هنا ، نقدم طرقا مفصلة لإعداد وتقييم لقاح ورم مستحلب نانوي ذاتي التركيب في المختبر وفي الجسم الحي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التحضير والخصائص والسمية وتقييم الفعالية للقاح ورم مستحلب نانوي ذاتي التجميع ذاتيا في المختبر وفي الجسم الحي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
جذبت الببتيدات Epitope اهتماما واسع النطاق في مجال لقاحات الأورام بسبب سلامتها وخصوصيتها العالية وإنتاجها المريح. على وجه الخصوص ، يمكن لبعض الحواتم المقيدة ب MHC I أن تحفز نشاط الخلايا الليمفاوية التائية السامة الفعالة لإزالة الخلايا السرطانية. بالإضافة إلى ذلك ، تعد إدارة الأنف تقنية توصيل فعالة وآمنة للقاحات الأورام نظرا لملاءمتها وتحسين امتثال المريض. ومع ذلك ، فإن الببتيدات الخاتمة غير مناسبة للولادة الأنفية بسبب ضعف مناعتها ونقص كفاءة التوصيل. المستحلبات النانوية (NEs) هي أنظمة مستقرة ديناميكيا حراريا يمكن تحميلها بالمستضدات وتسليمها مباشرة إلى سطح الغشاء المخاطي للأنف. Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) هو الخماسي الأساسي للامينين ، وهو ببتيد ملزم بالأنتغرين تعبر عنه الخلايا الظهارية التنفسية البشرية. في هذه الدراسة ، تم تحضير لقاح ورم الببتيد NE ذاتي التجميع ذاتيا للأنف يحتوي على الببتيد الاصطناعي IKVAV-OVA257-264 (I-OVA ) بطريقة استحلاب منخفضة الطاقة. يمكن أن يؤدي الجمع بين IKVAV و OVA257-264 إلى تعزيز امتصاص المستضد بواسطة الخلايا الظهارية المخاطية للأنف. هنا ، نضع بروتوكولا لدراسة الخصائص الفيزيائية والكيميائية بواسطة المجهر الإلكتروني النافذ (TEM) ، ومجهر القوة الذرية (AFM) ، وتشتت الضوء الديناميكي (DLS) ؛ الاستقرار في وجود بروتين الميوسين. السمية من خلال فحص صلاحية الخلايا لخلايا BEAS-2B وأنسجة الأنف والرئة للفئران C57BL / 6 ؛ الامتصاص الخلوي بواسطة مجهر المسح بالليزر متحد البؤر (CLSM) ؛ الافراج عن ملامح عن طريق تصوير الحيوانات الصغيرة في الجسم الحي ؛ والتأثير الوقائي والعلاجي للقاح باستخدام نموذج E.G7 الحامل للورم. نتوقع أن يوفر البروتوكول أدلة تقنية ونظرية للتطوير المستقبلي للقاحات الغشاء المخاطي الببتيد الببتيد الجديدة للخلايا التائية.
المقدمة
باعتبارها واحدة من أهم ابتكارات الصحة العامة ، تلعب اللقاحات دورا رئيسيا في مكافحة العبء العالمي للأمراض البشرية1. على سبيل المثال ، في الوقت الحاضر ، يتم اختبار أكثر من 120 لقاحا مرشحا لأمراض COVID-19 ، تمت الموافقة على بعضها في العديد من البلدان2. تشير التقارير الأخيرة إلى أن لقاحات السرطان قد حسنت بشكل فعال تقدم علاجات السرطان السريرية لأنها توجه الجهاز المناعي لمرضى السرطان للتعرف على المستضدات على أنها غريبة على الجسم3. علاوة على ذلك ، يمكن استخدام العديد من حوامل الخلايا التائية الموجودة داخل أو خارج الخلايا السرطانية لتصميم لقاحات الببتيد ، والتي أظهرت مزايا في علاج السرطانات النقيلي بسبب ن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت التجارب على الحيوانات وفقا لإرشادات المختبر للمراجعة الأخلاقية لرعاية الحيوان (GB / T 35892-2018) وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية وأخلاقيات المختبر التابعة للجامعة الطبية العسكرية الثالثة. تم القتل الرحيم للفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من 100 ملغم / كغم من بنتوباربيتال الصوديوم 1٪.
1. إعداد I-OVA NE
- Admix 1 mg من monophosphoryl lipid A (MPLA) مع 100 ميكرولتر من DMSO ، دوامة لمدة 5 دقائق ، واتركها تقف لمدة 4 ساعات في درجة حرارة الغرفة (RT) لتذوب تماما.
- أضف Tween 80 و I-OVA كميا واخلطهما.
ملاحظة: تم خلط Tween 80 و I-OVA بنسبة كتلة 25: 119. - أضف السكوالين إ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وفقا للبروتوكول ، أكملنا التحضير والتقييم التجريبي في المختبر وفي الجسم الحي لتوصيل اللقاح النانوي لورم الأنف. تعد TEM و AFM و DLS وسائل فعالة لتقييم الخصائص الأساسية لإمكانات زيتا السطحية وحجم جسيمات اللقاح النانوي (الشكل 1). الخلايا الظهارية BEAS-2B هي نموذج فحص مفيد لاختبار السمية في المختبر للقاحات الأنفية (الشكل 2A). توضح الصور المجهرية الملطخة ب H&E أن I-OVA NE لم يكن له سمية مخاطية واضحة ، بما في ذلك تلف الأنسجة أو النزيف أو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تتمتع اللقاحات النانوية التي تعمل بأغشية الخلايا المناعية بمزايا كبيرة في العلاج الموجه للأمراض ، ويتم تقليل الآثار الجانبية من خلال خصائص مثل الانتحاء الفريد للورم ، وتحديد أهداف محددة ، والدورة الدموية المطولة ، والتفاعلات المحسنة بين الخلايا ، والسمية الجهازية المنخفضة. يمكن أيضا دمجها بسهولة مع وحدات العلاج الأخرى لعلاج السرطانات بشكل تعاوني16,20. يمكن الحصول على السمات المرغوبة من خلال التحكم في الخصائص الفيزيائية والكيميائية مثل القياس والشكل والشحنة الكهرب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة معروفة أو علاقات شخصية يمكن أن يبدو أنها تؤثر على العمل المذكور في هذه الورقة.
شكر وتقدير
تم دعم هذه الدراسة من قبل رقم 31670938 ، 32070924 ، 32000651 من برنامج المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين ، رقم 2014jcyjA0107 ورقم 2019jcyjA-msxmx0159 من برنامج مشروع مؤسسة العلوم الطبيعية في تشونغتشينغ ، رقم 2020XBK24 ورقم 2020XBK26 من المشاريع الخاصة بجامعة الجيش الطبية ، ورقم 202090031021 ورقم 202090031035 من البرنامج الوطني للابتكار وريادة الأعمال لطلاب الجامعات.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 96-بئر لوحات | Corning Incorporated ، الولايات المتحدة الأمريكية | CLS3922 | |
| Bio-Rad 6.0 microplate reader | Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA | مجموعات Bio-Rad 6.0 | |
| CCK-8 | Dojindo ، اليابان | CK04 | |
| أجهزة الطرد المركزي 5810 R | Eppendorf ، ألمانيا ؛ | 5811000398 | |
| DAPI | Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، الولايات المتحدة الأمريكية | D9542 | |
| مصل بقري الجنين (FBS) | Hyclone (Life Technology ، الولايات المتحدة الأمريكية) | SH30088.03 | |
| FITC I-OVA | Shanghai Botai Biotechnology Co.، Ltd. | NA | |
| HF 90/240 حاضنة | شفاء القوة, سويسرا | NA | |
| HPLC | شنغهاي بوتاي التكنولوجيا الحيوية المحدودة | E2695 | |
| المجهر المقلوب | نيكون ، اليابان | DSZ5000X | |
| IPC-208 | جامعة تشونغ تشينغ ، الصين | ||
| NA IVIS system ؛ | شركة Caliper Life Science Limited | NA | |
| JEM-1230 TEM | JEOL Limited Company of Japan | 1230 TEM | |
| Malvern NANO ZS | Malvern Instruments Ltd. ، المملكة المتحدة | NA | |
| MPLA | & nbsp ؛ شركة Invivogen Lit. | tlrl-mpla | |
| مرهم كبريتات | نيومايسين شنغهاي CP العامة للأدوية المحدودة | H31022262 | |
| OVA257 &ndash ؛ 264 | شنغهاي بوتاي التكنولوجيا الحيوية المحدودة | NA | |
| RPMI 1640 | Hyclone متوسط (Life Technology ، الولايات المتحدة الأمريكية) | SH30809.01 | |
| اقتران الببتيد الاصطناعي (I-OVA) من IKVAV-PA | Shanghai Botai Biotechnology Co.، Ltd. | NA | |
| Zeiss LSM800 مجهر مضان متحد البؤر للمسح الضوئي بالليزر | زايس ، ألمانيا | Zeiss LSM800 |
المراجع
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Mohammed, I., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
