Summary
这里介绍的是一种通过人工膜系统 在体外对 蜱虫进行血液喂养的方法，以允许各种蜱生命阶段的部分或完全充血。
Abstract
蜱虫及其相关疾病由于其公共卫生和兽医负担而是一个重要的研究课题。然而，在研究和饲养过程中对蜱虫的喂养要求可能会限制实验问题或实验室研究蜱虫及其相关病原体的能力。人工膜饲喂系统可以减少这些问题，并开辟传统动物饲喂系统可能无法实现的新研究途径。本研究描述了一种人工膜喂养系统，该系统已经过改进，可在所有 肩突硬蜱 生命阶段成功进食和肿胀。此外，本研究中描述的人工膜喂养系统可以通过简单细化所需的膜厚度来修改以用于其他蜱虫物种。人工膜饲喂系统的好处被系统的劳动密集型、可能影响饲喂成功的其他环境因素以及针对蜱虫的每个新物种和生命阶段改进技术的需求所抵消。
Introduction
蜱传疾病严重影响着全世界人类和动物的健康，2004年至2016年占美国所有病媒相关疾病的三分之二以上1。此外，近年来病例数一直在增长，越来越多的人和牲畜受到蜱虫及其相关疾病的影响2，3。虽然病例数上升趋势的原因可能有很多，但气候变化是一个重要因素3，4.预计蜱传疾病病例数量的持续增加突出表明需要开发新工具来调查蜱与其传播的病原体之间的关系。
众所周知，蜱在进食过程中会经历生理和基因表达的变化，这些变化在病原体传播中起作用5，6。使用动物模型进行研究检查全部和部分摄食对病原体传播和获取的影响可能很困难，特别是在啮齿动物模型不易被特定病原体感染的情况下。例如， 无形体吞噬细胞变体 -1菌株在 肩突硬蜱 和鹿之间自然传播，但无法感染小鼠，使实验室中的蜱感染复杂化7。人工喂养系统也可以通过使用具有抑制传播或感染的基因缺失的转基因突变体 来帮助研究伯氏疏螺旋体 等病原体8。使用人工喂养系统有助于研究人员通过允许感染或传播只发生在蜱虫一侧来隔离基因的作用，从而隔离可能混淆此类研究的任何宿主反应。
同样，与疾病和动物传播有关的蜱虫的某些生命阶段可能不会被诱导以常见的实验室模式物种为食。例如， 肩突硬蜱 雌性必须以较大的动物为食，通常是兔子9。虽然通常可用于实验室实验，但使用兔子的行政和管理要求超过了小型啮齿动物的要求，并且对于某些实验室来说可能令人望而却步。其他蜱虫种类，特别是那些兽医关注的蜱虫物种，必须以牛或其他大型动物为食，这些动物在大多数实验室中都不实用。 体外 喂养和感染方法，如人工膜喂养，为使用大型或外来宿主动物提供了替代方案。
此外，使用人工饲喂系统可以进行某些传统动物饲喂方法无法实现的分析。一个这样的例子是，通过将血源与喂养机制分离，可以检查不同宿主的血液在伯氏疏螺旋体传播中的作用10。这种对宿主血液的检查以及血液本身在没有宿主免疫反应的情况下所起的作用是能够理解病原体传播周期的重要因素，也是人工喂养系统能够帮助回答的问题11。还可以在饲料期间量化病原体的确切传播次数，而不仅仅是检查宿主中的传播成功和建立8，12。
在 1950 年代和 1960 年代，一些用于硬蜱的第一批人工摄食膜是由动物皮或动物源性膜制成的13，14。由于这些膜的生物学性质，新膜的生产和保质期都存在问题。在 1990 年代，开发了全人造膜，它利用网、纸或织物的背衬和硅胶浸渍15，16。有机硅是理想的选择，因为它的物理特性模仿了皮肤的弹性和轻微的粘性，以及它的生物固有特性。在此基础上，Krober 和 Guerin（该技术所基于的工作）描述了一种用于人工喂养 I. ricinus17 的有机硅浸渍人造丝膜喂养技术。
肩胛骨弧菌（一种密切相关的物种）方法的改进导致膜浸渍中使用的有机硅硬度、膜生产配方、腔室尺寸和附着兴奋剂存在显着差异。虽然本研究中报告的改进导致了与Andrade等人报告的膜特性相似的膜特性，他还开发了基于Krober和Guerin的有机硅膜用于肩胛骨I.，有机硅浸渍步骤存在差异，这使得可以灵活地将该方案用于肩胛骨I.的未成熟生命阶段15，18.本研究还描述了基于重复使用此方法的添加和技术更改、导致成功源的最佳实践以及可能出现的问题的故障排除。这种方法已被用于喂养所有活跃的生命阶段，用致病菌感染蜱虫，并将蜱虫暴露于多种剂量的抗生素19，20。虽然所示的人工膜喂养方法是针对肩胛蜱的，但这种方法很容易适应其他种类的蜱，膜厚度略有改变。
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Protocol
1. 准备蜱膜室
- 用70%乙醇擦拭，准备一个平坦的无孔表面，例如玻璃平面或陶瓷涂层的金属底座，然后用单层保鲜膜覆盖，确保保鲜膜平坦，没有气泡或皱纹（见 图1A）。
- 将100%人造丝镜头清洁纸胶带到准备好的表面上。确保它平坦并用胶带在纸张的所有四个面上略微拉紧。可以使用步骤 1.3 中描述的体积将两张 4 英寸 x 6 英寸的透镜纸制成膜。
注意：这足以组成多达 12 个进料室（见 图 1B）。如果膜用于幼虫蜱，请使用云龙纸代替镜头清洁纸。 - 通过将硅胶套件的每个部分的 5 mL 量出到一次性容器中，在加入 1.5 mL 己烷之前轻轻混合两种液体来制备 00-10 硬度的硅胶混合物。继续混合，直到混合物均匀并充分混合。
注意：如果为成虫制作膜，请使用硬度为00-50的硅胶。 - 使用小刮刀将硅胶混合物分布在镜头纸上。静置1分钟，以确保硅胶已浸入镜头纸中。使用少量向下压力用刮刀稳定地将多余的硅胶刮到侧面。用刮刀进行第二次通过，不施加向下的压力，以去除任何硅胶线并产生光滑的层。
注意：该过程的这一步可能需要一些练习才能为每个生命阶段生产最佳厚度的膜（成人：150-200μm;若虫：90-120μm;幼虫：80-100μm）。较厚的膜（在生命阶段的进料公差范围内）通常可以通过减少腔室中的冷凝和改善膜的自愈特性来产生更好的结果。 - 仅对于幼虫，将饲喂室的顶部浸入Fluon含氟聚合物树脂（PTFE-30）中数次，使其在两次施用之间干燥以产生一致的层。
注意：Fluon的应用将形成类似于不粘锅的含氟聚合物树脂不粘层。这将减少爬到腔室顶部的幼虫数量21。 - 在进行下一步之前，将膜在无尘环境中固化至少24小时，例如封闭的化学或生物安全柜。请参阅 图1C ，了解硅胶干燥后人造丝镜片纸的外观。
- 准备 30 硬度的有机硅混合物，通过混合等量的有机硅混合物 A 和 B 将腔室连接到膜上。
- 将聚碳酸酯腔室浸入硅胶混合物中约四分之一英寸（6毫米），然后放在膜片上，注意不要与任何胶带重叠（图1D）。
- 让附着硅胶固化至少24小时，然后再进行下一步。
- 使用手术刀，小心地切割每个连接的腔室周围的膜，修剪边缘，使其可以顺利地装入6孔板的孔中，而不会在侧面刮擦太多（图1E）。在腔室外留出足够的材料，以最大限度地提高膜的附着力。
注意：如果残留的外部材料过多，则从6孔板中反复取出腔室会导致膜与腔室部分分离。修复分离的膜在第 5 节中描述。 - 从膜片的每个角和中心切下一小块剩余的膜。从每块上取下保鲜膜。用千分尺测量碎片以确定平均膜厚度。
注意：如果膜厚度不在生命阶段的公差范围内（见步骤1.4），则应丢弃膜并重新制作。云龙纸的厚度由于其粗纤维束和薄区域而变化很大。虽然这种特性允许幼虫找到最佳厚度的区域，但它使得难以确定实际的膜厚度。 - 将进料室与每个室的一个O形圈一起放入玻璃烧杯中，在121°C高压灭菌至少20分钟以灭菌。使用前让腔室冷却。
2. 设置即时报价
- 准备一盏灯或房间，使灯亮16小时，然后熄灭8小时。如果使用灯，请确保下一步中的水浴在黑暗中8小时。
- 在34°C下设置一个水浴，并带有支撑物，以便6孔板可以坐在其中并稍微漂浮在其中。使用沉入水浴中的小玻璃烧杯作为支撑。使用透明盖子进行水浴，以保持蜱虫的明暗循环;如果需要，请使用 T 形支架和保鲜膜制作盖子。为了降低污染的风险，在水浴中加入0.02%苯扎氯铵，并将另一个水浴设置为36°C以加热冷血。
- 取出预先准备好的高压灭菌膜室，将O形圈放置在室周围（图1F），然后用足够的70%乙醇填充每个腔室以覆盖膜。在6孔板中静置5分钟，然后寻找腔室和膜之间以及膜本身中的任何泄漏。
注意：如果膜泄漏，乙醇将积聚在井底。渗漏的膜应丢弃。 - 从腔室中清空乙醇，然后在生物安全柜或层流罩内风干。
注意：这可能需要几分钟，具体取决于环境湿度。 - 在等待期间，通过在56°C下加热40分钟来加热使血液中的补体失活。用2 g / L葡萄糖补充机械去纤维化的牛血。
- 膜干燥后，将~20 μL吞噬兴奋剂涂在腔室内部，然后通过倾斜腔室将其散布在表面。有关从蜱虫碎屑制备吞噬兴奋剂的说明，请参阅第 6 节。
- 等到吞噬兴奋剂干燥后，再用刷子或镊子将蜱虫添加到腔室中。将蜱虫转移到腔室时，请尽快工作，以防止逃逸。将蜱虫放入冰上的管中1-2分钟，然后转移它们以减慢其逃生能力。转移刻度后，用封口膜密封顶部;不要过度拉伸封口膜，因为水浴产生的热量会导致它撕裂。
注意：镊子最适合若虫和成虫生命阶段，刷子最适合幼虫生命阶段。 - 将每个孔/室的5mL热灭活血液加入锥形管中，并置于36°C的水浴中。 在将蜱虫暴露在蜱虫之前，将冷血至少升至室温。每个 6 孔板留出四个腔室，以便于处理腔室。应避免每块板有更多的腔室，但是，根据水浴的大小，可以使用更多的板。
- 每 5 mL 血液向试管中加入 5 μL 3 mM ATP 和 50 μL 100 倍青霉素/链霉素/真菌酮原液。
- 将 4.5 mL 血液转移到 6 孔板的孔中，然后将腔室轻轻放入孔中，调整腔室上的 O 形圈高度，使膜位于血液中，但侧面的血液水平不会覆盖孔。将孔以一定角度放入血液中，以避免在血液和膜之间形成气泡。
注意：完成的板如图 2所示。 - 将6孔板的盖子放在喂养室的顶部;然后，将带有腔室的6孔板放入准备好的34°C水浴中并盖上盖子。
注意：顶部的盖子将有助于阻止冷凝水接触封口膜并稀释孔中的血液。
3.通过每12小时更换一次血液来维持喂养蜱虫
- 将每孔5mL热灭活的血液分装到管中，并在36°C水浴中加热。同时在水浴中解冻ATP和青霉素/链霉素/真菌区。
- 每孔加入 5 μL 3 mM ATP 和 50 μL 100 倍青霉素/链霉素/真菌区储备到血管中。将 4.5 mL 血液转移到新鲜 6 孔板的孔中。
- 从水浴中取出带有滴答室的 6 孔板。从孔中取出腔室，并用 10 mL 无菌 1x PBS 冲洗腔室和膜的外部以去除血液。
- 使用高压灭菌的滤纸，轻轻擦干膜和腔室以去除多余的PBS。更换腔室顶部的封口膜。如果腔室内有大量冷凝，请先用高压灭菌的滤纸轻拍干燥湿点，然后再用新鲜封口膜密封。
- 将滴答室放入装有新鲜血液的新 6 孔板中，如果需要，调整 O 形圈高度。对板上的每个腔室重复步骤3.3-3.5。将 6 孔板的盖子放在腔室顶部。将新的6孔板移回34°C水浴中。
- 每12小时重复步骤3.1-3.5，直到蜱虫喂养结束。等待蜱虫在充血时自行从膜上脱落，或者在仍然连接时用触感柔软的镊子轻轻地将它们从膜上取出以获得部分充血的蜱虫。
4. 抗真菌治疗
注意：仅当膜上看到真菌生长时才进行。如果喂食时间足够长，真菌可能会在膜的血液一侧形成。真菌污染的第一个迹象是膜上可见的小片（1-3毫米）凝血。当注意到真菌污染时，抗真菌治疗可以延长实验的持续时间并提高肿胀的成功率。
- 将每毫升 10，000 U 制霉菌素溶解在蒸馏水中，每个喂养室溶解 5 mL。用0.1μm注射器过滤器进行过滤灭菌。
- 新的 6 孔板每孔加入 5 mL 制霉菌素溶液，每个喂养室一个孔。
- 将PBS冲洗的腔室放入溶液中。静置10分钟。
- 用PBS冲洗处理过的膜，然后再放回新鲜血液。
- 每2-3天重复一次抗真菌治疗（取决于真菌污染的程度），直到实验完成。
5. 用氰基丙烯酸酯胶重新粘附分离膜
注意：仅在发现膜脱落时执行。
- 膜可能会部分从饲养室中分离，尤其是在从 6 孔板中取出时。如果发生这种情况，请用PBS冲洗血液膜。
- 轻轻擦干患处。它不需要完全干燥，但水分的存在会导致胶水凝固得更快。
注意：重新粘附膜会限制工作时间，但是，根据分离尺寸，可能需要更快的凝固时间。 - 将少量氰基丙烯酸酯胶水挤入膜从腔室拉开的间隙中。保持~2分钟，让胶水凝固。
- 将腔室放回 6 孔板中的血液中。
6. 制造吞噬兴奋剂
注意：在进料结束时或膜进料开始之前执行。
- 从先前的膜喂养或其他喂养蜱的来源收集蜱粪便。在制造吞噬兴奋剂之前将粪便储存在-20°C。压碎蜱虫粪便颗粒，每 1 mL 水混合 0.1 克。加入1 mM三肽还原型谷胱甘肽，溶解并通过涡旋充分混合。
- 用0.1μm注射器过滤器进行过滤灭菌。
- 在-20°C冷冻直至需要。
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Representative Results
成功的喂养取决于是否需要部分或完全充血。成功喂养的 肩胛骨I. 在成虫中变成青铜灰色，并自行从膜上分离。但是，如果它们至少是豌豆大小的，则在完成喂食时，它们可能会从膜上分离。对于 肩蜛不成熟 阶段，完全充血的蜱的大小各不相同，并且由于与成虫不同，它们不会表现出颜色变化，因此脱离是确定蜱是否完全充血的最佳方法。参见 图3 ，了解若虫I . scapularis 在喂养过程中的外观示例。 成虫肩突I. 蜱从附着到开始脱离膜需要1周或更长时间;若虫通常在附着后约5天脱离，幼虫在第一次附着后~3-4天开始分离。只要人们想要维持每天两次的血液变化，只要霉菌还没有开始生长到超出抗真菌治疗可以控制的范围，喂养就可以继续。部分充血的蜱虫必须手动从膜上分离。
自行从膜上脱落的未成熟蜱（幼虫和若虫）几乎总是成功地蜕皮进入下一个生命阶段，并且假设它们已经充分充血并且具有足够大的尺寸，即使是那些在饲料蜕皮结束时手动从膜上分离的蜱虫。在充血期间变成青铜灰色的雌性蜱虫通常可以成功产卵。然而，与自然喂养方式不同，膜喂养的充血雌性产生的卵量较小，并且比自然动物喂养的雌性更小。最近通过若虫充血和蜕皮从卵中喂养肩 胛蚴 幼虫的实验结果如 表1所示。最初幼虫饲料产生的若虫在蜕皮后2个月喂食。然而，重要的是要注意，该实验将鹿器官匀浆添加到血液中，这可能对蜱虫喂养成功产生不利影响。
在另一项实验中，将60只雌性和60只雄性肩 突I. scapularis 蜱放置在四个喂养室（每个室30个性别匹配的蜱），并允许雌性蜱进食以补充。这些蜱虫起源于从猎人杀死的鹿中收集的充血雌性的后代。除了肿胀成功数（肿胀和脱离后产卵的雌性数量）外，平均卵子质量重量和范围可以在 表1中看到。 肩胛 蜱的卵质量重量在文献中变化很大，但先前从明尼苏达州猎杀鹿中收集的蜱虫产生的卵质量平均重量为 77 毫克（19-147 毫克）22。使用人工膜饲喂系统蜱虫死亡率低;不附着和进食的蜱虫大多在这个过程中存活下来，增加了尝试与幸存者进行进一步膜喂养实验的可能性。
该方法已被用于用多种蜱传病原体感染 肩突 若虫I.，包括 吞噬细胞A. Variant-1，它不能使用传统的啮齿动物感染方法7。用qPCR确认细菌感染蜱虫，虽然所有成功喂养的若虫蜱在喂养后都是阳性的，但根据细菌种类，感染会或不会经静态持续19。该方法也已用于喂养雌性 肩胛胛环 丙沙星;成功喂养的蜱虫显示出与注射的蜱虫20相当的细菌共生体水平的敲低。
图1：滴答膜室 。 （A） 覆盖有保鲜膜的陶瓷涂层支架底座。（B） 胶带贴在塑料包装底座上的镜头纸。蓝色矩形是面板 C 中使用的刮刀。（C）用硅胶浸渍后的镜头纸。（D）连接到有机硅人造丝膜的腔室。每张 4 英寸 x 6 英寸镜头纸板可容纳六个腔室。（E）带有硅胶人造丝膜的完整腔室。右图显示分离的硅胶人造丝膜。（F） 组装完成的腔室，上面固定着一个O形圈。 请点击此处查看此图的大图。
图 2：设置即时报价馈送。 一组带有成年肩 突I. scapularis 的四个腔室的示例，一旦所有设置好并且将其放置在水浴中之前，将如何外观。 请点击此处查看此图的大图。
图 3：肩 胛硬蜱 若虫部分充血的持续饲料。 附着位点周围的黑色或棕色点（例如参见标签A）是在饲料期间和之后可以收集的碎屑，以制造吞噬兴奋剂。部分充血的 肩胛胛 胛若虫附着在膜上（见标签B）。通过标签C可以看到充血幼虫蜕皮的外壳， 请点击这里查看此图的大图。
| 起始报价数量 | 成功充血的蜱虫数量 | 鸡蛋质量平均质量（毫克）（范围） | |
| 幼虫 | 2 个孵化蛋团 | 150 | 不适用 |
| 若虫 | 150 | 24 | 不适用 |
| 成年女性 | 60 | 18 | 42.5 (5.3-77.8) |
表1：蜱虫充血数和鸡蛋质量重量。 幼虫和若虫充血实验条件除了本协议中使用的补充剂外，还向血液中添加了鹿器官匀浆。成年女性肿胀实验条件如上述方案所述。成功的肿胀被定义为成功蜕皮到下一个生命阶段的充血蜱或成功产卵的充血雌性。
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Discussion
蜱虫的人工膜喂养为各种实验程序提供了有用的工具，但不太可能取代所有应用的动物喂养。在没有动物喂养的情况下，在所有生命阶段维持大量蜱虫通常是站不住脚的。相反，人工饲喂系统对于其他目的很有价值，例如用模型宿主不支持的病原体感染蜱虫，在简化的摄食环境中评估化合物或微生物的受控剂量对蜱虫的影响，或饲养依赖实验室中不易获得的宿主动物的小蜱虫菌落8， 10，11，23，24，25.与传统的动物饲养方法相比，人工膜饲喂是劳动密集型的，存在挑战15，24。正是由于这些原因，人工膜喂养不能替代传统的动物喂养方法，而是允许传统动物喂养无法完成的实验。
保持饲养室和蜱虫菌落的卫生条件对于避免真菌和细菌污染至关重要。然而，当使用人工喂养将蜱暴露给病原体时，应避免从血液中补充青霉素/链霉素/真菌宗 （P/S/F），以避免杀死病原体。蜱暴露于血液中的环丙沙星可以完全消除肩胛立克次体，即肩胛立克次体的卵巢内共生体，来自F1后代的一个亚群，而常规的P / S / F添加到血液中没有这种效果20。未使用该系统进行经卵巢病原体传播研究，但在抗生素暴露与对照实验中，未发现充血女性的生育能力发生变化。快速开始进食和蜱虫充血可避免与真菌污染相关的许多问题;出于这个原因，该系统往往更容易处理幼虫和若虫蜱，因为它们的喂食时间较短。用制霉菌素等抗真菌药定期治疗受污染的膜可将肿胀时间延长几天。使用蜕皮足够长以渴望进食的蜱虫也很重要。幼虫在卵团中的所有幼虫完成出苗后 2 周准备就绪，但如果在蜕皮后至少 10 周使用若虫和成虫，则表现更好。
这种方法显示出与使用实验动物相当的蜱虫喂养成功率，通常有30%-50%的雌性和大约50%的若虫I . scapularis 完成充血，与以实验室兔子或若虫喂养小鼠或仓鼠的幼虫的成虫的充血成功率相当19。同样，其他使用人工喂养室的研究报告了肩 胛骨I. 雌性的肿胀率为45%，若虫的摄食率为72%10，18。同时，雌性 硬蓖麻 和若虫通过人工膜 喂养 ，肿胀率分别为71%和58%25。因此，结果可能会因使用的系统和所调查的蜱虫种类而异。
膜厚度是饲喂成功的重要因素;较薄的膜不太能够密封由蜱探测和附着产生的小孔。进料开始后，更多的水分进入腔室，这可能导致潮湿条件、碎屑液化和随后的再干燥和霉菌。因此，重要的是以蜱虫种类和生命阶段的下口长度可以耐受的最大厚度生产膜（参见方案步骤1.1-1.4）。 肩胛骨若 虫和 变异真皮 若虫以90μm至120μm厚度的膜为食，而成虫以厚度接近200μm的膜为食。成虫肩 胛 骨下口长500μm，若虫和幼虫护膜长~100μm，足以穿透稍厚的膜15，26。人造丝镜片纸的平均厚度为~50μm，由它制成的膜厚度至少为50μm;然而，如上所述，较厚的膜会产生更好的结果。幼虫摄食膜在80-100μm的厚度下使用非常轻的unryu纸（10g / m3）工作良好。这种不规则的桑葚纸上掺有相对较厚的纤维，为某些地方非常薄的膜提供支撑，从而允许充足的幼虫附着部位。
根据推荐的膜厚度和腔室大小，最好将成人饲料中的雌性数量限制为最多 20 只雌性（在方案步骤 2.7 中将蜱虫放置在腔室中）。更多的雌性可能会使附着部位过度拥挤，因为蜱虫往往非常紧密地附着在一起，这会损害局部区域的膜完整性并增加泄漏的风险，并减慢进食速度。对于若虫蜱，最大数量要高得多，即使每个房间喂食 50 个若虫，也没有注意到显着的有害影响。由于计算单个幼虫是不合理的，并且没有发现过度拥挤的问题，因此建议每个腔室的一半到整个卵质量，以便于设置。全卵团由~1，000个或更多的幼虫组成，并且在数十到~200个充血的幼虫的进料过程中可能会从单个卵团中脱落。此外，不进食的幼虫蜱虫往往不会死亡，并且可能会被重新饲养以备后喂食。
其他塑料已被用于生产喂料室，其中聚碳酸酯已被确定为最耐用和非反应性。其他塑料，如丙烯酸树脂，对清洁溶液敏感，这可能导致龟裂和破损，尤其是在管道的切割端。聚碳酸酯可以很好地耐受漂白剂、乙醇、高压灭菌和紫外线灭菌。
虽然由于下面温热血液的热刺激，腔室中的蜱虫最终可能会叮咬并附着在膜上，但化学吞噬剂形式的额外刺激有助于加速这一过程（有关配方，请参阅协议步骤6）。对于这项研究，使用溶解在水中的蜱虫粪便是理想的，因为它们能够在-20°C下长时间保存。它们也很容易更新，因为可以从后续饲料中收集蜱虫粪便。当然，第一次膜饲料可能无法获得建议的蜱粪便提取物的吞噬兴奋剂，并且可以在没有它的情况下进行，以帮助生产它以供将来的饲料使用。此外，可以使用替代吞噬兴奋剂，其他研究在不同的化学或机械刺激（如头发或头发提取物）上取得了成功15，24。
人工膜喂养为从事蜱虫和蜱传病原体生物学的研究人员提供了额外的工具。它价格实惠且简单，但也是劳动密集型的，可能需要一些初步测试来优化其所需的应用和蜱虫种类/生命阶段。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 00-10 Hardness Silicone | Smooth-On | Ecoflex 00-10 | Trial size from Smooth-On Store |
| 00-50 Hardness Silicone | Smooth-On | Ecoflex 00-50 | Trial size from Smooth-On Store |
| 30 Hardness Silicone | Smooth-On | Mold Star 30 | Trial size from Smooth-On Store |
| 6-well cell culture plates | Corning Incorporated | 3516 | |
| Adenosine triphosphate (ATP) | Millipore Sigma | A1852-1VL | Used to make an aqueous solution of 3 mM ATP that has been filter sterlized via 0.2 micometer filter |
| Bovine blood | HemoStat | DBB500 | Mechanically defibrinated; 500 mL is usually sufficient for one experiment |
| Clingwrap | Fisherbrand | 22-305654 | |
| Filter Paper | Fisherbrand | 09-790-2C | Autoclave and let cool before using. Can use Fine quality instead of medium too |
| Fluon (aqueous polytetrafluoroethylene) | Bioquip | 2871 | Available from other sources such as https://canada-ant-colony.com/products/fluon-ptfe-10ml |
| Glucose | Millipore Sigma | G8270-100G | |
| Hexane | Millipore Sigma | 139386-100ML | |
| Lens paper | Fisherbrand | 11-995 | 100% rayon |
| Nystatin | Gold Biotechnology | N-750-10 | |
| Parafilm | Fisherbrand | S37440 | |
| Penicillin/streptomycin/fungizone | Gibco | 15240-096 | Or equivalent generic with concentration as follows (10,000 units/mL of penicillin, 10,000 µg/mL of streptomycin, and 25 µg/mL of Amphotericin B) |
| Phagostimulant | Made in House | Collected from prior tick feeds | |
| Polycarbonate Pipe | McMaster-Carr | 8585K204 | Cut to 45 mm length, 1.25 inch outer diameter, 1 inch inner diameter. Cutting requires a chop saw grinding wheel. |
| Rubber O-rings | McMaster-Carr | 9452K38 | 5 mm thick, 1.25 inch inner diameter |
| Soft touch forceps | VWR | 470315-238 | |
| Super glue | cyanoacrylate glue | ||
| Unryu paper | Art supply stores | mulberry fiber 10 g/m2. Purchased at Wet Paint art supply store, St. Paul, MN, USA |
References
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