Эмбрионы осы Nasonia препарировали из куколок Lucillia sericata после паразитирования в течение 12-24 ч и промывали спиртом и 10% раствором гипохлорита натрия для получения безмикробных эмбрионов. После выращивания безмикробных эмбрионов и снабжения их средой для выращивания Nasonia для роста и развития in vitro были получены взрослые особи Nasonia без микробов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оптимизация процедуры выращивания безмикробных ос
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Технология асептического выращивания – это метод культивирования насекомых в стерильных или почти стерильных условиях, который позволяет эффективно исключить влияние внешних микроорганизмов на микробиоту насекомых и тем самым способствовать быстрому развитию исследований микробиоты насекомых. Nasonia (род ос) - это паразитическое насекомое-оса, которое имеет много преимуществ, таких как короткая продолжительность жизни, высокая генетическая изменчивость, простота в эксплуатации и т. д., и широко используется в качестве модельной системы насекомых. В отличие от лечения антибиотиками, которое может только уменьшить количество микроорганизмов у животных, методы асептического выращивания могут контролировать как состав, так и количество микроорганизмов у животных, что еще больше облегчает изучение взаимодействий хозяина и микроба. Однако предыдущие версии среды для выращивания Nasonia (NRM) имеют некоторые дефекты и проблемы, такие как сложный и трудоемкий процесс приготовления, легкое загрязнение бактериями или грибками и короткое время хранения. Таким образом, данное исследование решает эти проблемы за счет оптимизации инструментов, используемых в процессе подготовки NRM, условий хранения и соотношения компонентов. Оптимизированная среда может обеспечить хранение при -20 °C в течение не менее 3 месяцев и исключить возможность загрязнения NRM во время кормления стерильных ос. Это еще больше улучшает выживаемость и уровень здоровья асептической Nasonia, что важно для использования Nasonia в качестве модели для микробных исследований.
Введение
Безмикробные животные - это животные, у которых нет обнаруживаемых живых микроорганизмов и паразитов1. Эмбрионы, не содержащие зародышей, могут быть получены путем вскрытия матери в асептических условиях и впоследствии выращены в барьерных системах2. Такие животные могут быть использованы для изучения воздействия микроорганизмов на животных, таких как кишечная микробиота, иммунная система и метаболизм1. С помощью определенных технических средств многие насекомые и даже млекопитающие могут быть стерильны 3,4. Безмикроб....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Приготовление безмикробнойсреды для выращиваниянасонии
- Поместите имеющихся в продаже куколок L. sericata (см. Таблицу материалов) на поверхность, на которой могут разместиться все куколки, например, на лоток или лист бумаги. Выбросьте все недоразвитые личинки, темные старые куколки, пустые оболочки куколок, опилки или другие примеси. Оставляйте только молодых куколок коричневато-красного цвета и переносите их в стакан (примерно 3000-4000 куколок).
ПРИМЕЧАНИЕ: После проведения многих экспериментов было обнаружено, что среда, сделанная из темных старых куколок, легко темнела и останавл....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Эффективность подготовки NRM была значительно улучшена за счет совершенствования инструментов подготовки. Кроме того, проблема загрязнения NRM в процессе кормления была устранена за счет оптимизации стратегии и метода сохранения. В то же время скорректированный NRM имел более подходящее соотношение питательных веществ для роста и развития безмикробных ос с L. sericata в качестве хозяев. Выживаемость безмикробных ос от личинок до куколок была значительно улучшена по сравнению с безмикробными осами, выращенными с .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
С применением высокопроизводительных технологий обнаружения, таких как геномика и метаболомика, исследователи постепенно осознали, что в микробиоте кишечника существует огромное генетическое разнообразие и сложность метаболизма16. Эти симбиотические бактерии тесно связаны с различными физиологическими или патологическими состояниями, такими как метаболизм питательных веществ хозяина, опухоли, иммунитет и старение посредством сложных взаимодействий с хозяином17. Однако иссле.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам раскрывать нечего.
Благодарности
Финансирование: эта работа была поддержана Национальным научным фондом Китая (32270538), Национальной ключевой программой исследований и разработок Китая (2022YFF0710603), Фондом естественных наук Пекина (6222046) и стратегическим финансированием CAS через схему финансирования CAS-CSIRO (152111KYSB20210011), присужденную G.H.W. Вклад авторов: все авторы разработали объем и направленность обзора и внесли свой вклад в написание рукописи.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,22 Стерильный вакуум-фильтр | NEST | 331011 | |
| 10% гипохлорит натрия | LIRCON | XB-84BS-1 | |
| 1x PBS раствор | Solarbio | P1020 | |
| 200 меш нейлоновая сетка | BIOBYING | BY-378Z | |
| 24 луночная пластина | NEST | 702001 | |
| 8, 1,2, 0,8 и 0,45 µ m фильтры | Шанхайская фабрика очистных материалов Xingya | HN-AA-JT-10079 | |
| Абсолютный этиловый спирт | Macklin | E809057-500мл | |
| Клеточное ситечко | BIOLOGIX | 15-1100 | |
| Коммерческий дрозофила Средний | бур | B645446-500мл | |
| Игла для препарирования | Bioroyee | 17-9140 | |
| Пресс | для чеснокаTaobao | No Каталожные номера Покупка | на Taobao |
| Lucillia sericata pupae | Hefei Dayuan Biotechnology Co., Ltd. | Нет каталожных номеров | Купить на Taobao |
| Маленькая кисть для письма | Cestidur | BL0508 | |
| Стереоскоп | SOPTOP | RX50 | |
| Пинцет | SALMART | A109001-56 |
Ссылки
- Diviccaro, S., et al. Exploring the impact of the microbiome on neuroactive steroid levels in germ-free animals. International Journal of Molecular Sciences. 22 (22), 12551(2021).
- Pang, X., et al. Inter-specie....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
