Summary

マウスにおける心房細動感受性評価のための経食道心房ペーシングの最適化

Published: June 29, 2022
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Summary

本プロトコルは、マウスにおける心房細動感受性を評価するために経食道心房ペーシングを使用する場合の実験パラメータの最適化を記載する。

Abstract

心房細動(AF)の遺伝的および後天的危険因子のマウスモデルは、AFの分子決定要因の研究において価値があることが証明されています。プログラムされた電気刺激は、生存手順として経食道心房ペーシングを使用して実行できるため、同じ動物での連続試験が可能になります。ただし、ペーシングプロトコルが多数存在するため、再現性が複雑になります。本プロトコルは、研究間の再現性を向上させるためにモデル固有の実験パラメータを開発するための標準化された戦略を提供することを目的としています。予備研究は、研究時の年齢、性別、およびペーシングプロトコルのパラメーター(例えば、ペーシングのモードおよびAF感受性の定義)を含む、調査中の特定のモデルの実験方法を最適化するために実施される。重要なことに、これは不注意な副交感神経叢の活性化を伴う神経節神経叢の刺激を引き起こす可能性があり、ペーシング中の誇張された房室(AV)ブロックによって現れ、しばしば人工的なAF誘導に関連するため、高い刺激エネルギーを避けるように注意が払われます。この合併症を示す動物は分析から除外する必要があります。

Introduction

心房細動(AF)は、複数の後天性および遺伝的危険因子の最終的な共通経路を表します。AF基質の病態生理学的メカニズムを調査する研究では、マウスモデルは、遺伝子操作の容易さおよび一般に、異なる臨床表現型についてヒトで観察されるAF感受性を再現するという事実を考えると有利である1,2,3しかし、マウスが自発的なAF4を発症することはめったになく、挑発的な心房ペーシング研究の使用が必要です。

プログラムされた電気刺激(PES)を実行して、心臓内5または経食道6ペーシングのいずれかを使用して、マウス心房電気生理学およびAF感受性を評価することができます。経食道アプローチは生存手順として特に有利であるが、その使用は、多数の公開された実験プロトコル7,8および再現性を妨げる可能性のある変動性の原因9によって複雑である。さらに、報告されたプロトコルの比較が限られているため、適切なペーシングプロトコルを選択することは困難です。

現在のプロトコルは、再現性を高めるためにマウスAF感受性を評価するためのモデル固有の経食道PES法を開発するための体系的な戦略を利用することを目的としています。重要なことに、最初のパイロット研究は、年齢、性別、およびペーシングモードの変動性を考慮してペーシングプロトコルを最適化するために実行され、ペーシングは結果を混乱させる可能性のある不注意な副交感神経刺激を最小限に抑えるように設計されています9

Protocol

この手順は、ヴァンダービルト施設動物管理および使用委員会によって承認され、実験動物の世話と使用に関するガイドと一致しています。このプロトコルは、遺伝的9 と取得したAF感受性の10 (例えば、高血圧)マウスモデルの両方を使用して開発されました。オペレーターは、研究中のマウスの表現型を知らされていませんでした。 <str…

Representative Results

経食道心房ペーシング研究では、SNRTとAVERP、およびAF感受性6を決定することにより、SAおよびAVノードの電気生理学的特性を評価します(図1)。ECG記録により、P波持続時間、PR間隔、QRS期間、およびQT/QTc間隔の測定が可能になります。急速な心房ペーシング中のECGの継続的な記録は、AFの脆弱性の次の測定値を提供できます:研究中に誘発されたエピソード…

Discussion

経食道心房ペーシングは、同じ動物での連続研究を可能にするだけでなく、その期間は通常、心臓内研究よりも短い(~20分)ため、麻酔薬の使用と電気生理学的パラメーターへの影響を最小限に抑えます。

個々のマウスモデルごとに最初に方法を最適化することが重要です。加齢は正常マウスにおけるAF誘導能を増加させ18,19、?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

図 2 は BioRender.com で作成されました。この研究は、国立衛生研究所の国立心臓、肺、血液研究所(HL096844およびHL133127)からの助成金によってサポートされました。アメリカ心臓協会(2160035、18SFRN34230125および903918 [MBM]);国立衛生研究所のトランスレーショナルサイエンス推進センター(UL1 TR000445)。

Materials

27 G ECG electrodes ADInstruments MLA1204
2-F octapolar electrode catheter NuMED CIBercath
Activated carbon canister VetEquip 931401
Analysis software ADInstruments LabChart v8.1.13
Biological amplifier ADInstruments FE231
Data acquisition hardware ADInstruments PowerLab 26T
Eye ointment MWI Veterinary NC1886507
Heating pad Braintree Scientific DPIP
Isoflurane Piramal 66794-017-25
Stimulator Bloom Associates DTU-210
Stimulus Isolator World Precision Instruments Model A365

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Cite This Article
Murphy, M. B., Kim, K., Kannankeril, P. J., Murray, K. T. Optimization of Transesophageal Atrial Pacing to Assess Atrial Fibrillation Susceptibility in Mice. J. Vis. Exp. (184), e64168, doi:10.3791/64168 (2022).

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