इस वीडियो से पता चलता है कैसे जर्दी थैली और महाधमनी – जननपिंड mesonephros क्षेत्र भ्रूण से सूक्ष्म काटना और प्रवाह cytometry का उपयोग करने के लिए hematopoietic स्टेम सेल तरह.
Abstract
माउस भ्रूण में, जल्दी hematopoiesis कई अंगों, जो जर्दी थैली और महाधमनी जननपिंड – mesonephros क्षेत्र भी शामिल है में एक साथ होता है. इन क्षेत्रों में भ्रूण में रक्त प्रणाली स्थापित करने में महत्वपूर्ण हैं और भ्रूण जिगर और फिर bonemarrow में वयस्क स्टेम सेल के विकास में स्टेम सेल की अंतिम आंदोलन के लिए होता है. जल्दी hematopoietic स्टेम कोशिकाओं प्रवाह cytometric छँटाई के द्वारा पीछा करने के लिए एक अधिक शुद्ध जनसंख्या प्राप्त भ्रूण के microdissection के माध्यम से इन अंगों से अलग किया जा सकता है. यह अस्पष्ट बनी हुई है कि इन स्टेम सेल आबादी भ्रूण और वयस्क स्टेम सेल पूल करने के लिए योगदान है. इसके अलावा, हमारी प्रयोगशाला की जांच कैसे जल्दी स्टेम कोशिकाओं कार्यात्मक भ्रूण और वयस्क hematopoietic स्टेम कोशिकाओं से अलग हैं. इसके अलावा, हमारी प्रयोगशाला hematopoietic स्टेम कोशिकाओं के विभिन्न आबादी के प्रकार और आनुवंशिक मॉडल की एक किस्म के संदर्भ में उनके कार्यात्मक भूमिका का परीक्षण. इस वीडियो में, हम विच्छेदन सूक्ष्म प्रक्रिया हम सामान्यतः का उपयोग करें और यह भी एक ठेठ FACS इन दुर्लभ आबादी के अलग plotfter के परिणाम दिखाने के प्रदर्शन, यह संभव है सहित कार्यात्मक assays के एक किस्म प्रदर्शन: कॉलोनी assays और अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण.
Protocol
विच्छेदन और जल्दी murine जर्दी थैली और क्षेत्र महाधमनी जननपिंड – mesonephros से hematopoietic स्टेम सेल का अलगाव शुरू करने से पहले, यह महत्वपूर्ण है सभी अभिकर्मकों और उपकरण प्रक्रिया के लिए आवश्यक है: कैंची स?…
Morgan, K., Kharas, M., Dzierzak, E., Gilliland, D. G. Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM. J. Vis. Exp. (16), e789, doi:10.3791/789 (2008).