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方法論記事

意識のあるラットにおける鎖骨下静脈採血

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DOI:

10.3791/66075

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2023年11月3日

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責任著者: Zhi-ping Wang <wangzplzu@163.com>

* These authors contributed equally

この記事について

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サマリー

ここでは、麻酔なしでラットの迅速、安全、反復採血を可能にする効果的なラット制限法と鎖骨下静脈穿刺法の組み合わせを紹介します。

要約

ラットから繰り返し血液サンプルを取得するための確立された方法はいくつかあり、最も一般的に採用されている方法は、麻酔なしの側尾静脈サンプリングと麻酔による頸静脈サンプリングです。しかし、これらの方法のほとんどは、補助具や麻酔器具を必要とし、採血や血液サンプルの質の悪さという点で困難を伴うことがあります。さらに、これらの採血方法は、多数のラットに対して採血を繰り返す必要がある場合、多大な時間と人的資源を消費します。この研究は、麻酔をかけていないラットで、熟練した 1 人の個人で繰り返し採血する技術を提示します。鎖骨下静脈に穴を開けることで、非常に満足のいく血液サンプルを得ることができます。この方法は、ラットの拘束から採血完了までの時間の中央値で、95%という驚異的な全体的な成功率を示しました。また、指定範囲内で連続採血を行っても、ラットに害を及ぼすことはありません。この方法は、特に大規模な薬物動態研究において、採血のために推進する価値があります。

概要

ラットは最も一般的な実験動物の1つであり、血液サンプルを取得する方法はたくさんあります。最終段階での1回の採血を含む実験では、心臓穿刺または腹部大動脈採血によって十分な量の血液を得ることができます1。ただし、一部の研究では、特に薬物動態および毒物学の研究において、薬物の吸収、分布、および代謝を決定するために繰り返し採血する必要がある、定期的な血液分析または生化学的分析のためにラットからの繰り返しの採血が必要です2。

現在、ラットからの採血には尾静脈採血が最も一般的な方法であるが、麻酔を必要としないにもかかわらず、この方法は繰り返し採取が困難な場合があり、採取される血液の量は比較的少ない3,4。また、伏在静脈や陰茎静脈から採血はできるが、得られる血液の量は限られており、麻酔が必要である1,5。さらに、顎下静脈神経叢、舌下静脈、頸静脈、鎖骨下静脈から採取された血液サンプルは、より高品質のサンプルを提供しますが、通常、麻酔または複数の個人の支援が必要です1,6,7,8,9。

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プロトコル

この研究は、実験動物のケアと使用のためのガイドの第8版で概説されているガイドラインを順守しています13。この研究は、蘭州大学第二病院の倫理委員会から承認を受け、ARRIVEガイドライン2.014に準拠して文書化されました。生後12〜16週齢の健康なWistarラット12匹(体重290〜330gの雄6匹と体重250〜280gの雌6匹)を、実際の実験の3日前に蘭州大学のGLP動物研究所に収容しました。使用したラットケージは、545mm×395mm×200mmのR5型で、オートクレーブ処理された寝具が備え付けられていました。すべてのラットには、餌と水の両方への無制限のアクセスが与えられました。実験室は平均湿度25%、平均気温24°C、昼と夜を交互に繰り返す光のサイクル(午前7:00/午後7:00)を維持しました。研究の結論として、すべての動物はイソフルランの過剰摂取を使用して人道的に安楽死させられました。この研究で使用した材料と機器に関する包括的な情報については、 材料表を参照してください。

1. サンプルサイズの計算と動物の選択

  1. リソース方程式法15 を選択し、式(1)を使用して動物サンプルサイズを推定します。
    ....

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結果

高品質のプラズマ試料は、 図2Aに示すように、淡黄色の色相、透明度、透明度を示し、赤みを帯びたり凝固したりすることはありません。 図2B は、不適切な処置の結果としての溶血(左側)または凝固(右側)をそれぞれ示しています。4日間に96回の採血セッションを行った場合、グループ A と B の平均採血時間は、それぞれ119.87±33.62秒、123.28±30.96秒でした。2群間の日次採血時間に有意差はなかった(t = 0.66、 P = 0.54、 表1)。最短の個人採血時間は、それぞれ78秒と89秒でした。.

1回の採血を成功させるのに必要な平均試行回数は、グループAで1.21回、Bグループで1.17回であった。2群間で試行回数に有意差はなかった(t.......

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ディスカッション

ラットでは、尾静脈採血が最も一般的な採血方法であるが、麻酔薬の影響を受ける可能性があり、尾静脈のサイズが小さいため、1回で採取できる血液量が限られ、採血期間が長くなります4,5。高速液体クロマトグラフィー(HPLC)-タンデム質量分析(MS/MS)システムとラット尾静脈のキャピラリーマイクロサンプリング(CMS)を組み合わせることで、ラットで使用される血液の量を減らすことができます11が、すべての施設にこの高価な装置が装備されているわけではありません。球後神経叢/副鼻腔からの採血は、ラットに不安や痛みを引き起こすことが多く、不適切な操作はラットの視力と健康を損なうことさえあります。したがって、この方法はラット9の採血には推奨されない。

鎖骨下静脈は、ラットの大胸筋と三角筋の間に位置し、内鎖骨の3分の1で頸静脈に流れ込みます(図4<.......

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開示事項

著者は、開示すべき関連する金銭的または非金銭的利害関係を有していません。

謝辞

本研究は、蘭州大学第二病院の翠英計画プロジェクト(Grant No.PR0121015)および甘粛省泌尿器系疾患研究重点実験室(助成金番号0412D2)。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
0.75%生理食塩水甘粛省Fuzheng製薬技術有限公司——調製したヘパリンナトリウム溶液
パスツールピペット 1mL バイオシャープBS-XG-01-NS採血
用シリンジ 1mL (26G, 0.45 mm x 12 mm)Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.0.45*12RWLB採血 
1.5 mL Eppendorf tubeBiosharpBS-15-M血液の保存と収集
75% 医療用アルコール山東 Lircon Medical Technology Co., Ltd.——ラット採血場所の消毒
遠心分離機の管のホールダーBiosharpBS-05/15-SM60(mdash;—
電子スケール上海PUCHUN測定器械Co.、株式会社JE1002
パリンナトリウム注射河北長山生化学薬品有限公司——シリンジとEPチューブをすすぎ、生理食塩水で25 U/mLに希釈します
低温遠心分離機HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd. H1750R血清の分離
ヘの重量を量る

参考文献

  1. UCSF Office of Research Institutional Animal Care and Use Program. Blood collection: The rat IACUC Guideline. , https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf (2022).
  2. Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 4....

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再版と許可

訂正


Formal Correction: Erratum: Subclavian Vein Blood Sampling in Conscious Rats
Posted by JoVE Editors on 3/21/2024. Citeable Link.

This corrects the article 10.3791/66075

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