Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
-Gelişen pupaya erişim sağlamak, pupal epitel kütikülden ayrıldıktan sonra veya pupal aşamasından sonra puparium'u çıkarın P5. Başlamak için, sağlam pupayı ventral tarafı size bakacak şekilde yerleştirin. Puparium'u kasanın ön ucu ile pupanın başı arasındaki boş boşlukta tutmak için ön kısmı hafifçe kırın ve çıkarın.
Ventral yönelimi korurken, forsepsleri kullanarak puparium'un ön-arka ekseni boyunca küçük kırılmalar oluşturun ve süreçte sürekli bir boşluk oluşmasını sağlayın. Pupa dokusunun hiçbirine doğrudan altında zarar vermemeye dikkat edin. Sonra puparium'u boşluktan dışa doğru, birer bir parçaya ayırmaya devam edin ve işlemdeki yırtılmış kasayı yaymaya devam edin. İnce bir ıslak boya fırçası kullanarak, daha fazla araştırma için maruz kalan pupayı alın. Örnek protokolde, Drosophila guttifera'nın pupariumunun nasıl çıkarılacağını ve pupanın görüntüleme için nasıl hazırlanacağını göreceğiz.
-Puparium çıkarılmasına başlamak için, bir kağıt havlu parçasına çift taraflı bant parçası yapıştırın. Pupayı çift taraflı bant üzerine yerleştirin, ventral taraf yukarı. Puparium'un ön tarafı ile iç pupa arasındaki boşluğu bulun. Bu boşluğun etrafındaki puparumu toparlamalar kullanarak kavrayın ve çıkarın ve pupanın başının ön tarafını açığa çıkarın.
Bir yaban arısının ucunu ön-arka eksene paralel hareket ettirerek yerleştirin. Puparium ve pupal bacaklar arasında bir boşluk oluştuğundan emin olun ve iç pupanın hasarını en aza indirirken pupariumun ventral tarafını kırın. Puparium'u mümkün olduğunca kırdıktan sonra, ince bir boya fırçası kullanarak pupayı çıkarın. Pupayı ddH2O ile nemlendirilmiş ve plastik bir Petri kabına yerleştirilmiş bir kağıt mendil parçasına yerleştirin. Maruz kalan pupa savunmasız olduğu ve kolayca kurudukça hemen fotoğraf çekin.
