Summary
Здесь мы описываем общий протокол и дизайн, которые могут быть применены для идентификации следовых количеств и второстепенных компонентов в сложных составах натуральных продуктов (матрицах) в тибетской медицине.
Abstract
Тибетские лекарства сложны и содержат множество неизвестных соединений, что делает углубленное исследование их молекулярных структур критически важным. Жидкостная хроматография-электрораспылительная ионизационная времяпролетная масс-спектрометрия (LC-ESI-TOF-MS) обычно используется для извлечения тибетской медицины; Тем не менее, многие непредсказуемые неизвестные соединения остаются после использования базы данных спектра. В настоящей статье разработан универсальный метод идентификации компонентов в тибетской медицине с использованием масс-спектрометрии ионных ловушек (ИТ-МС). Метод включает в себя стандартизированные и запрограммированные протоколы для пробоподготовки, настройки МС, предварительного запуска LC, установления метода, сбора МС, многоступенчатой работы МС и ручного анализа данных. Два репрезентативных соединения в тибетской медицине Abelmoschus manihot seeds были идентифицированы с использованием многоступенчатой фрагментации с подробным анализом типичных структур соединений. Кроме того, в статье рассматриваются такие аспекты, как выбор ионной моды, регулировка подвижной фазы, оптимизация диапазона сканирования, управление энергией столкновения, переключение режима столкновения, коэффициенты фрагментации и ограничения метода. Разработанный стандартизированный метод анализа является универсальным и может быть применен к неизвестным соединениям в тибетской медицине.
Introduction
Качественный анализ микрокомпонентов в традиционной китайской медицине (ТКМ) стал важной темой в исследованиях. Из-за большого количества соединений в ТКМ их трудно выделить для анализа спектрометра ядерного магнитного резонанса (ЯМР) или рентгеновского дифрактометра (XRD), что делает методы на основе масс-спектрометрии (МС), требующие только небольших объемов образцов, все более популярными. Кроме того, жидкостная хроматография (ЖК) в сочетании с МС широко используется в исследованиях ТКМ в последние годы для улучшения разделения сложных образцов и качественного анализа химических соединений1. Одним из распространенных методов является времяпролетная масс-спектрометрия жидкостной хроматографии и ионизации электрораспылением (LC-ESI-TOF-MS), которая широко используется в качественных исследованиях тибетской медицины2. С помощью этого метода сложные компоненты обогащаются и разделяются в колонке LC, а отношение массы к заряду (m/z) ионов аддукта наблюдается с помощью детектора MS. Поиск в тандемных базах данных MS (MS/MS или MS2) в настоящее время является самым быстрым подходом к уверенным аннотациям соединений в низкомолекулярном анализе с использованием квадрупольного времяпролетного (Q-TOF) MS и Orbitrap MS3. Однако низкое качество баз данных и наличие различных изомеров препятствуют идентификации неизвестных соединений. Кроме того, информация, предоставляемая базой данных MS/MS, ограничена 4,5,6,7. Важно исследовать химические соединения в каждой ТКМ с использованием общего протокола, который может быть широко применен к другим ТКМ.
IT-MS улавливает широкий спектр ионов, подавая различные радиочастотные (РЧ) напряжения на кольцевые электроды8. IT-MS может выполнять многоступенчатое сканирование MS временных рядов в различных хронологических порядках, обеспечивая фрагментацию многоступенчатого MS ингредиентов (MS n), гдеn - количество стадий9 ионов продукта. Линейный IT-MS считается лучшим для идентификации структуры, так как его можно использовать для последовательных экспериментовMS n 10. Целевые ионы могут быть выделены и накоплены в линейном IT-MS1. MSn (n ≥ 3) в IT-MS предоставляет больше информации о фрагментах, чем MS/MS в Q-TOF-MS. Поскольку IT-MS не может блокировать ион-мишень и его фрагментированные ионы, он является мощным инструментом для выяснения структуры неизвестных соединений, включая изомеры1. Технология MSn широко применяется для структурного анализа неизвестных белков, пептидов и полисахаридов11,12. Уровень содержания фрагментных ионов в MSn обеспечивает больше информации о молекулярных фрагментах целевых соединений в сложных образцах, чем MS / MS в Q-TOF-MS. Следовательно, применение технологии MSn для структурной идентификации в ТКМ имеет важное значение.
Тибетская медицина является важным компонентом TCM13, и эти лекарства в основном получены из животных, растений и минералов, найденных в районе плато14. Тибетская медицина Abelmoschus manihot seeds (AMS) - это семя Abelmoschus manihot (linn.) medicus. AMS — это традиционная фитотерапия, используемая для лечения таких состояний, как атопический дерматит, ревматизм и проказа. Он содержит халкон, который обладает антибактериальным, противогрибковым, противоопухолевым, антиоксидантным и противовоспалительным действием15. В настоящемисследовании были усовершенствованы процедуры MSN, и был разработан подробный метод идентификации сложных структур в AMS тибетской медицины с использованием IT-MS и MSn. Некоторые параметры MS, включая ионный режим, дальность сканирования и режим столкновения, были оптимизированы для преодоления проблем с идентификацией следовых соединений. Это исследование направлено на содействие стандартизированной идентификации структуры следовых соединений в ТКМ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Пробоподготовка
- Точно взвесьте 1 г образца AMS и поместите его в коническую колбу с 30 мл 80% метанола. Перенесите смесь в ультразвуковую ванну на 30 минут экстракции при 25 ° C. Центрифугируйте образец при 14 000 x g в течение 5 мин.
ПРИМЕЧАНИЕ: Частота ультразвукового аппарата ультразвуковой ванны составляет 40 кГц. - Подготовьте инъекционный шприц и микропористый мембранный фильтр (0,22 мкм, только органический). Отфильтруйте надосадочную жидкость в бутылку с образцом объемом 2 мл.
2. Настройка MS
- Включите выключатель вакуумного насоса. Откройте главный клапан баллона с аргоном и клапан парциального давления и отрегулируйте давление примерно до 0,3 МПа. Откройте азотный клапан.
ПРИМЕЧАНИЕ: Подождите не менее 8 часов, чтобы обеспечить достаточную степень вакуума для условий эксперимента. Перед анализом убедитесь, что давление газа аргона и азота достаточно высокое. - Запустите управляющее программное обеспечение MS. Нажмите « Источник SEI с подогревом » на панели программного обеспечения и введите параметры MS, включая температуру нагревателя (350 °C), расход газа в оболочке (35 arb), расход вспомогательного газа (15 arb), напряжение распыления (3,8 кВ для положительного режима, -2,5 кВ для отрицательного режима) и температуру капилляров (275 °C). Нажмите кнопку «Применить », чтобы активировать источник ионов.
3. Предварительный запуск LC, установление метода и получение MS
- Приготовьте подвижную фазу А и подвижную фазу В, используя 0,1% водный раствор муравьиной кислоты и чистый ацетонитрил соответственно. Дегазируйте их в ультразвуковой ванне ультразвукового аппарата в течение не менее 15 минут. Подсоедините растворы к каналам для жидкости A и B соответственно (рис. 1A). Приготовьте раствор метанола и воды (1:9 об./об.), а затем вручную залейте его в бутылки с жидкостью для очистки насоса и инжектора.
ПРИМЕЧАНИЕ: Частота ультразвукового аппарата ультразвуковой ванны составляет 40 кГц. - Запустите управляющее программное обеспечение LC-MS.
- Нажмите кнопку «Прямое управление», чтобы открыть панель управления LC. Откройте продувочный клапан против часовой стрелки на модуле насоса (рис. 1B).
- Нажмите кнопку « Дополнительно », чтобы открыть настройку насоса, и установите параметры продувки на уровне 5 млмин-1 в течение 3 минут. Нажмите кнопку «Очистка », чтобы начать удаление пузырьков. Затем закройте продувочный клапан.
- Нажмите на кнопки «Основной шприц», «Буферная петля для стирки» и «Внешняя игла для стирки », чтобы ополоснуть шприц в течение трех циклов, петлю в течение одного цикла и иглу в течение одного цикла соответственно. Поместите бутылку с образцом в пробоотборник (рис. 1C).
- Нажмите кнопку «Настройка инструмента», чтобы открыть окно редактирования метода. Нажмите кнопку «Создать», чтобы создать новый метод прибора LC-MS.
- Установите общее время выполнения метода LC. Затем введите значения для установки предельного давления, общего расхода, градиента потока, температуры образца, температуры колонны и дельты готовой температуры в окне редактирования метода.
ПРИМЕЧАНИЕ: Общий расход подвижной фазы по умолчанию постоянен на уровне 0,3 мл/мин с 50% A и 50% B и без температуры колонки при отсутствии хроматографической колонки. Значения температуры образца и дельты температуры готовности по умолчанию составляют 15 °C и 0,1 °C соответственно. Другие настройки зависят от типа используемой колонки жидкостной хроматографии. - Выберите общий тип эксперимента MS или MS n для метода MS. Введите значения, чтобы настроить время сбора данных, полярность, диапазон масс, номер значения отклонения и продолжительность значения отклонения. Нажмите кнопку «Сохранить», чтобы настроить параметры как метод инструмента.
ПРИМЕЧАНИЕ: Настройки по умолчанию без хроматографической колонки следующие: время сбора данных, 2 мин; полярность, положительная или отрицательная; диапазон масс от 100 до 1 200; число значений отклонения, 2; и продолжительность отклонения значения, 1,99 мин.
4. Операционная многоступенчатая масс-спектрометрия
- Нажмите кнопку «Настройка последовательности», чтобы открыть таблицу последовательностей.
- В таблице введите следующую информацию: тип образца, имя файла, путь, идентификатор образца, метод прибора, положение и объем впрыска.
- Нажмите кнопку « Сохранить », чтобы записать таблицу последовательностей, а затем нажмите кнопку « Начать анализ », чтобы выполнить настройки и начать сбор MS.
ПРИМЕЧАНИЕ: Тип выборки по умолчанию выбран как неизвестный. Инструментальный метод — это метод, сохраненный на шаге 3.6. Флакон с образцом помещается в свое уникальное место в комнате для образцов. Например, RA1 — это первое место в первом ряду красной области в комнате для образцов. Объем впрыска по умолчанию обычно составляет 2 мкл, что зависит от концентрации образца.
- Дважды щелкните необработанный файл в проводнике, чтобы загрузить данные MS в программное обеспечение для обработки данных. На базовой пиковой хроматограмме (BPI) выберите область с максимальной площадью под кривой (AUC), щелкнув и перетащив мышь. Соответствующие спектры МС будут отображаться в том же окне.
- Выберите ион-мишень для следующего анализа МС/МС.
- Снова откройте окно редактирования метода. В таблице MSn Setting установите m/z целевого иона на один десятичный знак в столбце «Родительская масса ».
- Выберите режим столкновения и введите значение энергии столкновения (CE). Установите диапазон сканирования MS/MS. Нажмите кнопку « Сохранить », чтобы записать метод MS, и введите новое имя файла в таблицу последовательностей. Нажмите кнопку «Пуск », чтобы начать приобретение MS/MS.
ПРИМЕЧАНИЕ: Диапазон сканирования MS / MS составлял 40% -130% от целевого родительского иона. Значение CE по умолчанию в режиме диссоциации, вызванной столкновением (CID), составляет 35%.
- Дважды щелкните необработанный файл в проводнике, чтобы загрузить необработанный файл MS / MS в программное обеспечение для обработки данных.
- Определите самый сильный фрагментный ион в спектре MS/MS и введите его значение m/z в список методов MSn. В таблице настроек MSn установите параметры MS3, включая режим столкновения, значение CE и диапазон сканирования.
- Нажмите кнопку « Сохранить », чтобы записать метод MS, и введите новое имя файла в таблицу последовательностей. Нажмите кнопку «Пуск », чтобы начать сбор MS3 .
- Дважды щелкните необработанный файл в проводнике, чтобы загрузить необработанный файл MS3 в программное обеспечение для обработки данных. Повторите шаг 4.4, чтобы получить спектр MS4 .
- Завершите эксперимент MSn , когда в спектре не наблюдается стабильных фрагментных ионов.
5. Ручной анализ данных MSn
- Дважды щелкните необработанные файлы, чтобы открыть все масс-спектры от MS до MSn. Вручную рассчитайте значения разницы m/z между ионом и соответствующими ионами фрагмента.
ПРИМЕЧАНИЕ: Например, значение разницы m/z между ионом (m/z 617,25) и соответствующими ионами-фрагментами (m/z 571,28) составило 45,97 в MS/MS, значение разницы m/z между ионом (m/z 571,28) и соответствующими ионами фрагментов (m/z 525,38) составило 45,90 в MS3, а значения разницы m/z между ионом (m/z 525,38) и соответствующими ионами фрагмента (m/z 344,93 и 273,16) составили 180,45 и 252,22 в МС4 соответственно. - Вручную нарисуйте «основную» структуру по результатам MS4 (последний уровень MSn). Вручную выведите исходную структуру, используя функциональные группы или молекулярные сегменты на основе значения разности m/z. Вручную нарисуйте пути молекулярного расщепления в соответствии с каждой молекулярной структурой в MSn. Примеры ручного молекулярного деривации подробно описаны в разделе репрезентативных результатов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Целлобиоза была использована в качестве модели для проверки осуществимости MSn в режиме положительных ионов. Как показано на рисунке 2A, ESI-MS (режим положительных ионов) целлобиозы [C 12 H22O11]+ продуцировал протонированную молекулу [M + H]+ при m / z 365. Сканирование ионов продукта (CID-MS/MS) [M+H]+ на m/z 365 привело к получению второго фрагмента иона на m/z 305 (рис. 2B), который был дополнительно проанализирован с использованием анализов MS3 и MS4 (рис. 2C, D). Анализ MS3 привел к третьему фрагменту иона на m/z 254, а анализ MS4 привел к четвертому фрагментному иону на m/z 185. Анализ MS/MS (рис. 2E) показал, что потерянный ион фрагмента в m/z 60 указывает на последовательность фрагментации ионов на m/z 365, а именно гидролиз с раскрытием кольца (отмечен синим цветом), расщепление связи C-C (отмечен красным цветом) и обезвоживание (отмечен зеленым цветом). Аналогичным образом, анализ MS3 показал, что потерянный ион фрагмента при m/z 60 указывает на расщепление связи C-C (отмечено красным) иона при m/z 305. Анализ MS4 показал, что потерянный фрагмент иона при m/z 60 подразумевает гидролиз (отмечен синим цветом) и обезвоживание (отмечен зеленым цветом), что приводит к расщеплению иона с m/z 245 на ион с m/z 185. Ступенчатый переломв анализе MSN показал, что этот метод применим для исследования структуры углеводов.
Предварительный качественный анализ ВМС с использованием ЖХ-К-ТОФ-МС выявил наличие многочисленных неизвестных соединений. Один из них, ион в m/z 617, был выбрандля анализа MSN в отрицательном режиме. Сканирование продукта ионов (CID-MS/MS) [M-H]− при m/z 617 в AMS произвело второй фрагмент иона на m/z 571. Анализ MS3 этого фрагментного иона произвел третий фрагмент иона при m/z 525, а анализ MS4 произвел четвертый фрагмент ионов при m/z 345 и 273 (рис. 3A-D). МС3 m/z 571 дал фрагмент иона при m/z 525 за счет потери части CH2OH в виде метанола (-32 Да) и части OH (-18 Да) в виде воды. Эти результаты MS4 были использованы для ручной идентификации «основной» структуры соединения, а его исходная структура была определена путем сравнения значений m/z иона и его фрагментных ионов. Молекулярная структура соединения в m/z 617 и пути его расщепления в MSn показаны на рисунке 3E. Другое неизвестное соединение на m/z 365 было проанализировано в положительном режиме с использованием MSn. Сканирование ионов продукта (CID-MS/MS) иона [M+H]+ при m/z 365 в AMS дало ионы второго фрагмента при m/z 299, m/z 329 и m/z 347. Анализ MS3 этих фрагментных ионов произвел третий фрагмент иона при m/z 231 (рис. 4A-C). Молекулярная структура и механизм расщепления соединения при m/z 365 показаны на рисунке 4E.
Рисунок 1: Идентификация неизвестных составных структур в тибетской медицине с использованием IT-MS и многоступенчатого масс-спектрометрического анализа. (А) Подвижная фаза для жидкостной хроматографии. (B) Насос жидкостной хроматографии. (C) Комната для образцов. (D) Источник ионов для MS. (E) Внутренняя структура модуля ионной ловушки в MS. (F) Спектр MS4. (G) Информация о молекулярной структуре из результатов MS4. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Многоступенчатая фрагментация целлобиозы с помощью IT-MS в режиме положительных ионов . (A) Исходный масс-спектр целлобиозы. (B) Фрагментные ионы в спектре MS/MS. (C) Фрагментные ионы в спектре MS3 . (D) Фрагментные ионы в спектре MS4 . (E) Механизм расщепления и молекулярная структура целлобиозы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3: Многоступенчатая фрагментация и структурный анализ неизвестного иона соединения AMS на m/z 617 с помощью IT-MS в режиме отрицательных ионов . А) Частичный масс-спектр АМС. (B) Фрагментные ионы в спектре MS/MS. (C) Фрагментные ионы в спектре MS3 . (D) Фрагментные ионы в спектре MS4 . (E) Механизм расщепления и молекулярная структура сложного иона AMS при m/z 617. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4: Многоступенчатый фрагментационный структурный анализ неизвестного иона соединения AMS на m/z 365 с помощью IT-MS в режиме положительных ионов . (А) Частичный масс-спектр ВПП. (B) Фрагментные ионы в спектре MS/MS. (C) Фрагментные ионы в спектре MS3 . (D) Механизм расщепления и молекулярная структура иона соединения AMS при m/z 365. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
IT-MS и его технология MSn предлагают новый подход к идентификации структуры следовых соединений ТКМ. В отличие от Q-TOF-MS, который не мог глубоко идентифицировать фрагменты ионов, IT-MS с технологией MSn выделяется своей способностью изолировать и накапливать ионы. В этой статье описывается метод идентификации микросоединений в тибетской медицине с использованием методов IT-MS и MSn . Метод использует значение n в MSn для определения количества предоставленной информации об ионах фрагментов. Важнейшие шаги в этом методе включают выбор соответствующего диапазона сканирования и корректировку значения CE, что приводит к идентификации ценных фрагментов.
Как правило, анализ сахаридов MSn лучше всего проводить в режиме16 положительных ионов, в то время как фенольные кислоты и алкалоиды лучше всего анализировать в режиме отрицательных ионов. Реакция соединения в источнике ESI может быть улучшена путем регулировки подвижной фазы с помощью таких добавок, как муравьиная кислота, уксусная кислота и ацетатаммония 17. Химический источник ионизации при атмосферном давлении можно рассматривать для соединений со слабой полярностью. Выбор подходящего диапазона сканирования может увеличить интенсивность фрагментных ионов, что полезно для следующей стадии MS n из-за неизбежного распада энергии в каждом MSn. m/z иона фрагмента должен располагаться в центральной области диапазона сканирования для получения наилучшей соответствующей интенсивности. Если ион имеет двойные или множественные заряды, фрагментированные ионы с более высокими значениями m/z могут быть получены путем уменьшения числа зарядов во время фрагментации. В этом случае конечная m/z диапазона сканирования должна быть больше. Режим CID подходит для большинства соединенийв анализе MSN 18. Если интенсивность фрагмент-иона недостаточна, значение CE может быть увеличено на 5% за один раз. Когда в MSn есть несколько сложных фрагментных ионов, для контроля диссоциации ионов требуется более низкое значение CE. Режим диссоциации, индуцированный импульсным добротным столкновением, который подходит для малых молекул, предоставляет более подробную информацию об ионах низкомолекулярных фрагментов, чем режим CID19. Модель диссоциации переноса электрона (ETD) доминирует при разрушении пептидов и идентификации белков, но редко используется для идентификации компонентовTCM 20. Режим ETD может быть использован для исследования неизвестных соединений, содержащих дисульфидные связи21.
Хотя метод MSn имеет много преимуществ для структурной идентификации по сравнению с другими методами MS, все же существуют некоторые ограничения. Во-первых, ни один из режимов столкновения не подходит для всех соединений ТКМ. Разумный выбор режима столкновения и ручная регулировка энергии столкновения могут улучшить фрагментированные ионы. Кроме того, при методе MSn трудно различить положение функциональных групп в больших молекулах со сложными изомерами. Идентификация сайтов функциональной группы является сложной задачей, требующей опытных исследователей. Ручной постанализ и длительное времяобработки данных MSN также являются серьезными препятствиями, которые отпугивают исследователей от использования этой технологии. Q-TOF-MS популярен среди исследователей благодаря высокой точности измерений, разрешению и простоте использования с базами данных. Тем не менее, IT-MS является хорошим решением для неопознанных ионов и следовых ионов из-за его способности выделять и накапливать ионы и выполнять несколько этапов анализа. Интеграция Q-TOF и IT-MS может обеспечить оптимальное решение для полного качественного анализа образцов ТКМ. Технология MSn широко используется в таких областях, как пищевая промышленность, наука об окружающей среде и медицина, и ожидается, что ее популярность и использование в различных областях будут расти с улучшением приборов IT-MS.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.
Acknowledgments
Эта работа финансировалась Программой талантов Синлинь Чэндуского университета ТКМ (No 030058191), Фондом естественных наук провинции Сычуань (2022NSFSC1470) и Национальным фондом естественных наук Китая (82204765).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetonitrile | Thermo Scientific | CAS 75-05-8 | LC-MS grade |
| Formic Acid | Knowles | CAS 64-18-6 | HPLC grade |
| Linear ion trap mass spectrometer | Thermo Scientific | LTQ XL | |
| liquid chromatograph | Thermo Scientific | U3000 | |
| LTQ Tune | Thermo Scientific | version 2.8.0 | MS control software |
| Methanol | Thermo Scientific | CAS 67-56-1 | LC-MS grade |
| Pure water | Thermo Scientific | CAS 7732-18-5 | LC-MS grade |
| Xcalibur | Thermo Scientific | version 2.0 | LC-IT-MS operational software |
References
- Chen, X. -F., Wu, H. -T., Tan, G. -G., Zhu, Z. -Y., Chai, Y. -F. Liquid chromatography coupled with time-of-flight and ion trap mass spectrometry for qualitative analysis of herbal medicines. Journal of Pharmaceutical Analysis. 1 (4), 235-245 (2011).
- Ou, C., et al. Systematically investigating the pharmacological mechanism of Dazhu Hongjingtian in the prevention and treatment of acute mountain sickness by integrating UPLC/Q-TOF-MS/MS analysis and network pharmacology. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 179, 113028 (2020).
- Kind, T., et al. Identification of small molecules using accurate mass MS/MS search. Mass Spectrometry Reviews. 37 (4), 513-532 (2018).
- Phetsanthad, A., Vu, N. Q., Li, L. Multi-faceted mass spectrometric investigation of neuropeptides in Callinectes sapidus. Journal of Visualized Experiments. (183), e63322 (2022).
- Seetaloo, N., Phillips, J. J. Millisecond hydrogen/deuterium-exchange mass spectrometry for the study of alpha-synuclein structural dynamics under physiological conditions. Journal of Visualized Experiments. (184), e64050 (2022).
- Karas, B. F., et al. Dose uptake of platinum-and ruthenium-based compound exposure in zebrafish by inductively coupled plasma mass spectrometry with broader applications. Journal of Visualized Experiments. (182), e6358 (2022).
- Chang, H. -L., et al. Uracil-DNA glycosylase assay by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry analysis. Journal of Visualized Experiments. (182), e63089 (2022).
- Wang, S., et al. Structural characterization and identification of major constituents in Jitai tablets by high-performance liquid chromatography/diode-array detection coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry. Molecules. 17 (9), 10470-10493 (2012).
- Pang, B., Zhu, Y., Lu, L., Gu, F., Chen, H. The applications and features of liquid chromatography-mass spectrometry in the analysis of traditional Chinese medicine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016, 3837270 (2016).
- Ichou, F., et al. Comparison of the activation time effects and the internal energy distributions for the CID, PQD and HCD excitation modes. Journal of Mass Spectrometry. 49 (6), 498-508 (2014).
- Fu, X., et al. Suppression of oligomer formation in glucose dehydration by CO2 and tetrahydrofuran. Green Chemistry. 19 (14), 3334-3343 (2017).
- Fu, X., et al. Solvent effects on degradative condensation side reactions of fructose in its initial conversion to 5-Hydroxymethylfurfural. ChemSusChem. 13 (3), 501-512 (2020).
- Yang, S., Wang, Z., Zhao, H., Ren, X.
- Shang, X., et al. Ethno-veterinary survey of medicinal plants in Ruoergai region, Sichuan province, China. Journal of Ethnopharmacology. 142 (2), Sichuan province, China. 390-400 (2012).
- Su, J., et al. Chalcone derivatives from Abelmoschus manihot seeds restrain NLRP3 inflammasome assembly by inhibiting ASC oligomerization. Frontiers in Pharmacology. 13, 932198 (2022).
- Fu, X., et al. Mapping out the reaction network of humin formation at the initial stage of fructose dehydration in water. Green Energy & Environment. , In Press (2022).
- Hua, Y., Jenke, D. Increasing the sensitivity of an LC-MS method for screening material extracts for organic extractables via mobile phase optimization. Journal of Chromatographic Science. 50 (3), 213-227 (2012).
- Kumar, S., Singh, A., Bajpai, V., Kumar, B. Identification characterization and distribution of monoterpene indole alkaloids in Rauwolfia species by Orbitrap Velos Pro mass spectrometer. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 118, 183-194 (2016).
- Bayat, P., Lesage, D., Cole, R. B. Tutorial: Ion activation in tandem mass spectrometry using ultra-high resolution instrumentation. Mass Spectrometry Reviews. 39 (5-6), 680-702 (2020).
- Wu, S. -L., et al. Mass spectrometric determination of disulfide linkages in recombinant therapeutic proteins using online LC−MS with electron-transfer dissociation. Analytical Chemistry. 81 (1), 112-122 (2009).
- Echterbille, J., Quinton, L., Gilles, N., De Pauw, E. Ion mobility mass spectrometry as a potential tool to assign disulfide bonds arrangements in peptides with multiple disulfide bridges. Analytical Chemistry. 85 (9), 4405-4413 (2013).
