile yıkayın, koruyucu alüminyum kapağı çıkarmak için taşıma aletinin çatal ucunu kullanarak açıklığı kontrol edin ve ardından düğmeyi tutmak için manyetik ucu kullanın ve sıvı 1Fr ucundan sızana kadar ilgili enjektöre bağlı 1 mL'lik bir şırınga ile enjekte edin.
NOT: Kateter yıkama alternatif olarak adım 2.1'de gerçekleştirilebilir. - Düğmeye cebinizde kaudal olarak basın ve cildi VAS'ın keçe diski üzerinden, VAS'ın flanşının altında, kraniyal olarak en az iki 4-0 kesilmiş dikişle kapatın.
NOT: Düğmenin etrafındaki ciltte gerginlik olmadığından emin olun.
- Ven kateterizasyonu (7-10 dk, mikroskop altında yapılır)
- Fareyi sırtüstü pozisyona geri çevirin, anestezi derinliğini bir ayak parmağı tutamıyla doğrulayın ve kesilen bölgeye bir damla salin ekleyin.
- Kateter ve juguler ven etrafındaki ilk ligatürü 2-3 knot ile damarı ligate'e bağlamak ve kateteri dışarıya sabitlemek için mümkün olduğunca kraniyal olarak bağlayın. İkinci bağı pektoral kaslara mümkün olduğunca yaklaştırın.
- Kateteri istenen uzunluğa kadar kısaltın, böylece keskin bir uç oluşturmak için çapraz açıyla mikro makasla keserek kateterin ~ 3-5 mm'si damarda olur.
- Güvenli kraniyal ligatürü çekerek ve iğneyi damara paralel iterek tuzlu suyla dolu 1 mL'lik bir şırıngaya bağlı 27 G'lik bir iğne kullanarak damardaki bir deliği delin.
NOT: Geri akıştan gelen kan damardan sızarsa, kanama durana kadar basınç uygulamak için pamuklu çubukla kullanın. - Güvenli kraniyal bağı çekerek ve bükülmüş cımbızı kullanarak kateteri damarın içine kaydırarak kateteri aynı şekilde damara yerleştirin. Kateteri damarla aynı hizaya gelene kadar itin.
- İkinci bağı 2-3 knot ile damar içine kateterin yerleştirildiği bölge üzerine bağlayın ve kan kaçağı olmadığını kontrol edin. Kateteri ek olarak sabitlemek için üçüncü bir ligatür ve lokal yağ dokusunun bir kısmı kullanılabilir.
- Her iki ligatürdeki fazla ucu mikro makasla kesin ve bir damla salin ekleyin.
- Cildi 4-0 emilebilir kesilmiş dikişlerle kapatın.
- Fareye, deri altından 10 μL/g farede salin içinde %10 glikoz enjekte edin.
- Koruyucu alüminyum kapağı çıkarmak için taşıma aletinin çatal ucunu ve ardından düğmeyi tutmak için manyetik ucu kullanarak fareye istenen miktarda inhibitör veya PBS / salin enjekte edin ve enjektöre bağlı 1 mL'lik bir şırınga ile enjekte edin.
NOT: Enjeksiyon şırıngasında hava veya hava kabarcığı olmadığından emin olun, enjeksiyondan önce bir damla sıvı çıkana kadar pistona bastırın. Kateter ucuna kan çekilmesini ve kateter tıkanmasına neden olmasını önlemek için şırıngayı enjektörle VAS'tan ayırırken piston üzerindeki pozitif basıncı koruyun. - Kapalı yaraya bir povidon-iyot yara spreyi uygulayın ve farenin bir ısıtma lambası altında bilinci kazanmasına izin verin, ardından ameliyattan sonraki 3 gün boyunca 200 mL içme suyunda 7.5 mg piritramid (uzun süreli ağrı yönetimi için) ve 20 mL% 5 glikoz ile kafese geri gönderin.
- Fareleri ağrı veya sıkıntı belirtileri için günde birkaç kez kontrol edin.
- Günlük enjeksiyonlar (<5 dk.)
- Günlük enjeksiyon için, fareyi anestezi odasına% 3 -% 4 izofluranda 2 L / dakO2 ile karıştırılmış, bilinçsiz olana ve solunum hızı yavaşlayana kadar yerleştirin, ardından adım 2.12.10'daki gibi enjekte edin. Enjeksiyon sonrası şişlik belirtileri için boynu kontrol edin, bu da kateterin artık damara yerleştirilmediğini gösterir. Ayrıca, kateter tıkanırsa enjeksiyonun mümkün olmayacağını unutmayın.
NOT: Günde 1x 10 μL / g fare ağırlığı enjeksiyonu fareler tarafından iyi tolere edilir.
- Günlük enjeksiyon için, fareyi anestezi odasına% 3 -% 4 izofluranda 2 L / dakO2 ile karıştırılmış, bilinçsiz olana ve solunum hızı yavaşlayana kadar yerleştirin, ardından adım 2.12.10'daki gibi enjekte edin. Enjeksiyon sonrası şişlik belirtileri için boynu kontrol edin, bu da kateterin artık damara yerleştirilmediğini gösterir. Ayrıca, kateter tıkanırsa enjeksiyonun mümkün olmayacağını unutmayın.
3.3D ultrason
- Ultrason görüntüleme sistemini, ısıtma masasını ve jel ısıtıcısını hazırlayın, dönüştürücüyü sisteme takın ve sahnenin üzerine enine konumda (yani fare omurgasına dikey) ayarlayın.
- Ultrason yazılımını kullanarak ayarları 30 dB, görüntü derinliği 9,0 mm ve görüntü genişliği 8,08 mm olacak şekilde ayarlayın.
- Fareyi anestezi odasına bilinçsiz olanakadar 2 L/dak O2 ile karıştırılmış %3-%4 izoflurana yerleştirin. Fareyi sırtüstü pozisyonda ısıtılmış bir masaya (37 ° C) hareket ettirin ve izofluran anestezisini bir burun konisi aracılığıyla% 1.8 -% 2'de tutun.
- Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz kayganlaştırıcısı uygulayın.
- Kürkü fare karnındaki tıraş edin. Gerekirse 1 dakika boyunca epilasyon kremi uygulayın, ardından silin ve nemli gazlı bezle temizleyin.
- Sahnedeki dört elektrokardiyogram (EKG) elektrodunun her birine bir damla elektrot jeli ekleyin ve fare ekstremitelerini bunlara bantlayın.
- Sıcak ultrason jelini farenin karnına yayın ve vericiyi hayvanla temas ettirmek için indirin.
- Aortu dairesel hızlı titreşen bir damar olarak tanımlayın.
NOT: İnferior vena kava (IVC) aortun yanına yerleştirilecektir ve prob sıkıca bastırılırsa, aort sabit kalırken IVC sıkıştırılacaktır. Analiz edilen damarın IVC yerine aort olduğunun doğrulanması, 65°'lik bir açıyla darbe dalgası Doppler (PW-modu) kullanılarak elde edilebilir. Aort yüksek nabız dalga hızına sahip olacaktır. - Sol renal arteri bulun ve ilgilenilen alanda (yani suprarenal aort) herhangi bir girişim olmadığından emin olmak için bölgeyi kraniyal olarak 12 mm'ye kadar manuel olarak araştırın. Sol renal artere dönün ve ardından probu sol renal arterden kraniyal olarak 6 mm'ye ayarlayın.
NOT: 3D ultrason, menşe noktasından kaudal olarak yarıya (6 mm) başlayan ve belirtilen uzunluğu (12 mm) kraniyal olarak kaydedecektir. Parazit için sorun giderme adımları, dönüştürücüyle hafifçe bastırmayı, dönüştürücüyü kaldırıp tekrar indirmeyi, daha fazla ultrason jeli uygulamayı ve sahnenin açısını eğmeyi içerir. - 3D ultrason alımı
- Solunum geçidini %25 gecikmeye ve %50'lik bir pencereye ve EKG tetikleyicisini (T1) 50 ms'ye (aortun pik sistolik dilatasyonunu kaydetmek için) ayarlayın.
NOT: Solunum geçidi, solunum hızına ve hareket artefaktlarının çıkarılmasını sağlama çabasına bağlı olarak her hayvan için optimize edilebilir. - 3B seçeneklerinden, tarama mesafesini 0,076 mm'lik bir adım boyutuyla 11,96 mm'ye ayarlayın ve bu da 157 kare ile sonuçlanır.
- Program yaklaşık 1-2 dakika içinde 157 kareyi otomatik olarak alacaktır. Görüntü kalitesini kontrol etmek için kaydırın, subpar ise tekrarlayın, sonra görüntüyü kaydedin.
- Solunum geçidini %25 gecikmeye ve %50'lik bir pencereye ve EKG tetikleyicisini (T1) 50 ms'ye (aortun pik sistolik dilatasyonunu kaydetmek için) ayarlayın.
- 2D çap kazanımı
- Solunum geçidi ve EKG tetikleyicisini kapatın ve suprarenal aortun 12 mm uzamasında en büyük çapa sahip alanı manuel olarak bulun.
- B modu görüntüsü16 elde edin.
- Ek olarak, dönüştürücüyü hareket ettirmeden, aynı yerde sistemin standart ayarlarıyla EKG kapılı kilohertz görselleştirme (EKV) görüntüsü elde edin.
- Taramayı sonlandırma
- Ultrason jelini karnından silin ve fareyi kafesine geri getirin. Tamamen iyileşene kadar fareyi izleyin.
4. Ultrason analizi
- Hacim analizi
- Analiz yazılımında, 3D Mode görüntüsünü açın ve Görüntü İşleme menüsünün altında, 157 2D kareyi bir 3D görüntüde (yani küp) derleyecek olan 3D'ye yükle'ye basın.
- Hacim Ölçümü menüsünde, Paralel ve Dönme Yöntemleri'ni seçin ve ardından yazılım 3B görüntüyü tek bir bölmede görüntüleyecektir.
- Ses Düzeyi altında, Başlat'a basın ve ilk noktayı eklemek için tıklatarak, imleci aortun etrafında hareket ettirerek ve ardından konturu tamamlamak için sağ tıklatarak aortun iç duvarının etrafına ilk konturu çizin.
- 9-10 kare (0,75-1 mm) atlayın, ardından aynı şekilde başka bir kontur çizin. Son kareye ulaşılana kadar bu adımları yineleyin. Bu, 16-17 konturla sonuçlanmalıdır.
NOT: 12 mm'nin üzerindeki doğru hacmin hesaplanabilmesi için ilk ve son çerçevelerin konturlarının çizilmiş olması gerekir. - Menüden ilk konturu seçin ve İyileştir'i seçin. Bu, çizgiyi gemi duvarına yakından sığdırmak için kenar algılama algoritmasını başlatacaktır. Kontur üzerindeki noktaları yeni bir konuma sürükleyerek hareket ettirin, böylece kontur aortun iç duvar kenarını doğru bir şekilde hizalar.
NOT: Ang-II modelinde intramural trombüs mevcut olabilir. Bu, bu modelin ortak bir özelliği olduğundan, hacim ölçümü trombüsü içermelidir. - Tüm konturları hassaslaştırın ve analizi kaydetmek için Son'a basın. Hesaplanan hacim sol alt köşede görüntülenecektir.
- Çap analizi
NOT: Çap ölçümleri içten içe duvar, dıştan dış duvara veya içten dışa duvar şeklinde yapılabilir, ancak tüm ölçümler için tutarlı olmalıdır. Bununla birlikte, Ang-II modelinde, analize dahil edilmesi gereken bir intramural trombüs mevcut olabilir.- 3D mod görüntüsünden: Görsel inceleme ile maksimum çapı belirlemek için 157 kareyi değerlendirin. Ardından, Ölçüm menüsünden Doğrusal'ı seçin ve en büyük çapı belirlemek için aort boyunca birden fazla çizgi çizin.
- B modu veya EKV (EKG kapılı kilohertz görselleştirme) görüntüsünden: Cine döngüsünde, görsel inceleme ile aortun maksimum genişlemesini (sistolde) tanımlayın. Ardından, Ölçüm menüsünden Doğrusal'ı seçin ve en büyük çapı belirlemek için aort boyunca birden fazla çizgi çizin.
NOT: EKG, kardiyak siklüsü belirlemek için kullanılabilir, ancak görsel tanımlama doğru sonuçlar verir.
Representative Results
Temsili sonuçlar, başlangıçta, 8. günde ve 27. günde ultrason ile izlenen suprarenal anevrizmaların gelişimini ve ilerlemesini göstermektedir (Şekil 1A). Şekil 1A'daki 27. gün aortunun trikrom boyası ( Şekil 1B ), duvar diseksiyonu ve intramural trombüs ile oluşan anevrizmanın morfolojisini göstermektedir. Aort hacmi (mm3) 12 mm14'lük bir streç üzerinde belirlendi ve EKV görüntülerinden ek olarak maksimum aort çapı ölçüldü. İlk anevrizma gelişimini tanımlamak için başlangıçtan 8. güne kadar% 125'lik bir hacim büyümesi eşiği belirlendi. 2 yıl boyunca toplanan verilere dayanarak (2020-2021, n = 157), hayvanların sadece% 9'u bu kesime göre bir AAA oluşturamadı. Bununla birlikte, farelerin% 35'i 9. günde kateter implantasyonundan önce aort rüptürleri (torasik veya karın) yaşamıştır, böylece AAA hastalığı olan kalan hayvanların toplam% 56'sı tedavi gruplarına tabakalaşmaya uygundur (Şekil 1C). Not olarak, tarihsel PBS kontrollerimiz arasında (n = 21), anevrizmalar değişen derecelerde gelişmiştir (aralık: % 128 -% 314, ortalama% 199 ± 8. günde % 55 SD aort hacmi büyümesi). Önemli olarak, ilk genişleme ile daha fazla hastalık progresyonu arasında ters bir ilişki gözlenmiştir, yani hızlı ilerleyen anevrizmaların% 55'i (8. günde >% 200 hacim büyümesi) 27. güne kadar ilerlemezken, diğer anevrizmaların% 80'i (>125% ve% 200 hacim büyümesi) deneyin sonuna kadar genişlemeye devam < (Şekil 1D).
Son zamanlarda bildirildiği gibi14,17, tarif edilen yöntemler başarılı bir şekilde kurulmuş, doğrulanmış ve uygulanmıştır, örneğin, bir histon sitrullinasyon inhibitörünün (GSK484, nötrofil hücre dışı tuzak oluşumunun inhibisyonu için) yerleşik AAA'nın ilerlemesini bloke etmedeki terapötik etkisini belgelemek için. ApoE eksikliği olan fareler, 28 gün boyunca deri altından implante edilen ozmotik pompalarla 1000 ng / kg / dak'da Ang-II aldı. Hayvanlar, 8. günde ölçülen aort hacmine dayanarak GSK484'e (0.2 μg / g / gün) veya PBS tedavisine 1: 1 tabakalandırıldı ve 9. günde juguler ven kateterizasyon prosedürü uygulandı. İlaç enjeksiyonları, çalışmanın sonuna kadar günlük olarak 10 μL / g fare ağırlığı hacminde gerçekleştirildi17. Şekil 2, GSK484 tedavisinin AAA progresyonunu inhibe ettiğini, anevrizmaların kontrol farelerinde büyümeye devam ettiğini ortaya koyan örnek (n = 2 / grup) ultrason sonuçlarını (mutlak ve göreceli hacim veya çap genişlemesinin zaman seyri) göstermektedir.
Şekil 1: Ang-II fare modelinde AAA oluşumu ve ilerlemesi 3D ultrason ile tespit edildi. (A) Suprarenal aort, Ang-II pompa implantasyonundan sonra başlangıçta (BL), gün 8 (d8) ve gün 27'de (d27) 3D ultrason ile izlendi. Hacim, 3D yeniden yapılandırılmış bir görüntüye dayanarak suprarenal aortun 12 mm'lik bir uzantısı (157 kare) üzerinde ölçüldü. EKV görüntülerinden maksimum aort çapı belirlendi. (B) Fare kurban edildikten ve organ toplanmasından sonra 27. günün enine kesitinin trikrom boyası. Aort diseksiyonunun varlığı L1/L2 (lümen 1 ve lümen 2) ile gösterilir ve intramural trombüs A ve B'de * ile gösterilir. (C) 2 yıl boyunca toplanan bir veri setinden 8. günde AAA insidansı (BL'den %>125 aort hacmi büyümesi) ve ilk 9 gün içinde (torasik veya karın) aort rüptürleri (n=157) insidansı. (D) PBS kontrolü ile tedavi edilen farelerde (n = 21) başlangıçta hızlı oluşan (BL'den 8. güne %200 > aort hacmi büyümesi) ile orta derecede büyüyen (BL<'den 8. güne %>125 ve %200 aort hacmi büyümesi) anevrizmalarının 8. günden 27. güne ilerleme sıklığı (n = 21). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Örnek olarak, vasküler erişim düğmesi aracılığıyla GSK484 veya PBS'nin intravenöz enjeksiyonu ile Ang-II modelinde AAA progresyonunu bloke etmek için histon sitrülinasyonun inhibisyonu sonucu elde edilir. (A) Suprarenal aortun 12 mm'lik bir gerilmesi üzerinde ölçülen aort hacmi (mm3). (B) Başlangıçtan itibaren hesaplanan aort hacmi büyümesi (BL = %100). (C) EKV görüntülerinden belirlenen maksimum aort çapı. GSK484 verilerinden hesaplanan aort çapı büyümesi daha önce yayınlanmış bir çalışmadan çıkarılmıştır17. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Discussion
Ang-II modeli, düşük teknik talepleri ve insan hastalığına benzeyen özel özellikleri nedeniyle AAA'nın en yaygın kullanılan fare modellerinden biridir 3,6. Ameliyat süresi hayvan başına yaklaşık 10 dakikadır ve deri altı cebi yeterince genişse ve hayvanın sırtında, insizyon bölgesinden uzakta, yara iyileşmesine müdahale etmeyecek şekilde alçak yerleştirilmişse, deri altı pompa implantasyonu fareler tarafından iyi tolere edilir. Cilt pompanın etrafında sıkı olduğunda, doku tahrişi meydana gelebilir, bu da iltihaplanmaya ve kabuklanmaya neden olabilir ve potansiyel olarak pompanın ozmotik basınçla serbest bırakma mekanizmasını bozabilir. Hayvan kurbanı sırasında pompada kalan Ang-II'nin hacminin ölçülmesi, Ang-II'nin 28 gün boyunca başarılı bir şekilde serbest bırakılıp bırakılmadığı konusunda fikir verir.
Ang-II modelinin son zamanlarda aort anevrizmasını ve diseksiyon ilerlemesini incelemek için çok uygun olduğu öne sürülmüştür, çünkü her iki6'nın insan özellikleriyle benzerlik göstermektedir. Daha da önemlisi, aort genişlemesini engellemek ve yeniden şekillenmeyi etkilemek için ilaç adaylarının test edilmesi, mevcut klinik talebe uygun olacaktır. Deneysel ortamımızda, tedaviye başlamadan önce, farelerde mutlak aort boyutundaki doğal değişimi açıklayan başlangıç çizgisine göre% 125 hacim büyümesine dayanarak, anevrizma oluşumu için bir kesim tanımlanmıştır. Eşik ve zaman noktası, histolojide aort duvarı yıkımını doğrulayan (veriler gösterilmemiştir) ve kateter implantasyonundan önce% 35 rüptür ve% 56 gözlenen AAA'larla sonuçlanan bir başlangıç zaman seyrinden türetilmiştir. Çalışmaya dahil edilmek üzere minimum bir belirlenmiş hastalık eşiği uygulanırken, daha sonra yüksek oranda başlangıç aort genişlemesinin deneysel uygulanabilirliği de sınırlayabileceği gözlenmiştir. 8. günde hızla %>200 hacme ulaşan anevrizmalar, olguların %55'inde bu boyutun üzerine çıkmamıştır (Şekil 1D). Bu, deneysel tasarım ve örneklem büyüklüğü hesaplaması sırasında dikkate alınmalıdır, çünkü bir tedavinin gerçek etkisini maskeleyebilir. Bu modelin bir başka yönü de% 20-40 oranlarında ve çoğunlukla Ang-II pompaimplantasyonundan sonraki ilk 10 gün içinde meydana gelen sık aort rüptürleridir (torasik veya karın). Böylece, tedavinin başlangıcını 9. gün olarak seçerek, yüksek oranda yerleşik anevrizmalar elde edildi ve juguler ven kateterizasyonu esasen deneyin sonuna kadar hayatta kalması beklenen farelerde gerçekleştirildi (tarihi kontrol grubumuzda sadece 3/24 fareler 9. günden sonra yırtıldı), böylece zaman, çaba korundu, ve maliyet.
Ciddi bir durum oluşturan aort rüptürlerinin yanı sıra, kateterin vasküler erişim düğmesi ve ozmotik pompa ile eşzamanlı implantasyonu, fareler tarafından iyi tolere edildi ve ameliyattan sonra iyileşme sonrası hareketlilik veya davranış üzerinde kayda değer bir etkisi olmadı. Juguler ven kateterizasyon prosedürü eğitimli araştırmacılar için yaklaşık 30 dakika sürmelidir. (İzofluran) anesteziye maruz kalma süresi minimumda tutulmalı ve solunum depresyonunu önlemek için hayvan solunum hızı yakından izlenmelidir, bu da çözülmediği takdirde ölümcül bir sonuca yol açabilir20. Kateter yerleştirilmesi için juguler veni deldikten sonra kan kaybı - majör ise hayvan ölümüne yol açar - juguler ven kraniyal olarak düzgün bir şekilde bağlanmadığında veya damarın izole bölgesine beslenen bir yan dal kapatılmadığında potansiyel olarak ortaya çıkabilir. Bu durumda, kan sızıntısı yavaşlayana veya durana kadar delinme bölgesine pamuklu çubukla basınç uygulanmalı, daha sonra kateter yerleştirme ve ligasyon mümkün olduğunca çabuk yapılmalıdır; Kollajen yara örtüsünün küçük bir parçası hemostaza yardımcı olmak için geçici olarak kullanılabilir.
Kateter açıklığı en önemli faktörlerden biridir, çünkü kateter damardan veya erişim düğmesinden kopması, ilacın deri altı boşluğuna sızdığı yerlerde yanlış ilaç verilmesine neden olur. Üreticinin kateter ve metal bağlayıcı arasında en az 3 mm örtüşme önerisi üzerine, yaranın açılması ve ameliyatta bağlantının yeniden kurulmasıyla sabitlenen bu modelde (2020-2021, n=73) 3 yıl boyunca düğme tarafında sadece bir kateter kopması vakası (düğmedeki kesi yerinden sızan enjekte sıvı ile gösterilir) kaydedilmiştir. Ek olarak, tarihsel PBS kontrol grubumuzda (2/21) kateter tıkanıklığı (enjekte etmeyi imkansız hale getiren), damardan kateter bağlantısının kesilmesi (enjeksiyon sırasında boyunda belirgin şişlik ile belirtilir) veya yara iyileşmesi komplikasyonları nedeniyle yaklaşık %10'luk bir kateter açıklığı başarısızlığı oranı yaşanmıştır. Bu sorunlar, kendi kendine meydana gelen yaralanmalara, yani fare çiziklerine veya ısırıklarına bağlı olabilir. Özellikle, yara iyileşmesine müdahale eden ilaç tedavileri başarısızlık oranlarını artırabilir. Açıklık oranını iyileştirmek için sorun giderme adımları, damara yerleştirilen kateterin uzunluğunun arttırılmasını, ligatürlerin kateter ve ven etrafında sıkıca düğümlenmesini sağlamayı ve enjekte ederken adım 2.12.10.'da açıklandığı gibi üreticinin tavsiyesine uygun olarak pozitif basınç tekniğini uygulamayı içerir. Kateter açıklığı ayrıca hayvan kurban edilirken mikroskop altında diseksiyon ve görsel muayene ile doğrulanmalıdır. Not olarak, enjekte edilen ilaç çözeltisinin günlük hacmi dikkatlice düşünülmelidir. Plazma hacmi kan basıncını düzenlediğinden, enjeksiyon hacmi AAA genişlemesini etkileyebilir ve bu nedenle kontrol hayvanlarının taşıyıcı hacimli sahte prosedürü almaları gerekir. Deneyimlerimize (ve yayınlanmamış gözlemlere) dayanarak, günlük 250 μL'ye kadar PBS miktarı iyi tolere ediliyor gibi görünmektedir. Son olarak, pompa implantasyonuna benzer şekilde, implante edilen vasküler erişim düğmesinin etrafında cilt tahrişi meydana gelebilir. Devitalize veya nekrotik dokunun eşlik ettiği iltihaplanma gözlenirse, canlı olmayan doku çıkarılarak yara debridmanı yapılmalıdır (nekrotik doku genellikle yaradan doğal olarak ayrılacaktır) ve gerekirse cilt dikilmelidir; Enflamasyon ve nekroz yaygınsa, hayvanın refahı ve insancıl bitiş noktaları kılavuzlara göre düşünülmelidir.
Ozmotik pompanın ve/veya VAS'ın tek ve çift dorsal implantasyonu, ultrason sinyaline veya farenin ultrason aşamasında uygun bir pozisyonda sabitlenmesine müdahale etmedi. Hacim ölçümü için aortun 3D görüntüsünü oluşturmak üzere 12 mm'nin üzerinde 157 karenin otomatik olarak elde edilmesi, yalnızca aortun ilgi alanı üzerindeki parazitten arındırılmasını sağlayan basit ve hızlı bir prosedürdür14. Bu bağlamdaki bir tuzak, girişim görüntüsünü temizlemeye çalışırken dönüştürücü ile çok fazla basınç uygulamaktır; bu, abdominal aortun kraniyal ucunun görüntüleri kaydedildiğinde solunum hızı kaburgaların sıkışmasından etkilenirse otomatik ölçümü kesintiye uğratabilir. Çap geleneksel olarak, ultrason analizi yapılırken maksimum çap alanını manuel olarak arayan operatör tarafından B modu kullanılarak elde edilen görüntülerde ölçülür. B modu görüntülerindeki bir gelişme, titreşen aortun yüksek kaliteli, yavaşlatılmış bir görüntüsünü üretmek için küçük aort hareketlerini çözebilen EKV görüntüleridir. Ayrıca, maksimum aort çapı, 157 görüntünün sistolde alınan aortun kapsamlı bir genel bakışını sunduğu (ayarlanmış EKG tetikleyicisi nedeniyle) elde edilen 3D çerçevelerden belirlenebilir.
Sonuç olarak, sunulan derlenmiş protokol, Ang-II ile indüklenen AAA'nın bir fare modelinde i.v. ilaç uygulaması ve 3D ultrason ile aort boyutunun izlenmesi için güvenilir ve tekrarlanabilir bir iş akışı sağlar. İzleme ve operasyon zaman noktaları özel ihtiyaçlara göre ayarlanabilir ve juguler ven kateterizasyonu, i.v. enjeksiyonları yoluyla spesifik maddelerin verilmesini gerektiren herhangi bir deney düzeni için ayrı ayrı gerçekleştirilebilir. VAS, pıhtılaşmayı önlemek için bir kateter kilit çözeltisi kullanılıyorsa, alternatif olarak tekrarlanan kan örneklemesi için kullanılabilir. Tarif edilen 3D ultrason prosedürü, AAA'nın elastaz veya CaCl2 tabanlı fare modellerinde akut hakaret üzerine anevrizmaların geliştiği infrarenal aortu ölçmek için uyarlanabilir. 3D ultrason edinimi, etkilenen aort bölgesi ve anevrizma morfolojisine genel bir bakış sunma avantajına sahip olsa da, görüntü alımı daha zaman alıcıdır ve bu nedenle daha maliyet yoğun olabilir. Protokolün kabul edilmesi gereken bir diğer sınırlaması, intravenöz enjeksiyonlar için hayvanların kısaca anestezi altına alınması ihtiyacıdır, intraperitoneal uygulama genellikle bilinçli farelerde yapılır.
Disclosures
Yazarların herhangi bir açıklaması yoktur.
Acknowledgments
Hayvan deneylerindeki yardımları için Prof. Podesser ve Prof. Ellmeier'in ekiplerine (Biyomedikal Araştırma Bölümü ve Laboratuvar Hayvanları Yetiştiriciliği ve Yetiştiriciliği için Temel Tesis, Viyana Tıp Üniversitesi) teşekkür ederiz. AAA trikrom boyaması, Monika Weiss ve Prof. Peter Petzelbauer (Viyana Tıp Üniversitesi Dermatoloji Bölümü) tarafından nazikçe gerçekleştirildi. Bu çalışma Avusturya Bilim Fonu [SFB projesi F 5409-B21] tarafından desteklenmiştir. Marc Bailey, İngiliz Kalp Vakfı [FS/18/12/33270] tarafından kişisel olarak desteklenmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4-0 Polysorb sutures | Covidien | GL-46-MG | Braided absorbable suture CV-23 Taper |
| 6-0 Silk sutures | Ethicon | 639H | PERMA-HAND Silk |
| ALZET 2004 osmotic pumps | DURECT Corp | 298 | Osmotic mini pumps |
| Angiotensin-II | Bachem | 4006473.0100 | Angiotensin II acetate |
| Aquasonic Clear Ultrasound Transmission Gel | Parker Labs | PUSG-0308 | Ultrasound gel |
| Betadona Wound Spray | Mundipharma | Wound disinfectant spray (povidone-iodine spray) | |
| Betaisodona Solution | Mundipharma | 15973 | Wound disinfectant solution (povidone-iodine solution) |
| Catheter for mouse femoral vein/artery | Instech Laboratories Inc | C10PU-MFV1301 | 1 to 3Fr, 10.5 cm, collar @1.2 cm. Fits 22 G |
| Hair removal cream | |||
| Handling tool | Instech Laboratories Inc | VABMG | Handling tool for magnetic mouse Vascular Access Buttons |
| HYLO NIGHT Eye Oinment | URSAPHARM | 538922 | Eye lubricant cream |
| Needles and syringes of various sizes | 1 mL and 5 mL syringes, 27 G and 30 G needles | ||
| Olympus SZ51 Stereo microscope | Olympus Corporation | Dissection and inspection microscope | |
| PinPort injectors | Instech Laboratories Inc | PNP3M-50 | Injector for vascular access button |
| Protective aluminum cap | Instech Laboratories Inc | VABM1C | Protective aluminum cap for magnetic 1 channel mouse VAB |
| Signa Electrode Ultrasound Gel | Parker Labs | PE-1560 | Electrode gel |
| Small electric shaver | |||
| Surigcal and microsurgical equipment | |||
| Suprasorb C | Lohmann & Rauscher | 20482 | Collagen wound dressing |
| Vascular access button (VAB) | Instech Laboratories Inc | VABM1B/22 | Vascular Access Button for mouse, magnetic, 1 channel 22 G, injector |
| Vevo 3100 Imaging System | FUJIFILM VisualSonics Inc | 51073-51 | Ultrasound system |
| Vevo Lab 5.6.1 software | FUJIFILM VisualSonics Inc | Ultrasound analysis software | |
| Vevo MX550D transducer | FUJIFILM VisualSonics Inc | Linear Array Transducer For Vevo 3100 system | |
| Vevo Mouse Handling Table | FUJIFILM VisualSonics Inc | 11436 | Mouse heating, mouse core temperature capture and ECG pads for physiological monitoring |
References
- Busch, A., et al. Translating mouse models of abdominal aortic aneurysm to the translational needs of vascular surgery. JVS-Vascular Science. 2, 219-234 (2021).
- Golledge, J., Krishna, S. M., Wang, Y. Mouse models for abdominal aortic aneurysm. British Journal of Pharmacology. 179 (5), 792-810 (2022).
- Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice. Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1605-1612 (2000).
- Bhamidipati, C. M., et al. Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase. Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).
- Phillips, E. H., et al. Morphological and biomechanical differences in the elastase and AngII apoE -/- rodent models of abdominal aortic aneurysms. BioMed Research International. 2015, 413189 (2015).
- Gäbel, G., et al. Parallel murine and human aortic wall genomics reveals metabolic reprogramming as key driver of abdominal aortic aneurysm progression. Journal of the American Heart Association. 10 (17), 20231 (2021).
- Phie, J., Thanigaimani, S., Golledge, J. Systematic review and meta-analysis of interventions to slow progression of abdominal aortic aneurysm in mouse models. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 41 (4), 1504-1517 (2021).
- Lu, H. S., Owens, A. P., Liu, B., Daugherty, A. Illuminating the importance of studying interventions on the propagation phase of experimental mouse abdominal aortic aneurysms. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 41 (4), 1518-1520 (2021).
- Al Shoyaib, A., Archie, S. R., Karamyan, V. T. Intraperitoneal route of drug administration: Should it be used in experimental animal studies. Pharmaceutical Research. 37 (1), 1-17 (2020).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: Routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
- Derde, S., et al. Use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration in a mouse model of critical illness. Journal of Visualized Experiments. (123), e55553 (2017).
- Lu, W., et al. Microsurgical skills of establishing permanent jugular vein cannulation in rats for serial blood sampling of orally administered drug. Journal of Visualized Experiments. (178), e63167 (2021).
- Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. Journal of Visualized Experiments. (59), e3496 (2012).
- Waduud, M. A., et al. High-frequency three-dimensional lumen volume ultrasound is a sensitive method to detect early aneurysmal change in elastase-induced murine abdominal aortic aneurysm. Aorta. 9 (6), 215-220 (2020).
- Lu, H., et al. Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice. Journal of Visualized Experiments. (103), e53191 (2015).
- Sawada, H., et al. Ultrasound imaging of the thoracic and abdominal aorta in mice to determine aneurysm dimensions. Journal of Visualized Experiments. (145), e59013 (2019).
- Eilenberg, W., et al. Histone citrullination as a novel biomarker and target to inhibit progression of abdominal aortic aneurysms. Translational Research. 233, 32-46 (2021).
- Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 23 (9), 1621-1626 (2003).
- Trachet, B., Fraga-Silva, R. A., Jacquet, P. A., Stergiopulos, N., Segers, P. Incidence, severity, mortality, and confounding factors for dissecting AAA detection in angiotensin II-infused mice: A meta-analysis. Cardiovascular Research. 108 (1), 159-170 (2015).
- Cesarovic, N., et al. Isoflurane and sevoflurane provide equally effective anaesthesia in laboratory mice. Laboratory Animals. 44 (4), 329-336 (2010).
